專利名稱：芐基-環(huán)烷基鞘氨醇1-磷酸酯受體調(diào)節(jié)劑的制作方法
芐基-環(huán)烷基鞘氨醇1-磷酸酯受體調(diào)節(jié)劑相關(guān)申請的交叉引用本申請要求享有2007年9月28日提交的美國臨時申請系列號60/976，129的優(yōu) 先權(quán)，所述美國臨時申請的公開內(nèi)容通過引用并入本文。美國政府的權(quán)利本發(fā)明是在美國政府的支持下在由國立衛(wèi)生研究院授予的基金號ROl GM067958 之下作出的。美國政府擁有本發(fā)明中的某些權(quán)利。領(lǐng)域本發(fā)明涉及對一種或多種鞘氨醇I-磷酸酯(sphingosine 1-phosphate)受體具 有活性的新穎的鞘氨醇1-磷酸酯類似物。背景鞘氨醇1-磷酸酯(sphingosine 1-phosphate, SIP)是一種溶血磷脂介體，已報 道它通過刺激內(nèi)皮細胞分化基因(EDG)受體家族的五個成員而引起各種細胞反應(yīng)。所述 EDG受體是G-蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)并且在刺激時通過異源三聚體G蛋白α (Ga)亞基和 β-Υ (G0y) 二聚體的激活傳導(dǎo)第二信使的信號。已報道鞘氨醇1-磷酸酯(SlP)引起來自細胞和組織的許多反應(yīng)。在這些反應(yīng)之 中突出的反應(yīng)是細胞凋亡抵抗、細胞形態(tài)的改變、細胞遷移、細胞分裂、血管發(fā)生和通過淋 巴細胞運輸?shù)母淖儗γ庖呦到y(tǒng)的調(diào)節(jié)。因此，SlP受體是治療例如腫瘤性疾病、自身免疫障 礙和組織同種異體移植物的排斥反應(yīng)的靶標。鞘氨醇-1-磷酸酯在某種程度上通過命名為 51卩1、51 2、51 3、51 4和51 5的一組6蛋白偶聯(lián)受體向細胞發(fā)信號。這些受體共享50-55% 相同的氨基酸，并和結(jié)構(gòu)上相關(guān)的溶血磷脂酸(LPA)的其他三個受體(LPAp LPA2和LPA3) 簇生在一起。當配體與G-蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合時在G-蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)中誘發(fā)構(gòu)象轉(zhuǎn)變，從 而引起GDP被相關(guān)G-蛋白的a -亞基上的GTP取代以及G-蛋白隨后被釋放進入細胞質(zhì)。 然后α-亞基從β γ亞基解離，并且之后每個亞基可與效應(yīng)蛋白締合，這激活第二信使從 而引起細胞反應(yīng)。最后在G-蛋白上的GTP水解為GDP，G-蛋白的亞基彼此重新締合，再與 受體締合。擴增被認為在一般的GPCR途徑中發(fā)揮了重要作用。一種配體與一種受體的結(jié) 合能導(dǎo)致許多G-蛋白的激活，每種G-蛋白能夠與許多效應(yīng)蛋白締合，從而導(dǎo)致擴增的細胞 反應(yīng)。已報道SlP受體具有組織特異性和反應(yīng)特異性。因為對一種受體具有選擇性的激 動劑或拮抗劑的開發(fā)可將細胞反應(yīng)定位于包含該受體的組織，限制了不想要的副作用，所 以SlP受體的組織特異性是所希望的。SlP受體的反應(yīng)特異性也很重要，因為它能允許啟動 或抑制某種細胞反應(yīng)而不影響其他反應(yīng)的激動劑或拮抗劑的開發(fā)。例如，SlP受體的反應(yīng) 特異性可允許啟動血小板聚集而不影響細胞形態(tài)的SlP模擬。鞘氨醇1-磷酸酯在鞘氨醇與鞘氨醇激酶的反應(yīng)中作為鞘氨醇代謝產(chǎn)物而形成， 并被豐富地儲存在血小板的聚集物中，在血小板凝集物中存在高水平的鞘氨醇激酶，但缺 乏SlP裂解酶。在血小板聚集過程中，SlP被釋放，在血清中積聚，并且在惡性腹水中也被 發(fā)現(xiàn)。SlP的可逆生物降解被認為是通過由胞外磷酸酶如SlP磷酸水解酶的水解進行，SlP
6被SlP裂解酶不可逆地降解。刺激個體SlP受體的生理影響大部分是未知的，部分是因為缺乏受體類型選擇性 配體。由于從缺乏可溶性的SlP類似物起源的合成的復(fù)雜性，所以對SlP受體具有強效的 激動劑或拮抗劑活性的SlP類似物的分離和表征受到限制。目前，對于能夠調(diào)節(jié)SlP受體的新穎、強效和選擇性的藥劑存有需求；更具體地 說，對于SlP1受體激動劑存有需求。對用于進一步研究與SlP受體的激動作用有關(guān)的生理 過程的藥理學(xué)工具也存有需求。概述本發(fā)明提供了鞘氨醇I-磷酸酯(sphingosine Ι-phosphate)類似物，它們是對 一種或多種SlP受體特別是SlP1受體類型強效的和選擇性的激動劑。所公開的化合物包 括具有磷酸酯部分的化合物以及具有抗水解的磷酸酯替代物的化合物，所述抗水解的磷酸 酯替代物如膦酸酯、α-取代的膦酸酯(特別地，其中的α-取代是鹵素)和硫代膦酸酯 (phosphothionate)。此外，本發(fā)明提供了前體藥物，如在體外例如通過鞘氨醇激酶最特別 是鞘氨醇激酶2型(SPHK2)被激活或轉(zhuǎn)化(例如磷酸化)的含有伯醇的化合物。因此，本發(fā)明提供了具有式⑴或式(II)的鞘氨醇1-磷酸酯類似物 或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是C、CH或N ；R5、R6和R7獨立地是CH、CH2, 0、S、N或NR3 ；其中R3是氫或 (C1-C10)烷基基團；X是羥基(-0H)、羧酸(-C00H)、亞甲基羧酸(-CH2COOH)、α -取代的亞甲基羧酸、磷 酸酯(-OPO3H2)、膦酸酯(-CH2PO3H2)或α-取代的膦酸酯；R1是氫、商、三氟甲基、(C1-Cltl)-烷基、被鹵取代的(C1-Cltl)烷基、羥基、烷氧基或氰 基；R2 是氫、鹵、(C1-C2tl)烷基、(C1-C2tl)烷氧基、(C2-C26)烷氧基烷基；(C2-C2tl)烯基、 (C2-C20)炔基、(C3-C12)環(huán)烷基、(C1-C20)烷基-(C3-C12)環(huán)烷基、(C6-C10)芳基；(C1-C
20)焼基
(C6-C10)芳基、(C6-Cltl)芳基(C1-C2tl)烷基和芳基取代的芳烷基；其中R2基團中的一個或多 個碳原子可獨立地被非過氧化物的氧、硫或NR8取代；其中R8是氫或(C1-Cltl)烷基基團；R1、R2或X的烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基或雜芳基基團任選地被1、2、3或4 個基團取代，其中所述取代基基團獨立地是羥基、鹵、氰基、(C1-Cltl)烷基、(C1-Cltl)烷氧基、 C6-芳基、(C7-C24)芳烷基、氧基(=0)或亞氨基(=NRa) ；Ra是氫或(C1-C10)烷基；η為0、
1、2、3或4 ； O表示一個或多個任選的雙鍵，且R3的烷基基團任選地被1個或2個羥基基
團取代。另一方面，本發(fā)明還提供了式(I)或式(II)的任何化合物的酯，例如，具有如下式(III)或式(IV)的磷酸酯。
其中R1、R2、R4、R5、R6、R7和η如以上所描述，其中可添加酯官能來形成前體藥物以 增加口服利用度。另一方面，本發(fā)明提供了具有式I、式II、式III或式IV的化合物的對映 異構(gòu)體和立體異構(gòu)體。另一方面，本發(fā)明提供了式(I)或式(II)的化合物的前體藥物。另一方面，本發(fā) 明還提供了式(I)、式(II)的化合物，其藥學(xué)上可接受的鹽、酯(例如式(III)或式(IV)) 或其任何組合供醫(yī)學(xué)治療中使用。另一方面，本發(fā)明還提供了 可以是SlP 1型受體激動劑并且當引入到動物中時從而誘發(fā)淋巴細胞減少長達 約5天或更長的時間的化合物；可以是SIPpSIP4和SlP5受體的選擇性激動劑且可具有很長作用持續(xù)時間(例如 比FTY-720(芬戈莫德)更長)的本發(fā)明的化合物；包括式(I)、式(II)的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯(例如式(III)或式(IV)) 或它們的任何組合和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑的藥物組合物；一種預(yù)防或治療自身免疫性疾病的方法，所述疾病是例如，葡萄膜炎、I型糖尿病、 類風濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸病和更特別的多發(fā)性硬化癥；一種預(yù)防或治療慢性疼痛的方法，具體地是神經(jīng)性疼痛，包括但不限于與帶狀皰 疹后神經(jīng)痛和糖尿病相關(guān)的疼痛；一種預(yù)防或治療漸進性癡呆或腦退行性疾病的方法；一種通過改變淋巴細胞運輸以延長同種異體移植物存活率的方法，例如，實體器 官移植體、移植物抗宿主病的治療、骨髓移植等；一種通過抑制自分泌運動因子來治療或預(yù)防癌癥發(fā)展的方法，例如通過預(yù)防或抑 制腫瘤中的血管發(fā)生；—種預(yù)防或治療哺乳動物中的病理狀態(tài)或癥狀的方法，其中涉及到鞘氨醇1-磷 酸酯受體的活性；一種預(yù)防或治療哺乳動物中的病理狀態(tài)或癥狀的方法，其中涉及到SlP裂解酶的 活性并且SlP裂解酶的抑制是令人希望的；其中所述的方法包括向需要這種治療的哺乳動物(例如人)施用有效量的式⑴、 式(II)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯；或者式(I)、式(II)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于制備在哺乳動物(例如，人) 中預(yù)防或治療自身免疫性疾病、預(yù)防或治療慢性疼痛、預(yù)防或治療漸進性癡呆或腦退行性 疾病、改變淋巴細胞運輸或治療或預(yù)防腫瘤中血管發(fā)生的藥物的用途。
