專利名稱：具有良好細(xì)胞穿透和強(qiáng)核酸親和性的肽核酸衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及經(jīng)化學(xué)修飾以顯示出良好細(xì)胞穿透和強(qiáng)核酸親和性的肽核酸衍生 物。附圖簡(jiǎn)述

圖1提供了由反相HPLC純化Oligo 17之前和之后的HPLC層析譜。圖2提供了 Oligo 17純化批次的MALDI-TOF質(zhì)譜。圖3提供了 Oligo 17針對(duì)互補(bǔ)或錯(cuò)配DNA的隨溫度變化的光吸收?qǐng)D。圖4 (a)和4 (b)提供了分別用Oligo 1和Oligo 2以5 μ M對(duì)HeLa細(xì)胞處理之后 1、2、3和24小時(shí)的共聚焦顯微鏡圖像(63 X物鏡)。圖5 (a)禾Π 5(b)提供了分別用OKgo 6和OKgo 7以2.5 μ M對(duì)MCF-7細(xì)胞處理之 后0.5和1小時(shí)的共聚焦顯微鏡圖像(63Χ物鏡)。圖6 (a)和6 (b)提供了分別用Oligo 1和Oligo 6以1 μ M對(duì)HeLa細(xì)胞處理之后
6或者24小時(shí)的共聚焦顯微鏡圖像(40Χ物鏡)。圖7 (a)和7 (b)提供了分別用Oligo 21和Oligo 28以2 μ M對(duì)JAR細(xì)胞處理之后
24小時(shí)的共聚焦顯微鏡圖像(40Χ物鏡)。圖7 (C)和7 (d)提供了分別用Oligo 21和Oligo 28以,2 μ M對(duì)Α549細(xì)胞處理之 后24小時(shí)的共聚焦顯微鏡圖像(40Χ物鏡)。圖7 (e)和7 (f)提供了分別用Oligo 21和Oligo 28以2 μ M對(duì)HeLa細(xì)胞處理之
后12小時(shí)的共聚焦顯微鏡圖像(40Χ物鏡)。圖7 (g)提供了用Oligo 21以2 μ M對(duì)HeLa細(xì)胞處理之后24小時(shí)的共聚焦顯微 鏡圖像(40Χ物鏡)。圖8 (a)、8 (b)和 8 (C)提供 了在用 2 μ M 的 Oligo 22 分別對(duì) HeLa、A549 和 JAR 細(xì)胞處理之后24小時(shí)的共聚焦顯微鏡圖像(40X物鏡)。圖9提供了 JAR細(xì)胞的蛋白印跡結(jié)果，所沭細(xì)胞用5 μ M或者10 μ MOligo 9處 理、5 μ M或者10 μ M OligQ 10處理、用5μ M或者10μ M的每個(gè)寡聚物共處理，以及空
白(無(wú)寡聚物處理)。圖10是本發(fā)明PNA寡聚物的代表性結(jié)構(gòu)。
背景技術(shù)：
寡核苷酸已經(jīng)用于許多不同生物學(xué)目的，包括基因表達(dá)的反義抑制、PCR(聚合 酶鏈反應(yīng))、通過(guò)基因芯片進(jìn)行的診斷分析等等。由于寡核苷酸以序列特異性的方式與 核酸如DNA和RNA相互作用，因此其在可預(yù)測(cè)地調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)涉及DNA或者RNA的生 物過(guò)程時(shí)是非常有用處的。然而與小分子藥物不同，寡核苷酸不易于穿透哺乳動(dòng)物細(xì)胞 膜，因此除非對(duì)其進(jìn)行適當(dāng)修飾或者配制以易于穿透漿膜，否則幾乎不能影響細(xì)胞內(nèi)生 物過(guò)程。作為藥物靶標(biāo)的蛋白質(zhì):蛋白質(zhì)介導(dǎo)許多不同的細(xì)胞功能。并不令人吃驚的是 可發(fā)現(xiàn)目前市場(chǎng)上大多數(shù)藥物通過(guò)調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)功能而顯示治療活性。例如，非留體類抗炎藥物阿司匹林抑制稱作環(huán)加氧酶的酶而發(fā)揮其抗炎活性。氯沙坦結(jié)合并拮抗稱作血管 緊張素II受體的跨膜受體的功能而發(fā)揮其抗高血壓活性。