專利名稱：Erbb-3(her3)選擇性組合療法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到下調(diào)HER3(和可選的一個或多個表皮生長因子受體和HEM)在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)和/或活性，包括對細(xì)胞使用有效量的低聚化合物(寡核苷酸)HER3 mRNA和有效量的蛋白質(zhì)酪氨酸激酶(PTK)抑制劑，或藥學(xué)上可接受的其衍生物。本發(fā)明還涉及到包括給有需求的患者使用有效量的寡核苷酸HER3和PTK抑制劑，或藥學(xué)上可接受的其衍生物。 另外本發(fā)明還涉及到醫(yī)藥組合物包括有效量的寡核苷酸HER3 mRNA和PTK抑制劑，或?qū)W上可接受其衍生物并且是藥學(xué)上可接受的賦形劑形式。該化合物可有效下調(diào)HER3 (和可選的一個或多個表皮生長因子受體(簡稱EGFR)和HER2)在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)和/或活性，可以用于治療多種疾病，如癌癥。本發(fā)明為藥劑制備中鎖核酸(簡稱“LNA”)寡核苷酸HER3，例如一個或多個所述寡核苷酸的用法，其中，該藥劑是與一種蛋白酪氨酸激酶抑制劑結(jié)合用于癌癥治療。本發(fā)明提供了一種藥劑包含LNA寡核苷酸HER3，例如一個或多個所述寡核苷酸，其中該藥劑與一種蛋白酪氨酸激酶抑制劑相結(jié)合用于治療癌癥。
1. 1.背景HER3是ErbB受體酪氨酸激酶族中的一種，該族包括四個不同的受體 ErbB-I(EGFR, HER1)，ErbB-2(neu,HER2)，ErbB-3(HER3)和 ErbB-4(HER4)(Yarden et al.， Nat. Rev. Mol. Cell. Biol, 2001, 2 (2) :127-137)。這個家族的受體蛋白是由胞外配體結(jié)合域，一個單疏水跨膜結(jié)構(gòu)域和一個酪氨酸激酶細(xì)胞質(zhì)含域構(gòu)成。EGF家族至少有12個結(jié)合一個或或多個ErbB受體的生長因子影響同源或異源二聚體。二聚化引發(fā)配體結(jié)合受體的內(nèi)在化和再循環(huán)(或退化)，以及調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)下游信號通路，尤其是細(xì)胞存活，死亡和增殖活性。在專業(yè)領(lǐng)域中HER3 (ErbBIB)被認(rèn)為是缺乏酪氨酸激酶活性。EGFR, HER2和最新的HER3都是腫瘤的成因。最近的研究表明，與人體正常相同部位組織相比，在許多癌變的組織中都存在EGFR超表達(dá)的現(xiàn)象。目前，在乳腺癌，肺癌，卵巢癌和肝癌中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了大量的EGFR的超表達(dá)，擴(kuò)增缺失和基因編碼的結(jié)構(gòu)重組等現(xiàn)象。 EGFR在多形性膠質(zhì)細(xì)胞瘤癌中的擴(kuò)增是已知的最穩(wěn)定的基因病變之一。EGFR的超表達(dá)在許多非小細(xì)胞肺癌病例中也有記錄。在人類乳腺癌中HER3 mRNA已被檢測出升高。常規(guī)化療方案，直接作用于細(xì)胞蛋白質(zhì)或其他大分子并導(dǎo)致細(xì)胞死亡，但通常無法區(qū)分快速分裂的腫瘤細(xì)胞和快速的分裂正常細(xì)胞。正常細(xì)胞的死亡，如骨髓細(xì)胞和胃腸道的細(xì)胞，會導(dǎo)致毒副作用。而且，腫瘤對于細(xì)胞毒性化療的反應(yīng)是不可預(yù)測的。最近，一些蛋白酪氨酸激酶抑制劑已經(jīng)被開發(fā)作為某些癌癥的治療藥劑，這些癌癥中，蛋白酪氨酸激酶的表達(dá)都不正常。然而，這種療法的功效有局限性，因為許多癌癥對蛋白酪氨酸激酶抑制劑的治療沒有反應(yīng)或隨著時間的推移發(fā)展會對抑制劑產(chǎn)生抗藥性。Arora et al. (2005)J. Pharmacol, and Exp. Therapies 315 (3) :971-971-979.這樣就需要一個新的針對腫瘤細(xì)胞的癌癥療法，比傳統(tǒng)的化療毒性較低且更有效，而且比目有所使用的治療方法有更高的響應(yīng)速率。
