專(zhuān)利名稱：一種利用生物酶法制備α-淀粉酶抑制劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種淀粉酶抑制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
目前全球肥胖癥患者數(shù)量正以驚人的速度上升，專(zhuān)家預(yù)測(cè)以目前的發(fā)展速 率，到2230年，所有的美國(guó)人將成為肥胖患者；而在英國(guó)，在近20年間，男性 中超重和肥胖者由15%上升至54%,女性則上升至45%。即便在中國(guó)這樣的發(fā) 展中國(guó)家，肥胖已成為中國(guó)面臨的一個(gè)嚴(yán)重的公共健康問(wèn)題。目前我國(guó)肥胖者 已遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)9000萬(wàn)名，超重者高達(dá)2億名。專(zhuān)家預(yù)測(cè)，未來(lái)十年中國(guó)肥胖人群 將會(huì)超過(guò)2億。而且，肥胖不但會(huì)導(dǎo)致糖尿病、高血壓、癌癥等諸多疾病，還會(huì) 使人早逝。有數(shù)據(jù)表明，肥胖者早逝的危險(xiǎn)是非肥胖者的1.3 2倍。
科學(xué)研究表明，肥胖癥、脂肪過(guò)多癥、動(dòng)脈硬化癥、高血脂、糖尿病等，往 往跟人體內(nèi)的淀粉酶活力有關(guān)，通過(guò)抑制淀粉酶的活性可以阻斷淀粉轉(zhuǎn)化葡萄 糖，從而抑制血糖濃度升高及降低脂肪的生成量。
本發(fā)明涉及的a -淀粉酶抑制劑是一種糖苷水解酶抑制劑，它通過(guò)抑制腸道 內(nèi)唾液及胰淀粉酶的活性，阻礙食物中碳水化合物的水解和消化，選擇性地減少 糖份攝取，降低血糖和血脂的含量，減少胰島素分泌，降低脂肪合成，從而起到 降糖、減肥及預(yù)防肥胖的作用。此種a-淀粉酶抑制劑來(lái)源于綠色植物，對(duì)人體 沒(méi)有任何副作用，是一種糖蛋白。因此，a-淀粉酶抑制劑作為一種預(yù)防和治療 肥胖以及治療糖尿病的藥物或保健品將具有廣闊的市場(chǎng)前景。
a-淀粉酶抑制劑是一種糖蛋白，這種糖蛋白會(huì)與醣類(lèi)分子形成復(fù)合物，因 而阻斷糖類(lèi)消化酶的作用，故能有效的抑制糖類(lèi)吸收。目前已經(jīng)從小麥、大麥、 高梁、谷物、花生、大豆、芋頭、野生莧屬等植物種子中分離得到a-淀粉酶抑 制劑，但是從白腰豆中提取的a -淀粉酶抑制劑活性較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種利用生物酶法制備a -淀粉酶抑制劑的方法，該方 法反應(yīng)條件溫和，所得的產(chǎn)品純度高，對(duì)淀粉酶的抑制效果好。本發(fā)明的目的通過(guò)采取以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)-
一種利用生物酶法制備a-淀粉酶抑制劑的方法，其特征是以白腰豆為原料， 經(jīng)過(guò)浸泡，粉碎，離心，上清液用復(fù)合酶分步處理，再經(jīng)離子交換層析、超濾制 備得到"淀粉酶抑制劑。具體包括以下步驟
(1) 預(yù)處理白腰豆加水浸泡，然后粉碎，所獲物質(zhì)進(jìn)行離心處理；
(2) 酶水解離心出的上清液調(diào)整pH值至4. 0 5. 0，升溫到45 50°C， 加入糖化酶反應(yīng)1 12小時(shí)，升溫到60 70'C滅酶，待溫度降到室溫后調(diào)整pH 值至6.0 7. 0，再升溫到45 50°C，加入脂肪酶反應(yīng)1 4小時(shí)，然后升溫到 60 70。C滅酶；
(3) 精制滅酶后的溶液經(jīng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂層析后，再經(jīng)超濾膜超濾，濃縮，
干燥后得到。-淀粉酶抑制劑。
所述步驟(i)中白腰豆與水的重量比為i : 7~io。
所述步驟(l)中白腰豆加水浸泡的時(shí)間為4 24小時(shí)。
所述歩驟(2)中糖化酶的加入量為白腰豆重量的0.1 1%。
所述步驟(2)中脂肪酶的加入量為白腰豆重量的0.1 0. 5%。
所述步驟(3)中的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂為強(qiáng)酸性苯乙烯系陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。
所述步驟(3)中滅酶后的溶液通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的流速為1 2.5mL/min。
所述步驟(3)中的超濾膜為巻式超濾膜。
