專(zhuān)利名稱：作為抗癌疫苗的來(lái)源于中期因子蛋白質(zhì)的免疫原性肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及來(lái)源于中期因子(midkine)蛋白質(zhì)的肽在許多癌癥類(lèi)型中作為抗癌 疫苗的應(yīng)用，該肽可以誘導(dǎo)CD4+T和/或CD8+T淋巴細(xì)胞，該淋巴細(xì)胞可識(shí)別在白種人群體 的大部分個(gè)體中的所述中期因子蛋白質(zhì)。本發(fā)明也涉及在許多癌癥類(lèi)型中，在白種人群體的大多數(shù)個(gè)體中，這種被對(duì)中期 因子蛋白質(zhì)具有特異性的CD4+T和/或CD8+T淋巴細(xì)胞所識(shí)別的肽作為試劑的用途，用于免 疫監(jiān)控癌癥或者抗癌治療過(guò)程中針對(duì)中期因子的細(xì)胞反應(yīng)。
背景技術(shù)：
腫瘤細(xì)胞可表達(dá)許多健康細(xì)胞不表達(dá)或者表達(dá)極少的蛋白質(zhì)、或者僅在幾個(gè)細(xì)胞 類(lèi)型中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)。這些在腫瘤細(xì)胞中被優(yōu)先表達(dá)的蛋白質(zhì)可以構(gòu)成腫瘤抗原，即存在 于腫瘤中的蛋白質(zhì)，并且該抗原可以誘導(dǎo)能識(shí)別腫瘤并且(理想的是)除去腫瘤的免疫反 應(yīng)。該免疫反應(yīng)既可以是一種抗體反應(yīng)，只要抗原是一種細(xì)胞膜抗原，也可以是一種涉及 CDS+T或者CD4+T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞反應(yīng)。大部分腫瘤抗原是細(xì)胞內(nèi)抗原并且可誘導(dǎo)細(xì)胞反 應(yīng)。它們構(gòu)成了用于疫苗開(kāi)發(fā)的優(yōu)選目標(biāo)。T淋巴細(xì)胞可促進(jìn)直接針對(duì)腫瘤的細(xì)胞免疫反應(yīng)。它們偶爾可以在經(jīng)受癌癥折磨 的病人體內(nèi)自然地被誘導(dǎo)出來(lái)并且滲入腫瘤，導(dǎo)致自然退化。它們可以被所設(shè)計(jì)的疫苗誘 導(dǎo)，以便促進(jìn)它們的補(bǔ)充。它們是涉及抗腫瘤免疫的兩種類(lèi)型的τ淋巴細(xì)胞。CD8+T淋巴細(xì) 胞是細(xì)胞毒性的(CD8+CTL)，并且可以裂解腫瘤細(xì)胞。在細(xì)胞識(shí)別期間它們的裂解涉及穿孔 素和粒酶。CD8+T淋巴細(xì)胞識(shí)別被稱為CD8+T表位的肽形式的腫瘤抗原，該抗原通過(guò)存在于 腫瘤表面的I型HLA分子(HLA-A、HLA-B和HLA-C)被呈遞給CD8+T淋巴細(xì)胞。輔助CD4+T 淋巴細(xì)胞識(shí)別被稱為CD4+T表位的肽形式的腫瘤抗原，該抗原通過(guò)II型HLA分子被呈遞給 輔助⑶4+T淋巴細(xì)胞。當(dāng)腫瘤表達(dá)II型分子時(shí)，可以直接發(fā)生⑶4+T淋巴細(xì)胞對(duì)腫瘤的識(shí) 別；或者通過(guò)樹(shù)狀細(xì)胞攝取細(xì)胞碎片而間接發(fā)生CD4+T淋巴細(xì)胞對(duì)腫瘤的識(shí)別，樹(shù)狀細(xì)胞是 表面有許多Π型HLA分子的細(xì)胞。涉及抗腫瘤免疫的CD4+T淋巴細(xì)胞在腫瘤控制中起著 多重作用，尤其是涉及補(bǔ)充和維持⑶8+CTL。⑶4+T淋巴細(xì)胞通過(guò)⑶40依賴性機(jī)制在激活樹(shù) 狀細(xì)胞(DC)中起著作用。⑶4+T淋巴細(xì)胞通過(guò)DC增加IL-12的分泌和在⑶4+T淋巴細(xì)胞 表面上共刺激分子或粘附分子(I-CAM-1、⑶80、⑶86)的表達(dá)。該活化使得CTL得到補(bǔ)充。 