羅格列酮(Rosiglitazone)選擇 性激活稱作過(guò)氧化物增殖物激活受體Y (PPARy)的細(xì)胞內(nèi)受體而引發(fā)其抗糖尿病活性。 依那西普(Etanercept)是一種融合蛋白，其結(jié)合稱作腫瘤壞死因子_ α (TNF- α )的細(xì)胞因 子并且中和TNF-α的生物活性從而發(fā)揮其抗風(fēng)濕活性。赫賽汀(Herceptin)是通過(guò)選擇 性結(jié)合在某些類型乳腺癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)的erbB2治療乳腺癌的單克隆抗體。蛋白質(zhì)合成的反義抑制蛋白質(zhì)由DNA(2-脫氧核糖核酸)編碼。在對(duì)細(xì)胞刺 激的應(yīng)答中，DNA在細(xì)胞核中被轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生前-mRNA(前信使核糖核酸)。前_mRNA的 內(nèi)含子部分被酶剪接掉而產(chǎn)生mRNA(信使核糖核酸)，然后其被易位至胞質(zhì)區(qū)室。在 細(xì)胞質(zhì)中，稱作核糖體的翻譯機(jī)制的復(fù)合物結(jié)合mRNA并隨著其掃描沿mRNA編碼的遺 傳信息而進(jìn)行蛋白質(zhì)合成(Biochemistry vol 41, 4503-4510，2002 ； Cancer Res.vol 48， 2659-2668, 1988)。以序列特異性方式結(jié)合至mRNA或者前-mRNA的寡核苷酸被稱作反義寡核苷酸 (AO)。AO在細(xì)胞質(zhì)中可以緊密結(jié)合mRNA并且抑制由沿著mRNA的核糖體進(jìn)行的蛋白 質(zhì)合成。AO需要存在于細(xì)胞內(nèi)以抑制其靶蛋白質(zhì)的合成。AO可以緊密結(jié)合細(xì)胞核中 前-mRNA并且影響前-mRNA的剪接，產(chǎn)生改變了序列的mRNA及因此而改變了的蛋白質(zhì)。
0IoB
0 ι
1
ONA
B:核鋮基非天然寡核苷酸DNA或者RNA的寡核苷酸易于被內(nèi)源核酸酶降解,限制了 其治療用途。迄今為止，已經(jīng)開發(fā)并深入研究了許多類型的非天然寡核苷酸(Clin.Exp. Pharmacol.Physiol.vol 33, 533-540，2006)。其中一些顯示出與 DNA 和 RNA 相比更強(qiáng)的 代謝穩(wěn)定性。上面提供的是一些具代表性的非天然寡核苷酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)。這些寡核苷酸 可預(yù)測(cè)地如DNA或者RNA —樣地結(jié)合互補(bǔ)核酸。硫代磷酸寡核苷酸(PTO)是一種DNA類似物，其每個(gè)單體的主鏈磷酸氧原子之 一由硫原子所取代。這種小的結(jié)構(gòu)改變使得PTO對(duì)于核酸酶降解具有相當(dāng)抗性(Arai.Rev. Biochem.vol 54，367-402，1985)?；仡橮TO與DNA的結(jié)構(gòu)相似性，它們都不易穿透大多數(shù)類型哺乳動(dòng)物細(xì)胞中 的細(xì)胞膜。然而，對(duì)于一些大量表達(dá)DNA轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的細(xì)胞，DNA和PTO顯示出良 好的細(xì)胞穿透。全身性施用的PTO已知易于分布至肝和腎(NucleicAcids Res.vol 25，3290-3296, 1997)。為了促進(jìn)在體外PTO的細(xì)胞穿透，脂轉(zhuǎn)染法已被廣泛實(shí)施。然而，脂轉(zhuǎn)染物理 性地改變了細(xì)胞膜，引起細(xì)胞毒性，因此對(duì)于長(zhǎng)期治療性用途并不理想。