1. 2.概要在某些實例中，本發(fā)明涉及一種藥物組合物包括(a)由10至50個相近單體組成的寡核苷酸，相鄰的單體間通過磷酸鹽組或磷酸酰組以共價鍵結(jié)合，該寡核苷酸第一區(qū)至少由10個連續(xù)的單體組成，其中至少有一個單體是核苷類似物，且第一區(qū)序列至少有80% 和排列最整齊的哺乳動物HER3或哺乳動物HER3 mRNA基因目標(biāo)區(qū)域的逆補相同；(b) —種蛋白酪氨酸激酶抑制劑；及(c)藥學(xué)上可接受的輔料劑。在各種實例中，醫(yī)學(xué)組合物包括一個由SEQ ID180中顯示的順序和蛋白酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼構(gòu)成的寡核苷酸。在另一些實例中，藥學(xué)組合物包括(a)由10至50個相近單體組成的寡核苷酸， 這些單體通過磷酸鹽組或磷酸酰組以共價鍵結(jié)合，該寡核苷酸第一區(qū)至少由10個連續(xù)的單體組成，其中至少有一個單體是核苷類似物，且第一區(qū)序列至少有80%和排列最整齊的哺乳動物HER3或哺乳動物HER3 mRNA基因目標(biāo)區(qū)域的逆補相同；(a) —個蛋白酪氨酸激酶抑制劑 ’及(c)藥學(xué)上可接受的輔料劑。本發(fā)明還涉及一種抑制哺乳動物細(xì)胞增殖的方法，包括細(xì)胞接觸用(a)有效量的由10至50個相近單體組成的寡核苷酸，這些單體通過磷酸鹽組或磷酸酰組以共價鍵結(jié)合，該寡核苷酸第一區(qū)至少由10個連續(xù)的單體組成，其中至少有一個單體是核苷類似物， 且第一區(qū)序列至少有80%和排列最整齊的哺乳動物HER3或哺乳動物HER3 mRNA基因目標(biāo)區(qū)域的逆補相同；及(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制劑。在很多的實例中，抑制哺乳動物細(xì)胞的增殖的方法，包括用有效量的由SEQ ID180 中顯示的順序和蛋白酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼(Gefitinib)構(gòu)成的接觸細(xì)胞寡核苷酸。在一些實例中，本發(fā)明包括抑制哺乳動物體內(nèi)細(xì)胞增殖的方法，包含接觸哺乳動物組織用(a)有效量的由10至50個相近單體組成的寡核苷酸，這些單體通過磷酸鹽組或磷酸酰組以共價鍵結(jié)合，該寡核苷酸第一區(qū)至少由10個連續(xù)的單體組成，其中至少有一個單體是核苷類似物，且第一區(qū)序列至少有80%和排列最整齊的哺乳動物HER3或哺乳動物 HER3 mRNA基因目標(biāo)區(qū)域的逆補相同；及(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制劑。在某些實例中，抑制哺乳動物體內(nèi)細(xì)胞增殖的方法，包括用有效量的由SEQ ID180 中顯示的順序和蛋白酪氨酸激酶抑制劑吉非替尼構(gòu)成的接觸細(xì)胞寡核苷酸。在很多的實例中，抑制哺乳動物體內(nèi)細(xì)胞增殖的方法，包括接觸哺乳動物組織用 (a)有效量的由10至50個相近單體組成的寡核苷酸，這些單體通過磷酸鹽組或磷酸酰組以共價鍵結(jié)合，該寡核苷酸第一區(qū)至少由10個連續(xù)的單體組成，其中至少有一個單體是核苷類似物，且第一區(qū)序列至少有80%和排列最整齊的哺乳動物HER3或哺乳動物HER3 mRNA 基因目標(biāo)區(qū)域的逆補相同；及(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶。本發(fā)明還包括一種治療哺乳動物癌癥的方法，包括對哺乳動物使用(a)有效量的由10至50個相近單體組成的寡核苷酸，這些單體通過磷酸鹽組或磷酸酰組以共價鍵結(jié)合，該寡核苷酸第一區(qū)至少由10個連續(xù)的單體組成，其中至少有一個單體是核苷類似物， 且第一區(qū)序列至少有80%和排列最整齊的哺乳動物HER3或哺乳動物HER3 mRNA基因目標(biāo)區(qū)域的逆補相同；及(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制劑。在某些實例中，治療哺乳動物癌癥的方法，包括對哺乳動物使用有效量的由SEQ ID180中顯示的順序構(gòu)成的寡核苷酸和有效量的吉非替尼。在很多的實例中，癌癥是指肺癌，前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，結(jié)腸癌，上皮癌或胃癌。在進(jìn)一步的實例中，本發(fā)明包括一種治療哺乳動物癌癥的方法，包括對哺乳動物使用(a)有效量的由10至50個相近單體組成的寡核苷酸，這些單體通過磷酸鹽組或磷酸酰組以共價鍵結(jié)合，該寡核苷酸第一區(qū)至少由10個連續(xù)的單體組成，其中至少有一個單體是核苷類似物，且第一區(qū)序列至少有80%和排列最整齊的哺乳動物HER3或哺乳動物HER3 mRNA基因目標(biāo)區(qū)域的逆補相同；及(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制劑。本發(fā)明的一個實例提供了以下藥劑的使用方法