此外，在不表達(dá)I型分子的小鼠中觀察到的結(jié)果也顯示，輔助T淋巴細(xì)胞通過(guò)獨(dú)立于CTL的 機(jī)制而發(fā)揮控制腫瘤的作用，可能是通過(guò)巨噬細(xì)胞活化而起作用。最終，CD4+T淋巴細(xì)胞可 能自身是細(xì)胞毒性的。通過(guò)啟動(dòng)該反應(yīng)，樹(shù)狀細(xì)胞也涉及抗腫瘤免疫。天然的腫瘤特異性 的T淋巴細(xì)胞實(shí)際上是通過(guò)樹(shù)狀細(xì)胞而不是通過(guò)腫瘤細(xì)胞被補(bǔ)充和活化的。在九十年代，第一個(gè)腫瘤抗原的發(fā)現(xiàn)代表著在腫瘤中表達(dá)的蛋白質(zhì)上的許多研究 成果。根據(jù)腫瘤抗原的表達(dá)模式，它們已經(jīng)被分為幾個(gè)類(lèi)別。*腫瘤特異的抗原這是最大組的抗原，起初在黑素瘤中發(fā)現(xiàn)，但是實(shí)際上在許多腫瘤中被表達(dá)。由于這些抗原可在睪丸中表達(dá)，睪丸是表達(dá)它們的僅有的健康組織，這些抗原也被稱為“癌癥睪 丸”。這些抗原中的一些也在胎盤(pán)或者卵巢中表達(dá)。因?yàn)椴G丸和胎盤(pán)缺少常規(guī)的HLA分子， 在健康組織中，對(duì)于T淋巴細(xì)胞而言這些抗原是看不見(jiàn)的。主要的抗原是MAGE-A、MAGE-B、 MAGE-C, GAGE、LAGE 和 SSX 抗原。*分化的抗原分化的抗原是被腫瘤和被產(chǎn)生腫瘤的細(xì)胞組織所表達(dá)的蛋白質(zhì)。最有名的例子是 黑色素瘤抗原，其也在會(huì)黑色素細(xì)胞中表達(dá)。它們是酪氨酸酶(TYR0、TRP-1和TRP-2)和Gp 100和MELAN-A/MART-1抗原。其它分化的抗原對(duì)于前列腺腫瘤(激肽釋放酶_4和PSA)或 者消化道癌癥(CEA)也是已知的。*過(guò)表達(dá)的抗原雖然這些抗原的表達(dá)水平在正常細(xì)胞中不是很高，但是在許多腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá) 的抗原是被高度表達(dá)的蛋白質(zhì)。在大約30%乳腺癌和卵巢癌中和在一些結(jié)腸癌和腎癌中 可發(fā)現(xiàn)HER-2/neu抗原的例子。在腫瘤中P53也是經(jīng)常被過(guò)表達(dá)的。抑制細(xì)胞增殖的P53 蛋白質(zhì)在腫瘤細(xì)胞中通常是非?？焖俚刂貜?fù)循環(huán)的。不論其組織來(lái)源如何，端粒酶(hTERT) 在大于80%的腫瘤中被發(fā)現(xiàn)，然而它在正常細(xì)胞中是不存在的或者被低量地表達(dá)。端粒酶 的作用是用于補(bǔ)償細(xì)胞分裂期間發(fā)生的端粒減少。通過(guò)端粒酶維持端粒長(zhǎng)度不變，來(lái)促進(jìn) 細(xì)胞增殖以及因此的腫瘤發(fā)生。凋亡蛋白質(zhì)抑制因子(IAP)，例如存活素蛋白質(zhì)組成了通過(guò) 抑制胱天蛋白酶而抑制細(xì)胞死亡的蛋白質(zhì)家族。*其它抗原其它抗原種類(lèi)是源于突變或者基因重排的抗原(MUM-1、⑶K4、β-連環(huán)蛋白， HLA-A2，BCR-ALB，CASP-8)和病毒來(lái)源的腫瘤抗原(涉及子宮頸癌的乳頭狀瘤病毒的E6和 E7蛋白質(zhì))。雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多腫瘤抗原，但用于抗擊癌癥的疫苗并不是完美的。疫苗接種試 驗(yàn)仍然令人失望，并且由疫苗引起的退化的例子是很少的。這些失敗是如下情況造成的結(jié) 果被識(shí)別的抗原的弱免疫原性；或者逃避機(jī)理，即腫瘤不再表達(dá)目標(biāo)抗原。被靶向的抗原 對(duì)于細(xì)胞常常不是致命的，以致于可以發(fā)生腫瘤逃逸。已被識(shí)別的抗原主要發(fā)生在黑素瘤 上，并不適用于其它很多癌癥。有少數(shù)幾種已知的抗原具有寬的表達(dá)譜并且因而可能具有 適用于許多癌癥的疫苗。