在過(guò)去的二十年，對(duì)反義PTO及PTO變體進(jìn)行了臨床評(píng)估以治療癌癥、免疫疾 病、代謝疾病等(Biochemistry vol 41，4503-4510，2002 ； Clin.Exp.Pharmacol.Physiol.vol 33，533-540，2006)。許多這種反義藥物候選物并未成功，部分由于PTO的不良細(xì)胞穿 透所致。為了克服不良的細(xì)胞穿透，需要高劑量施用PTO以達(dá)到治療活性。然而，已 知PTO與劑量依賴性毒性相關(guān)，如延長(zhǎng)的凝血時(shí)間、補(bǔ)體激活、腎小管腎病、Kupffer細(xì) 胞激活以及免疫刺激包括脾腫大、淋巴增生、單核細(xì)胞侵潤(rùn)(Clin.Exp.Pharmacol.Physiol. vol 33，533-540, 2006)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多反義PTO對(duì)于具有顯著的來(lái)自肝或腎的影響的疾病顯示出適當(dāng)?shù)?臨床活性。ISIS-301012(mipomersen)是PTO類似物，其抑制涉及LDL膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)的 蛋白質(zhì)apoB-100的合成。Mipomersen很可能由于其在肝臟中的優(yōu)先分布而在某些動(dòng)脈 硬化患者群中顯示出適當(dāng)?shù)呐R床活性(www.medscape.com/viewarticle/556073 于2009 年2月19日訪問(wèn))。ISIS-113715是反義PTO類似物，其抑制合成蛋白酪氨酸磷酸酶 IB(PTPlB)，且發(fā)現(xiàn)其在II型糖尿病患者中顯示出治療活性(Curr.Opin.Mol.Ther.vol 6， 331-336， 2004)。在亞磷酰胺嗎啉代寡核苷酸(PMO)中，DNA的主鏈磷酸和2_脫氧核糖分別被 亞磷酰胺和嗎啉取代(Appl.Microbiol.Biotechnol.vol 71，575-586，2006)。雖然 DNA 主 鏈?zhǔn)菐ж?fù)電荷的，但是PMO主鏈不帶電荷。因此PMO與mRNA之間的結(jié)合在主鏈之 間沒(méi)有靜電排斥，而趨向于比DNA與mRNA之間的結(jié)合更強(qiáng)。由于PMO在結(jié)構(gòu)上與 DNA非常不同，因此PMO不會(huì)被識(shí)別DNA的肝轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白所識(shí)別。然而，PMO不易于 穿透細(xì)胞膜。肽核酸(PNA)是具有N-(2-氨基乙基)甘氨酸作為單位主鏈的多肽，由Nielsen 及其同事發(fā)現(xiàn)(Science vol 254，1497-1500，1991)。與 DNA 和 RNA—樣，PNA 也選擇 性結(jié)合互補(bǔ)核酸[Nature(London)vol 365，566-568，1992]。與 PMO—樣，PNA 的主鏈 不帶電荷。因此PNA與RNA之間的結(jié)合趨相于比DNA與RNA之間的結(jié)合更強(qiáng)。由于 PNA在結(jié)構(gòu)上與DNA顯著不同，因此PNA不會(huì)被識(shí)別DNA的肝轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白所識(shí)別，并會(huì) 顯示出與DNA或者PTO極為不同的組織分布譜。然而，PNA也不易穿透哺乳動(dòng)物細(xì)胞 膜(Adv.Drug Delivery Rev.vol 55，267-280，2003)。在鎖定核酸(LNA)中，RNA的主鏈核糖環(huán)在結(jié)構(gòu)上受到約束以提高對(duì)于RNA 或者DNA的結(jié)合親和性。因此，LNA可被認(rèn)為是高親和性DNA或者RNA衍生物 (Biochemistry vol 45，7347-7355，2006)。