(a)由10至50個相近單體組成的寡核苷酸，這些單體通過磷酸鹽組或磷酸酰組以共價鍵結(jié)合，該寡核苷酸第一區(qū)至少由10個連續(xù)的單體組成，且其排列至少有80%和包含以下結(jié)構(gòu)的化合物中至少10個連續(xù)單體區(qū)的序列相同
5' _GsMeCsTscscsasgsascsastscsasMeCsTsMeC 3 (SEQ ID 號169)禾口
5 ‘ -TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3 ‘ (SEQ ID 號180)，其中，大寫字母表示 β -D-oxy-LNA單體，小寫字母表示的DNA單體，下標(biāo)“S”是指磷酸酰鍵，和nreC表示一個含有5-甲基胞嘧啶基的β -D-oxy-LNA單體，及上述第一區(qū)至少有一個單體是核苷類似物， 上述寡核苷酸是反義抑制劑或者HER3 ；及
(b)EGFR(HERl)的蛋白酪氨酸激酶抑制劑，如吉非替尼，埃羅替尼，拉帕替尼和卡奈替尼和/或VEGFR家族的蛋白質(zhì)酪氨酸激酶抑制劑，如VEGFR2和VEGFR3，如索拉非尼，可以聯(lián)合用于哺乳動物癌癥治療。在其中一個實例中，第一區(qū)序列和至少有10個連續(xù)單體的區(qū)的序列在5' -5' -G sMeCsTscscsasgsascsastscsasMeCsTsMeC 3 (SEQ ID 號169)或 5' "TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMe C-3' (SEQ ID號180)相同。在另一個實例中，寡核苷酸為HER3反義寡核苷酸抑制劑5‘ -GsMeCsTscscsasgsascsastscsasMeCsTsMeC 3 (SEQ ID 號16 或 5' _TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsT sMeC"3' (SEQ ID號180)。本發(fā)明還提供了有關(guān)使用方法的治療方法實例。上述方法實例包括對治療需要的哺乳動物，比如人類，同時或前后使用寡核苷酸和PKI抑制劑。
1.3.簡要說明1A-1C。圖IA和IB顯示了用低聚化合物(序列和設(shè)計同上述SEQ ID號180) 和吉非替尼相結(jié)合對A549肺癌細(xì)胞的抗增殖治療效果。圖IC闡述了采用SEQ ID號180 序列和設(shè)計的低聚化合物在A549細(xì)胞中對HER3 mRNA表達(dá)的抑制效果。圖2A-2C。圖2A和2B顯示與低聚化合物(序列和設(shè)計同上述SEQ ID號180)和吉非替尼相結(jié)合，在H1993前列腺癌細(xì)胞抗增生治療中的效果。圖2C闡述了采用SEQ ID 號180序列和設(shè)計的低聚化合物在H1993細(xì)胞中對HER3 mRNA表達(dá)的抑制效果。圖3A-3C。圖3A和顯示與低聚化合物(序列和設(shè)計同上述SEQ ID號180)和吉非替尼相結(jié)合，在15PC3前列腺癌細(xì)胞抗增生治療中的效果。圖3C闡述了采用SEQ ID 號180序列和設(shè)計的低聚化合物在15PC3細(xì)胞中對HER3 mRNA表達(dá)的抑制效果。
圖4A-4C。圖4A和4B顯示了與低聚化合物(序列和設(shè)計同上述SEQ ID號180) 和吉非替尼相結(jié)合，在DU145前列腺癌細(xì)胞抗增生治療中的效果。圖4C闡述了采用SEQ ID 號180序列和設(shè)計的低聚化合物在DU145細(xì)胞中對HER3 mRNA表達(dá)的抑制效果。圖5A-5C。圖5A和5B顯示了與低聚化合物(序列和設(shè)計同上述SEQ ID號180) 和吉非替尼相結(jié)合，在SKBR3乳腺癌細(xì)胞抗增生治療中的效果。圖5C闡述了采用SEQ ID 號180序列和設(shè)計的低聚化合物在SKBR3細(xì)胞中對HER3 mRNA表達(dá)的抑制效果。。圖6A-6C。圖6A和6B顯示了與低聚化合物(序列和設(shè)計同上述SEQ ID號180) 和吉非替尼相結(jié)合，在A431人類上皮癌細(xì)胞抗增生治療中的效果。圖6C闡述了采用SEQ ID號180序列和設(shè)計的低聚化合物在A432細(xì)胞中對HER3 mRNA表達(dá)的抑制效果。
1.4.詳細(xì)說明在某些實例中，本發(fā)明提供了調(diào)節(jié)HER3(可選一個或多個的EGFR和HEM)表達(dá)和 /或活性的藥品和方法。特別是，本發(fā)明還提供了藥品配方，包括有效量的以藥學(xué)上可接受的輔料劑專門在細(xì)胞內(nèi)部混合編碼HER3的核酸(可選一個或多個EGFR和HER2)，和有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制劑，或藥學(xué)上可接受的其衍生物的寡核苷酸。在某些實例中，寡核苷酸會以蛋白酪氨酸激酶抑制劑，或藥學(xué)上可接受的其衍生物的形式出現(xiàn)在相同的化合物中。在各種實例中，寡核苷酸會出現(xiàn)在與在含有蛋白質(zhì)酪氨酸激酶抑制劑的化合物分離的化合物中。在某些實例中，寡核苷酸會出現(xiàn)在與蛋白質(zhì)酪氨酸激酶抑制劑化合物分離的化合物中，這兩個化合物會被結(jié)合在一起使用。在某些實施，本發(fā)明包括治療或預(yù)防疾病的方法，如癌癥，給需要的病人使用本發(fā)明的藥劑。
