專(zhuān)利名稱(chēng)：聲膜色譜法分離黃芪多糖和黃芪皂甙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥材黃芪的兩種有效成分黃芪多糖和黃芪皂甙的提取分離方法，屬 于藥用植物有效成分的提取分離技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
黃芪為豆科植物蒙古黃芪[Astragalus mongholicus (Bge. ) Hsiao]或膜莢黃芪 [Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge.]的干燥根.黃芪味甘，性微溫，具有補(bǔ)氣固表、 利尿排毒、排膿、斂瘡生肌等功效.近代藥理研究表明，黃芪多糖和黃芪皂甙是藥用黃芪中 的主要有效成分，黃芪多糖具有促進(jìn)免疫器官功能和抗體的生成、抗菌抗病毒和抗腫瘤、防 衰老及抗輻射、雙向調(diào)節(jié)血糖等作用，黃芪皂甙也具有抗炎、降壓、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜的作用，能促 進(jìn)正常機(jī)體的抗體生成，提高巨噬細(xì)胞的吞噬率。目前，黃芪多糖和黃芪皂甙的提取分離方 法主要有水提醇沉法，水提液醇沉后沉淀主要含黃芪多糖，上清液主要含黃芪皂甙，單一的 水提醇沉收率都不高，如葛朝亮，夏泉，劉鋼等(正交設(shè)計(jì)優(yōu)化黃芪多糖的水提取工藝研究 [J1.中國(guó)藥師，2007(6) :21)得到的最佳提取條件為加水量12 1，提取時(shí)間0.5小時(shí)， 提取次數(shù)2次，提取液濃縮后加無(wú)水乙醇沉淀，黃芪多糖收率2. 7% ；在醇提或水提時(shí)，也可 通過(guò)用CaO或NaCO3調(diào)節(jié)pH值至堿性的堿水法，如李紅民，黃仁泉，王亞洲(提高黃芪多糖 提取收率的工藝研究J西北大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)版，2000，30 (6) =335-337)或加入輔助方 法，如超聲波或微波，如王莉等(黃芪多糖的微波提取及含量測(cè)定J，中國(guó)醫(yī)藥報(bào)，2001， 29(6) :35-37)運(yùn)用微波技術(shù)提高提取速度，有效提高了收率，多糖含量為6. 55%。中國(guó)專(zhuān) 利申請(qǐng)?zhí)?00510042836. 9 ；公開(kāi)號(hào)CN1709916A，
公開(kāi)日:2005. 12. 21公開(kāi)了甘肅祁連 山生物科技開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司發(fā)明的黃芪多糖及黃芪皂甙提取方法，該發(fā)明采用了將黃芪 粉碎至顆粒狀，采用6倍量混合溶劑回流提取，然后采用超濾-柱層析-溶劑重結(jié)晶兩重純 化，超濾-醇沉-溶劑洗滌兩重純化方法，分別得到了高純度黃芪多糖和黃芪皂甙產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)目前從黃芪中提取分離黃芪多糖和黃芪皂甙時(shí)，步驟繁復(fù)，工藝時(shí)間長(zhǎng)，效率 低的問(wèn)題，提出本發(fā)明。本發(fā)明的目的在于提供一種簡(jiǎn)單、快速，處理量大，又同時(shí)能純化兩種有效成分的 工藝方法，采用超聲膜處理器處理醇水提取液，通過(guò)膜分離可直接實(shí)現(xiàn)大分子黃芪多糖和 小分子黃芪皂甙以及黃酮等小分子物的分離，超聲可保證膜通量沒(méi)有較大的衰減，滿(mǎn)足了 操作簡(jiǎn)單、處理量大、快速省時(shí)的生產(chǎn)化要求，得到的黃芪多糖純度達(dá)到80%以上。透過(guò)超 濾膜的黃芪皂甙以及黃酮等小分子物經(jīng)濃縮、干燥后，用70%甲醇溶解，上反相制備柱，可 將不同組分分開(kāi)，得到的黃芪皂甙純度可達(dá)90%以上。本發(fā)明的具體步驟如下1)將黃芪根粉碎至顆粒狀，以液料質(zhì)量比12 1的比例，用90%乙醇溶液和水溶 液交替提取各2次，乙醇提取溫度70°C，水提溫度100°C，最后合并全部上清液A ；
2)將合并后的上清液A經(jīng)過(guò)超聲膜分離器進(jìn)行分離，超濾膜截留分子量為 6000-10000道爾頓，得濃縮液B和濾過(guò)液C ；3)濃縮液B經(jīng)醇沉、干燥后，得到黃芪多糖粉；4)濾過(guò)液C經(jīng)濃縮、干燥，用70%甲醇液溶解后，上反相制備柱進(jìn)行色譜法分離， 收集不同組分，經(jīng)濃縮、干燥得黃芪皂甙。其中，步驟2)中的超聲膜分離器，膜材料為聚砜，可耐受PH值2-13，操作環(huán)境 0-60°C，超聲頻率40KHZ士0. 5KHZ，單次處理過(guò)程中膜衰減不超過(guò)10%。