本發(fā)明還提供了對于制備式(I)、式(II)、式(III)或式(IV)的化合物有用的本 文公開的新穎的中間體和工藝，包括本文的圖表和實施例中所述的一般和特殊的中間體以 及合成工藝。附圖簡述

圖1舉例說明了制備化合物VPC122096的合成方案。圖2是將鞘氨醇和FTY720與作為人類和小鼠鞘氨醇激酶1型和2型(SPHK1和 SPHK2)底物的測試化合物VPC122093、VPC122096和VPC122097進行比較的體外測定的圖
解說明。圖3是口服施用(管飼法)單劑量(10mg/kg)的VPC122096 (環(huán)戊基)、 VPC122093(環(huán)己基)或VPC122097(環(huán)庚基)后小鼠中循環(huán)淋巴細胞計數(shù)的圖解說明。圖4是向小鼠施用不同劑量的VPC122096或溶媒后總的血液淋巴細胞計數(shù)的圖解 說明。圖5是口服施用(管飼法)2%羥丙基環(huán)糊精(溶媒對照)中的單一濃度的 VPC122096(1. Omg/kg)后在不同時間循環(huán)淋巴細胞計數(shù)測定的結(jié)果的圖解說明，每組3只小鼠。圖6舉例說明了式II的其他化合物。詳述以下縮寫為本文所用S1P，鞘氨醇-1-磷酸酯；SHV5，SlP受體類型；GPCR，G-蛋 白偶聯(lián)受體；SAR，結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系；EDG，內(nèi)皮細胞分化基因；EAE，實驗性自身免疫性腦脊髓 炎；N0D，非肥胖型糖尿??；TNFa，腫瘤壞死因子α ；HDL，高密度脂蛋白；和RT-PCR，逆轉(zhuǎn)錄 酶聚合酶鏈反應(yīng)。在對本發(fā)明的描述和要求中，除非另有定義，本文所用的所有技術(shù)術(shù)語和科學(xué)術(shù) 語都具有與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所通常理解的相同的含義。雖然與本文所 述的材料和方法類似或等同的任何材料和方法都可用在本發(fā)明的實踐或測試中，但本文描 述了優(yōu)選的材料和方法。下列術(shù)語中的每一個的含義都與這部分中的含義相關(guān)。以下所列 的對于自由基、取代基和范圍的具體值和優(yōu)選值僅用于例證說明；它們不排除在自由基和 取代基的定義范圍內(nèi)的其他定義值或其他值。本文互換使用的術(shù)語“一種(a) ”、“一種(an) ”、“該(the) ”、“至少一種”和“一種 或多種”是指一種或一種以上(即至少一種)的語法對象。舉例而言，“一種要素”是指一 種要素或一種以上的要素?！笆荏w激動劑”被定義為模擬SlP在其受體上的作用但具有不同效力或功效的化合 物。術(shù)語“受體激動劑”是模擬SlP在其一種或多種受體上的作用但可能具有不同效 力或功效的化合物。術(shù)語“受體拮抗劑”是如下的化合物1)缺乏內(nèi)在激動劑活性和2)阻斷一種或多 種SlP受體的激動劑(例如，SlP)激活，其方式通常是完全可以克服和可逆的(“競爭性拮 抗劑”)。術(shù)語“受影響的細胞”是指遭受疾病或失調(diào)的受治療者的細胞，相對于未遭受疾病 或失調(diào)的受治療者的細胞，受影響的細胞具有改變的表型。如果細胞或組織具有相對于未遭受疾病或失調(diào)的受治療者的相同細胞或組織而言改變的表型，則所述細胞或組織受疾病 或失調(diào)“影響”。如果疾病或失調(diào)的癥狀的嚴重度、患者經(jīng)歷這樣的癥狀的頻率降低，或兩者 都降低，則所述疾病或失調(diào)被“減輕”?；瘜W(xué)化合物的“類似物”是這樣的化合物，通過舉例，所述化合物與另一種化合物 在結(jié)構(gòu)上相似，但不一定是異構(gòu)體(例如5-氟尿嘧啶是胸腺嘧啶的類似物)。術(shù)語“細胞”、“細胞系”和“細胞培養(yǎng)物”可被互換使用。“對照”細胞、組織、樣品或者受治療者是與測試細胞、組織、樣品或受治療者相同 類型的細胞、組織、樣品或受治療者。例如，可以在與檢驗測試細胞、組織、樣品或受治療者 精確相同或幾乎相同的時間對對照進行檢驗。例如，也可以在與檢驗測試細胞、組織、樣品 或受治療者的時間有距離的時間對對照進行檢驗，并且可以記錄對照的檢驗結(jié)果以便可以 將所記錄的結(jié)果與通過檢驗測試細胞、組織、樣品或受治療者所獲得的結(jié)果進行比較。對照 也可以從測試組或測試受治療者以外的另一來源或類似來源獲得，其中測試樣品可以從懷 疑患有正進行測試的疾病或失調(diào)的受治療者獲得?！皽y試”細胞、組織、樣品或受治療者是正在檢驗的細胞、組織、樣品或受治療者?！安±碇刚鞯摹奔毎?、組織或樣品是如下細胞、組織或樣品當其存在時是所述細 胞、組織或樣品所在(或者從中組織被獲得)的動物遭受疾病或失調(diào)的指征。通過舉例，動 物肺組織中存在一種或多種乳腺細胞是該動物遭受轉(zhuǎn)移性乳腺癌的指征。如果一種或多種細胞存在于沒有遭受疾病或失調(diào)的動物組織中，那么該組織“正 常地包括”所述細胞。詞“檢測”及其語法變體意指測量物類而不進行量化，而詞“確定”或“測量”與它 們的語法變體一起使用意指測量物類并進行量化。術(shù)語“檢測”和“鑒別”在本文被互換使用?！翱蓹z測的標志物”或“報道分子”是允許在不含標志物的類似化合物的存在下特 異性檢測包含該標志物的化合物的原子或分子?？蓹z測的標志物或報道分子包括但不限 于放射性同位素、抗原決定簇、酶、可用于雜交的核酸、生色團、熒光團、化學(xué)發(fā)光分子、電 化學(xué)可檢測的分子和提供改變的熒光偏振或改變的光散射的分子。“疾病”是動物的一種健康狀況，其中所述動物不能保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，并且其中如 果疾病不改善的話，動物的健康就會繼續(xù)惡化。動物內(nèi)的“失調(diào)(disorder) ”是一種健康狀況，在該狀況中動物能夠保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn) 定，但在該狀況中動物的健康狀況不如它在沒有該失調(diào)的情況下良好。如果不進行治療，失 調(diào)并非必然引起動物健康狀況的進一步下降?！坝行Я俊笔侵缸阋援a(chǎn)生選所擇的效果的量?；衔锏摹爸委熡行Я俊笔侵缸阋詫?該化合物所施用的受治療者提供有益效果的化合物的量。例如，SlP受體激動劑的有效量 是降低SlP受體的細胞發(fā)信號活性的量?！爸委熜浴悲煼ㄊ菍Ρ憩F(xiàn)出病理征兆的受治療者施用的、以減少或消除那些征兆為 目的的療法。術(shù)語“治療”包括預(yù)防具體的失調(diào)或病癥，或者減輕與具體的失調(diào)或病癥相關(guān)的癥 狀，或者防止或消除所述癥狀?！邦A(yù)防性”療法是對沒有表現(xiàn)出疾病征兆或僅表現(xiàn)出疾病的 早期征兆的受治療者施用的、以降低與疾病相關(guān)的病理學(xué)發(fā)展的風險為目的的療法。
