中藥組合物植物藥中間體中單萜及皂苷類成分的分離方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種中藥組合物植物藥中間體中單萜及皂苷類成分的分離方法，具體步驟為：萃取、大孔吸附樹脂純化得到30%及70%乙醇洗脫部位、取30%乙醇洗脫部位分離得到白芍苷R1純品、芍藥苷純品、取70%乙醇洗脫部位分離得到芍藥苷內(nèi)酯純品、芍藥酮苷純品、苯甲酰芍藥苷純品、沒食子酰芍藥苷純品、甲基芍藥苷純品、人參皂苷Rg1純品、人參皂苷Rc純品、人參皂苷Rb1純品、人參皂苷Rb2純品等；分離出來(lái)的有效成分可以縮小藥物的服用劑量，還可以保證藥物的質(zhì)量。
【專利說(shuō)明】中藥組合物植物藥中間體中單萜及皂苷類成分的分離方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥制劑領(lǐng)域，具體涉及中藥有效成分的分離方法。

【背景技術(shù)】
[0002]冠心病心絞痛是嚴(yán)重危害人類健康的疾病，已成為人類三大死亡原因之一。心絞痛是冠心病最常見的臨床類型，不僅給患者帶來(lái)極大痛苦，且可造成嚴(yán)重后果，多數(shù)學(xué)者報(bào)告心絞痛病人每年死亡率是4%左右，8年內(nèi)將有30%的病人死亡。
[0003]我公司運(yùn)用中醫(yī)絡(luò)病理論研究胸痹心痛病理機(jī)制，選用益氣與蟲類通絡(luò)藥物為主研制而成的治療冠心病心絞痛的中藥新制劑，該藥在古代醫(yī)家運(yùn)用絡(luò)病理論治療久痛證取得良好療效的基礎(chǔ)上，提出冠心病心絞痛心氣虛乏，絡(luò)脈瘀阻，絀急而痛的病機(jī)新認(rèn)識(shí)，制定了益氣活血、通絡(luò)止痛的治療方法。依據(jù)保證藥效、優(yōu)化工藝的原則，確定了制備工藝，同時(shí)對(duì)部分藥物進(jìn)行了定量鑒別，既縮小了服用劑量，又保證了藥物的療效和質(zhì)量。
[0004]研究表明，該藥對(duì)血管病變的共性病理環(huán)節(jié)均具有顯著干預(yù)作用:明顯改善高血壓、高血脂、高血糖等高危因素所致血管內(nèi)皮功能障礙，穩(wěn)定易損斑塊減少心腦事件療效確切，解除血管痙攣療效獨(dú)特，對(duì)目前尚無(wú)特效治療藥物的糖尿病微血管并發(fā)癥如腎病、心肌病變、周圍神經(jīng)病變、眼底病變實(shí)驗(yàn)研究均取得顯著療效。
[0005]但該藥組方復(fù)雜，雖然多年來(lái)對(duì)其作用機(jī)理做了大量的研究，但僅限于成品，其活性物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)理尚不明確。為了探索其活性物質(zhì)，故對(duì)其植物藥中間體進(jìn)行了系統(tǒng)分離。得到如下物質(zhì):(1)芍藥苷內(nèi)酯，(2)芍藥酮苷，(3)苯甲酰芍藥苷，(4)沒食子酰芍藥苷，(5)芍藥苷，(6)甲基芍藥苷，(7)白芍苷R1, (8)人參皂苷Rg1, (9)人參皂苷Re，(10)人參皂苷Rb1, (11)人參皂苷Rb2, (12 W -O-苯甲酰芍藥苷，(13)白芍苷R2。(1)-(13)結(jié)構(gòu)如下:

【權(quán)利要求】
1.一種中藥組合物植物藥中間體中單萜及皂苷類成分的分離方法，該中藥組合物包括如下重量份的植物藥人參3-10赤芍3-9降香1-5檀香1-5 炒酸棗仁3_10，該中藥組合物植物藥中間體的制備過程為:按比例稱取各原料藥，降香和檀香先加水提取揮發(fā)油后再用水提取；赤芍和炒酸棗仁加水煎煮；人參用乙醇提取后，再用水提取；將所有水提液過濾后混勻濃縮成水提浸膏，其特征在于包括以下步驟: A、萃取:稱取該中藥組合物植物藥中間體，用20倍量水溶解，然后再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取3次，減壓回收溶劑， B、大孔吸附樹脂純化:用DlOl大孔樹脂將正丁醇萃取物粗分，分別用水、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇依次洗脫，洗脫液濃縮干燥后，收集30%及70%乙醇洗脫部位； C、取30%乙醇洗脫部位，采用硅膠色譜柱，以氯仿-甲醇梯度洗脫，以薄層色譜檢識(shí)各餾分并合并餾分，分別得到白芍苷R1純品、芍藥苷純品； D、取70%乙醇洗脫部位，采用硅膠色譜柱，以氯仿-甲醇梯度洗脫，以薄層色譜檢識(shí)各餾分并合并餾分，得到餾分Fr.rFr.9 ； E、分別取懼分Fr.2、Fr.3、Fr.4、Fr.6、Fr.7、Fr.8、Fr.9,經(jīng)中壓制備色譜分離，分別按照色譜峰收集各目標(biāo)化合物，減壓濃縮，分別得到各濃縮液； F、用制備液相色譜分別對(duì)各濃縮液進(jìn)行洗脫，按照色譜峰分別收集目標(biāo)化合物，減壓濃縮分別得到芍藥苷內(nèi)酯純品、芍藥酮苷純品、苯甲酰芍藥苷純品、沒食子酰芍藥苷純品、甲基芍藥苷純品、人參皂苷Rg1純品、人參皂苷Re純品、人參皂苷Rb1純品、人參皂苷Rb2純品、2' -O-苯甲酰芍藥苷、白芍苷R2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物植物藥中間體中單萜及皂苷類成分的分離方法，其特征在于白芍苷R1的分離步驟如下: A、萃取:稱取該中藥組合物植物藥中間體，用20倍量水溶解，然后再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取3次，減壓回收溶劑； B、大孔吸附樹脂純化:用DlOl大孔樹脂將正丁醇萃取物粗分，分別用水、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇依次洗脫，洗脫液濃縮干燥后，收集30%及70%乙醇洗脫部位； C、取30%乙醇洗脫部位，采用硅膠色譜柱，以體積比為10:1~1:2的氯仿-甲醇梯度洗脫，薄層色譜檢識(shí)各餾分并合并餾分，析出晶體，得到白芍苷R1純品。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物植物藥中間體中單萜及皂苷類成分的分離方法，其特征在于芍藥苷的分離步驟如下: Α、萃取:稱取該中藥組合物植物藥中間體，用20倍量水溶解，然后再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取3次，減壓回收溶劑； B、大孔吸附樹脂純化:用DlOl大孔樹脂將正丁醇萃取物粗分，分別用水、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇依次洗脫，洗脫液濃縮干燥后，收集30%及70%乙醇洗脫部位； C、取30%乙醇洗脫部位，采用硅膠色譜柱，以體積比為10:1~1:4的氯仿-甲醇梯度洗脫，薄層色譜檢識(shí)各餾分并合并餾分，析出晶體，得到芍藥苷純品。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物植物藥中間體中單萜及皂苷類成分的分離方法，其特征在于芍藥苷內(nèi)酯的分離步驟如下: Α、萃取:稱取該中藥組合物植物藥中間體，用20倍量水溶解，然后再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取3次，減壓回收溶劑；B、大孔吸附樹脂純化:用DlOl大孔樹脂將正丁醇萃取物粗分，分別用水、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇依次洗脫，洗脫液濃縮干燥后，收集30%及70%乙醇洗脫部位； D、取70%乙醇洗脫部位，采用硅膠色譜柱，以體積比為10:1~1:2氯仿-甲醇梯度洗脫，薄層色譜檢識(shí)各餾分并合并餾分，得到餾分Fr.rFr.9 ； E、取餾分Fr.3，經(jīng)中壓制備色譜分離，色譜柱為C18, 50 μ m，柱規(guī)格為26 X 310mm，以甲醇-水梯度洗脫，體積比10 =90^100:0，流速為25ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，按照色譜峰收集芍藥苷內(nèi)酯，減壓濃縮含芍藥苷內(nèi)酯的洗脫液，濃縮溫度控制在500C，得到芍藥苷內(nèi)酯濃縮液； F、用制備液相色譜對(duì)芍藥苷內(nèi)酯濃縮液進(jìn)行洗脫，色譜柱為C18，填料粒徑為5μ m，規(guī)格為20X250mm，以乙腈-水梯度洗脫，體積比為24:76，流速為5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm,按照色譜峰收集芍藥苷內(nèi)酯的洗脫液，50 V減壓濃縮，得到芍藥苷內(nèi)酯純品。