這些抗原主要是過(guò)表達(dá)的抗原例如端粒酶和存活素(PCT國(guó)際申 請(qǐng) W02007/036638)。然而，有許多蛋白質(zhì)在腫瘤細(xì)胞中被優(yōu)先表達(dá)，無(wú)論腫瘤細(xì)胞來(lái)源如何，并且因此 可能組成適用于許多癌癥的疫苗。為了使這些被關(guān)注的蛋白質(zhì)可以用于疫苗，有必要顯示 它們可誘導(dǎo)能夠識(shí)別腫瘤細(xì)胞的T淋巴細(xì)胞，該腫瘤細(xì)胞表達(dá)這些蛋白質(zhì)。實(shí)際上，由于耐 受機(jī)理或者這些蛋白質(zhì)的序列中沒(méi)有T表位，它們有可能僅僅具有弱的免疫原性。它們能 夠誘導(dǎo)免疫反應(yīng)也是有可能的，除非被誘導(dǎo)的細(xì)胞不識(shí)別腫瘤。由于這些腫瘤細(xì)胞中的蛋 白質(zhì)的表達(dá)水平不充分或者加工不正確，來(lái)源于這些蛋白質(zhì)的T表位實(shí)際上可能不在腫瘤 細(xì)胞的表面被呈遞。中期因子(MDK)蛋白質(zhì)，也稱為NEGF2(神經(jīng)突起生長(zhǎng)促進(jìn)因子2)，在1988年被 證明是一種被視黃酸誘導(dǎo)的胚胎癌細(xì)胞蛋白質(zhì)(Kadomatsu等人，Biochem. Biophys. Res. Commun. 1988，151，1312-1318 ；—篇綜述，參見(jiàn) http//www. midkine. org)。在人類(lèi)體內(nèi)，中期因子基因位于第11號(hào)染色體位置llpll. 2上。它包含4個(gè)外顯子并且大小為3. 5kb ； 編碼序列對(duì)應(yīng)于NCBI登錄號(hào)M69148(附后的序列表中的SEQ ID NO :1)。調(diào)控性的5，區(qū) 域包含一種視黃酸反應(yīng)位點(diǎn)和兩個(gè)WT 1(腎胚胎性瘤抑制因子1)腫瘤抑制反應(yīng)位點(diǎn)。視 黃酸反應(yīng)位點(diǎn)負(fù)責(zé)通過(guò)視黃酸誘導(dǎo)中期因子的表達(dá)，同時(shí)WT 1反應(yīng)位點(diǎn)涉及通過(guò)WT 1降 低表達(dá)。已經(jīng)描述了被稱為INSP106的人類(lèi)中期因子蛋白質(zhì)剪接變體(PCT國(guó)際申請(qǐng)WO 2004/052928)。中期因子是一種富含堿性殘基的143個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，有五個(gè)二硫鍵[(37， 61) ； (45, 70) ； (52，74) ； (84，116) ； (94，126)]。人類(lèi)序列對(duì)應(yīng)于 SwissProt 登錄號(hào) P21741(

圖1和附后的序列表中的SEQ ID NO :2)。它呈包含信號(hào)肽和22個(gè)氨基酸的前體 的形式被表達(dá)(圖1)。它呈現(xiàn)出與多效生長(zhǎng)因子蛋白質(zhì)大約50%同源性。在1997年通過(guò) NMR解析了中期因子的結(jié)構(gòu)。該蛋白質(zhì)包含兩個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域，每個(gè)結(jié)構(gòu)域由通過(guò)二硫鍵維 持的三個(gè)反平行β折疊組成；兩個(gè)結(jié)構(gòu)域通過(guò)柔性區(qū)域相連接。生物活性(神經(jīng)突生長(zhǎng)、 纖維蛋白溶解和神經(jīng)細(xì)胞遷移)僅需要C末端結(jié)構(gòu)域。這個(gè)結(jié)構(gòu)域是保守的，并且從果蠅 至人中都被發(fā)現(xiàn)，確認(rèn)了它的功能作用。C末端結(jié)構(gòu)域也包含兩個(gè)肝素結(jié)合位點(diǎn)。至少四個(gè) 能夠結(jié)合中期因子的受體是已知的，這賦予它許多活性共結(jié)合聚糖(syndecan)家族的成 員，其是包含硫酸肝素的蛋白聚糖；PTP ζ，其是包含硫酸軟骨素的蛋白聚糖；ALK(間變性 淋巴瘤激酶)；LRP，其是低密度脂蛋白(LDL)受體家族的成員。