“功能性”分子是處于如下形式的分子它在該形式中表現(xiàn)出其被表征的特性。通 過舉例，功能性酶是表現(xiàn)出其被表征的特征性催化活性的酶。術(shù)語“抑制”是指所公開的化合物降低或阻礙所述功能的能力。優(yōu)選地，抑制為 至少10%，更優(yōu)選為至少25%，甚至更優(yōu)選為至少50%，以及最優(yōu)選地，功能被抑制了至少 75%。“樣品”優(yōu)選地是指來自受治療者的生物樣品，包括但不限于正常組織樣品、病變 組織樣品、活組織檢查物(biopsies)、血液、唾液、糞便、精液、淚水和尿液。樣品也可以是取 自受治療者的任何其他來源的材料，其包含感興趣的細胞、組織或液體。樣品也可以取自細 胞或組織的培養(yǎng)物。本文所用的術(shù)語“標準”是指用于比較的東西。例如，它可以是在測量測試樣品中 的所述化合物時被施用或添加到對照樣品中并被用于比較結(jié)果的已知標準試劑或化合物。 標準還可指“內(nèi)部標準”，例如在感興趣的標志物被測量前樣品經(jīng)過加工或純化或提取步驟 時以已知量被添加至樣品的并且在確定諸如純化率或回收率中有用的試劑或化合物。分析、診斷或治療的“受治療者”是動物。這些動物包括哺乳動物，優(yōu)選為人。術(shù)語“純化的”及類似術(shù)語涉及一種分子或化合物相對于在天然環(huán)境中與該分子 或化合物正常地相關(guān)聯(lián)的其他組分的富集。術(shù)語“純化”，并非必然表示在這個過程中實現(xiàn) 特定分子的徹底純化。本文所用的“高純化的”化合物是指純度大于90%的化合物。術(shù)語“腸胃外的，，是指不通過消化道而是通過一些其他途徑諸如皮下、肌內(nèi)、脊柱 內(nèi)或靜脈內(nèi)?；衔锏摹把苌铩笔侵缚梢栽谝粋€或多個步驟中如在由烷基、酰基或氨基基團對 氫的取代中從相似結(jié)構(gòu)的另一種化合物產(chǎn)生的化學(xué)化合物。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”包括本領(lǐng)域已知的任何標準藥物載體，如磷酸鹽緩沖 鹽水溶液、羥丙基β-環(huán)糊精(Η0-丙基β環(huán)糊精)、水、乳劑如油/水或水/油乳劑和各種 類型的濕潤劑。該術(shù)語還包括由美國聯(lián)邦政府的管理部門批準或者在美國藥典中所列的用 于動物(包括人)的任何試劑。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指保持有本發(fā)明化合物的生物學(xué)功效和特性的并且 不是生物學(xué)上或其他方面不希望的鹽。在許多情況下，本發(fā)明的化合物能夠借助于氨基或 羧基基團或其類似基團的存在而形成酸式鹽或堿式鹽。“說明材料”包括可以用來交流本發(fā)明的組合物對于其指定用途的有用性的出版 物、記錄、圖或任何其他表達媒介。本發(fā)明的試劑盒的說明材料可以例如附貼于包含該組合 物的容器上或者與包含該組合物的容器裝在一起。可替代地，說明材料可與容器分裝，其目 的是接受者將說明材料與組合物配套使用。所公開的方法包括一種試劑盒，所述試劑盒包括本文所鑒別的抑制劑和描述該抑 制劑或包含該抑制劑的組合物對細胞或動物的施用的說明材料。這應(yīng)該被理解為包括本領(lǐng) 域技術(shù)人員已知的試劑盒的其他實施方案，例如包括在向細胞或動物施用化合物之前溶解 或懸浮所公開的組合物的(優(yōu)選為無菌的)溶劑的試劑盒。優(yōu)選地動物為人。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解所公開的具有手性中心的化合物可能以旋光形式和外 消旋形式存在并以旋光形式和外消旋形式分離。一些化合物可能會表現(xiàn)出多態(tài)性。應(yīng)理解 的是，所公開的化合物包括具有本文所述有用特性的任何外消旋、旋光、多態(tài)或立體異構(gòu)體
11形式或其混合物，而如何制備旋光形式(例如，通過重結(jié)晶技術(shù)的外消旋形式的拆分、通過 從旋光原料的合成、通過手性合成或通過使用手性固定相進行的色譜分離)和如何使用本 文所述的標準測試或使用本領(lǐng)域公知的其他類似測試確定SlP激動劑活性是本領(lǐng)域公知 的。在化合物有形成酸式鹽或堿式鹽的足夠的堿性或酸性的情況中，該化合物作為鹽 使用可能是適當?shù)??？山邮艿柠}的例子是用形成生理上可接受的陰離子的酸所形成的有機 酸加成鹽，例如，甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、丙二酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、 苯甲酸鹽、抗壞血酸鹽、α-酮戊二酸鹽和α-甘油磷酸鹽。也可以形成無機鹽，包括鹽酸 鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、碳酸氫鹽和碳酸鹽。藥學(xué)上可接受的酸加成鹽可由無機酸和有機酸制得。從無機酸衍生的鹽包括鹽 酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及類似物。從有機酸衍生的鹽包括乙酸、丙酸、羥乙酸、丙酮酸、 草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲 磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸及類似物。藥學(xué)上可接受的堿加成鹽可由無機堿和有機堿制得。僅通過舉例，從無機堿衍生 的鹽包括鈉、鉀、鋰、銨、鈣和鎂鹽。從有機堿衍生的鹽包括但不限于伯胺、仲胺和叔胺的鹽， 如烷基胺、二烷基胺、三烷基胺、取代的烷基胺、二(取代的烷基)胺，三(取代的烷基)胺、 烯基胺、二烯基胺、三烯基胺、取代的烯基胺、二(取代的烯基)胺、三(取代的烯基)胺、環(huán) 烷基胺、二(環(huán)烷基)胺、三(環(huán)烷基)胺、取代的環(huán)烷基胺、二取代的環(huán)烷基胺、三取代的環(huán) 烷基胺、環(huán)烯基胺、二(環(huán)烯基)胺、三(環(huán)烯基)胺、取代的環(huán)烯基胺、二取代的環(huán)烯基胺、 三取代的環(huán)烯基胺、芳基胺、二芳基胺、三芳基胺、雜芳基胺、二雜芳基胺、三雜芳基胺、雜環(huán) 胺、二雜環(huán)胺、三雜環(huán)胺、混合的二胺和三胺，其中胺上的至少兩個取代基是不同的，并且是 烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、芳基、 雜芳基、雜環(huán)基及類似物。還包括如下的胺其中兩個或三個取代基與氨基氮一起形成雜環(huán) 基或雜芳基基團。僅通過舉例，胺的例子包括異丙基胺、三甲基胺、二乙基胺、三(異丙基) 胺、三(正丙基)胺、乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、氨丁三醇、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、 普魯卡因、哈胺(hydrabamine)、膽堿、甜菜堿、乙二胺、葡萄糖胺、N-烷基葡糖胺、可可堿、 嘌呤、哌嗪、哌啶、嗎啉、N-乙基哌啶及類似物。還應(yīng)該了解的是，其他羧酸衍生物在本發(fā)明 的實施中將是有用的，例如，羧酸酰胺，包括羧酰胺、低級烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺及類似 物。可接受的鹽可采用本領(lǐng)域公知的標準程序獲得，例如通過將足量的堿性化合物例 如胺與提供生理上可接受的陰離子的酸反應(yīng)。也可制得有機酸(例如羧酸)的堿金屬(例 如，鈉、鉀或鋰)或堿土金屬(例如鈣)鹽。用于制備式⑴、式(II)的化合物的方法或用于制備對制備式⑴或式(II)的化 合物有用的中間體的方法被作為本發(fā)明的另外的實施方案提供。對制備式(I)或式(II) 的化合物有用的中間體也作為本發(fā)明的另外的實施方案提供。術(shù)語“鹵素”或“鹵”包括溴代、氯代、氟代和碘代。本文所用術(shù)語“鹵代烷基”是指具有至少一個鹵素取代基的烷基(alkylradical)， 例如，氯甲基、氟乙基或三氟甲基及類似物。本文所用術(shù)語“烷基或C1-C2tl烷基”表示具有1至20個碳原子的支鏈或直鏈烷基
12基團。通常地，C1-C2tl烷基基團包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲 丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基及類似物。本文所用術(shù)語“烯基或C2-C2tl烯基”表示具 有2至20個碳原子和至少一個雙鍵的烯屬不飽和支鏈或直鏈基團。這些基團的例子包括 但不限于1-丙烯基、2-丙烯基、1，3_ 丁二烯基、1-丁烯基、己烯基、戊烯基及類似物。術(shù)語 “炔基或C2-C2tl炔基”是指具有2至20個碳原子和至少一個三鍵的不飽和支鏈或直鏈基團。 這些基團的例子包括但不限于1-丙炔基、2-丙炔基、1- 丁炔基、2- 丁炔基、1-戊炔基及類 似物。術(shù)語"C3-C12環(huán)烷基”表示環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基及類似物。本文所用術(shù)語“任選地取代的”是指0、1、2、3或4個取代基，其中所述取代基被各 自獨立地選擇。每個獨立選擇的取代基可與其他取代基相同或不同。所述取代基基團獨立 地是羥基、鹵、氰基、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、C6-芳基、(C7-C24)芳烷基、氧基(=0)、 或亞氨基(=NRa)、其中Ra是氫或(C1-C10)烷基。本文所用術(shù)語“芳基”是指具有一個或兩個芳族環(huán)的C6-Cltl單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)系統(tǒng)， 包括但不限于苯基、芐基、萘基、四氫萘基、茚滿基、茚基及類似物。本文所用的“任選地取代的芳基”包括具有0至4個取代基的芳基化合物，并且取 代的芳基包括具有1至3個取代基的芳基化合物，其中所述取代基包括諸如例如烷基、鹵或