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物植物藥中間體中單萜及皂苷類成分的分離方法，其特征在于芍藥酮苷和甲基芍藥苷的分離步驟如下: A、萃取:稱取該中藥組合物植物藥中間體，用20倍量水溶解，然后再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取3次，減壓回收溶劑； B、大孔吸附樹脂純化:用DlOl大孔樹脂將正丁醇萃取物粗分，分別用水、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇依次洗脫，洗脫液濃縮干燥后，收集30%及70%乙醇洗脫部位； D、取70%乙醇洗脫部位，采用硅膠色譜柱，以體積比為10:1~1:2氯仿-甲醇梯度洗脫，薄層色譜檢識(shí)各餾分并 合并餾分，得到餾分Fr.rFr.9 ； E、取懼分Fr.3、Fr.4，經(jīng)中壓制備色譜分尚，色譜柱為C18, 50 y m，柱規(guī)格為26 X 310mm,以甲醇-水梯度洗脫，體積比10 =90^100:0，流速為25ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，按照色譜峰從餾分Fr.3中收集芍藥酮苷，從餾分Fr.4中收集甲基芍藥苷，分別減壓濃縮含芍藥酮苷和甲基芍藥苷的洗脫液，濃縮溫度控制在50°C，得到芍藥酮苷和甲基芍藥苷濃縮液； F、用制備液相色譜分別對(duì)芍藥酮苷和甲基芍藥苷濃縮液進(jìn)行洗脫，色譜柱為C18,填料粒徑為5 μ m，規(guī)格為20 X 250mm，以乙腈-水梯度洗脫，體積比為25:75，流速為5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，分別按照色譜峰收集，50°C減壓濃縮，得到芍藥酮苷和甲基芍藥苷純品。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物植物藥中間體中單萜及皂苷類成分的分離方法，其特征在于苯甲酰芍藥苷和沒食子酰芍藥苷的分離步驟如下: A、萃取:稱取該中藥組合物植物藥中間體，用20倍量水溶解，然后再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取3次，減壓回收溶劑； B、大孔吸附樹脂純化:用DlOl大孔樹脂將正丁醇萃取物粗分，分別用水、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇依次洗脫，洗脫液濃縮干燥后，收集30%及70%乙醇洗脫部位； D、取70%乙醇洗脫部位，采用硅膠色譜柱，以體積比為10:1~1:2氯仿-甲醇梯度洗脫，薄層色譜檢識(shí)各餾分并合并餾分，得到餾分Fr.rFr.9 ； E、分別取餾分Fr.2、Fr.6，經(jīng)中壓制備色譜分離，色譜柱為C18, 50 μ m，柱規(guī)格為26X310mm,以甲醇-水梯度洗脫，體積比10:90~100:0，流速為25ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，按照色譜峰從餾分Fr.2中收集苯甲酰芍藥苷，從Fr.6中收集沒食子酰芍藥苷，分別減壓濃縮含苯甲酰芍藥苷和沒食子酰芍藥苷的洗脫液，濃縮溫度控制在50°C，得到苯甲酰芍藥苷和沒食子酰芍藥苷濃縮液；F、用制備液相色譜分別對(duì)苯甲酰芍藥苷和沒食子酰芍藥苷濃縮液進(jìn)行洗脫，色譜柱為C18，填料粒徑為5 μ m，規(guī)格為20 X 250mm，以乙腈-水梯度洗脫，體積比為22:78，流速為5ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，分別按照色譜峰收集，50°C減壓濃縮，得到苯甲酰芍藥苷和沒食子酰芍藥苷純品。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物植物藥中間體中單萜及皂苷類成分的分離方法，其特征在于人參皂苷Rg1的分離步驟如下: A、萃取:稱取該中藥組合物植物藥中間體，用20倍量水溶解，然后再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取3次，減壓回收溶劑； B、大孔吸附樹脂純化:用DlOl大孔樹脂將正丁醇萃取物粗分，分別用水、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇依次洗脫，洗脫液濃縮干燥后，收集30%及70%乙醇洗脫部位； D、取70%乙醇洗脫部位，采用硅膠色譜柱，以體積比為10:1-1:2氯仿-甲醇梯度洗脫，薄層色譜檢識(shí)各餾分并合并餾分，得到餾分Fr.rFr.9 ； E、取懼分Fr.7，經(jīng)中壓制備色譜分尚，色譜柱為C18, 50 u m,柱規(guī)格為26 