在正常個(gè)體中，中期因子主要是在胚胎發(fā)育期間表達(dá)的，在懷孕的中間達(dá)到了表 達(dá)的峰值。中期因子涉及神經(jīng)元發(fā)展。它引起神經(jīng)突生長(zhǎng)和神經(jīng)細(xì)胞遷移。它也涉及神經(jīng) 肌肉接頭發(fā)展和神經(jīng)元的保護(hù)。在胚胎發(fā)育期間，中期因子涉及牙齒、肺、腎和骨的生長(zhǎng)。中 期因子基因缺陷型小鼠是能存活的，根據(jù)中期因子在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)展中的作用，它們僅僅在 神經(jīng)元功能方面受影響。也觀察到中期因子基因缺陷型小鼠與對(duì)照小鼠相比，更少地受到 軟玉(Mphrite)誘導(dǎo)影響。它們也很少遭受到再狹窄(由于受損害的動(dòng)脈組織增殖所引 起的動(dòng)脈狹窄)。中期因子可在許多腫瘤中被過(guò)表達(dá)，然而在健康的成人個(gè)體中，它表達(dá)較少并 且是局部地表達(dá)(小腸、腦)。與健康的組織相比較，中期因子是腫瘤中表達(dá)最多的40 個(gè)基因之一(Velculescu等人，Nat. Genet.，1999，23，387-388)。在很多人類(lèi)癌癥中大 約80%的例子中，尤其是癌中，中期因子被過(guò)表達(dá)。尤其是在食道癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰 腺癌、甲狀腺癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、子宮癌、卵巢癌和前列腺癌、肝細(xì)胞癌、骨肉瘤、 成神經(jīng)細(xì)胞瘤、惡性膠質(zhì)瘤、星細(xì)胞瘤、白血病和腎胚細(xì)胞瘤中可以觀察到中期因子的 1 ^ ii (Moon φ 人，Gynecologic Oncology, 2003,88, 289-297 ；Hidaka 等人，Leukemia Res.，2007，8，1045-1051 ；Maeda 等人，Br. J. Cancer, 2007,97,405-411 ；Ren 等人，World J. Gastroenterol.，2006，12，2006-2010)。高度表達(dá)與膀胱癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和神經(jīng)母細(xì) 胞瘤的不良預(yù)后相關(guān)(O'Brien，Cancer Res.，1996，56，2515-2518)。此外，中期因子的 過(guò)表達(dá)與人類(lèi)胃癌細(xì)胞系中對(duì)化療的耐受性提高相關(guān)。中期因子不僅僅是在組織中表達(dá)。 在大于60%的罹患癌癥的病人的血清中可以觀察到高水平的中期因子(Muramatsu等人， J. Biochem.，2003，132，259-371)。當(dāng)腫瘤被去除后，這個(gè)水平會(huì)降低。因此血清中中期因 子的存在具有一種診斷學(xué)上的價(jià)值。中期因子看起來(lái)有許多活性與腫瘤發(fā)生相關(guān)。實(shí)際上 它具有轉(zhuǎn)化、抗凋亡、致有絲分裂、血管生成、溶解血纖維蛋白和趨化性的活性(Kadomatsu等人，Cancer Letters，2004，127-143)。已經(jīng)表明，靶向中期因子基因的反義策略抑制了小 鼠中癌的腫瘤發(fā)生(Takei 等人，Cancer Research，2001，61，8486-8491)。