專利名稱：黃芩素-8-磺酸鈉及其制備方法和藥物用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于雜環(huán)化合物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到雜環(huán)不氫化的含六節(jié)環(huán)，有一個氧原子作 為僅有環(huán)雜原子，與其它環(huán)稠合的雜環(huán)化合物。
活性氧自由基的強氧化性能使不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化，生成過氧化脂質(zhì)，傷害生物膜， 促進衰老,誘發(fā)多種疾病。黃芩素是黃芩的主要承分，屬黃酮類化合物，具有抗菌、抗病毒、 抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)、抗氧化、清除氧自由基、抗癌、抗腫瘤、抗凝血栓形成和保護肝臟、心 腦血管、神經(jīng)元等多種藥理作用。研究認(rèn)為黃酮的部分藥理活性與其清除活性氧自由基有關(guān)。 但因黃芩素化合物水溶性較差，導(dǎo)致人體吸收緩慢且生物利用度低，限制了其在臨床中的應(yīng) 用。為此，本發(fā)明將黃芩素磺化，給分子結(jié)構(gòu)中引入磺酸基增加水溶性，以改善黃芩素在臨 床使用時的效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述黃芩素的缺點，提供水溶性高的具有藥用價值的新化合物 黃苳素-8-磺酸鈉。
本發(fā)明的另一個目的在于提供一種制備上述化合物的方法。 本發(fā)明的進一步目的在于提供一種治療抗衰老的藥物和組合物。
本發(fā)明的第四個目的在于提供一種上述化合物和組合物在制備治療抗衰老藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明黃芩素-8-磺酸鈉的化學(xué)名稱為5，6，7-三羥基異黃酮-8-磺酸鈉，它的化學(xué)結(jié)構(gòu)如 下述式(1)。
背景技術(shù)：
<formula>formula see original document page 3</formula>
式(1)
采用化學(xué)反應(yīng)制備本發(fā)明的黃芩素-8-磺酸鈉的方法如下:(1)在反應(yīng)釜中加入溶劑和下式(2)黃芩素，攪拌下加入磺化劑，黃芩素與磺化劑進行
式(2)
化學(xué)反應(yīng)，所用黃芩素與磺化劑的摩爾比為1 : 1 1 : IO，用調(diào)溫裝置使反應(yīng)液的溫度為20 110 °C，反應(yīng)0.5小時 14小時，得黃芩素-8-磺酸與未反應(yīng)物的混合物。
S03Na
(2)將(1)反應(yīng)的混合物冷卻至室溫，倒入總體積為反應(yīng)混合物1 5倍量10 20%的 氯化鈉溶液，充分?jǐn)嚢?，靜置生成沉淀，用常規(guī)分離方法，將權(quán)利要求l中式(1)化合物分 離出來，得到粗品，再加入粗品量的1 5倍量量重量比為10 20%氯化鈉溶液使其純化，得 到權(quán)利要求l中式(1)化合物純品。
本發(fā)明黃芩素-8-磺酸鈉的制備方法中，化學(xué)反應(yīng)所用的溶劑是70-98%的硫酸，所用的 磺化劑可以是濃硫酸或氯磺酸或發(fā)煙硫酸或三氧化硫。
本發(fā)明黃芩素-8-磺酸鈉制備方法中，磺化反應(yīng)的優(yōu)選溫度為20-110 'C，反應(yīng)的優(yōu)選時 間為0. 5-14小時。
本發(fā)明黃芩素-8-磺酸鈉的制備方法中，化學(xué)反應(yīng)的最佳溫度為100 °C，化學(xué)反應(yīng)的最 佳時間為12小時。
