專利名稱：：一類克洛皂苷及其制法與抗高致病h5n1流感病毒的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一類新的克洛皂苷，制備這類克洛皂苷的方法，含有這類克洛皂苷的藥物組合物，以及這類克洛皂苷在制備抗流感病毒藥物，尤其是抗高致病H5m流感病毒的藥物中的應(yīng)用；屬于化學(xué)藥物
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：甲型流感病毒屬于正粘病毒科，基因組由8個(gè)單鏈節(jié)段式的負(fù)鏈RNA組成，編碼至少10種蛋白血凝素蛋白(Hemagglutinin,HA)、神經(jīng)氨酸酶(Neuraminidase,ΝΑ)、聚合Sl(Polymerasebasicprotein1，PBl；Polymerasebasicprotein1，PB2；Polymeraseacidicprotein,PA)、核蛋白(Nucleoprotein,NP)、基質(zhì)蛋白(Matrixprotein1，Ml；Matrixprotein2,M2)^nI^JSS(Non-structuralproteinl,NSl；Non-structuralprotein2，NS2)。野生水禽是甲型流感病毒的原生宿主，當(dāng)經(jīng)過(guò)變異，甲型流感病毒會(huì)感染其它物種(包括人類)。H5m高致病流感病毒即是如此，1997年在中國(guó)香港首次證實(shí)了H5W高致病流感病毒感染人類的病例，說(shuō)明該病毒已具備以人為宿主的跨種屬傳播的能力。WHO的數(shù)據(jù)顯示，截止至2008年2月22日，全世界共有368人感染H5W高致病流感病毒，其中的234人死亡(死亡率63.6%)(http://www.who.int/csr/disease/avian_influenza/country/cases_table_2008_02_26/en/index,html,2008.),并且傳播速度和范圍未見(jiàn)下降趨勢(shì)。目前，臨床上針對(duì)甲型流感病毒的藥物主要有兩個(gè)靶點(diǎn)M2離子通道抑制劑和神經(jīng)氨酸酶抑制劑。前者包括有Amantadine和Rimantadine，后者包括Oseltamivir和Zanamivir等(J.Clin.Virol.30，(2004):115_133)。但由于流感病毒的高變異性，目前已經(jīng)對(duì)所有M2離子通道抑制劑產(chǎn)生耐藥性(自2007年起，美國(guó)FDA已經(jīng)禁止這類藥物用作流感治療藥物)；因而神經(jīng)氨酸酶抑制劑幾乎是唯一一類臨床用藥，但自2006年起，在泰國(guó)和越南出現(xiàn)了對(duì)該類藥物耐藥的H5m高致病流感病毒株(NipponRinsho.64,(2006)1845-1852；AntiviralRes.73(2007):228_231)。同時(shí)，還是由于流感病毒的高變異性，目前尚無(wú)一勞永逸的針對(duì)流感病毒的疫苗。血凝素蛋白(HA)是流感病毒表面的糖蛋白，其主要功能是與宿主細(xì)胞表面的受體(唾液酸)相互識(shí)別、結(jié)合，并介導(dǎo)病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞，即病毒感染的第一步。因此，若能在這個(gè)環(huán)節(jié)上阻斷流感病毒的入侵，則可以有效地進(jìn)行預(yù)防和治療。留體皂苷在自然界中分布廣泛，主要集中在單子葉植物的百合科(Liliaceae)、薯蕷科(Dioscoreaceae)和龍舌蘭科(Agavaceae)等植物中；在雙子葉植物的豆禾斗(Fabaceae)、玄參禾斗(Scrophulariaceae)、漠藜禾斗(Zygophyllaceae)>苦木禾斗(Simaroubiaeae)和茄科(Solanaceae)的少數(shù)植物中也有分布。自上世紀(jì)七十年代以來(lái)，在海洋動(dòng)物中也發(fā)現(xiàn)了許多留體皂苷跡。留體皂苷具有廣泛的藥理活性，主要有抗真菌、抗細(xì)菌、抗病毒、細(xì)胞毒性、抗腫瘤、心血管活性、抗炎、護(hù)肝、抑制血小板凝聚等藥理活性，是一類頗有前景的藥物。一些研究結(jié)果表明皂苷中的糖鏈與其生物活性有著密切的關(guān)系，因而皂苷研究日益引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的極大興趣。薯蕷皂苷Dioscin(diosgenin3-0--chacotrioside)是最具代表性的螺旋甾烷類皂苷，它廣泛存在于蔬菜和傳統(tǒng)藥用植物中，對(duì)腫瘤細(xì)胞具有抑制作用，而且該活性與3-0-糖鏈結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一類新的克洛皂苷化合物；本發(fā)明要解決的另一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供這類克洛皂苷化合物的制備方法；本發(fā)明要解決的又一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供含有這類克洛皂苷化合物的藥物組合物；本發(fā)明要解決的再一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供這類克洛皂苷化合物在制備抗流感病毒藥物，尤其是抗高致病H5m流感病毒藥物中的應(yīng)用。