1. 5.藥物組合物 1. 5. 1.寡核苷酸在一個方面，在本發(fā)明藥物組合物及方法中使用的低聚化合物(此處指寡核苷酸)是有用的，例如在調(diào)節(jié)哺乳動物核酸分子編碼HER3的功能。在某些實例中，哺乳動物核酸分子編碼HER3包括核酸序列同SEQID No. :197，和自然發(fā)生的等位變體。本發(fā)明的寡核苷酸由共價鍵連接的單體組成。術(shù)語“單體”指天然存在于核酸中不包含任何改良糖或改良核酸堿基的核苷和脫氧核苷(統(tǒng)稱“核苷”)，也就是說，在“單體”的化合物中，核酸糖或脫氧核糖與自然發(fā)生的，未經(jīng)改良的堿基(基)(即嘌呤，腺嘌呤，鳥嘌呤，胞嘧啶，胸腺嘧啶或尿嘧啶嘧啶雜環(huán)) 和“核苷類似物”共價鏈接，“核苷類似物”為自然存在或非自然存在于核酸的核苷，其中糖基不是核糖就是脫氧核糖(如雙環(huán)糖或2'改良糖，如2'取代糖)，或糖基被改良(例如， 5-甲基胞嘧啶)，或兩者兼而有之。"RNA單體”是指含有核酸糖和未經(jīng)改良的核苷?！癉NA單體”是含有脫氧核糖和未經(jīng)改良的核苷堿基的核苷?！版i核酸單體”，“鎖定單體”或“LNA單體”是指有雙環(huán)糖的核苷類似物，本文中進(jìn)一步說明如下?！皩?yīng)的核苷類似物”和“對應(yīng)的核苷”是指，核苷類似物與核苷成分是相同的。例如，當(dāng)“核苷”包含2-脫氧糖鏈接到腺嘌呤，其“對應(yīng)核苷類似物”則包含，例如，改良后的鏈接到糖基腺嘌呤。
在此處所述化合物和本發(fā)明方法中使用的寡核苷酸單體均通過連接組結(jié)合在一起。相應(yīng)的，每個單體通過連接組與3'鄰近單體結(jié)合。“連接組”或“核苷間連接”是指能夠共價連接兩個相鄰的單體。具體例子包括磷酸鹽組(在相鄰核苷單體間形成磷酸二酯)和磷硫酰組(在相鄰核苷單體間形成磷硫酰連接)。適合的連接組包括WO 2007/031091中所列，比如，在WO 2007/031091第34頁第一段中所列的連接組名單(在此納入?yún)⒖?。 在一些實例中，連接組正常的磷酸二酯會被改良，對核酸酶侵襲更具抵抗力，如磷硫?；蚣着鹜榱姿猁}，可由核糖核酸酶H裂解，允許核糖核酸酶介導(dǎo)對目標(biāo)基因表達(dá)的反義抑制。在發(fā)明的內(nèi)容中，“寡核苷酸”，“低聚化合物”和“低聚核苷酸”等術(shù)語可以互換，是指通過磷酸鹽組(在相鄰核苷單體間形成磷酸二酯)和磷硫酰組(在相鄰核苷單體間形成磷硫酰連接)與兩個或兩個以上鄰近的單體共價形成的分子。寡核苷酸含有或由10-50單體組成，比如10-30單體。在某些實例中，寡核苷酸包括核苷或核苷類似物，或其混合物?！癓NA寡核苷酸”或 "LNA低聚核苷酸”，是指包含一個或多個LNA單體的低聚核苷酸，如下第6. 1. 2節(jié)所定義。核苷類似物，寡核苷酸中所含可選核苷類似物的作用等同于相應(yīng)的核苷，或也可能有特別改進(jìn)的功能。寡核苷酸中所含的一些單體或全部單體都是核苷類似物的，都往往優(yōu)于其原始形式，因為他們滲透細(xì)胞膜的能力增加了，且對額外的和/或細(xì)胞內(nèi)的核酸酶具有良好的抵抗性，對目標(biāo)核酸有高親和性。LNA單體在這方面更是首選。在很多的實例中，存在于寡核苷酸中的一個或多個核苷類似物與和相應(yīng)的天然核苷相比，其功能更“不明顯”或“等效”的，也就是說，不會對寡核苷酸抑制目標(biāo)基因表達(dá)有功效。但是這種“等效”核苷類似物還是很有用的，例如，它們更容易生產(chǎn)或成本更低廉，在生產(chǎn)或儲存過程中性質(zhì)更穩(wěn)定，或者可以加上標(biāo)簽分類。但是，通常對于寡核苷酸對表達(dá)抑制，類似物會有功效，例如能增加與目標(biāo)區(qū)域的目標(biāo)核酸的親和性和/或增加細(xì)胞內(nèi)核酸的抵抗力和/或使其更容易進(jìn)入細(xì)胞。在很多的實例中，依據(jù)本發(fā)明，寡核苷酸包括核苷單體和至少一個核苷類似物單體，如LNA單體，或其他核苷類似物單體。“至少一個”指大于或等于 1 的整數(shù)，如 1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15， 16,17,18,19,20以此類推。在很多的實例中，比如當(dāng)指的是本發(fā)明化合物的核酸或蛋白質(zhì)標(biāo)靶時，“至少一個”應(yīng)包括“至少二個”，“至少三個”和“至少四個”。同樣，在一些實例中， “至少兩個”應(yīng)包括“至少三個”和“至少四個”。