X 310mm,以甲醇-水梯度洗脫，體積比10 =90^100:0，流速為25ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，按照色譜峰收集人參皂苷Rg1，減壓濃縮含人參皂苷Rg1的洗脫液，濃縮溫度控制在50°C，得到人參皂苷Rg1濃縮液； F、用制備液相色譜對(duì)人參皂苷Rg1濃縮液進(jìn)行洗脫，色譜柱為C18，填料粒徑為5μ m，規(guī)格為20 X 250mm，以乙腈-水梯度洗脫，體積比為24:76，流速為5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，按照色譜峰收集，50°C減壓濃縮，得到人參皂苷Rg1純品。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物植物藥中間體中單萜及皂苷類成分的分離方法，其特征在于人參皂苷Re的分離步驟如下: A、萃取:稱取該中藥組合物植物藥中間體，用20倍量水溶解，然后再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取3次，減壓回收溶劑； B、大孔吸附樹脂純化:用DlOl大孔樹脂將正丁醇萃取物粗分，分別用水、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇依次洗脫，洗脫液濃縮干燥后，收集30%及70%乙醇洗脫部位； D、取70%乙醇洗脫部位，采用硅膠色譜柱，以體積比為10:1-1:2氯仿-甲醇梯度洗脫，薄層色譜檢識(shí)各餾分并合并餾分，得到餾分Fr.rFr.9 ； E、取餾分Fr.8，經(jīng)中壓制備色譜分離，色譜柱為C18, 50 μ m,柱規(guī)格為26 X 310mm,以甲醇-水梯度洗脫，體積比10 =90^100:0，流速為25ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，按照色譜峰收集人參皂苷Re，減壓濃縮含人參皂苷Re的洗脫液，濃縮溫度控制在50°C，得到人參皂苷Re濃縮液； F、用制備液相色譜對(duì)人參皂苷Re濃縮液進(jìn)行洗脫，色譜柱為C18,填料粒徑為5μ m,規(guī)格為20X250mm，以乙腈-水梯度洗脫，體積比為27:73，流速為5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，按照色譜峰收集，50°C減壓濃縮，得到人參皂苷Re純品。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物植物藥中間體中單萜及皂苷類成分的分離方法，其特征在于人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb2的分離步驟如下: A、萃取:稱取該中藥組合物植物藥中間體，用20倍量水溶解，然后再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取3次，減壓回收溶劑； B、大孔吸附樹脂純化:用DlOl大孔樹脂將正丁醇萃取物粗分，分別用水、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇依次洗脫，洗脫液濃縮干燥后，收集30%及70%乙醇洗脫部位； D、取70%乙醇洗脫部位，采用硅膠色譜柱，以體積比為10:1-1:2氯仿-甲醇梯度洗脫，薄層色譜檢識(shí)各餾分并合并餾分，得到餾分Fr.rFr.9 ； E、取餾分Fr.9，經(jīng)中壓制備色譜分離，色譜柱為C18, 50 μ m,柱規(guī)格為26 X 310mm,以甲醇-水梯度洗脫，體積比10 =90^100:0，流速為25ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，按照色譜峰分別收集人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb2,分別減壓濃縮含人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb2的洗脫液，濃縮溫度控制在50°C，分別得到人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb2濃縮液； F、用制備液相色譜分別對(duì)人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb2濃縮液進(jìn)行洗脫，色譜柱為C18,填料粒徑為5 μ m，規(guī)格為20 X 250mm，以乙腈-水梯度洗脫，體積比為28:72，流速為5ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，分別按照色譜峰收集，50°C減壓濃縮，得到人參皂苷Rb1和人參皂苷Rb2純品。