氨基取代基的基團。術(shù)語“芳烷基”是指通過烷基基團連接于母體部分的任何芳基基團，例如，芳基 (C1-C20烷基)。因此，術(shù)語(C5-C6芳基)(C5-C8烷基)是指通過C5-C8烷基基團連接于母體 部分的五元或六元芳族環(huán)。術(shù)語“雜環(huán)基團”是指包括1至3個雜原子的任選地取代的單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)系統(tǒng)， 其中所述雜原子是氧、硫或氮。本文所用術(shù)語“雜芳基”是指具有一個或兩個包含1-3個雜原子的芳族環(huán)的任選 地取代的單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)系統(tǒng)，并且包括但不限于呋喃基、噻吩基、吡啶基及類似物。術(shù)語“雙環(huán)”代表不飽和或飽和的穩(wěn)定的7元至12元橋接或稠合的雙環(huán)碳環(huán)。雙 環(huán)可能在提供穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的任何碳原子處連接。該術(shù)語包括但不限于萘基、二環(huán)己基、二環(huán)己 烯基及類似物。本發(fā)明的化合物可在分子中包含一個或多個不對稱中心。按照本發(fā)明，不指定立 體化學(xué)的任何結(jié)構(gòu)應(yīng)當理解為包括所有各種光學(xué)異構(gòu)體及其外消旋混合物。本發(fā)明的化合物可能以互變異構(gòu)形式存在并且本發(fā)明包括兩者的混合物和分離 的單個互變異構(gòu)體。例如，以下的結(jié)構(gòu)
被理解為代表以下結(jié)構(gòu)的混合物
以及 術(shù)語16 0、18 0、18 1、20 4或22 6烴是指支鏈或直鏈烷基或烯基基團，其中第一 個整數(shù)代表該基團中碳的總數(shù)，而第二個整數(shù)代表該基團中的順式雙鍵數(shù)。"SlP調(diào)節(jié)劑”是指能夠在體內(nèi)或體外誘導(dǎo)SlP受體活性的可檢測的改變的化合物或組合物(例如，SlP活性的至少10%的增加或減少，如通過給定測試如在實施例所述和本 領(lǐng)域已知的生物測定所測量的)。除非指明具體亞型，否則本文所用的“S1P受體”是指所 有的SlP受體亞型(例如，SlP受體SlP1, SlP2, S1P3、SlP4和SlP5)。術(shù)語“試劑的EC5tl”是指給定活性是該SlP受體的50%最大活性的試劑濃度，所述 給定活性包括結(jié)合鞘氨醇或SlP受體的其他配體或者包括SlP受體的功能活性(例如，發(fā) 信號活性)。換言之，EC5tl是當100%激活被設(shè)定在不隨更多配體/激動劑的添加而增加的 SlP受體的活性的量并且0%激活被設(shè)定在不存在添加的配體/激動劑時該測定中的活性 的量時給予50%激活的試劑的濃度。術(shù)語“磷酸酯類似物”、“膦酸酯類似物”或“磷酸酯”包括其中磷原子處于+5價 氧化態(tài)并且一個或多個氧原子被非氧部分取代的磷酸酯和膦酸酯的類似物，其包括例如 磷酸酯類似物硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯(phosphoroselenoate)、二硒代磷 酸酯(phosphorodiselenoate)、苯胺硫代磷酸酯(phosphoroanilothioate)、苯胺磷酸酯 (phosphoranilidate)、氨基磷酸酯、硼磷酸酯(boronophosphate)及類似物，包括相關(guān)的 抗衡離子，例如氫、NH4, Na及類似物，如果存在這樣的抗衡離子的話。術(shù)語“ α _取代的膦 酸酯”包括在α-碳上被取代的膦酸酯(-CH2PO3H2)基團，如-CHFPO3H2、-CF2PO3H2、-CHOHPO3H 2、_C( = 0) PO3H2及類似基團。本發(fā)明提供了對一種或多種SlP受體特別是SIPpSIP4和SlP5受體類型具有作為 受體激動劑活性的鞘氨醇1-磷酸酯(SIP)類似物。本發(fā)明包括具有磷酸酯部分的化合物 以及具有抗水解的磷酸酯替代物的化合物，所述磷酸酯替代物如膦酸酯、α -取代的膦酸酯 (特別地，其中α取代是鹵素)和硫代膦酸酯。在SlP受體激動劑的一個實施方案中具有式(II Α)的一般結(jié)構(gòu) 或是其藥學(xué)上可接受的鹽，其中η為0、1、2、3或4;Χ是羥基(-0Η)、羧酸(-C00H)、亞甲基羧酸(-CH2COOH)、 α -取代的羧酸、磷酸酯(-OPO3H2)、膦酸酯(-CH2PO3H2)或α -取代的膦酸酯(包括-CHFP0 3Η2、-CF2PO3H2、-CHOHPO3H2、-C ( = 0) PO3H2)；其中R1是氫、鹵素(其中F或Cl是優(yōu)選的鹵素)，諸如甲基、乙基和丙基的(C1-C6) 烷基，或鹵、羥基、烷氧基、氰基取代的(C1-C6)烷基諸如三氟甲基；R2是烷基、烯基、炔基、烷 基取代的芳基、烷基取代的環(huán)烷基、芳烷基或芳烷基取代的芳基。在R2中，5-8個碳原子的 鏈的長度是優(yōu)選的。本發(fā)明還提供了式(II)的任何化合物的酯，如磷酸酯，其中可添加酯官能以形成 前體藥物來提高口服利用度。
在所優(yōu)選的實施方案中，具有式(II)的化合物中R1是H、鹵(優(yōu)選為F或Cl)、甲 基、三氟甲基、乙基、丙基或其他低級烷基(C1-C6),或鹵、羥基、烷氧基、氰基取代的低級烷基 基團；且R2是烷基、烯基、炔基、烷基(任選地取代的芳基)、烷基(任選地取代的環(huán)烷基)、 芳烷基，且鏈長度為5-8個碳原子的芳烷基(任選地取代的芳基)是優(yōu)選的。SlP受體激動劑前體藥物(優(yōu)選為SlP1受體類型選擇性激動劑)的潛在用途包括 但不限于作為治療自身免疫性病理的方法的改變淋巴細胞運輸，所述自身免疫性病理諸如 葡萄膜炎、I型糖尿病、類風濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸病，而最特別的是多發(fā)性硬化癥。多發(fā)性硬 化癥的“治療”包括該病的不同形式，包括復(fù)發(fā)緩和型、慢性進行型等，且SlP受體激動劑可 單獨使用或與其他藥物結(jié)合使用以緩解以及預(yù)防疾病的征兆和癥狀。此外，本發(fā)明的化合物可用于改變淋巴細胞運輸是用于延長同種異體移植物存活 率的方法，例如實體器官移植體、移植物抗宿主病的治療、骨髓移植及類似物。所公開的化合物可用于抑制自分泌運動因子。自分泌運動因子是一種血漿磷酸二 酯酶，已證明其經(jīng)歷終產(chǎn)物抑制。自分泌運動因子水解為幾種底物以產(chǎn)生溶血磷脂酸和鞘 氨醇1-磷酸酯，并涉及癌癥發(fā)展和血管發(fā)生。因此，SlP受體激動劑前體藥物如VPC122096 可用于抑制自分泌運動因子。這種活性可與對SlP受體的激動作用結(jié)合或可能與此活性無 關(guān)。此外，本發(fā)明的化合物可用于抑制SlP裂解酶。SlP裂解酶是一種不可逆地降解 SlP的胞內(nèi)酶。SlP裂解酶的抑制破壞淋巴細胞運輸且伴隨淋巴細胞減少。因此，SlP裂解 酶抑制劑可有助于調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的功能。所以，前體藥物如VPC122096可用于抑制SlP裂 解酶。這種抑制作用可能與SlP受體活性一致，或者與任何SlP受體活性無關(guān)。本發(fā)明還包括包含本發(fā)明的化合物的藥物組合物。更特別地，可使用本領(lǐng)域技術(shù) 人員已知的標準的藥學(xué)上可接受的載體、填充劑、增溶劑和穩(wěn)定劑將這些化合物配制成藥 物組合物。