所述步驟(3)中層析處理后的溶液以相對(duì)流速1 2mL/min/cri^通過(guò)巻式超濾膜。
本發(fā)明以白腰豆為原料，利用生物酶法制備a-淀粉酶抑制劑，使白腰豆內(nèi) 含的a-淀粉酶抑制劑有效地釋放出來(lái)，有利提取和純化，降低提取成本。本發(fā) 明反應(yīng)條件溫和，所得的產(chǎn)品純度高，對(duì)淀粉酶的抑制效果好，其抑制活性高達(dá) 70% 95%，可以廣泛應(yīng)用在醫(yī)藥和保健食品等領(lǐng)域。
具體實(shí)施例方式
以下通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行闡述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于 此。所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員依據(jù)以上本發(fā)明公開(kāi)的內(nèi)容，均可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明 的目的。 實(shí)施例1
5稱取白腰豆100g，按照l(shuí) : IO比例加入水，浸泡12小時(shí)，粉碎。將所獲得 的物質(zhì)離心，上清液調(diào)整pH值至4.5士0.1，升溫到45。C，加入0.2%的糖化酶反 應(yīng)1小時(shí)，升溫到7(TC滅酶。待溫度降到室溫后調(diào)整pH值至6.5士0.1，再升溫 到5(TC，加入0.1%的脂肪酶反應(yīng)1小時(shí)，然后升溫到70'C滅酶。滅酶后的溶液 以2mL/min的流速通過(guò)強(qiáng)酸性苯乙烯系陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，將樹(shù)脂處理后的溶液 在40'C以相對(duì)流速1.5mL/min/cmS通過(guò)巻式超濾膜，膜過(guò)濾后的產(chǎn)品經(jīng)濃縮，干 燥，獲得a-淀粉酶抑制劑產(chǎn)品。產(chǎn)品的抑制活性約為90%。 實(shí)施例2
稱取白腰豆100g,按照l(shuí) : IO比例加入水，浸泡24小時(shí)，粉碎。將所獲得 的物質(zhì)離心，上清液調(diào)整pH值至4.8士0.1，升溫到45。C，加入0.5%的糖化酶反 應(yīng)4小時(shí)，升溫到7(TC滅酶。待溫度降到室溫后調(diào)整pH值至6.3±0.1，再升溫 到50'C，加入0.2%的脂肪酶反應(yīng)1小時(shí)，然后升溫到7(TC滅酶。滅酶后的溶液 以2mL/min的流速通過(guò)強(qiáng)酸性苯乙烯系陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，將樹(shù)脂處理后的溶液 在40'C以相對(duì)流速1.5mL/min/cii^通過(guò)巻式超濾膜，膜過(guò)濾后的產(chǎn)品經(jīng)濃縮，干 燥，獲得a-淀粉酶抑制劑產(chǎn)品。產(chǎn)品的抑制活性約為87%。 實(shí)施例3
稱取白腰豆100g，按照1 : 7比例加入水，浸泡8小時(shí)，粉碎。將所獲得的 物質(zhì)離心，上清液調(diào)整pH值至4.3士0.1，升溫到45。C，加入0.1%的糖化酶反應(yīng) 4小時(shí)，升溫到60。C滅酶。待溫度降到室溫后調(diào)整pH值至6.3±0.1，再升溫到 5(TC，加入0.1%的脂肪酶反應(yīng)1小時(shí)，然后升溫到6(TC滅酶。滅酶后的溶液以 lmL/min的流速通過(guò)強(qiáng)酸性苯乙烯系陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，將樹(shù)脂處理后的溶液在 4(TC以相對(duì)流速lmL/min/cn^通過(guò)巻式超濾膜，膜過(guò)濾后的產(chǎn)品經(jīng)濃縮，干燥， 獲得a-淀粉酶抑制劑產(chǎn)品。產(chǎn)品的抑制活性約為79%。 實(shí)施例4
稱取白腰豆100g，按照1 : 8比例加入水，浸泡12小時(shí)，粉碎。將所獲得 的物質(zhì)離心，上清液調(diào)整pH值至4.3士0.1，升溫到45"C，加入0.3%的糖化酶反 應(yīng)4小時(shí)，升溫到7(TC滅酶。待溫度降到室溫后調(diào)整pH值至6.3士0.1，再升溫 到50。C，加入0.3%的脂肪酶反應(yīng)1小時(shí)，然后升溫到70。C滅酶。滅酶后的溶液 以1.5mL/min的流速通過(guò)強(qiáng)酸性苯乙烯系陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，將樹(shù)脂處理后的溶液在4(TC以相對(duì)流速1.5mL/min/cmS通過(guò)巻式超濾膜，膜過(guò)濾后的產(chǎn)品經(jīng)濃縮，干 燥，獲得a-淀粉酶抑制劑產(chǎn)品。產(chǎn)品的抑制活性約為83%。