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物植物藥中間體中單萜及皂苷類成分的分離方法，其特征在于2' -O-苯甲酰芍藥苷的分離步驟如下: A、萃取:稱取該中藥組合物植物藥中間體，用20倍量水溶解，然后再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取3次，減壓回收溶劑； B、大孔吸附樹脂純化:用DlOl大孔樹脂將正丁醇萃取物粗分，分別用水、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇依次洗脫，洗脫液濃縮干燥后，收集30%及70%乙醇洗脫部位； D、取70%乙醇洗脫部位，采用硅膠色譜柱，以體積比為10:1-1:2氯仿-甲醇梯度洗脫，薄層色譜檢識(shí)各餾分 并合并餾分，得到餾分Fr.rFr.9 ； E、取餾分Fr.2，經(jīng)中壓制備色譜分離，色譜柱為C18, 50 μ m，柱規(guī)格為26 X 310mm，以甲醇-水梯度洗脫，體積比10 =90^100:0，流速為25ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，按照色譜峰收集2' -O-苯甲酰芍藥苷，減壓濃縮含2' -O-苯甲酰芍藥苷的洗脫液，濃縮溫度控制在50°C，得到2' -O-苯甲酰芍藥苷濃縮液； F、用制備液相色譜對(duì)2，-O-苯甲酰芍藥苷濃縮液進(jìn)行洗脫，色譜柱為C18,填料粒徑為5 μ m，規(guī)格為20 X 250mm，以乙腈-水梯度洗脫，體積比為51:49，流速為5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，按照色譜峰收集，50°C減壓濃縮，得到2' -O-苯甲酰芍藥苷純品。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物植物藥中間體中單萜及皂苷類成分的分離方法，其特征在于白芍苷R2的分離步驟如下: A、萃取:稱取該中藥組合物植物藥中間體，用20倍量水溶解，然后再依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取3次，減壓回收溶劑； B、大孔吸附樹脂純化:用DlOl大孔樹脂將正丁醇萃取物粗分，分別用水、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇依次洗脫，洗脫液濃縮干燥后，收集30%及70%乙醇洗脫部位； D、取70%乙醇洗脫部位，采用硅膠色譜柱，以體積比為10:1-1:2氯仿-甲醇梯度洗脫，薄層色譜檢識(shí)各餾分并合并餾分，得到餾分Fr.rFr.9 ； E、取餾分Fr.5，經(jīng)中壓制備色譜分離，色譜柱為C18, 50 μ m，柱規(guī)格為26 X 310mm，以甲醇-水梯度洗脫，體積比10 =90^100:0，流速為25ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，按照色譜峰收集白芍苷R2，減壓濃縮含白芍苷R2的洗脫液，濃縮溫度控制在50°C，得到白芍苷R2濃縮液； F、用制備液相色譜對(duì)白芍苷R2濃縮液進(jìn)行洗脫，色譜柱為C18，填料粒徑為5μ m，規(guī)格為20 X 250mm，以乙腈-水梯度洗脫，體積比為20:80，流速為5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，按照色譜峰收集， 50 V減壓濃縮，得到白芍苷R2純品。
【文檔編號(hào)】C07J17/00GK104072550SQ201310266771
【公開日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2013年6月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月25日
【發(fā)明者】付強(qiáng), 王曙賓 申請(qǐng)人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司