例如，包含如本文所述的本發(fā)明化合物、或其類似物、衍生物或變體的藥物組合 物被用于向受治療者施用適當?shù)幕衔铩１景l(fā)明的化合物對于治療疾病或失調(diào)是有用的，包括向需要它的受治療者施用治 療上可接受量的式(I)的化合物或包含治療上有效量的式(I)或式(II)的化合物以及藥 學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。以下所列的自由基、取代基和范圍的值僅是為了舉例說明；它們不排除在所述自 由基和取代基定義范圍內(nèi)的其他定義值或其他值。低級烷基基團的示范值是乙基或丙基。鹵的示范值是是氟或氯。X的示范值是羥基或OPO3H2。α -取代的膦酸酯包括-CHFPO3H2、-CF2PO3H2、-CHOHPO3H2、-C ( = 0) PO3H2)或硫代磷 酸酯(OPO2SH2)。R1的示范值是氫。R2的示范值是鏈長度為5-8個碳原子的烷基基團。R2 的其他示范值是庚基、辛基、壬基、-0-庚基、CH3-0-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-、-C( = 0)庚基或 CH3-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-。R2烷基基團的其他示范值是辛基、CH3-O-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-或_0_庚基。
另一個示范的R2烷基基團是辛基。 η的示范值是2或3。
具有雙鍵的示范性環(huán)烷基或雜環(huán)基團包括
示范性化合物具有位于該環(huán)烷基環(huán)的對位的R2基團。 示范性化合物具有位于R2的鄰位或間位的R1基團。 示范性化合物具有位于芐型環(huán)烷基基團的對位(即1，4)的R2基團。 本發(fā)明的化合物的酯的非限制性例子包括其中X基團是下式的化合物 其中R11是C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、或任選地取代的芳基。優(yōu)選的R9和
Rltl基團為烷氧基、 圖1的方案中提供了制備VPC122096的合成路線。式⑴或式(II)的其他化合 物可由本領(lǐng)域的技術(shù)人員使用來自以下具體例子中的方案和詳細描述的步驟的已知改進 制得。式(II)的示范性化合物是VPC122096，其中X是OH, R1是氫，R2是辛烷(C8H17)，η
是2，且R2基團在苯環(huán)上的對位。所述式為 式(II)的另一個示范性化合物是VPC122093，其中X是0Η，R1是氫，R2是辛烷 (C8H17), η是3，且R2基團在苯環(huán)上的對位。所述式為 式(II)的另一個示范性化合物是VPC122097，其中X是0Η，R1是氫，R2是辛烷 (C8H17), η是4，且R2基團在苯環(huán)上的對位。所述式為 本發(fā)明還包括以下異構(gòu)體 式(II)的另一個示范性化合物是VPC122096-P，其中X是OPO3H2，R1是氫，R2是辛 烷(C8H17)，η是2，且R2基團在苯環(huán)上的對位。所述式為 式(II)的其他示范性化合物在圖6中顯示。式(I)的包含雜原子(例如N、S、0)或者環(huán)烷基環(huán)中的雙鍵的其他示范性化合物 包括以下結(jié)構(gòu) 本發(fā)明還提供了式(I)或式(II)的化合物的酯，其中酯的形成可將所述化合物轉(zhuǎn) 換為前體藥物以增強施用，例如，增加口服利用度。此外，本發(fā)明還提供了式(I)或式(II) 的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明還提供了由式(I)或式(II)所描述的結(jié)構(gòu)的所有 可能的異構(gòu)體，指出當η是一(環(huán)丁烷)時該化合物是對稱的并且缺乏手性中心，但存在順 式和反式形式。包含本發(fā)明的一種或多種化合物的藥物組合物可以通過任何數(shù)目的途徑和方式 施用給需要它們的受治療者，所述途徑和方式包括但不限于局部、口服、口含、靜脈內(nèi)、肌 內(nèi)、動脈內(nèi)、髓內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、經(jīng)皮、皮下、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、腸內(nèi)、外用、舌下、陰道、眼部、肺 部或直腸的方式。大多數(shù)需要本發(fā)明的化合物的情況通常采用口服途徑。對于急性治療優(yōu) 選給與靜脈內(nèi)注射或輸注。對于維持方案，口服或腸胃外例如肌內(nèi)或皮下途徑是優(yōu)選的。根據(jù)一個實施方案，提供了包括式(I)、式(II)的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、 酯、類似物、衍生物、變體或組合和白蛋白的組合物。更具體地說，所述組合物包括式(I)、 式(II)的化合物、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯、類似物、衍生物、變體或組合，藥學(xué)上可接受的 載體和0.1-1.0%的白蛋白。白蛋白作為緩沖劑發(fā)揮功能并提高所述化合物的可溶性。在 一個方面中，不添加白蛋白。在一個實施方案中，對于實施本發(fā)明有用的藥物組合物可以被施用以遞送Ing/ kg/天與100mg/kg/天之間的劑量。在另一個實施方案中，對于實施本發(fā)明有用的藥物組合 物可以被施用以遞送lng/kg/天與100g/kg/天之間的劑量。有用的藥學(xué)上可接受的載體包括但不限于甘油、水、鹽水、乙醇以及其他藥學(xué)上可 接受的鹽溶液，如磷酸鹽和有機酸的鹽。這些和其他藥學(xué)上可接受的載體的例子描述于 Remington' s Pharmaceutical Sciences () (1991, Mack Publication Co.，New Jersey)中。藥物組合物可能以無菌可注射的水性或油性懸浮液或溶液的形式制備、包裝或出售。這種懸浮液或溶液可根據(jù)已知技術(shù)配制，并且除了活性成分之外可能包括其他成分如 本文所述的分散劑、濕潤劑或懸浮劑。這種無菌可注射制劑可使用無毒的腸胃外可接受的 稀釋劑或溶劑制備，諸如例如水或1，3_ 丁二醇。其他可接受的稀釋劑和溶劑包括但不限于 林格氏液、等滲氯化鈉溶液和不揮發(fā)性油，如合成的單甘油酯或甘油二酯。使用本文所述的任何方法鑒別的化合物可被配制并施用給受治療者用于治療本 文所述的任何疾病和失調(diào)。然而，本發(fā)明的化合物的用途不應(yīng)該被解釋為只包括本文所述 的疾病和失調(diào)。優(yōu)選地，受治療者是人。本文所述的藥物組合物的制劑可通過藥理學(xué)領(lǐng)域內(nèi)任何已知或此后發(fā)展的方法 制備。一般來說，這些制備方法包括使活性成分與載體或一種或多種其他的輔助成分結(jié)合 的步驟，然后，如果需要或是希望的話，將產(chǎn)品成形或包裝成期望的單劑量或多劑量單元。雖然本文所提供的藥物組合物的描述主要是針對向人施用的藥物組合物，但是本 領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解這些組合物適于向所有種類的動物施用。充分理解的是，對向人施用的藥物組合物進行改變以使該組合物向各種動物施 用，并且普通熟練的獸醫(yī)藥理學(xué)家能夠只用普通的實驗(如果有的話)設(shè)計并進行這種改 變。本發(fā)明的藥物組合物所施用的受治療者預(yù)期包括但不限于人類和其他靈長類動物以及 哺乳動物，包括商業(yè)相關(guān)哺乳動物，如牛、豬、馬、羊、貓和狗。本發(fā)明的藥物組合物可作為單一單位劑量或作為多個單一單位劑量而批量制備、 包裝或出售。如本文所用的“單位劑量”是包括預(yù)定量的活性成分的藥物組合物的離散量。 活性成分的量一般等于將向受治療者施用的活性成分的劑量或這種劑量的方便的小部分， 例如，諸如這種劑量的二分之一或三分之一。活性成分、藥學(xué)上可接受的載體和本發(fā)明藥物組合物中的任何其他成分的相對量 將會變化，這取決于所治療的受治療者的個性特征、大小和情況并且還取決于組合物有待 施用的路徑。通過舉例，組合物可包括0. 和100% (w/w)之間的活性成分。除了活性成分以外，本發(fā)明的藥物組合物還可包括一種或多種另外的藥學(xué)活性 劑。特別考慮的另外的試劑包括止吐劑和清除劑，如氰化物和氰酸鹽清除劑。本發(fā)明藥物組合物的控釋或持續(xù)釋放的制劑可使用常規(guī)技術(shù)制得。在某些情況下，所使用的劑型可提供為一種或多種活性成分的緩釋或控釋，其中 使用了例如羥丙基甲基纖維素、其他聚合物基質(zhì)、凝膠、可滲透膜、滲透系統(tǒng)、多層包衣、微 粒、脂質(zhì)體或微球或它們的組合來提供不同比例的希望的釋放曲線?？