在一些實例中，寡核苷酸由10-50個相近單體組成如10，11，12，13，14，15，16，17， 18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29 或 30 個連續(xù)單體。在一些實例中，寡核苷酸由10-25個單體，或10-16個或12_16單體組成。在各種實例中，寡核苷酸包括10-25個連續(xù)的單體，IO-M個連續(xù)的單體，12 25個或12- 個或10-22個連續(xù)的單體，比如12-18個連續(xù)單體，13 17個或12-16個連續(xù)的單體，如13，14，15，16個連續(xù)的單體。在很多的實例中，寡核苷酸包括10-22個連續(xù)的單體或10-18個，比如12_18個或13-17個或12-16個，如13，14，15或16個連續(xù)的單體。在一些實例中，寡核苷酸包括10-16個或12-16個或12-14個連續(xù)單體。在其它實例中，寡核苷酸包括14-18個或14-16個連續(xù)單體。在很多的實例中，寡核苷酸包括10，11，12，13或14個連續(xù)的單體。在很多的實例中，在本發(fā)明藥學(xué)組合物和方法中使用的寡核苷酸由不超過22個連續(xù)單體組成，比如不超過20個連續(xù)單體，不超過18個連續(xù)單體，例如15，16或17個連續(xù)單體。在某些實例中，本發(fā)明寡核苷酸包括低于20個連續(xù)的單體。在很多的實例中，本發(fā)明寡核苷酸不包括RNA單體。在很多的實例中，寡核苷酸是線性分子或線性合成。在這樣的實例中，寡核苷酸是一個單股分子，通常不包括類似至少有3，4或5范圍的連續(xù)單體，與在同一寡核苷酸中的其他區(qū)域互補，這樣，寡核苷酸就形成了一個內(nèi)部雙鏈體。在很多的實例中，大體上沒有雙股， 即不是siRNA。在一些實例中，寡核苷酸由連續(xù)的伸展單體組成，其排列同本文披露的SEQ ID No(見表1)。在其它實例中，寡核苷酸包括一個第一區(qū)域，該區(qū)域由鄰近的伸展單體組成， 還有一個或多個附加的區(qū)域，有至少一個另外的單體組成。在一些實例中，第一區(qū)序列同本文所披露的SEQ ID No。
1.5.2鎖核酸(LNA)單體"LNA單體”是指含有雙環(huán)苷糖(即LNA糖)的核苷類似物?！癓NA低聚核苷酸”和 "LNA寡核苷酸”是指含有一個或多個LNA單體的寡核苷酸。在某些實例中，本發(fā)明組合物和方法所使用的低聚核苷酸化合物中的LNA具有一般式I的結(jié)構(gòu)
權(quán)利要求
1.使用(a)寡核苷酸包含10至50個連續(xù)單體，其中相毗鄰的單體由磷酸鹽組或磷硫酰組共價連接，其中所述單體有一個含至少10個連續(xù)單體的第一區(qū)，該區(qū)至少80%的單體序列與由以下組組成的化合物中的至少10個連續(xù)單體的序列相同5' _GsMeCsTscscsasgsascsastscsasMeCsTsMeC_3 ‘ (SEQ ID NO 169)；禾口5' -TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3' (SEQ ID NO 180)。其中，大寫字母表示β -D-氧-LNA單體，小寫字母表示DNA單體，下標(biāo)“S”磷硫酰連結(jié)， MeC表示一個含有5-甲基胞嘧啶基的β -D-氧-LNA單體，其中所述第一區(qū)至少有一個單體是核苷類似物；及(b)EGFR (HERl)蛋白酪氨酸激酶抑制劑組合用于治療哺乳動物的癌癥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1，EGFR(HERl)蛋白酪氨酸激酶抑制劑選自吉非替尼，埃羅替尼，拉帕替尼和卡奈替尼。
3.根據(jù)權(quán)利要求2，EGFR(HERl)蛋白酪氨酸激酶抑制劑是吉非替尼。
4.根據(jù)先前任何權(quán)利要求的用法中，第一區(qū)序列與出現(xiàn)在SEQID NO :169或180中的一個至少有10個連續(xù)單體的區(qū)的序列是相同的。
5.根據(jù)先前任何權(quán)利要求的用法中，所述寡核苷酸第一區(qū)至少包含10至18個連續(xù)單體。
6.根據(jù)先前任何權(quán)利要求的用法中，所述寡核苷酸第一區(qū)至少包含16個連續(xù)單體。
7.根據(jù)先前任何權(quán)利要求的用法中，每個核苷類似物都是單獨從包含LNA單體，含有 2' -0-烷基-核酸糖的單體，含有2' -0-甲基-核酸糖的單體，含有2'氨基脫氧核糖的單體和含有2'氟-脫氧糖的單體的組中選取。
8.根據(jù)權(quán)利要求7，其中核苷類似物是一個LNA單體。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-3的用法，其中，聚物從以下組中選取5' _GsMeCsTscscsasgsascsastscsasMeCsTsMeC_3 ‘ (SEQ ID NO 169)；禾口5' -TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3' (SEQ ID NO 180) ·
