一種灰樹花多糖抗腸道病毒71型口服液及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及保健品技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種灰樹花多糖抗腸道病毒71型口服液及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]腸道病毒71型，簡稱為EV71，是引起嬰幼兒手足口病主要病原體之一，常引起兒童手足口病、病毒性咽峽炎，重癥患兒可出現(xiàn)心肌炎、肺水腫、腦炎等。手足口病多發(fā)生于兒童，尤其是3歲以下嬰幼兒多發(fā)，少數(shù)病情較重，嚴(yán)重的會引起死亡。
[0003]灰樹花是一種珍貴的藥、食兼用蕈菌，灰樹花多糖是從其菌絲體或子實體中分離得到的一種主要的生物活性成份，具有抗病毒、抗腫瘤、提高免疫力、降血糖、抗輻射和清除自由基等功效?；覙浠ǘ嗵蔷哂休^好的抗流感病毒、艾滋病病毒(HIV)和I型單純皰疹病毒(HSV-1)的作用。研究發(fā)現(xiàn)，固體發(fā)酵制備的灰樹花多糖能多條通路實現(xiàn)抗EV71病毒的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種抗EV71病毒灰樹花多糖口服液。該口服液富含灰樹花多糖，能有效的抗EV71病毒，從而能有效控制手足口病。本發(fā)明的另一個目的在于提供一種具有抗EV71病毒灰樹花多糖口服液的制備方法。
[0005]本發(fā)明的目的，可通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn):
一種灰樹花多糖抗腸道病毒71型口服液，所述口服液按以下重量份計組分組成:5-10份灰樹花多糖粉末，1-3份蔗糖，0.01- 0.03份甜菊糖，0.05- 0.1份香精，500-1000份純凈水。
[0006]所述灰樹花多糖粉末的制備方法為:
(1)灰樹花菌種以5-10%接種量接種于培養(yǎng)基上，置于20-30°C中避光培養(yǎng)25-35天，得到菌絲體，干燥備用；
(2)將步驟(I)所得灰樹花菌絲體中加入純凈水，灰樹花菌絲體與純凈水體積質(zhì)量體積比為1:35，300-600W微波提取6-15min，60-90°C浸提3-6小時，提取結(jié)束后，進行3000-4000r/min離心10-20min，取上清液備用，將離心的殘渣進行上述步驟提取2-3次，合并上清液；
(3)將步驟(2)上清液在50-60°C、轉(zhuǎn)速為20-40r/min進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，將上清液濃縮為原來的 1/20-1/10;
(4)醇沉，往濃縮的上清液加入3-4倍體積的95%乙醇，置于2-4°C中醇沉5-10h，醇沉后，進行3000~4000r/min離心5_20min，取沉淀物；
(5)向步驟(4)所得提取物中加入10-20倍體積的純凈水，進行攪拌復(fù)溶，用Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法中一種除蛋白3-5次；
(6)除小分子物質(zhì):利用透析袋，截留分子量12000-14000以上，除去有機小分子、色素； (7)重復(fù)步驟(3)，得到多糖，并進行冷凍干燥，研磨制得灰樹花多糖粉末。
[0007]所述的培養(yǎng)基為具體配制為:五節(jié)芒20-40%，巨菌草5-10%，蘆葦5-10%，玉米粉ΙΟ-? 3% ， 麩皮 I O-15% ， 石膏粉 I %-2%，水15%-40%，各組分百分?jǐn)?shù)之和為百分百，pH值為5-8，裝瓶，中央打孔；
所述的香精為葡萄香精、蘋果香精、草莓香精、藍(lán)莓香精、橘子香精中的一種或幾種。
[0008]—種灰樹花多糖抗腸道病毒71型口服液的制備方法:
(1)稱取灰樹花多糖粉末，加入純凈水，攪勻得到灰樹花多糖溶液;加入蔗糖，攪勻，加入香精、甜菊糖，調(diào)節(jié)PH值至6.8-7.5，攪勻；
(2)將步驟(I)得到的溶液靜置8-10小時，取上清液經(jīng)中空纖維膜超濾設(shè)備超濾，得濾液；
(3)將步驟(2)得到的溶液分裝，封口，10-121°C滅菌10-20mim，制備得到口服液。