由于具有許多生物活動(dòng)性，中期因子或者它的調(diào)劑因子(抑制劑)可用于刺激血 管生成和血細(xì)胞生成，防止粥樣硬化和再狹窄，以及抑制凋亡，并且用于預(yù)防和治療炎癥性 的、心臟的(心肌梗死)、大腦的、肝臟的、神經(jīng)的、腎的、眼的(視網(wǎng)膜病)、神經(jīng)纖維瘤的 (neurofibromatous)、呼吸的(哮喘和肺部增生)和術(shù)后的病理狀況(美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)US 2003/0072739， US 2003/0185794， US 2004/0077579， US 2005/0079151， US2006/0148738 和 US 2005/0130928 ；歐洲專(zhuān)利申請(qǐng) EP 1832296, PCT 國(guó)際申請(qǐng) W02007/055397 和 WO 2000/031541 ；和美國(guó)專(zhuān)利 US 5，629，284 ；US 6，383，480and US6, 572，851)。此外，由于中期因子在腫瘤中的經(jīng)常表達(dá)，結(jié)合血液和小便中該蛋白質(zhì)的存在， 以及與癌癥風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的中期因子的存在，中期因子表現(xiàn)為一種標(biāo)記物用于癌癥的風(fēng)險(xiǎn) 評(píng)估和診斷以及預(yù)測(cè)(美國(guó)專(zhuān)利US 7，090，983和美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)US 2003/0149534and US2004/0219614)。尤其是可通過(guò)使用對(duì)相當(dāng)于中期因子前體第23至25和82至 143位的截?cái)嘈椭衅谝蜃泳哂刑禺愋缘膯慰寺】贵w，來(lái)檢測(cè)中期因子(美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng) US2004/0219614)。中期因子啟動(dòng)子也可用于自殺基因策略中。另一方面，中期因子蛋白質(zhì)的免疫原性并沒(méi)有被研究。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明人已經(jīng)表明，在腫瘤中優(yōu)先表達(dá)的中期因子蛋白質(zhì)包含能夠誘導(dǎo)特異性的 CD4+T和/或CD8+T淋巴細(xì)胞的肽，該淋巴細(xì)胞可識(shí)別在大部分白種人群體個(gè)體中被許多癌 癥類(lèi)型的腫瘤細(xì)胞表達(dá)的中期因子蛋白質(zhì)。假定這些肽能夠誘導(dǎo)直接針對(duì)腫瘤的CD4+T和 CDS+T反應(yīng)，這些肽代表潛在的候選物用于在大部分預(yù)防接種病人中抗癌的預(yù)防性或者治 療性疫苗接種，因?yàn)?i)它們來(lái)源于許多被腫瘤表達(dá)的抗原，(ii)它們能夠誘導(dǎo)特異性的 CD4+T和CD8+T淋巴細(xì)胞，該淋巴細(xì)胞可識(shí)別被腫瘤表達(dá)的抗原，以及(iii)它們可被白種 人群體的大部分個(gè)體中的CD4+T和CD8+T淋巴細(xì)胞識(shí)別，是由于它們顧及HLA分子的多態(tài)現(xiàn) 象以及被白種人群體中主要的HLA分子所限制。此外，這些肽可被對(duì)大部分腫瘤表達(dá)的腫瘤抗原有特異性的⑶4+T和/或⑶8+T淋 巴細(xì)胞所識(shí)別，可用于免疫監(jiān)控在癌癥發(fā)展過(guò)程中、尤其是在抗癌治療(外科手術(shù)、化療、 放療、免疫療法)后針對(duì)中期因子的細(xì)胞反應(yīng)。因此，本發(fā)明的主題是一種來(lái)源于中期因子蛋白質(zhì)的肽或者編碼上述蛋白質(zhì)的 多核苷酸在制備抗癌疫苗中的應(yīng)用，該肽包含至少一個(gè)被白種人群體中主要的HLA分子限 制的CD4+T或者CD8+T表位，該疫苗用于治療與過(guò)表達(dá)所述中期因子蛋白質(zhì)的腫瘤相關(guān)的癌癥。