10.根據(jù)權(quán)利要求9的用法，其中寡核苷酸指5' -TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3' (SEQ ID NO 180)。
11.根據(jù)先前任何權(quán)利要求的用法中，該哺乳動物是指人類。
12.根據(jù)先前任何權(quán)利要求的用法中，癌癥是指肺癌，前列腺癌，乳腺癌，上皮細(xì)胞癌和表皮細(xì)胞癌。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-11中任何一條，其中癌癥是指非霍奇金淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，急性白血病，急性淋巴細(xì)胞白血病，急性髓細(xì)胞性白血病，慢性粒細(xì)胞白血病，慢性淋巴細(xì)胞白血病，多發(fā)性骨髓瘤，結(jié)腸癌，直腸癌，上皮癌，胰腺癌，乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌，腎細(xì)胞癌，肝癌，膽道癌，絨毛膜癌，宮頸癌，睪丸癌，肺癌，膀胱癌，黑色素瘤，頭頸部腫瘤，腦腫瘤， 不明原發(fā)灶癌，腫瘤，周圍神經(jīng)系統(tǒng)癌癥，中樞神經(jīng)系統(tǒng)，纖維肉瘤，粘液肉瘤，脂肪肉瘤，軟骨肉瘤，骨肉瘤，脊索瘤，血管肉瘤，肉皮肉瘤，淋巴管肉瘤，淋巴管內(nèi)皮肉瘤，滑膜瘤，間皮瘤，尤因氏瘤，平滑肌肉瘤，橫紋肌肉瘤，鱗狀細(xì)胞癌，基底細(xì)胞癌，腺癌，汗腺癌，皮脂腺癌，乳頭狀癌，乳頭狀腺癌，囊腺癌，髓樣癌，支氣管癌，精原細(xì)胞瘤，胚胎癌，腎母細(xì)胞瘤腫瘤， 小細(xì)胞肺癌，上皮癌，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，星形細(xì)胞瘤，髓母細(xì)胞瘤，顱咽管瘤，室管膜瘤，松果體瘤，血管母細(xì)胞瘤，聽神經(jīng)瘤，少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤，腦膜瘤，神經(jīng)母細(xì)胞瘤和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤。
14.藥物組合物包括(a)由10至50個連續(xù)單體組成的寡核苷酸，其中毗鄰單體由磷酸鹽組或磷硫酰組共價連結(jié)，其中所述寡核苷酸包含一個至少含有10個連續(xù)單體的第一區(qū)；其中該第一區(qū)至少有一個單體是核苷類似物；其中該第一區(qū)序列至少80%與哺乳動物HER3基因或哺乳動物HER3 mRNA的最佳對齊目標(biāo)區(qū)域的逆補相同；(b)蛋白酪氨酸激酶抑制劑；和(c)藥學(xué)上可接受的輔料劑。
15.權(quán)利要求14中所述組合物，其寡核苷酸第一區(qū)序列至少有80%等同于存在SEQID NO 1-140和169-234中至少含10個連續(xù)單體的區(qū)的序列。
16.權(quán)利要求15中所述組合物，其寡核苷酸第一區(qū)序列至少有80%等同于存在SEQID NO =1,54,200或211中至少含10個連續(xù)單體的區(qū)的序列。
17.權(quán)利要求15中所述組合物，其寡核苷酸第一區(qū)序列至少有80%等同于存在SEQID NO 169或180中至少含10個連續(xù)單體的區(qū)的序列。
18.權(quán)利要求14中所述組合物，其蛋白酪氨酸激酶抑制劑是指吉非替尼，埃羅替尼， 卡奈替尼，凡德他尼，拉帕替尼，索拉非尼，AG-494，RG-13022, RG-14620, BIBff 2992，酪氨酸磷酸化抑制劑AG-825，酪氨酸磷酸化抑制劑9，酪氨酸磷酸化抑制劑23，酪氨酸磷酸化抑制劑25，酪氨酸磷酸化抑制劑46，酪氨酸磷酸化抑制劑47，酪氨酸磷酸化抑制劑 53，紫鉚查爾酮，姜黃素，AG-1478，AG-879，環(huán)丙烷羧酸-(3-(6-(3-三氟甲基苯胺)-嘧啶_4-y 1氨基)-苯基)-酰胺，N8-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(1-甲基哌啶_4_y 1)-嘧啶并[5,4-d]嘧啶-2，8-:K，2HCl(CAS 196612-93-8)，4-(4-芐氧基苯胺)-6，7-二甲氧基，N-G-((3-氯-4-氟苯基)氨基)吡啶并[3,4 - δ]嘧啶-6-yl)2-布替那明(CAS 881001-19-0)，EKB-569, HKI-272 和 HKI-357。
