專利名稱：一種檢測(cè)嘔吐毒素的方法及其專用試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)嘔吐毒素的方法及其專用試劑盒。
技術(shù)背景 嘔吐毒素化學(xué)名稱為脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)其化學(xué)結(jié)構(gòu)如
權(quán)利要求
1.保藏編號(hào)為CGMCCNo. 3396的嘔吐毒素單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株。
2.一種單克隆抗體，是由保藏編號(hào)為CGMCC No. 3396的嘔吐毒素單克隆抗體雜交瘤細(xì) 胞株分泌產(chǎn)生的。
3.—種檢測(cè)嘔吐毒素的酶聯(lián)免疫試劑盒，包括權(quán)利要求2所述單克隆抗體。
4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述試劑盒為如下1)至4)中的任意一種1)所述試劑盒包括包被有包被原的酶標(biāo)板、一抗和酶標(biāo)二抗；所述包被原為式(I)所 示的化合物和載體蛋白偶聯(lián)得到的偶聯(lián)物；所述一抗為所述單克隆抗體；2)所述試劑盒包括包被有包被原的酶標(biāo)板和酶標(biāo)半抗原；所述包被原為所述單克隆 抗體；所述酶標(biāo)半抗原中的半抗原為式(I)所示的化合物；3)所述試劑盒包括包被有包被原的酶標(biāo)板和酶標(biāo)一抗；所述包被原為式(I)所示的化 合物和載體蛋白偶聯(lián)得到的偶聯(lián)物；所述酶標(biāo)一抗中的一抗為所述單克隆抗體；4)所述試劑盒包括包被有包被原的酶標(biāo)板、一抗和酶標(biāo)半抗原；所述包被原為二抗；所述一抗為所述單克隆抗體；所述酶標(biāo)半抗原中的半抗原為式(I)所示的化合物；
5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于所述載體蛋白為鼠血清蛋白、甲狀腺蛋 白、牛血清白蛋白、兔血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白或血藍(lán)蛋白；所述的二抗為羊抗 鼠二抗或羊抗兔二抗。
6.如權(quán)利要求4或5所述的試劑盒，其特征在于1)中所述的酶標(biāo)二抗、2)或4)中所 述的酶標(biāo)半抗原、3)中所述的酶標(biāo)一抗中，所用的標(biāo)記酶為辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酯 酶。
7.如權(quán)利要求3至6中任一所述的試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括嘔吐毒素 標(biāo)準(zhǔn)品溶液、底物顯色液、終止液、濃縮洗滌液和樣品濃縮液；所述嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度為0-5000 μ g/L ；所述濃縮洗滌液為磷酸鹽緩沖液；所述濃縮洗滌液優(yōu)選為將0. 8-1. 2mL吐溫20和 0. 5g疊氮鈉加入IOOmL pH7. 4 0. OlM磷酸鹽緩沖液得到的溶液；所述樣品濃縮液為0. 8mol/L pH7. 2-7. 5的磷酸鹽緩沖液。
8.如權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于所述標(biāo)記酶為辣根過(guò)氧化物酶；所述底物 顯色液由顯色液A液和顯色液B液組成；顯色液A液為過(guò)氧化氫溶液或過(guò)氧化脲溶液；顯色 液B液為鄰苯二胺溶液或四甲基聯(lián)苯胺溶液；所述終止液為硫酸溶液或鹽酸溶液。
9.如權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于所述標(biāo)記酶為堿性磷酸酯酶；所述底物顯色液為對(duì)硝基苯磷酸酯緩沖液；所述終止液為氫氧化鈉溶液。
10. 一種檢測(cè)樣品中嘔吐毒素的方法，包括如下步驟1)將待測(cè)樣品進(jìn)行前處理，得到待測(cè)樣本溶液；2)用權(quán)利要求3-9中任一所述試劑盒對(duì)所述待測(cè)樣本溶液進(jìn)行檢測(cè)； 所述前處理的方法為下述a)、b)、c)中的任意一種a)所述待測(cè)樣品為谷物或飼料；取待測(cè)樣品溶于10%(體積百分含量)甲醇水溶液 中，超聲波振蕩，過(guò)濾并收集濾液，即為待測(cè)樣本溶液；b)所述待測(cè)樣品為啤酒；將待測(cè)樣本攪拌，除去過(guò)量氣體，靜置得到上清液，即為待測(cè) 樣本溶液；c)所述待測(cè)樣品為麥芽汁；直接作為待測(cè)樣本溶液。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)嘔吐毒素的方法及其專用試劑盒。本發(fā)明提供了保藏編號(hào)為CGMCC No.3396的雜交瘤細(xì)胞株8C-2H-3A-6F-2B。本發(fā)明還提供了一種單克隆抗體，是由保藏編號(hào)為CGMCC No.3396的雜交瘤細(xì)胞株8C-2H-3A-6F-2B分泌產(chǎn)生的。本發(fā)明提供的試劑盒包括所述單克隆抗體。本發(fā)明中將嘔吐毒素進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，加入間隔臂，突出嘔吐毒素特征基團(tuán)，并合成了人工抗原。用所述人工抗原免疫動(dòng)物，獲取到了一個(gè)雜交瘤細(xì)胞株，該雜交瘤細(xì)胞株分泌得到的單克隆抗體特異性很高。本發(fā)明的試劑盒，操作簡(jiǎn)便易行，造價(jià)低廉，具有特異性高、靈敏度高、精確度高等特點(diǎn)，能夠現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控且適合大量樣本篩查，將在嘔吐毒素的檢測(cè)中發(fā)揮重要作用。
文檔編號(hào)C07K16/44GK102080067SQ200910237950
公開(kāi)日2011年6月1日 申請(qǐng)日期2009年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月26日
發(fā)明者史為民, 吳小平, 徐飛, 江海洋, 潘凈如, 王奇昌, 王戰(zhàn)輝, 王照鵬 申請(qǐng)人:北京維德維康生物技術(shù)有限公司