本發(fā)明的藥物組合物含有治療有效量的上述式(1)為活性成分，以及含有一種或多種藥 學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的化合物和藥物組合可用于制備治療抗衰老藥物中的應(yīng)用。 本發(fā)明有效成分黃芩素-8-磺酸鈉制備治療抗衰老藥物用常規(guī)藥用制劑的形式來使用所 述的常規(guī)藥用制劑含作為活性成分的黃芩素-8-磺酸鈉，該活性成分在制劑中與藥學(xué)上可接受 的載體如適宜于胃腸內(nèi)和胃腸外給藥的有機或無機的固體或液體賦形劑混合。該藥用制劑可 以是固體形式如片劑、顆粒集、粉劑、膠囊劑；也可以是液體形式如注射劑、懸浮劑、糖漿 劑和乳劑等。
<formula>formula see original document page 4</formula>式(2)<formula>formula see original document page 4</formula>
式(1)上述制劑中可含有輔助物質(zhì)、穩(wěn)定劑、濕潤劑和其它常用的添加劑，如乳糖、擰檬酸、 酒石酸、硬脂酸、硬脂酸鎂、石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、花生 油、橄欖油、可可脂、乙二醇、葡萄糖、鹽酸普魯卡因、鹽酸利多卡因和抗壞血酸等。 上述制劑可按照各種制劑常規(guī)的制備工藝制成。 ' 本發(fā)明的藥用組合物優(yōu)選含有重量比為0.1-99. 5%的活性成分，最優(yōu)選含有重量比為 0. 5-95%的活性成分。
本發(fā)明的活性成分黃芩素-8-磺酸鈉制成各種劑型的口服藥物，成人口服，藥物中黃苳素 -8-磺酸鈉的含量應(yīng)為每天150 mg， 一日三次，每次藥物中黃芩素-8-磺酸鈉的含量應(yīng)為50mg, 14天為一個療程，治療2-3個療程。成人肌肉注射，藥物中黃芩素-8-磺酸鈉含量應(yīng)為每天 80 mg， 一日兩次，14天為一個療程，治療2個療程；靜脈點滴，成人用量，藥物中黃芩素 -8-磺酸鈉的含量應(yīng)為每天80mg， 一日一次，14天為一個療程，治療2個療程?？诜幬锘?注射藥物，兒童用藥酌情減量。
發(fā)明人將本發(fā)明的活性成分黃芩素-8-磺酸鈉采用的是DPPH (1,1-二苯基-2-苦肼基自由 基)法做了清除自由基實驗。該方法簡單易操作，可信度高。試驗結(jié)果表明本發(fā)明的活性成 分黃芩素-8-磺酸鈉有很好的清除自由基的作用，若將其用于臨床試驗，預(yù)期將會有較好的清 除自由基作用，從而起到抗衰老的治療效果。本發(fā)明的制備方法采用親電取代反應(yīng)法，具有 工藝簡便，所用的設(shè)備簡單、產(chǎn)品的收率高和生產(chǎn)成本低等優(yōu)點。


圖1是本發(fā)明的黃芩素-8-磺酸鈉溶液對DPPH的抑制率曲線。 在圖1中，橫坐標(biāo)為濃度的對數(shù)，縱坐標(biāo)為抑制率。
具體實驗方式
下面實施例對本發(fā)明進一步詳細說明，但本發(fā)明不限于這些實施例。 一、黃芩素-8-磺酸鈉制備實施例 實施例1
在本實施例中，先將黃芩素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機攪拌并逐漸加入溶劑80%硫酸直到 使黃芩素充分溶解，再加入磺化劑濃硫酸，黃苳素與濃硫酸的摩爾比為1 : 5，用攪拌機攪拌 后，用調(diào)溫裝置使反應(yīng)液的溫度為100 'C，反應(yīng)12小時，得到黃芩素-8-磺酸和未反應(yīng)原料 的混合物，冷卻至室溫，加入反應(yīng)物總體積5倍的量重量比為10%氯化鈉水溶液，充分?jǐn)嚢瑁?靜置析出白色沉淀，過濾，得到黃芩素-8-磺酸鈉粗品；用重結(jié)晶法在黃芩素-8-磺酸鈉粗品中加入5倍量的量重量比為10%氯化鈉水溶液進行純化，得到黃芩素-8-磺酸鈉純品(產(chǎn)率85 %)。
采用本實例制備的黃芩素-8-磺酸鈉，經(jīng)測試，其理化性能如下
白色針狀晶體，熔點為290 'C (分解)；在水中的溶解度為8%，易溶于水。