扇菀椎剡x擇本領(lǐng)域 普通技術(shù)人員已知的示范性控釋制劑(包括本文所述的那些制劑)用于本發(fā)明的藥物組合 物。因此，口服施用的單一單位劑型如適合于控釋的片劑、膠囊、軟膠囊和囊片被包括?？蒯屩苿┛杀辉O(shè)計為最初釋放迅速產(chǎn)生希望的療效的藥物的量，然后逐漸且持續(xù) 地釋放藥物的其他量以便在一段延長的時間內(nèi)維持這種療效水平。為了在體內(nèi)保持這種藥 物的恒定水平，藥物必須以將更換被代謝和從機體排出的藥物量的速率從劑型中釋放。活 性成分的控釋可以由不同的誘導(dǎo)因素(inducer)激發(fā)，例如pH、溫度、酶、水或其他生理條 件或化合物。本發(fā)明藥物制品的粉狀和粒狀制劑可使用已知的方法制備。這種制劑可直接向受 治療者施用，用來例如形成片劑、填充膠囊或通過向其中添加水性或油性溶媒制備水性或 油性懸浮液或溶液。這些制劑的每一種還可以包括一種或多種分散劑或濕潤劑、懸浮劑和防腐劑。其他的賦形劑，如填充劑和甜味劑、調(diào)味劑或著色劑也可以包括在這些制劑中?！坝托浴币后w是包括含碳液體分子并表現(xiàn)出比水小的極性特征的液體?？诜┯玫谋景l(fā)明的藥物組合物的制劑可能以離散的固體劑量單位的形式制備、 包裝或出售，所述離散的固體劑量單位包括但不限于片劑、硬或軟的膠囊、扁囊劑、含劑或 錠劑，每種包含預(yù)定量的活性成分。口服施用的其他制劑包括但不限于粉狀或顆粒狀制劑、 水性或油性懸浮液、水性或油性溶液、糊劑、凝膠、牙膏、漱口劑、包衣、口腔清洗劑或乳劑。 術(shù)語口腔清洗劑和漱口劑在本文中可互換使用。例如，含活性成分的藥片可通過將活性成分任選地與一種或多種附加成分一起壓 制或模制制得。壓制的片劑可通過在合適的裝置中壓制任選地與一種或多種粘合劑、潤滑 劑、賦形劑、表面活性劑和分散劑相混合的自由流動形式的活性成分如粉末或顆粒制品而 制備。模制的片劑可通過在合適的裝置中對活性成分、藥學(xué)上可接受的載體的混合物和至 少足以潤濕混合物的液體進行模制制得。在片劑生產(chǎn)中所用的藥學(xué)上可接受的賦形劑包括 但不限于惰性稀釋劑、成粒劑及崩解劑、粘合劑和潤滑劑。已知的分散劑包括但不限于馬鈴 薯淀粉和淀粉羥基乙酸鈉。已知的表面活性劑包括但不限于十二烷基硫酸鈉。已知的稀釋 劑包括但不限于碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、微晶纖維素、磷酸鈣、磷酸氫鈣和磷酸鈉。已知的成 粒劑和崩解劑包括但不限于玉米淀粉和海藻酸。已知的粘合劑包括但不限于明膠、阿拉伯 膠、預(yù)膠化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和羥丙基甲基纖維素。已知的潤滑劑包括但不限于 硬脂酸鎂、硬脂酸、二氧化硅和滑石。片劑可以是非包衣的或者它們可以使用已知的方法包覆以實現(xiàn)在受治療者的胃 腸道中的延遲崩解，從而提供活性成分的持續(xù)釋放和吸收。通過舉例，材料如單硬脂酸甘油 酯或二硬脂酸甘油酯可用于包覆片劑。進一步通過舉例，片劑可使用專利號為4，256，108、 4，160，452和4，265，874的美國專利中所述的方法包衣以形成滲透性控釋片劑。片劑還可 以包括甜味劑、調(diào)味劑、著色劑、防腐劑或這些物質(zhì)的某種組合以提供藥學(xué)上精致的和適口 的制品。包括活性成份的硬膠囊可使用生理上可降解的成分如明膠制得。這些硬膠囊包括 活性成分并且還可以包括附加成分，所述附加成分包括例如惰性固體稀釋劑，如碳酸鈣、磷 酸鈣或高嶺土。包括活性成份的軟明膠膠囊可使用生理學(xué)上可降解的成分如明膠制得。這些軟膠 囊包括可與水或油介質(zhì)如花生油、液體石蠟或橄欖油混合的活性成分。所公開的口服施用的藥物組合物的液體制劑可以以液體形式或預(yù)期在使用前用 水或另一種合適的溶媒復(fù)原的干燥產(chǎn)品形式制備、包裝和出售?？勺⑸涞闹苿┛梢砸詥挝粍┬椭苽洹b或出售，例如在包含防腐劑的安瓿中或 者多劑量容器中。腸胃外施用的制劑包括但不限于懸浮液、溶液、油性或水性溶媒中的乳 液、糊劑和可植入的緩釋制劑或生物可降解的制劑。這些制劑還可以包括一種或多種附加 成分，所述附加成分包括但不限于懸浮劑、穩(wěn)定劑或分散劑。在一個腸胃外施用的制劑的實 施方案中，活性成分以在腸胃外施用復(fù)原的組合物之前用合適的溶媒(如滅菌無熱原水) 復(fù)原的干燥(例如粉末或顆粒)形式提供。本發(fā)明的藥物組合物可能以口含施用的制劑制備、包裝或出售。例如，這些制劑可 處于使用常規(guī)方法制得的片劑或錠劑形式，并且可以包含例如0.1至20% (w/w)的活性成分，其余部分(balance)包含口服可溶或可降解的組分，和任選的一種或多種本文所述的 附加成分。可替代地，口含施用的制劑可包括包含活性成分的粉末、氣霧化或霧化的溶液或 懸浮液。這些粉狀、氣霧化或霧化的制劑在分散時優(yōu)選地具有范圍從約0. 1到約200納米 的平均粒徑或液滴大小，并還可以包括一種或多種本文所述的附加成分。“附加成分”包括但不限于以下的一種或多種賦形劑；表面活性劑；分散劑；惰性 稀釋劑、成粒劑和崩解劑；粘合劑；潤滑劑；甜味劑；調(diào)味劑；著色劑；防腐劑；生理上可降 解的成分，如明膠；水性溶媒和溶劑；油性溶媒和溶劑；懸浮劑；分散劑或濕潤劑；乳化劑； 粘滑劑(demulcent)；緩沖劑；鹽；增稠劑；填充劑；乳化劑；抗氧化劑；抗生素；抗真菌劑； 穩(wěn)定劑；和藥學(xué)上可接受的聚合材料或疏水材料。參閱Genaro.編.1985，Remington’ s Pharmaceutical Sciences (雷明登氏制藥科學(xué)),Mack PublishingCo.，Easton, PA，其通 過引用并入本文。化合物能夠以每天數(shù)次的頻率向受治療者施用，或者它可頻率較小地施用，如每 天一次、每周一次、每兩周一次、每月一次或者甚至頻率更小，如每幾個月一次或者甚至一 年一次或更少。劑量的頻率對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將是容易明白的，并將取決于很多因素， 例如但不限于正在接受治療的疾病的類型和嚴重度、受治療者的類型和年齡等。本發(fā)明還提供了藥物包裝或試劑盒，其包括填充有本發(fā)明的藥物組合物的一種或 多種成分的一個或多個容器。根據(jù)一個實施方案，提供試劑盒用于治療需要免疫調(diào)節(jié)的受 治療者。優(yōu)選地，受治療者是人。在一個實施方案中，試劑盒包括本發(fā)明的一種或多種SiP 類似物并且還可以包括一種或多種已知的免疫抑制物。這些藥物可以被包裝在多種容器 中，例如小瓶、管、微量滴定孔板、瓶及類似物。其他試劑可被包括在單獨容器中并且為試劑 盒所配備，例如陽性對照樣品、陰性對照樣品、緩沖液、細胞培養(yǎng)基等。優(yōu)選地，試劑盒還將 包括使用說明書。雖然類似于或等同于本文所述的方法和材料的任何方法和材料可用在本發(fā)明的 實施或測試中，但是本文描述了優(yōu)選的方法和材料。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將容易地理解本發(fā)明很好地適合于實現(xiàn)所述目的并獲得所提 到的終點和優(yōu)點以及其中所固有的那些?？梢杂闷渌唧w形式體現(xiàn)本發(fā)明而不背離其精神 或本質(zhì)屬性。
實施例現(xiàn)在參照下面的實施例對本發(fā)明進行描述。提供這些實施例僅是為了說明的目 的，且本發(fā)明絕不應(yīng)該被解釋為受限于這些實施例，而應(yīng)該被解釋為包括由于本文所提供 的教導(dǎo)而變得明顯的任何及所有的變化形式。實施例1 : (1-氨基-2-(4’ -辛基芐基)環(huán)戊基)甲醇(9)A. :2-(4’_碘代芐基)環(huán)戊酮(3)。在室溫、氮氣氣氛下，將2-乙氧羰基環(huán)戊酮⑴ (1.0當量，1.568，10.0讓01)溶解于IOOmL的四氫呋喃中。加入乙醇鈉(1. 10當量，748mg， ll.Ommol)，然后引入4’ -碘代芐基氯(1.25當量，3. 15g，12. 5mmol)，將反應(yīng)加熱至回流并 保持6小時。然后使反應(yīng)冷卻，并在真空中去除溶劑，提供粗的2-乙氧羰基_2-(4’ -碘代 芐基)環(huán)戊酮(2)。將粗產(chǎn)物溶于IOOmL含水乙醇(10%水ν/ν)中，加入硫酸(0. ImL)，并 將反應(yīng)在氮氣下回流6小時。然后使反應(yīng)冷卻，用IOOmL乙醚稀釋并用5%碳酸氫鹽水溶液(2X50mL)萃取，然后有機層用鹽水洗滌，并用MgSO4干燥。在真空中去除溶劑得到一種 黃色的油，通過使用乙酸乙酯/己烷作為洗脫劑的快速柱層析法將其純化產(chǎn)生2-(4’ -碘 代芐基)環(huán)戊酮(3) (2. 