反義機(jī)制反義機(jī)制取決于AO類型而有差異。RNAse H識(shí)別mRNA與DNA、 RNA或者PTO的雙鏈體，并降解mRNA的雙鏈體部分。因此，PTO的反義活性顯著地 被RNAse H所增強(qiáng)。與此同時(shí)，RNAse H不識(shí)別mRNA與PMO、PNA或者LNA的雙 鏈體。換句話說(shuō)，PMO、PNA和LNA的反義活性必須純粹依賴于mRNA的空間阻斷 (steric blocking) (Biochemistry vol 41, 4501-4510, 2002)。對(duì)于具有相同mRNA結(jié)合親和性的寡核苷酸而言，PTO因此應(yīng)顯示出比PMO、PNA和LNA更強(qiáng)的反義活性。對(duì)于空間阻斷AO如PMO、PNA和LNA，反義活性需要 強(qiáng)mRNA親和性。PNA的反義活件PNA對(duì)mRNA的結(jié)合親和性會(huì)隨著PNA的長(zhǎng)度增加至某一點(diǎn) 而增加。然而，PNA的反義活性似乎不總是隨著PNA的長(zhǎng)度而增加。有這樣的情況， 即PNA的反義活性在12至13-聚體達(dá)到最大活性并隨后降低(Nucleic acids Res.vol 32， 4893-4902，2004)。另一方面，對(duì)于某一mRNA的最佳反義活性由15至18-聚體PNA達(dá) 到，反映出mRNA的靶結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)可及性將是重要的(Biochemistry vol 40，53-64， 2001)。在許多情況中，據(jù)報(bào)道PNA在良好的細(xì)胞穿透條件下以微摩爾水平抑制由 核糖體進(jìn)行的蛋白質(zhì)合成(Science vol 258，1481-85，1992 ； Biochemistry vol 40， 7853-7859，2001 ； Nucleic acids Res.vol 32, 4893-4902，2004)。然而，靴向于 mRNA 高可及性位置的PNA在良好的轉(zhuǎn)染條件下在低于微摩爾水平(Neuropeptides vol 38, 316-324，2004 ； Biochemistry vol 40，53-64，2001)或者甚至在低于納摩爾水平(Nucleic Acids Res.vol 36，4424-4432，2008)也被發(fā)現(xiàn)顯示出反義活性。在靶向于mRNA中高可及性位點(diǎn)之外，PNA對(duì)mRNA的強(qiáng)結(jié)合親和性對(duì)于良好 的反義活性也是非常必要的。與DNA、PTO和LNA不同，PNA的主鏈不帶電荷。隨 著大小增加，PNA趨于聚集并且變得不適于結(jié)合mRNA。希望改善PNA對(duì)mRNA的結(jié) 合親和性而不增加PNA的長(zhǎng)度。具有點(diǎn)電荷的PNA單體的摻入有益于防止PNA聚集。PNA的細(xì)胞穿透策略PNA不易于穿透細(xì)胞膜且趨于顯示不佳的反義活性， 除非其被適當(dāng)?shù)剞D(zhuǎn)染。在早些年，PNA的反義活性通過(guò)顯微注射(Science vol 258， 1481-85，1992)或者電穿孔(Biochemistry vol 40，7853-7859，2001)評(píng)估。顯微注射和 電穿孔是侵入性的且不適用于治療目的。為了改善細(xì)胞穿透，已經(jīng)開發(fā)了多種策略(Adv. Drag Delivery Rev.vol 55, 267-280，2003 ； Curr.Top.Med.Chem.vol 7, 727-737，2007)。