步驟4)中的反相制備柱為內(nèi)徑5-25厘米直管柱，配大流量高壓泵和可調(diào)波長(zhǎng)紫 外檢測(cè)器，反相填料指的是粒徑18微米的球形十八烷基硅膠填料。該發(fā)明與現(xiàn)有報(bào)道技術(shù)相比，具有以下明顯的優(yōu)點(diǎn)(1)超聲膜分離器設(shè)備具有處理量大，操作簡(jiǎn)單，可實(shí)現(xiàn)連續(xù)操作，可大幅提高勞 動(dòng)效率的優(yōu)點(diǎn)。(2)采用反相制備柱，分辨率高，目標(biāo)物純度高。(3)分離過(guò)程可控、自動(dòng)化程度高，便于工業(yè)化應(yīng)用。綜上所述，有關(guān)黃芪中提取黃芪多糖和黃芪皂甙的提取方法中，水提醇沉、超濾技 術(shù)、微波技術(shù)等的應(yīng)用，國(guó)內(nèi)已有專(zhuān)利技術(shù)和文獻(xiàn)報(bào)道。但本課題采用超聲膜分離器和反相 制備色譜柱結(jié)合來(lái)同時(shí)提取黃芪多糖和黃芪皂甙，過(guò)程簡(jiǎn)單、處理量大，黃芪多糖純度達(dá)到 80%以上，黃芪皂甙純度達(dá)到90%以上，國(guó)內(nèi)未見(jiàn)相同報(bào)道。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1取蒙古黃芪藥材5公斤，粉碎，每次12倍量的90%乙醇和水分別在70°C和100°C 下各提取兩次，每次1. 5小時(shí)，合并所有提取液。合并后的濾液通過(guò)BCSM-I超聲膜分離器進(jìn) 行分離，當(dāng)膜通量下降5%時(shí)開(kāi)啟超聲并調(diào)至弱超聲狀態(tài)，膜通量持續(xù)下降可調(diào)至強(qiáng)超聲狀 態(tài)，收集含小分子的濾過(guò)液并濃縮，未通過(guò)膜的大分子多糖通過(guò)循環(huán)過(guò)濾提高純度。收集含 大分子的循環(huán)濃縮液，醇沉，干燥得純度為84. 2% (苯酚-硫酸法測(cè)定)的黃芪多糖431.9 克。醇沉過(guò)程上清與透過(guò)膜含小分子的濾過(guò)液混合，濃縮，干燥，并用70%的甲醇溶 解，上反相制備柱，收集黃芪皂甙組分。經(jīng)HPLC檢測(cè)，得純度為91. 6%的黃芪皂甙86. 1克。
權(quán)利要求
1.聲膜色譜法分離黃芪多糖和黃芪皂甙的特征是采用了超聲膜分離器分離和過(guò)反相 制備柱色譜分離工藝，其具體步驟如下1)將黃芪根粉碎至顆粒狀，用90%乙醇溶液和水溶液交替提取各2次，乙醇提取溫度 70°C，水提溫度100°C，最后合并全部上清液A;2)將合并后的上清液A經(jīng)過(guò)超聲膜分離器進(jìn)行分離，超濾膜截留分子量為6000-10000 道爾頓，得濃縮液B和濾過(guò)液C ；3)濃縮液B經(jīng)醇沉、干燥后，得到黃芪多糖粉；4)濾過(guò)液C經(jīng)濃縮、干燥，用70%甲醇液溶解后，上反相制備柱進(jìn)行色譜法分離，收集 不同組分，經(jīng)濃縮、干燥得黃芪皂甙。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃芪多糖和黃芪皂甙提取方法，其特征在于黃芪根粉和提取 液液料質(zhì)量比為12 1，每次提取時(shí)間為1.5小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃芪多糖和黃芪皂甙提取方法，其特征在于超聲膜分離器為 一種以超聲促進(jìn)膜分離的分離裝置。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃芪多糖和黃芪皂甙提取方法，其特征在于制備柱指內(nèi)徑 5-25厘米的直管柱，柱內(nèi)反相填料指的是粒徑18微米的球形十八烷基硅膠填料。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種黃芪多糖和黃芪皂甙的分離方法，其特征是采用了超聲膜分離器分離和過(guò)反相制備柱色譜分離相結(jié)合的工藝，整個(gè)工藝過(guò)程簡(jiǎn)單、快速、處理量大，同時(shí)純化黃芪多糖和黃芪皂甙兩種有效成分，得到的產(chǎn)品純度高。本發(fā)明具有過(guò)程簡(jiǎn)單、自動(dòng)化控制程度高、易于工業(yè)化應(yīng)用的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07J53/00GK102040666SQ20091021851
公開(kāi)日2011年5月4日 申請(qǐng)日期2009年10月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月23日
發(fā)明者常建華, 趙彥鼎, 郭立安 申請(qǐng)人:西安交大保賽生物技術(shù)股份有限公司