145g，7.20mmol，72% )。(參見0rganic Syntheses (有機合成)， Coll.第 5 卷，第 76 頁(1973)；第 45 卷，第 7 頁(1965))。B. :2-(4’_(辛-1-炔基)芐基)環(huán)戊酮(4).將1. Ig(IOmmol)的1_辛炔添加到 已裝入1.498(5讓01)2-(4，-碘代芐基)環(huán)戊酮(3)的THF溶液(IOmL)的火焰干燥的25mL 燒瓶中。排氣30分鐘后，在氮氣保護下加入2mL三乙胺、5mg CuI和IOmg的Pd (PPh3) 4。反 應(yīng)在室溫下攪拌6小時，然后在真空中去除溶劑，并用氯仿洗脫劑對殘余物進行層析分離 以得到1.25g(93%)的黃色油。13C NMR (CDCl3) δ 220，143，132，127，122，91，80，46，42，39，32，31，29，29，23，20，14。C. :2-(4’_辛基芐基)環(huán)戊酮(5)。將幾滴甲酸和催化量的5% Pd/C添加到已裝 入IOmL甲醇和1. 25g(4. 75mmol)的2-(4，-(辛-1-炔基)芐基)環(huán)戊酮(4)的25mL燒瓶 中。反應(yīng)容器用H2吹洗三次，并隨即安裝上H2氣球。在氫氣氣氛下兩天后，將反應(yīng)混合物 暴露于氮氣，然后通過硅膠墊過濾。硅膠塞用乙醚洗滌(2X25mL)，并將合并的有機層濃縮 至粗產(chǎn)物，提供一種淺黃色油(1. 24g,98% )。13C NMR (CDCl3) δ 220，142，140，129，127，46，42，39，36，32，32，32，30，30，29，23，14。D. :1-氨基_2-(4’ -辛基芐基)環(huán)戊烷腈(6)。將2_(4_辛基芐基)環(huán)戊酮 (5)3. 20g(ll. 8mmol)、氰化鈉 1. 15g(23. 5mmol)和氯化銨 1. 25g(23. 5mmol)添加到 20mL氫 氧化銨中。將該混合物在室溫下劇烈攪拌12小時，然后倒入分液漏斗，并用IOmL 二氯甲烷 萃取兩次。將有機層合并，干燥，然后濃縮以給出粗的黃色油(3. 30g，約100% )。粗產(chǎn)物用 于下一步而不需要進一步純化。(參見J. Med. Chem.，1986，29，1988-1995)。E. 氨基_2-(4’ -辛基芐基)環(huán)戊烷羧酸(7)。將1_氨基_2_(4’ -辛基芐 基)環(huán)戊烷腈(6)(3.3g，11.2mm0l)和50mL濃鹽酸加熱至70°C并攪拌過夜。將生成的澄 清水溶液蒸發(fā)至干燥。加入IOmL水，然后再干燥。將這個過程重復(fù)幾次。粗產(chǎn)物用水和 丙酮洗滌以給出白色細粉末，該白色細粉末被用于下一步而不需要進一步純化。粗產(chǎn)量為 1. 71g(45% )。13C NMR (d6-DMS0) δ 175，141，140，64，51，46，45，44，36，35，35，34，32，32，29，29，
23，15。F. :(1-氨基-2-(4’-辛基苯基)環(huán)戊基)甲醇(8)。將1_氨基_2_ (4’ -辛基芐 基)環(huán)戊烷羧酸(7) (63. 4mg，0. 2mmol)和27mg(0. 6mmol)硼氫化鈉溶解于3mL的THF中。 在溶液冷卻至0°C后，將5Img (0. 2mmol) I2溶解于ImL THF中并且被逐滴加入。然后，在容器 上安裝一個冷凝器，并將反應(yīng)混合物在N2下回流5小時。然后用甲醇猝滅過量的NaBH4,并 且在真空下除去溶劑。將水(2mL)和二氯甲烷(5mL)添加到殘余物中，并將混合物攪拌約1 小時直到有機層變得澄清。收集有機相，并將水相用二氯甲烷進一步萃取兩次(5mL級分)。 干燥并濃縮合并的有機萃取物以給出43mg(71%)的粗產(chǎn)物。在用甲醇/氯仿(5 95)的 TLC 上進一步純化，給出 13mg 澄清的油。J. Org. Chem.，1993，58，3568-3571。13C NMr(CD3COCD3) δ 141，128，127，96，45，44，43，35，35，33，33，32，32，29，29，29，
2523，13。實施例2 (1-氡某-3-(4-辛某苯某)環(huán)戊某)甲某二氡』磷酸酯(9)(1-氨基-3- (4-辛基苯基)環(huán)戊基)甲基二氫磷酸酯(9)。將ImL 85 %的H3PO4滴 加入0. 5g的P2O5中，然后酸-酸酐混合物在100°C、氮氣保護下加熱1小時。將另一份0. 5g 的P2O5和30mg的(1-氨基-2-(4’ -辛基苯基)環(huán)戊基)甲醇⑶添加到聚磷酸溶液中， 并且在100°C下加熱5小時。冷卻至室溫后，將IOmL冰冷的水加入到反應(yīng)混合物中。該粗 產(chǎn)物沉淀為白色固體，將其過濾和用冷水洗滌。在真空干燥后收集到淺綠色的產(chǎn)物(31mg， 82% )0質(zhì)譜僅給出兩個峰M+1 = 398. 4 (指示希望的磷酸化材料9和318. 4 (去磷酸化或 原料8的特性)。實施例3 鞘氨醇激酶的測定使用重組的人類和小鼠鞘氨醇激酶同種型在對鞘氨醇和FTY720與測試化合物 VPC122093.VPC122096和VPC122097進行比較的體外測定中對所公開的化合物的活性進行 了評價。通過將相關(guān)的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染到HEK293T細胞中強制小鼠或人的重組酶表達而制備 了重組的鞘氨醇激酶1型或2型(SPHK1、SPHK2)。在大約60小時后將細胞收獲、破壞并且 非微粒體(例如可溶的)部分被保留。將含有重組酶的破碎細胞上清液與底物鞘氨醇、FTY720或測試化合物 (VPC122096、VPC122097 或 VPC122093)和 γ -32Ρ-ΑΤΡ 混合。底物濃度為鞘氨醇，15 微摩 爾；FTY720，50微摩爾；VPC化合物，100微摩爾。將來自表達指示的SPHK同種型的HEK293T 細胞的上清液勻漿與32P-ATP和底物在37°C下孵育1小時。反應(yīng)后，使用酸化的氯仿/甲 醇萃取脂質(zhì)，通過薄層層析法進行分離，通過放射自顯影法使包含SlP的帶顯影，通過閃爍 計數(shù)法進行分離和量化。結(jié)果示于圖2。實施例4 淋巴細胞減少的測定將測試化合物VPC122096 (芐基環(huán)戊基)、VPC122093 (芐基環(huán)己基)或 VPC122097(芐基環(huán)庚基)化合物溶解于2%羥丙基β-環(huán)糊精中，并以0.01mg/kg至IOmg/ kg體重的劑量通過口服管飼法向小鼠施用。24小時(或其他指定時間)后，將小鼠輕微 麻醉，并從眶竇抽取約0. Iml血液。使用Hemavet血液分析儀測定淋巴細胞的數(shù)目(每微 升血液中數(shù)千個；正常是4-11個)。每組3只小鼠，雄性，10-11周齡，且品系是混合的sv 129xC57BL/6。實施例4A將測試化合物VPC122096、VPC122097或VPC122093溶于2%含水的羥丙基β -環(huán) 糊精中，并以10mg/kg通過口服管飼法引入小鼠(每組3只小鼠)。18小時后，抽取血液并 進行檢驗。測試化合物誘發(fā)淋巴細胞減少。結(jié)果示于圖3。實施例4B將測試化合物VPC122096溶于2%含水的羥丙基β-環(huán)糊精(溶媒)中，并以 0. 01mg/kg、0. 03mg/kg、0. lmg/kg、0. 3mg/kg、lmg/kg 和 3mg/kg 的劑量口服(管飼法)向小 鼠施用以提供劑量反應(yīng)曲線(每組三至四只小鼠，成年，C57B1/6品系)。在18小時和42 小時抽取血液樣品。每組3只小鼠，雄性，10-11周齡，sv 129/C57B16品系。結(jié)果示于圖4。 縱坐標表示淋巴細胞(K/μΙ)。橫坐標表示施用單劑量后的按天計時間?？v坐標表示淋巴 細胞(Κ/μ 1)。橫坐標表示以每千克體重的毫克化合物(mpk)計的劑量。