通過(guò)如下方法已經(jīng)將PNA有效地輸送至細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞穿透性肽的共價(jià)摻 入(Neuropeptides vol 38，316-324，2004)、在與互補(bǔ)DNA形成雙鏈體后的脂轉(zhuǎn)染 (Biochemistry vol 40, 53-64，2001)、用共價(jià)附著的9-氨基吖啶對(duì)PNA的脂轉(zhuǎn)染 (Nucleic Acids Res.vol 32, 2695-2706，2004)、用共價(jià)附著的磷酸鹽陰離子對(duì)PNA的脂 轉(zhuǎn)染(NucleicAcids Res.vol 36，4424-4432，2008)等等。細(xì)胞穿透也通過(guò)在PNA上附著 親脂部分如金剛烷(Bioconjugate Chem.vol 10，965-972，1999)或者兩親性基團(tuán)如四苯基 磷(NucleicAcids Res.vol 29，1852-1863，2001)而進(jìn)行改善。然而，盡管在細(xì)胞穿透方 面有明顯改善，但是這種共價(jià)修飾不太可能增加對(duì)于mRNA的結(jié)合親和性。具有共價(jià)附著的CPP的PNA 細(xì)胞穿透肽(CPP)是顯示良好細(xì)胞穿透以及具有 來(lái)自精氨酸或者賴氨酸殘基的多個(gè)正電荷的多肽。迄今為止已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多CPP，如轉(zhuǎn) 運(yùn)肽(transportan)、穿膜肽(penetratin)、NLS (核定位信號(hào))和Tat。已知CPP有效地運(yùn) 載共價(jià)附著的搭載物(cargo)進(jìn)入細(xì)胞。具有共價(jià)附著的CPP的PNA也顯示出良好的細(xì) 胞穿透性。盡管一些具有共價(jià)附著的CPP的PNA示出大約IOOnM的反義IC5tl (Neuropeptides vol 38, 316-324，2004)，但是微摩爾反義IC5tl對(duì)于這種PNA更普遍。具有共價(jià)連接的CPP的PNA由兩部分組成，即疏水性PNA結(jié)構(gòu)域和帶正電的CPP結(jié)構(gòu)域。這種PNA趨于聚集以及被捕獲到細(xì)胞內(nèi)的內(nèi)體中，而不可用于蛋白質(zhì) 合成的反義抑制(Curr.Top.Med.Chem.vol 7，727-737，2007 ； Nucleic Acids Res.vol 33, 6837-6849，2005)。此外，這種共價(jià)附著的CPP幾乎不增加PNA對(duì)于mRNA的結(jié)合親和性。 具有手件主鏈的PNA 曾經(jīng)嘗試在2-氨基乙基-甘氧酸(Aeg)的PNA主鏈上 引入手性取代。例如，通過(guò)摻入具有2-氨基乙基-賴氨酸主鏈代替Aeg的PNA單體， 顯著改善 PNA 的水溶性(Angew.Chem.Int.Ed.Engl.vol 35，1939-1941，1996)。通過(guò)引入L-(2-氨基-2-甲基)乙基-甘氨酸的主鏈代替Aeg，PNA對(duì)于DNA 和RNA的結(jié)合親和性得到顯著改善。具有L-(2_氨基-2-甲基)乙基-甘氨酸所有主鏈 代替2-氨基乙基-甘氨酸的10-聚體PNA顯示出對(duì)于互補(bǔ)DNA和RNA的Tm分別增加 19°C和10°C。但是，這種增加與L-(2_氨基-2-甲基)乙基-甘氨酸取代數(shù)目似乎不成 比例(J.Am.Chem.Soc.vol 128，10258-10267，2006)。GPNA 據(jù)報(bào)道通過(guò)用2-氨基乙基-精氨酸主鏈代替Aeg來(lái)?yè)饺隤NA單體可顯 著改善 PNA 的細(xì)胞穿透(J.Am.Chem.Soc.vol 125，6878-6879，2003)。由于這種 PNA 在 主鏈上具有胍鹽部分而被稱作“GPNA”。據(jù)報(bào)道具有2-氨基乙基-D-精氨酸主鏈的GPNA與具有2-氨基乙基精氨 酸主鏈的GPNA相比具有更強(qiáng)的DNA和RNA親和性(Chem.Commun.244-246，2005)。 