權(quán)利要求
1、一種利用生物酶法制備α-淀粉酶抑制劑的方法，其特征是，以白腰豆為原料，經(jīng)過(guò)浸泡，粉碎，離心，上清液用復(fù)合酶分步處理，再經(jīng)離子交換層析、超濾制備得到α-淀粉酶抑制劑。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的利用生物酶法制備a-淀粉酶抑制劑的方法，其特 征是，包括以下步驟(1) 預(yù)處理白腰豆加水浸泡，然后粉碎，所獲物質(zhì)進(jìn)行離心處理；(2) 酶水解離心出的上清液調(diào)整pH值至4.0 5.0，升溫到45 50'C， 加入糖化酶反應(yīng)1 12小時(shí)，升溫60 70'C滅酶，待溫度降到室溫后調(diào)整pH值 至6.0 7.0，再升溫到45 50°C，加入脂肪酶反應(yīng)1 4小時(shí)，然后升溫到 60 70。C滅酶；(3) 精制滅酶后的溶液經(jīng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂層析后，再經(jīng)超濾膜超濾，濃縮， 干燥后得到a -淀粉酶抑制劑。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用生物酶法制備a-淀粉酶抑制劑的方法，其特 征是，所述步驟(l)中白腰豆與水的重量比為1 : 7 10。
4、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用生物酶法制備a-淀粉酶抑制劑的方法，其特 征是，所述步驟(1)中白腰豆加水浸泡的時(shí)間為4 24小時(shí)。
5、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用生物酶法制備a-淀粉酶抑制劑的方法，其特征是，所述步驟(2)中糖化酶的加入量為白腰豆重量的0.1 1%。
6、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用生物酶法制備a-淀粉酶抑制劑的方法，其特征是，所述步驟(2)中脂肪酶的加入量為白腰豆重量的0.1 0. 5%。
7、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用生物酶法制備a-淀粉酶抑制劑的方法，其特 征是，所述步驟(3)中的陽(yáng)離子交換樹(shù)脂為強(qiáng)酸性苯乙烯系陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。
8、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用生物酶法制備a-淀粉酶抑制劑的方法，其特 征是，所述步驟(3)中滅酶后的溶液通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的流速為l 2. 5mL/min。
9、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用生物酶法制備a-淀粉酶抑制劑的方法，其特 征是，所述步驟(3)中的超濾膜為巻式超濾膜。
10、根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用生物酶法制備a-淀粉酶抑制劑的方法，其 特征是，所述步驟(3)中層析處理后的溶液以相對(duì)流速1 2mL/min/crr^通過(guò)巻式超濾膜。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種利用生物酶法制備α-淀粉酶抑制劑的方法，該方法是以白腰豆為原料，經(jīng)過(guò)浸泡，粉碎，離心，上清液用復(fù)合酶分步處理，再經(jīng)離子交換層析、超濾制備得到α-淀粉酶抑制劑。本發(fā)明以白腰豆為原料，利用生物酶法制備α-淀粉酶抑制劑，使白腰豆內(nèi)含的α-淀粉酶抑制劑有效地釋放出來(lái)，有利提取和純化，降低提取成本。本發(fā)明反應(yīng)條件溫和，所得的產(chǎn)品純度高，對(duì)淀粉酶的抑制效果好，其抑制活性高達(dá)70％～95％，可以廣泛應(yīng)用在醫(yī)藥和保健食品等領(lǐng)域。
文檔編號(hào)C07K14/415GK101555275SQ20091003932
公開(kāi)日2009年10月14日 申請(qǐng)日期2009年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月8日
發(fā)明者寇秀穎, 勇 徐, 欣 王, 駱海平 申請(qǐng)人:廣東省食品工業(yè)研究所