[0009]本發(fā)明的優(yōu)點在于:
(1)本發(fā)明充分利用草本植物(五節(jié)芒、巨菌草、芒萁)為灰樹花固態(tài)發(fā)酵的培養(yǎng)基，“以草代木”栽培食藥用菌灰樹花，解決了菌業(yè)生產(chǎn)與林業(yè)生態(tài)平衡之間的“菌林矛盾”，有利于降低提取制備灰樹花多糖的成本。
[0010](2)手足口病是一種常見的傳染疾病，到目前為止，臨床上還沒有十分有效的治療方案或者疫苗研制成功。中草藥顯示出了良好的臨床治療效果，灰樹花多糖被發(fā)現(xiàn)具有多種抗癌，抗炎，抗病毒等藥用價值，但在灰樹花多糖抗EV71病毒的研究方面，尚未見報道。本發(fā)明制備的灰樹花多糖具有顯著的抗EV71病毒作用，而且細(xì)胞毒性效應(yīng)非常低，這在抗病毒藥物中顯得十分難得，極具研發(fā)推廣前景。
[0011]所述發(fā)明產(chǎn)品在體外細(xì)胞試驗中具有明顯抗EV71病毒效果，對病毒復(fù)制的抑制作用是在病毒入侵后的感染早期階段發(fā)揮功效的，在早期抗EV71病毒的抑制率達到80%以上?；覙浠ǘ嗵峭ㄟ^以下三個通路進行抗病毒功效。
[0012](I)通過下調(diào)宿主細(xì)胞內(nèi)EV71病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP1的表達和合成來抑制病毒的復(fù)制；
(2)通過抑制EV71病毒誘導(dǎo)的半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶(caspase-3)的剪切活性來抑制由病毒感染引起的細(xì)胞凋亡。
[0013](3)抑制EV71病毒感染引起的細(xì)胞核因子§8抑制蛋白?(Ι§Β?)的下調(diào)。
【具體實施方式】
[0014]實施例1
一種灰樹花多糖抗腸道病毒71型口服液，所述口服液按以下重量份計組分組成:5份灰樹花多糖粉末，I份蔗糖，0.0l份甜菊糖，0.05份香精，500份純凈水。
[0015]所述灰樹花多糖粉末的制備方法為:
(1)灰樹花菌種以5%接種量接種于固體培養(yǎng)基上，置于20°C中避光培養(yǎng)25天，得到菌絲體，干燥備用；
(2)將步驟(I)所得灰樹花菌絲體中加入純凈水，灰樹花菌絲體與純凈水體積質(zhì)量體積比為1: 35，300W微波提取6min，90°C浸提3小時，提取結(jié)束后，進行3000r/min離心1min，取上清液備用，將離心的殘渣進行上述步驟提取2次，合并上清液；
(3)將步驟(2)上清液在50°C、轉(zhuǎn)速為20r/min進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，將上清液濃縮為原來的I/ 10；
(4)醇沉，往濃縮的上清液加入3倍體積的95%乙醇，置于2°C中醇沉5h，醇沉后，進行3000r/min離心5min，取沉淀物；
(5)向步驟(4)所得提取物中加入10倍體積的純凈水，進行攪拌復(fù)溶，用Sevag法除蛋白
3次；
(6)除小分子物質(zhì):利用透析袋，截留分子量12000以上，除去有機小分子、色素；
(7)重復(fù)步驟(3)，得到多糖，并進行冷凍干燥，研磨灰樹花多糖粉末。
[0016]所述的固體培養(yǎng)基為具體配制為:五節(jié)芒20%，巨菌草10%，蘆葦10%，玉米粉13%，麩皮12%，石膏粉2%，水33%，pH值為5，裝瓶，中央打孔；
所述的香精為葡萄香精。
[0017]制備方法:
(1)稱取灰樹花多糖粉末，加入純凈水，攪勻得到灰樹花多糖溶液;加入蔗糖，攪勻，加入香精、甜菊糖，調(diào)節(jié)pH值至6.8，攪勾；
(2)將步驟(I)得到的溶液靜置8小時，取上清液經(jīng)中空纖維膜超濾設(shè)備超濾，得濾液；
(3)將步驟(2)得到的溶液分裝，封口，100°C滅菌1mim，制備得到口服液。
[0018]實施例2
一種灰樹花多糖抗腸道病毒71型口服液，所述口服液按以下重量份計組分組成:10份灰樹花多糖粉末，3份蔗糖，0.03份甜菊糖，0.1份香精，1000份純凈水。
[0019]所述灰樹花多糖粉末的制備方法為:
(1)灰樹花菌種以10%接種量接種于固體培養(yǎng)基上，置于30°C中避光培養(yǎng)35天，得到菌絲體，干