對(duì)于具有5個(gè)具有2-氨基乙基-Π-精氨酸主鏈的GPNA單體的10-聚體GPNA而言，與 相應(yīng)未修飾的PNA相比其對(duì)于互補(bǔ)DNA的Tm (解鏈溫度)增加7°C (Bioorg.Med.Chem. Lett.vol 16，4931-4935，2006)。據(jù)報(bào)道針對(duì)人EGFR-TK的16-聚體反義GPNA在經(jīng)ip (腹膜內(nèi))施用于無(wú)胸 腺裸鼠時(shí)顯示出抗腫瘤活性，盡管現(xiàn)有技術(shù)中并未證實(shí)反義GPNA的體外反義活性(WO 2008/061091)。具有修飾的核堿基的PNA 與DNA的情況一樣，已進(jìn)行核堿基修飾以改善PNA 對(duì)核酸的親和性。對(duì)用2，6- 二氨基嘌呤置換了腺嘌呤的PNA對(duì)于互補(bǔ)DNA或者RNA的親和性 進(jìn)行評(píng)估。發(fā)現(xiàn)2，6-二氨基嘌呤的取代引致每個(gè)置換Tm升高2.5 6°C (NucleicAcids Res.vol 25，4639-4643, 1997)。胞嘧啶和修飾的胞嘧啶對(duì)用9- (2-氨基乙氧基)吩噁嗪置換了胞嘧啶的PNA對(duì)于互補(bǔ)DNA或者RNA 的親和性進(jìn)行評(píng)估。用9-(2_氨基乙氧基)吩噁嗪的單取代引致Tm升高10.7 23.7°C， 但是這種升高顯著依賴于核苷酸序列。核堿基9- (2-氨基丙氧基)吩噁嗪也誘導(dǎo)Tm的大幅度升高。由于Tm巨大的升高，因此將具有9-(2-氨基乙氧基)_吩噁嗪或者9-(2-氨基 乙氧基)吩噁嗪作為胞嘧啶置換的PNA單體稱作“G-夾”(Org丄ett.vol 4，4395-4398， 2002)。然而，未報(bào)道具有G-夾PNA的細(xì)胞穿透數(shù)據(jù)。對(duì)用6-{2-(2_氨基乙氧基)苯基}_吡咯并胞嘧啶或者6_{2，6_ 二(2_氨基乙氧 基)苯基丨吡咯并胞嘧啶置換了胞嘧啶的PNA對(duì)于互補(bǔ)DNA或者RNA的親和性進(jìn)行評(píng) 估。用6-{2-(2_氨基乙氧基)苯基}吡咯并胞嘧啶或者6-{2，6-二(2-氨基乙氧基)-苯 基}吡咯并胞嘧啶的單取代使Tm提高3 11.5°C (J.Am.Chem.Soc.vol 130，12574-12575， 2008)。然而，未對(duì)這種PNA的細(xì)胞穿透進(jìn)行評(píng)估。PNA的其它用涂通過(guò)與微小RNA緊密結(jié)合，PNA可抑制微小RNA的調(diào)節(jié) 功能，導(dǎo)致由該微小RNA直接調(diào)節(jié)的蛋白質(zhì)的表達(dá)水平增加(RNAvol 14，336-346， 2008)。通過(guò)與核糖核蛋白如端粒酶的緊密結(jié)合，PNA可以調(diào)節(jié)所述核糖核蛋白的細(xì)胞 功能(8丨00屯16(1.0^1111^&019，1273-78，1999)。通過(guò)與細(xì)胞核中基因的某部分緊密 結(jié)合，PNA可以調(diào)節(jié)該基因的轉(zhuǎn)錄水平(Biochemistryvol 46，7581-89，2007)。由于PNA緊密結(jié)合DNA和RNA，且選擇性區(qū)分單堿基對(duì)錯(cuò)配，因此PNA將適 用于單核苷酸多態(tài)性(SNP)的高保真度檢測(cè)。因?yàn)镻NA以高序列特異性緊密結(jié)合DNA 和RNA，因此可發(fā)現(xiàn)PNA的多種其它涉及DNA或RNA的治療和診斷用途(FASEB vol 14， 1041-1060， 2000)。發(fā)明概述本發(fā)明提供了由式I所代表的新類型的PNA寡聚物或者其藥物可接受的鹽
權(quán)利要求
1.式I所示肽核酸衍生物或者其藥物可接受的鹽