本實施例的黃芩素-8-磺酸鈉分子結(jié)構(gòu)經(jīng)紅外光譜儀測試結(jié)果如下
IRv (cm-1, KBr): 3541.6， 3443.1， 1672.3， 1618.6， 1580.4， 1450.1， 1366.0， 1315.3，
1268.8， 1213.5， 1158.5， 1109.0， 1044.4， 1029.2， 849.2， 778.7， 767.8， 684.6， 654.8， 627.3，
586.3， 535.1 cm"。
本實施例的黃芩素-8-磺酸鈉的H用核磁共振儀測試結(jié)果如下
'HNMR(DMS0-d6， 300 MHz)S (ppm): 7.04 (1H， s,H-C3) ，8.30 (2H， d， J = 6.72, PICS', H-C6'), 7.58(2H, d, J = 6.72, H-C3', H-C5')， 7.57 (1H， s， H-C4')。 本實施例的黃芩素-8-磺酸鈉的C、 H元素分析結(jié)果如下 Anal, calcd for C15H9Na08S: C48.39, H2.44; found C 48.16， H2.19。
實施例2
在本實施例中，先將黃芩素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機攪拌并逐漸加入溶劑70%硫酸直到 使黃芩素充分溶解，再加入磺化劑濃硫酸，黃芩素與濃硫酸的摩爾比為1 :8，用調(diào)溫裝置使 反應(yīng)液的溫度為IIO'C，反應(yīng)0.5小時，得到黃芩素-8-磺酸與未反應(yīng)物的混合物，冷卻至室溫， 加1倍體積20%氯化鈉水溶液，放置，得到白色黃芩素-8-磺酸鈉沉淀，隨后分離黃芩素-S-磺酸鈉，并使其純化，分離和純化所用原料為反應(yīng)物總體積1倍的20%氯化鈉水溶液，其它 工藝過程與實施例l相同。
實施例3
先將黃芩素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機攪拌并逐漸加入溶劑85%硫酸直到使黃苳素充分溶 解，再加入磺化劑氯磺酸，黃芩素與氯磺酸的摩爾比為1 : 10，用攪拌機攪拌后，用調(diào)溫裝 置使反應(yīng)液的溫度為20 °C，反應(yīng)10小時，得到黃芩素-8-磺酸與未反應(yīng)物的混合物，加5倍 體積10%氯化鈉水溶液，放置，得到白色黃芩素-8-磺酸鈉沉淀，隨后分離黃苳素-8-磺酸鈉， 并使其純化，分離和純化所用原料及配比與實施例1相同。
實施例4
在本實施例中，先將黃芩素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機攪拌并逐漸加入溶劑85%硫酸直到 使黃芩素充分溶解，再通入磺化劑三氧化硫，黃芩素與三氧化硫的摩爾比為1 : 3，用攪拌機 攪拌后，用調(diào)溫裝置使反應(yīng)液的溫度為40 °C，反應(yīng)7小時，得到黃芩素-8-磺酸與未反應(yīng)物 的混合物，冷卻至室溫，加2倍體積10%氯化鈉水溶液，放置，得到白色黃吝素-8-磺酸鈉沉淀，隨后分離黃芩素-8-磺酸鈉并使其純化，分離和純化所用原料及配比與實施例l相同。實施例5
在本實施例中，先將黃芩素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機攪拌并逐漸加入溶劑80%硫酸直到使黃芩素充分溶解，再通入磺化劑發(fā)煙硫酸，黃芩素和發(fā)煙硫酸分摩爾比為l :4。用攪拌機攪拌后，升溫至60'C，反應(yīng)1小時，得到黃芩素-8-磺酸與未反應(yīng)物的混合物，冷卻至室溫，加3倍體積10%氯化鈉水溶液，得到黃芩素-8-磺酸鈉粗品，并使其純化。分離和純化所用原料以及配比和操作與實施例1相同。
實施例6