實施例4C將測試化合物VPC122096溶于2%含水的羥丙基β-環(huán)糊精(溶媒)中并口服(管 飼法)向小鼠施用后，我們對該測試化合物的作用持續(xù)時間進行了評價。該測試化合物引 起持久的淋巴細胞減少。在16小時、4天、12天和19天采取血液樣品。圖5說明在單劑量 的VPC122096或溶媒之后總的血液淋巴細胞計數(shù)。VPC122096的單ED95劑量可引起小鼠一 周或更長時間的淋巴細胞減少。本文中所使用的縮寫具有其在臨床、化學(xué)和生物領(lǐng)域內(nèi)的常規(guī)含義。在任何不一 致的情況中，本公開(包括其中的任何定義)將占主導(dǎo)。本發(fā)明不應(yīng)該被解釋為僅限于本文所述的測定和方法，而應(yīng)被解釋為也包括其他 方法和測定。所使用但沒有在本文描述的其他方法是公知的并且在化學(xué)、生物化學(xué)、分子生 物學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員的能力之內(nèi)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將會理解其他測 定和方法可用于實施本文所述的步驟。本文引用的每一份及每一篇專利、專利申請和公布文本的公開內(nèi)容都明確地通過 引用將其整體并入本公開內(nèi)容。對本公開的說明性實施方案進行了討論并提及了在本公開 范圍之內(nèi)的可能的變體。本公開中的這些和其他變體和修改對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言將是 明顯的而不背離本公開的范圍，并且應(yīng)理解本公開和如下所示的權(quán)利要求書不受本文所述 的說明性實施方案限制。
權(quán)利要求
下式的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或酯，其中R4是C、CH或N；R5、R6和R7獨立地是CH、CH2、O、S、N或NRa；X是羥基、羧酸、亞甲基羧酸、α-取代的羧酸、磷酸酯、膦酸酯或α-取代的膦酸酯；R1是氫、鹵、三氟甲基、(C1-C10)烷基、鹵代(C1-C10)烷基、羥基-(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基(C1-C10)烷基或氰基(C1-C10)烷基；并且R2是氫、鹵、(C1-C20)烷基、(C1-C20)烷氧基、(C2-C26)烷氧基烷基；(C2-C20)烯基、(C2-C20)炔基、(C3-C12)環(huán)烷基、(C1-C20)烷基-(C3-C12)環(huán)烷基、(C6-C10)芳基；(C1-C20)烷基(C6-C10)芳基、(C6-C10)芳基(C1-C20)烷基和芳基取代的芳烷基；其中R2基團中的一個或多個碳原子可獨立地被非過氧化物的氧、硫或NRa取代；R1、R2或X的烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基、雜環(huán)基或雜芳基基團任選地被1、2、3或4個基團取代，其中取代基基團獨立地是羥基、鹵、氰基、(C1-C10)烷基、(C1-C10)烷氧基、C6-芳基、(C7-C24)芳烷基、氧基(＝O)或亞氨基(＝NRa)；Ra是氫或(C1-C10)烷基；并且n為0、1、2、3或4；表示一個或多個任選的雙鍵，且Ra的烷基基團任選地被1個或2個羥基基團取代。FPA00001141131700011.tif,FPA00001141131700012.tif
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，該化合物為下式(II) 或者其藥學(xué)上可接受的鹽，其中X是羥基、磷酸酯、膦酸酯或α -取代的膦酸酯；其中R1是氫、鹵素、(C1-C6)烷基、鹵代(C1-C6)烷基、羥基(C1-C6)烷基、烷氧基(C1-C6) 烷基或氰基(C1-C6)烷基；R2是烷基、烯基、炔基、烷基取代的芳基、烷基取代的環(huán)烷基、芳烷基或芳烷基取代的芳 基；且η是0、1、2或3。
3.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中R1是氟或氯。
4.如權(quán)利要求1至3中任一項所述的化合物，其中X是羥基或0Ρ03Η2。
5.如權(quán)利要求4所述的化合物，其中X是0Ρ03Η2。
6.如權(quán)利要求4所述的化合物，其中X是羥基。
7.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中α-取代的膦酸酯是-CHFPO3H2、-CF2PO3H2、-C HOHPO3H2、-C( = 0) PO3H2 或-OPO2SH2。
8.如權(quán)利要求7所述的化合物，其中α-取代的膦酸酯 是-CHFPO3H2、-CF2PO3H2、-CHOHPO3H2 或 _C( = 0) PO3H2。
9.如權(quán)利要求1至8中任一項所述的化合物，其中R1是氫。
10.如權(quán)利要求1至9中任一項所述的化合物，其中R2是具有5、6、7或8個碳原子的焼基。
11.如權(quán)利要求10所述的化合物，其中R2是庚基、辛基、壬基、-0-庚基或 CH3-O-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-。
12.如權(quán)利要求11所述的化合物，其中R2是辛基。
13.如權(quán)利要求1至12中任一項所述的化合物，其中η是1或2。
14.如權(quán)利要求1至13中任一項所述的化合物，其中R2基團位于所述環(huán)烷基環(huán)的對位。
15.如權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中所述環(huán)烷基基團具有下式
16.如權(quán)利要求1至15中任一項所述的化合物，其中所述R1基團是在R2的鄰位或間位。
17.如權(quán)利要求1至15中任一項所述的化合物，其中所述R2基團是在芐型環(huán)烷基基團 的對位。
18.如任一項前述權(quán)利要求所述的化合物，其具有下式
19.一種藥物組合物，其包括權(quán)利要求1至18中任一項所述的化合物和藥學(xué)上可接受 的載體。
20.一種預(yù)防或治療哺乳動物中的病理狀態(tài)或癥狀的方法，其中涉及到鞘氨醇1-磷酸 酯受體的活性并且這種活性的激動作用是令人希望的，所述方法包括向所述哺乳動物施用 有效量的如權(quán)利要求1至18中任一項所述的化合物。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述病理狀態(tài)是自身免疫性疾病。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是葡萄膜炎、I型糖尿病、類 風濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸病或多發(fā)性硬化癥。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是多發(fā)性硬化癥。
24.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述病理狀態(tài)或治療是改變淋巴細胞運輸。
25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中改變淋巴細胞運輸提供了延長的同種異體移植物存活率。
26.一種預(yù)防或治療哺乳動物中的病理狀態(tài)或癥狀的方法，其中涉及到SlP裂解酶的 活性并且所述SlP裂解酶的抑制是令人希望的，所述方法包括向所述哺乳動物施用有效量 的如權(quán)利要求1至18中任一項所述的化合物。
27.如權(quán)利要求1至18中任一項所述的化合物，其在醫(yī)學(xué)治療中使用。
28.一種具有權(quán)利要求1至18中任一項所述的式的化合物，該化合物在預(yù)防或治療哺 乳動物的病理狀態(tài)或癥狀的方法中使用，在所述方法中涉及到鞘氨醇1-磷酸酯受體的活 性并且這種活性的激動作用是令人希望的，或者在所述方法中涉及到SlP裂解酶的活性并 且所述SlP裂解酶的抑制是令人希望的；所述方法包括向所述哺乳動物施用有效量的所述 化合物或所述其藥學(xué)上可接受的鹽或酯。
29.如權(quán)利要求1至18中任一項所述的化合物用于制備預(yù)防或治療哺乳動物中的病理 狀態(tài)或癥狀的藥物的用途，其中涉及到鞘氨醇1-磷酸酯受體的活性；或者其中涉及到SlP 裂解酶的活性和所述SlP裂解酶的抑制是令人希望的。
30.如權(quán)利要求29所述的用途，其中所述藥物包括液體載體。
31.一種用于向有相應(yīng)需要的患者施用權(quán)利要求1至18所述的至少一種化合物的試劑 盒，所述試劑盒包括藥物組合物，該藥物組合物含有至少一種化合物； 施用器；及使用它們的說明材料。
全文摘要
提供了鞘氨醇-1-磷酸酯類似物，它們是一種或多種S1P受體特別是S1P1受體類型的強效的選擇性激動劑。所公開的化合物包括任選的磷酸酯部分以及具有抗水解的磷酸酯替代物的化合物，所述抗水解的磷酸酯替代物例如膦酸酯、α-取代的膦酸酯和硫代膦酸酯。
文檔編號C07C211/21GK101874015SQ200880117666
公開日2010年10月27日 申請日期2008年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月28日
發(fā)明者凱文·R·林奇, 蒂莫西·L·麥克唐納 申請人:弗吉尼亞大學(xué)專利基金會