2.權(quán)利要求1的肽核酸衍生物或者其藥物可接受的鹽 其中，η是等于或者大于5但是小于或者等于30的整數(shù)；Si？ S2 ......？ Sn-!？ Sn T1J T2？ ......？ TV1 和Tn是氫基；X和Y獨(dú)立地選自氫基、取代或者未取代的烷基、取代或者未取代的?；?、取代或 者未取代的磺?；?、和取代或者未取代的芳基；Z表示氫基、羥基、取代或者未取代的烷氧基、取代或者未取代的氨基、取代或者未 取代的烷基、或者取代或者未取代的芳基；B1, B2,……，Blri和Bn獨(dú)立地選自天然核堿基，包括腺嘌呤、胸腺嘧啶、鳥嘌 呤、胞嘧啶和尿嘧啶，以及非天然核堿基；并且，B1, B2,……，Blri和Bn中至少一個(gè)獨(dú)立地選自由式II、III或者IV所示的非天然 核堿基
3.權(quán)利要求2的肽核酸衍生物或者其藥物可接受的鹽， 其中，N是等于或者大于8但是小于或者等于25的整數(shù)；Si？ S2 ......？ Sn-!？ Sn T1J T2？ ......？ TV1 和Tn是氫基；X和Y獨(dú)立地選自氫基、取代或者未取代的烷基、和取代或者未取代的酰基； Z表示羥基、或者取代或者未取代的氨基；B1, B2,……，Blri和Bn獨(dú)立地選自天然核堿基，包括腺嘌呤、胸腺嘧啶、鳥嘌 呤、胞嘧啶和尿嘧啶，以及非天然核堿基；B1, B2,……，Blri和Bn中至少兩個(gè)獨(dú)立地選自由式II、III或者IV表示的非天然 核堿基；R1, R2, R3, R4, R5和R6獨(dú)立地選自取代或者未取代的烷基、以及氫基； Q1和Qm是取代或者未取代的亞甲基，并且Qm與堿性氨基直接連接； Q2, Q3,……和Qnri獨(dú)立地選自取代或者未取代的亞甲基、氧和氨基；以及， m是等于或者大于2但是小于或者等于12的整數(shù)。
4.權(quán)利要求2的肽核酸衍生物或者其藥物可接受的鹽， 其中，N是等于或者大于10但是小于或者等于25的整數(shù)；Si？ S2 ......？ Sn-!？ Sn T1J T2？ ......？ TV1 和Tn是氫基；X和Y獨(dú)立地選自氫基、以及取代或者未取代的酰基； Z表示羥基、烷氧基、或者取代或者未取代的氨基；B1, B2,……，Blri和Bn獨(dú)立地選自天然核堿基，包括腺嘌呤、胸腺嘧啶、鳥嘌 呤、胞嘧啶和尿嘧啶，以及非天然核堿基；B1, B2,……，Blri和Bn中至少三個(gè)獨(dú)立地選自由式II、III或者IV所示的非天然 核堿基；R1, R2, R3, R4, R5和R6獨(dú)立地選自取代或者未取代的烷基、以及氫基； Q1和Qm是亞甲基，并且Qm與堿性氨基直接連接； Q2, Q3,……和Qnri獨(dú)立地選自亞甲基、氧和氨基；以及， m是等于或者大于2但是小于或者等于10的整數(shù)。
5.權(quán)利要求2的肽核酸衍生物或者其藥物可接受的鹽，其中，η是等于或者大于10但是小于或者等于20的整數(shù)；Si？ S2 ......？ Sn-!？ Sn T1J T2？ ......？ TV1 和Tn是氫基；X和Y獨(dú)立地選自氫基、以及取代或者未取代的?；?； Z表示羥基、或者取代或者未取代的氨基；B1, B2,……，Blri和Bn獨(dú)立地選自天然核堿基，包括腺嘌呤、胸腺嘧啶、鳥嘌 呤、胞嘧啶和尿嘧啶，以及非天然核堿基；B1, B2,……，Blri和Bn中至少三個(gè)獨(dú)立地選自由式II、III或者IV所示的非天然 核堿基；R1, R3和R5是氫基，R2, R4和R6獨(dú)立地表示氫基、或者取代或者未取代的脒基； Q1和Qm是亞甲基，并且Qm與堿性氨基直接連接； Q2, Q3,……和Qnri獨(dú)立地選自亞甲基、氧和氨基； m是等于或者大于2但是小于或者等于10的整數(shù)。