19.權(quán)利要求18中所述組合物中蛋白質(zhì)酪氨酸激酶抑制劑選自吉非替尼，埃羅替尼， 拉帕，卡奈替尼和索拉菲尼。
20.權(quán)利要求14中所述組合物中，第一區(qū)中至少一個單體是核苷類似物，并選自LNA 單體，含有2' -0-烷基-核酸糖的單體，含有2' -0-甲基-核酸糖的單體，含有2'-氨基-脫氧核糖的單體，含有2'氟-脫氧核糖的單體。
21.權(quán)利要求20中所述組合物中，其第一區(qū)至少有一個單體是LNA單體。
22.藥物組合物包括(a)寡核苷酸序列·5，-TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3，(SEQ ID NO :180)，其中，大寫字母表示β -D-氧-LNA單體，小寫字母表示DNA單體，下標(biāo)“S”指硫磷酰連結(jié)，fcC表示含有5-甲基胞嘧啶堿基的β -D-氧-LNA單體；(b)吉非替尼；及(c)藥學(xué)上可接受的輔料劑。
23.藥物組合物包括(a)寡核苷酸的共軛由10至50個連續(xù)單體組成，其中毗鄰的單體由磷酸鹽組或磷硫酰組共價連接，其中，該寡核苷酸由至少包含10個連續(xù)單體的第一區(qū)組成；其中，該第一區(qū)至少有一個單體是核苷類似物；其中，其中該第一區(qū)序列至少80%與哺乳動物HER3基因或哺乳動物HER3 mRNA的最佳對齊目標(biāo)區(qū)域的逆補相同；(b)蛋白酪氨酸激酶抑制劑；和(c)藥學(xué)上可接受的輔料劑。
24.權(quán)利要求23所述組合物中，該共軛是寡核苷酸共軛，包含以下序列5，-TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3，(SEQ ID NO :180)，其中，大寫字母表示β -D-氧-LNA單體，小寫字母表示DNA單體，下標(biāo)“S”指硫磷酰連結(jié)，fcC表示含有5-甲基胞嘧啶堿基的β -D-氧-LNA單體。其中，所述蛋白質(zhì)激酶抑制劑是吉非替尼。
25.—種抑制哺乳動物細(xì)胞增生的方法，包括連結(jié)該細(xì)胞與(a)有效量的包含10至50個連續(xù)單體的寡核苷酸，其中毗鄰單體由磷酸鹽組或磷硫酰組共價連結(jié)，其中，所述寡核苷酸包括一個至少有10個連續(xù)單體的第一區(qū)；其中，該第一區(qū)至少有一個單體是核苷類似物；其中，該第一區(qū)序列至少80%與哺乳動物HER3基因或哺乳動物HER3 mRNA的最佳對齊目標(biāo)區(qū)域的逆補相同；及(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制劑。
26.權(quán)利要求25所述的方法中，該寡核苷酸序列如下5，-TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3，(SEQ ID NO :180)，其中，大寫字母表示β -D-氧-LNA單體，小寫字母表示DNA單體，下標(biāo)“S”指硫磷酰連結(jié)，fcC表示含有5-甲基胞嘧啶堿基的β -D-氧-LNA單體。其中，所述蛋白質(zhì)激酶抑制劑是吉非替尼。
27.權(quán)利要求25所述的方法中，與同類型的未經(jīng)治療的該細(xì)胞相比，對細(xì)胞的增生的抑制至少達(dá)到30%。
28.權(quán)利要求25所述的方法中，所述細(xì)胞是指以下癌細(xì)胞前列腺癌細(xì)胞，乳腺癌細(xì)胞，肺癌細(xì)胞和上皮癌細(xì)胞。
29.抑制哺乳動物細(xì)胞增生的方法，包括連結(jié)該細(xì)胞與(a)有效量的包含10至50個連續(xù)單體的寡核苷酸共軛物，其中毗鄰單體由磷酸鹽組或磷硫酰組共價連結(jié)，其中，所述寡核苷酸包括一個至少有10個連續(xù)單體的第一區(qū)；其中，該第一區(qū)至少有一個單體是核苷類似物；其中，該第一區(qū)序列至少80%與哺乳動物HER3基因或哺乳動物HER3 mRNA的最佳對齊目標(biāo)區(qū)域的逆補相同；及(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制劑。
30.權(quán)利要求四所述的方法中，該共軛物是寡核苷酸共軛物由以下序列組成 5，-TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3，(SEQ ID NO :180)，其中，大寫字母表示β -D-氧-LNA單體，小寫字母表示DNA單體，下標(biāo)“S”指硫磷酰連結(jié)，fcC表示含有5-甲基胞嘧啶堿基的β -D-氧-LNA單體。 其中，所述蛋白質(zhì)激酶抑制劑是吉非替尼。