定義-術(shù)語(yǔ)“來(lái)源于中期因子的肽”是指中期因子蛋白質(zhì)(143個(gè)氨基酸的前體或者成 熟蛋白質(zhì)(前體第23至143位))和所述蛋白質(zhì)的至少8個(gè)連續(xù)氨基酸的肽片段。術(shù)語(yǔ) “中期因子”指的是來(lái)源于任何哺乳動(dòng)物的中期因子蛋白質(zhì)；它優(yōu)選是人類(lèi)蛋白質(zhì)。來(lái)源于 中期因子的肽的位置根據(jù)人類(lèi)序列(SwissProt P21741，圖1和SEQ ID NO 2)被標(biāo)明。-術(shù)語(yǔ)“白種人群體中主要的HLA分子”或者“主要的HLA分子”指的是主要的HLAI型(HLA-A、HLA-B或者HLA-C)或者HLA II型分子。它涉及包含被等位基因編碼的α鏈 的HLA-A，HLA-B和HLC-C分子，在白種人群體中等位基因的頻率大于5%，如在下文表I中 所述。MJ, =HLA I型的基因(等位基因*) /表現(xiàn)型頻率
權(quán)利要求
1.一種來(lái)源于中期因子蛋白質(zhì)的肽或者編碼所述蛋白質(zhì)的多核苷酸在抗癌疫苗制備 中的應(yīng)用，所述肽包含至少一個(gè)受白種人群體中顯著存在的HLA分子限制的CD4+T或者 CD8+T表位。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述肽由序列SEQID :2的人類(lèi)中期因子蛋 白質(zhì)組成。
3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述肽是中期因子蛋白質(zhì)中至少8個(gè)氨基酸 的片段，所述片段包含至少一個(gè)受HLA-A2分子限制的⑶8+T表位，所述肽至少包含所述中 期因子蛋白質(zhì)的氨基酸序列第14至21位或者第114至122位。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述肽由所述中期因子蛋白質(zhì)的氨基酸序 列第12至21位、第13至21位、第13至22位、第14至22位、第113至122位或者第114 至122位組成。
5.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述肽是中期因子中的至少8個(gè)氨基酸的 片段，該片段包含至少一個(gè)受白種人群體中顯著存在的至少四個(gè)不同HLA II分子限制的 ⑶4+T表位，所述肽至少包含所述中期因子蛋白質(zhì)的氨基酸序列第9至15位、第14至28位 或者第110至124位。
6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述肽由所述中期因子蛋白質(zhì)的氨基酸序 列第1至15位、第4至18位或者第14至28位組成。
7.如權(quán)利要求1、3和5中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述肽包含至少一個(gè)受 HLA-A2分子限制的⑶8+T表位和至少一個(gè)受白種人群體中顯著存在的至少四個(gè)不同HLA 11 分子限制的CD4+T表位，所述肽由所述中期因子蛋白質(zhì)的氨基酸序列第9至21位、第9至 22位、第9至23位或者第110至124位組成。
8.如權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述肽是一種包含至少兩個(gè)相 同或者不同表位的多聯(lián)體的多表位肽，至少一個(gè)所述表位是如權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所 限定的中期因子⑶4+T和/或⑶8+T表位。
9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述多表位肽包含另一種腫瘤抗原的CD4+T 或者⑶8+T表位。
10.如權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述肽被融合于異源蛋白質(zhì) 或者蛋白質(zhì)片段。