具體而言，為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案本發(fā)明涉及的克洛皂苷化合物如通式(I)所示權(quán)利要求如通式(I)所示的克洛皂苷，其中，R1、R2獨(dú)立的選自氫、葡萄糖基、阿拉伯糖基、鼠李糖基、半乳糖基、木糖基、核糖基、甘露糖基、2氨基葡萄糖基、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、山梨糖基、阿洛糖基、阿洛酮糖基，或由這些單糖23個(gè)組成的直鏈或支鏈寡糖基；R3選自H、C1C18直鏈或支鏈的烷酰基。F2009100842456C00011.tif2.制備權(quán)利要求1所述的克洛皂苷的方法，其特征在于，包括如下步驟3.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于，用芐基保護(hù)時(shí)；反應(yīng)的堿選自NaH；催化劑選自四丁基碘化銨；溶劑選自四氫呋喃，N，N-二甲基甲酰胺。4.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于，脫除苷元上的芐基保護(hù)基使用Pd-C和H2；脫保護(hù)基反應(yīng)的溶劑選自四氫呋喃、甲醇、乙醇、二氯甲烷、水中的一種或多種的混合物；反應(yīng)在有機(jī)胺存在的條件下進(jìn)行。5.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于，所述的糖基供體上的保護(hù)基選自乙?；?、苯甲?；?、叔戊?；?、芐基；所述的糖基供體的活化基團(tuán)選自三氯乙酰亞胺酯、乙硫苷、苯硫苷或?qū)?甲苯硫苷；糖苷化反應(yīng)的在路易斯酸催化劑存在的條件下進(jìn)行；所述糖苷化反應(yīng)中的有機(jī)溶劑選自C1-C4的氯代烷烴、甲苯或乙醚；糖苷化反應(yīng)在3Α-5A型硅鋁酸鹽分子篩存在的條件下進(jìn)行；糖苷化反應(yīng)的淬滅劑選自硫代硫酸鈉、有機(jī)胺。6.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于，脫除糖基上的苯甲?；Ｗo(hù)基使用CH3ONa；脫保護(hù)基反應(yīng)的溶劑選自四氫呋喃、甲醇、乙醇、二氯甲烷、水中的一種或多種的混合物；脫保護(hù)基反應(yīng)完成后使用陽(yáng)離子樹脂(H+)中和反應(yīng)液至中性。7.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于，步驟(7)選擇性的保護(hù)葡萄糖上3，6-OHs使用位阻試劑1-(苯甲?；?苯并三唑；有機(jī)溶劑優(yōu)選為C1-C4的氯代烷烴、甲苯或乙醚；反應(yīng)在有機(jī)胺存在的條件下進(jìn)行。8.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于，酯化反應(yīng)的縮合試劑選自1，3二環(huán)己基碳二亞胺、二吡啶碳酸酯、1-(3_二甲胺丙基)-3_乙基碳酰亞胺鹽酸鹽、1，3_二異丙基碳酰亞胺、4-吡咯烷基吡啶；催化劑選自4-二甲氨基吡啶(DMAP)，4-吡咯烷基吡啶。9.根據(jù)權(quán)利要求2的制備方法，其特征在于，各步驟的產(chǎn)物可以通過(guò)重結(jié)晶或硅膠柱純化。10.根據(jù)權(quán)利要求的制備方法，其特征在于，所述的硅膠柱純化時(shí)使用的洗脫劑是選自石油醚、正己烷、環(huán)己烷、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇中一種或多種的混合物；所述重結(jié)晶純化中的溶劑優(yōu)選為三氯甲烷、(^-(；的烷基醇、乙酸乙酯、丙酮、正己烷、石油醚、環(huán)己烷、二氯甲烷、水中一種或多種的混合物。11.一種藥物組合物，其特征在于，含有作為有效成分的通式(I)所示的克洛皂苷和藥效學(xué)上可接受的載體。12.根據(jù)權(quán)利要求11的藥物組合物，其特征在于，還含有其它的抗病毒藥。13.權(quán)利要求1所述的克洛皂苷在制備預(yù)防或治療抗流感病毒的藥物中的應(yīng)用。14.根據(jù)權(quán)利要求13的應(yīng)用，其特征在于，所述的流感病毒為H5N1、H5N2。全文摘要本發(fā)明公開了一類克洛皂苷及其制法與抗高致病H5N1流感病毒的應(yīng)用。本發(fā)明以天然產(chǎn)物薯蕷苷元為原料，通過(guò)結(jié)構(gòu)修飾首先在C-6位引入羥基，得到克洛皂苷元，然后在C-3位引入糖基，得到系列克洛皂苷，最后在C-6羥基引入不同?；玫较盗谢衔?。藥理實(shí)驗(yàn)表明，它們對(duì)H5N1高致病流感病毒的侵入宿主細(xì)胞過(guò)程有明顯的抑制作用，可以用作預(yù)防或治療抗流感病毒的藥物。本發(fā)明還涉及本發(fā)明化合物與其它抗病毒藥的聯(lián)合用藥以及包含它們的藥物組合物。文檔編號(hào)C07J75/00GK101935335SQ20091008424公開日2011年1月5日申請(qǐng)日期2009年5月18日優(yōu)先權(quán)日2009年5月18日發(fā)明者曹穎莉,李英霞,郭穎申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所;中國(guó)海洋大學(xué)