在本實施例中，先將黃芩素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機攪拌并逐漸加入溶劑90°/。硫酸直到使黃苳素充分溶解，再加入磺化劑氯磺酸，黃芩素與氯磺酸的摩爾比為1 : 1。滴加完后，用攪拌機攪拌后，升溫至50'C，反應(yīng)6小時，將反應(yīng)物的混合物冷卻至室溫，加4倍體積10%氯化鈉水溶液并加熱，得到黃芩素-8-磺酸鈉粗品。分離和純化所用原料以及配比和操作與實施例1相同。
實施例7
在本實施例中，先將黃芩素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機攪拌并逐漸加入溶劑98%硫酸直到使黃芩素充分溶解，再加入磺化劑濃硫酸，黃芩素與濃硫酸的摩爾比為1 : 2。滴加完后，升溫至55。C，反應(yīng)14小時，得到黃芩素-8-磺酸與未反應(yīng)物的混合物，冷卻至室溫，加5倍體積10%氯化鈉水溶液并加熱，得到黃芩素-8-磺酸鈉粗品。分離和純化所用原料以及配比和操作與實施例1相同。
二、黃芩素-8-磺酸鈉制劑實施例實施例8
以制備本發(fā)明黃芩素-8-磺酸鈉片劑1000片為例所用的原料和輔料配比如下黃芩素-8-磺酸鈉 50 g
淀 粉 250 g
淀粉漿(10%) 85 g
硬脂酸 鎂 15 g
采用常規(guī)片劑的制備工藝制成，每片重0.4g，每片黃苳素-8-磺酸鈉的含量為50mg。用法成人一日三次，每次1片口服，兒童酌情減量。實施例9
以制備本發(fā)明黃芩素-8-磺酸鈉散劑1000袋為 所用的原料和輔料配比如下黃薈素-8-磺酸鈉 40 g
乳 糖 2900 g
淀粉漿(10%) 60 g
采用常規(guī)散劑的制備工藝制成，每袋重3 g，每片黃芩素-8-磺酸鈉的含量為40 mg。用法:成人一日三次，每次1袋口服，兒童酌情減量。實施例10
以制備本發(fā)明黃芩素-8-磺酸鈉1000mL注射劑為例，所用的原料和輔料配比如下
黃苳素-8-磺酸鈉 50 g
注 射用水 加至1000mL
采用常規(guī)法注射劑的制備工藝制成，每瓶2mL,含黃芩素-8-磺酸鈉100mg。用法肌肉注射， 一日兩次，每次1支，靜脈點滴， 一日一次，每次2支。
三、發(fā)明人將本發(fā)明的有效成分黃芩素-8-磺酸鈉進行了清除自由基實驗，例舉下列實驗內(nèi)容及其試驗結(jié)果，證明用本發(fā)明制備的藥物治療抗衰老的有效性。1溶液的配制
DPPH(l,l-二苯基-2-苦肼基自由基)溶液以無水乙醇為溶劑配制濃度為2.0X10—4 raoL/L的DPPH溶液。
DPra是一種穩(wěn)定的自由基，呈紫色，在517nm處有強吸收。有自由基清除劑存在時，DPPH的單電子被配對而使其顏色變淺，在最大吸波長處的吸光度變小，因此，此處的吸光度可以用來檢測自由基的清除情況，從而評價試驗樣品的抗氧化能力。DPPH法用于研究藥物的抗氧化能力較多，氧化能力用抑制率來表示，抑制率越大，抗氧化性越強。
黃芩素-8-磺酸鈉儲備溶液以無水乙醇為溶劑配制濃度為4.0X10-4moL/L的黃芩素-8-磺酸鈉溶液。
2抗氧化作用的測定
取稀釋后的黃芩素-8-磺酸鈉溶液2 mL及2.0X10—4 moL/L DPPH溶液2 mL加入同一具塞試管中，搖勻。30rain后用無水乙醇做參比測定其吸光度A,，同時測定2 mL 2.0X 10—4moL/LDPffl溶液與2 mL無水乙醇混合液的吸光度A。，以及2 mL黃芩素-8-磺酸鈉與2 mL無水乙醇混合液的吸光度Aj。
DPPH法中抗氧化能力用抑制率來表示，其公式為
抑制率=[1- (A「Aj)]從X畫
其中A。為未加抗氧化劑時DPPH溶液的吸光度；A為加抗氧化劑后DPPH溶液的吸光度；Aj為黃芩素-8-磺酸鈉在測定波長的吸光度。
分別測定不同濃度黃芩素-8-磺酸鈉溶液對DPPH的抑制率，用抑制率對濃度的對數(shù)作圖黃零素-8-磺酸鈉抑制率曲線，參見圖1。
在黃芩素-8-磺酸鈉抑制率曲線圖1中，當(dāng)黃芩素-8-磺酸鈉濃度為4.0x10—4mol/L時，抑制率高達95%，稀釋10倍后，對DPPH仍有50W清除作用。由圖1求得黃芩素-8-磺酸鈉對DPPH的半抑制率IC50 (抑制率為50%時抗氧化劑的濃度)為4.0xl(T5 mol/L,與人工合成的強抗氧化劑THBQ (特丁基對苯二酚)相當(dāng)，表明黃芩素-8-磺酸鈉對DPPH有強抑制作用。