11.如權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述肽是脂肽。
12.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述多核苷酸編碼如權(quán)利要求2至10中任 一項(xiàng)所限定的肽。
13.如權(quán)利要求12所述的應(yīng)用，其特征在于，所述多核苷酸被插入至表達(dá)載體中。
14.如權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述疫苗包含藥學(xué)上可接受 的媒介物、載體物質(zhì)和/或佐劑。
15.如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)所述的肽的應(yīng)用，用于制備用于免疫監(jiān)控針對(duì)中期因 子的細(xì)胞反應(yīng)的試劑，準(zhǔn)備用于評(píng)估預(yù)后或者監(jiān)控癌癥治療。
16.如權(quán)利要求15所述的應(yīng)用，其特征在于，所述肽呈被標(biāo)記的HLA分子四聚體/肽復(fù) 合物的形式。
17.如權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述癌癥選自下組食道癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、子宮癌、卵巢癌和前列腺癌、肝 細(xì)胞癌、骨肉瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、惡性膠質(zhì)瘤、星細(xì)胞瘤、白血病和腎胚細(xì)胞瘤。
18.一種疫苗組合物，其特征在于，它包含至少一種如權(quán)利要求3至11中任一項(xiàng)所述的 肽或者如權(quán)利要求13所述的載體、和一種藥學(xué)上可接受的媒介物、載體物質(zhì)或者佐劑。
19.一種用于免疫監(jiān)控患有癌癥的個(gè)體中針對(duì)中期因子的細(xì)胞反應(yīng)的體外方法，其特 征在于包括-使來(lái)自所述個(gè)體的生物樣品與權(quán)利要求1至10和16中任一項(xiàng)所述的肽相接觸，以及 -通過(guò)任何適當(dāng)?shù)姆椒z測(cè)中期因子特異性的⑶4+T和/或⑶8+T淋巴細(xì)胞。
20.一種用于免疫監(jiān)控針對(duì)中期因子的細(xì)胞反應(yīng)的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包含 如權(quán)利要求1至10和16中任一項(xiàng)所述的肽。
21.一種來(lái)源于如權(quán)利要求3至11中任一項(xiàng)所述的中期因子的肽。
22.—種多核苷酸，其編碼如權(quán)利要求21所述的肽。
23.—種表達(dá)載體，其包含如權(quán)利要求22所述的多核苷酸。
24.一種用如權(quán)利要求22所述的多核苷酸或者如權(quán)利要求23所述的載體修飾的寄主 細(xì)胞。
全文摘要
一種來(lái)源于中期因子蛋白質(zhì)的肽，該肽包含至少一個(gè)受白種人群體中主要的HLA分子限制的CD4+T或者CD8+T表位，或者編碼所述肽的多核苷酸，作為在癌癥或者抗癌治療過(guò)程中一種抗癌疫苗或者用于免疫監(jiān)控針對(duì)中期因子的細(xì)胞反應(yīng)的試劑。
文檔編號(hào)C07K14/475GK102123731SQ200980132872
公開(kāi)日2011年7月13日 申請(qǐng)日期2009年6月19日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月20日
發(fā)明者埃馬紐埃爾·法夫里, 熱羅姆·蓋爾澤厚, 貝爾納·馬耶 申請(qǐng)人:法國(guó)原子能與替代能源委員會(huì)