6.權(quán)利要求2的肽核酸衍生物或者其藥物可接受的鹽， 其中，N是等于或者大于10但是小于或者等于20的整數(shù)；Si？ S2 ......？ Sn-!？ Sn T1J T2？ ......？ TV1 和Tn是氫基；X和Y獨(dú)立地選自氫基、以及取代或者未取代的酰基； Z表示羥基，或者取代或者未取代的氨基；B1, B2,……，Blri和Bn獨(dú)立地選自腺嘌呤、胸腺嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶，以及非 天然核堿基；B1, B2,……，Blri和Bn中至少三個(gè)獨(dú)立地選自由式II、III或者IV所示的非天然核堿基；R1, R3和R5是氫基，并且R2, R4和R6獨(dú)立地表示氫基或者脒基； Q1和Qm是亞甲基，并且Qm與堿性氨基直接連接； Q2, Q3,……和Qnri獨(dú)立地選自亞甲基、和氧；以及， m是等于或者大于2但是小于或者等于8的整數(shù)。
7.權(quán)利要求2的肽核酸衍生物或者其藥物可接受的鹽， 其中，η是等于或者大于8但是小于或者等于20的整數(shù)；Si？ S2 ......？ Sn-!？ Sn T1J T2？ ......？ TV1 和Tn是氫基；X是氫基；Y表示氫基、或者取代或者未取代的?；?； Z表示羥基、或者取代或者未取代的氨基；B1, B2,……，Blri和Bn獨(dú)立地選自腺嘌呤、胸腺嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶，以及非 天然核堿基；B1, B2,……，Blri和Bn中至少三個(gè)獨(dú)立地選自有式II、III或者IV所示的非天然核堿基；R1, R3和R5是氫基，R2, R4和R6獨(dú)立地表示氫基或者脒基；L1 表示-(CH2)2-O-(CH2) 2_、-CH2-O-(CH2) 2_、或者-CH2-O-(CH2) 3_，其右端與堿 性氨基直接連接；以及，L2 和 L3 獨(dú)立地選自-(CH2)2-O-(CH2) 2_、-(CH2) 3-0-(CH2) 2_、-(CH2)2-O-(CH2)3-、_ (CH2) 2_、-(CH2) 3"> "(CH2) 4-> -(CH2) 5-> -(CH2) 6-、_ (CH2) 7_、和-(CH2)8-,其右 端與堿性氨基直接連接。
8.用于治療目的的藥物組合物，其含有治療有效量的權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的肽核酸衍 生物或者其藥物可接受的鹽。
9.使用權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的肽核酸衍生物或者其鹽用于診斷目的的方法。
10.使用權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的肽核酸衍生物或者其鹽用于細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)體外調(diào)節(jié) 的方法。
11.式VI所示化合物其中，
12.由式VII所示化合物其中，R8是氫基、N-琥珀酰基、或者取代或者未取代的烷基；P1選自氫基、叔丁氧羰基、(9H-芴-9-基)甲氧基_羰基、取代或者未取代的芐氧 羰基、以及取代或者未取代的芳基磺酰基；P2選自氫基、叔丁氧羰基、(9H-芴-9-基)甲氧基_羰基、取代或者未取代的芐氧 羰基、取代的烷氧羰基、取代或者未取代的烷基、脒基、1，3-雙(叔丁氧基-羰基)脒 基、1，3-雙-(芐基-氧羰基)脒基；P3選自氫基、叔丁氧羰基、(9H-芴-9-基)甲氧基_羰基、取代或者未取代的芐氧 羰基和取代的芐氧羰基；P4選自氫基、以及叔丁氧羰基；以及， L2是由式V所示的接頭
13.由式VIII所示化合物
14.由式IX所示化合物
全文摘要
本發(fā)明提供了一類新的肽核酸衍生物，其示出良好的細(xì)胞穿透以及對(duì)核酸的強(qiáng)結(jié)合親和性。
文檔編號(hào)C07C237/10GK102015628SQ200980109059
公開日2011年4月13日 申請(qǐng)日期2009年3月13日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月14日
發(fā)明者樸賢真, 李鐘旭, 鄭信, 金希娟, 金美蘭 申請(qǐng)人:Cti生物公司