3結(jié)論
黃苳素在化學(xué)結(jié)構(gòu)上屬于黃酮類化合物。黃酮類物質(zhì)廣泛存在于自然界，并且具有多種多樣生理活性，其中包括抗氧化、清除自由基、抗癌、抗菌、抗病毒、降血脂、降血糖和免疫調(diào)節(jié)等功能。研究認(rèn)為黃酮的部分藥理活性與其清除活性氧自由基有關(guān)。黃芩素-8-磺酸鈉對DPPH有強抑制作用，能很好的起到抗氧化和清除自由基的作用，有望開發(fā)為一類治療抗衰老的新藥。
權(quán)利要求
1.下述式(1)化合物黃芩素-8-磺酸鈉式(1)。
2. —種權(quán)利要求l中式(1)黃芩素-8-磺酸鈉化合物的制備方法，該方法包括以下步驟(1)反應(yīng)釜中加入下式(2)黃芩素，溶解在溶劑中，再加入磺化劑，黃芩素與磺化劑<formula>formula see original document page 2</formula>進行化學(xué)反應(yīng)，所用黃芩素與磺化劑的摩爾比為1 : 1 1 : 10，用調(diào)溫裝置使反應(yīng)液的溫度 為20 U0 。C，反應(yīng)0.5小時 14小時，得黃芩素-8-磺酸與未反應(yīng)物的混合物。(2)將(1)反應(yīng)后的混合物冷卻至室溫，倒入總體積為反應(yīng)混合物1 5倍量重量比為 10 20%的氯化鈉溶液，充分?jǐn)嚢瑁o置生成沉淀，用常規(guī)分離方法，將權(quán)利要求l中式(1) 化合物分離出來，得到粗品，再加入粗品量的1 5倍量量重量比為10 20%氯化鈉溶液使其 純化，得到權(quán)利要求l中式(1)化合物純品。
3. 按照權(quán)利要求2所述的權(quán)利要求1中式(1)化合物的制備方法，其中式(2)化合物與磺 化劑的反應(yīng)溫度為20-110 °C，化學(xué)反應(yīng)時間為0.5-14小時。
4. 按照權(quán)利要求2所述的權(quán)利要求1中式(1)化合物的制備方法，其特征在于所用溶劑 為70~98%硫酸；所用磺化劑為濃硫酸或氯磺酸或發(fā)煙硫酸或三氧化硫。
5. —種治療抗衰老的藥物組合物，其中有治療有效量的權(quán)利要求1中式(1)化合物和藥學(xué) 上可接受的載體。
6. 權(quán)利要求l中式(1)化合物在制備治療抗衰老的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于雜環(huán)化合物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到雜環(huán)不氫化的含六節(jié)環(huán)，有一個氧原子作為僅有環(huán)雜原子，與苯環(huán)稠合有芳環(huán)僅連在位置2的雜環(huán)化合物。本發(fā)明了提供了一種黃芩素-8-磺酸鈉及其制備方法，其工藝包括在溶劑中加入反應(yīng)物黃芩素，再加入磺化劑，反應(yīng)物與磺化劑進行化學(xué)反應(yīng)，得到本發(fā)明化合物與未反應(yīng)物的混合物，用常規(guī)分離方法并使其純化，得到本發(fā)明的化合物純品。還提供了一種治療抗衰老的藥物和組合物，其中有治療有效量的黃芩素-8-磺酸鈉和藥學(xué)上可接受的載體，以及黃芩素-8-磺酸鈉在制備治療抗衰老藥物中的應(yīng)用。
文檔編號C07D311/00GK101633652SQ20091002316
公開日2010年1月27日 申請日期2009年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月1日
發(fā)明者張尊聽, 張小清, 瑾 潘, 王彥昌, 苗延青 申請人:西安醫(yī)學(xué)院