31.抑制哺乳動物體內(nèi)細(xì)胞增生的方法，包括連結(jié)哺乳動物組織與(a)有效量的10-50個連續(xù)單體組成的寡核苷酸其中，相鄰單體由磷酸鹽組或磷硫酰組共價連接，其中，該寡核苷酸由包括至少10個連續(xù)單體的第一區(qū)構(gòu)成； 其中，該第一區(qū)至少有一個單體是核苷類似物；其中，該第一區(qū)序列至少80%與哺乳動物HER3基因或哺乳動物HER3 mRNA的最佳對齊目標(biāo)區(qū)域的逆補相同；及(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制劑。
32.權(quán)利要求31所述的方法中，該寡核苷酸序列的構(gòu)成如下 5，-TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3，(SEQ ID NO :180)，其中，大寫字母表示β -D-氧-LNA單體，小寫字母表示DNA單體，下標(biāo)“S”指硫磷酰連結(jié)，fcC表示含有5-甲基胞嘧啶堿基的β -D-氧-LNA單體。 其中，所述蛋白質(zhì)激酶抑制劑是吉非替尼。
33.一種治療哺乳動物癌癥的方法，包括對該哺乳動物使用(a)有效量的10-50個連續(xù)單體組成的寡核苷酸，其中毗鄰單體由磷酸鹽組或磷硫酰組共價連接，其中，該寡核苷酸由包括至少10個連續(xù)單體的第一區(qū)構(gòu)成； 其中，該第一區(qū)至少有一個單體是核苷類似物；其中，該第一區(qū)序列至少80%與哺乳動物HER3基因或哺乳動物HER3 mRNA的最佳對齊目標(biāo)區(qū)域的逆補相同；及(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制劑。
34.權(quán)利要求33所述的方法中，寡核苷酸序列的構(gòu)成如下 5，-TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3，(SEQ ID NO :180)，其中，大寫字母表示β -D-氧-LNA單體，小寫字母表示DNA單體，下標(biāo)“S”指硫磷酰連結(jié)，fcC表示含有5-甲基胞嘧啶堿基的β -D-氧-LNA單體。 其中，所述蛋白質(zhì)激酶抑制劑是吉非替尼。
35.權(quán)利要求34所述方法中，所指癌癥是指非霍奇金淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，急性白血病，急性淋巴細(xì)胞白血病，急性髓細(xì)胞性白血病，慢性粒細(xì)胞白血病，慢性淋巴細(xì)胞白血病， 多發(fā)性骨髓瘤，結(jié)腸癌，直腸癌，上皮癌，胰腺癌，乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌，腎細(xì)胞癌，肝癌，膽道癌，絨毛膜癌，宮頸癌，睪丸癌，肺癌，膀胱癌，黑色素瘤，頭頸部腫瘤，腦腫瘤，不明原發(fā)灶癌，腫瘤，周圍神經(jīng)系統(tǒng)癌癥，中樞神經(jīng)系統(tǒng)，纖維肉瘤，粘液肉瘤，脂肪肉瘤，軟骨肉瘤，骨肉瘤，脊索瘤，血管肉瘤，肉皮肉瘤，淋巴管肉瘤，淋巴管內(nèi)皮肉瘤，滑膜瘤，間皮瘤，尤因氏瘤，平滑肌肉瘤，橫紋肌肉瘤，鱗狀細(xì)胞癌，基底細(xì)胞癌，腺癌，汗腺癌，皮脂腺癌，乳頭狀癌，乳頭狀腺癌，囊腺癌，髓樣癌，支氣管癌，精原細(xì)胞瘤，胚胎癌，腎母細(xì)胞瘤腫瘤，小細(xì)胞肺癌，上皮癌，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，星形細(xì)胞瘤，髓母細(xì)胞瘤，顱咽管瘤，室管膜瘤，松果體瘤，血管母細(xì)胞瘤，聽神經(jīng)瘤，少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤，腦膜瘤，神經(jīng)母細(xì)胞瘤和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤。
36.權(quán)利要求33所述方法中，該寡核苷酸和該蛋白酪氨酸激酶抑制劑要分別用藥。
37.權(quán)利要求33所述方法中，該寡核苷酸和該蛋白酪氨酸激酶抑制劑同時或一起用藥。
38.權(quán)利要求33所述方法中，該寡核苷酸和該蛋白酪氨酸激酶抑制劑要順序用藥。
39.權(quán)利要求33所述的方法中，該寡核苷酸和蛋白酪氨酸激酶抑制劑是適合口服的藥物劑型。
40.權(quán)利要求33所述方法中，該寡核苷酸為靜脈注射的藥品劑型，蛋白酪氨酸激酶抑制劑是適合口服的藥品劑型。
41.權(quán)利要求35所述方法中，所指癌癥是肺癌，前列腺癌，乳腺癌和上皮癌。
42.權(quán)利要求33所述方法中，該哺乳動物是指人類。
43.在制備藥劑時對目標(biāo)為HER3的LNA單體的用法中，該藥劑是與蛋白酪氨酸激酶抑制劑組合用來治療腫瘤的藥劑。
44.根據(jù)權(quán)利要求43所述的用法中，蛋白酪氨酸激酶抑制劑是指吉非替尼，埃羅替尼，卡奈替尼，凡德他尼，拉帕替尼，索拉非尼，AG-494，RG-13022, RG-14620, BIBff 2992， 酪氨酸磷酸化抑制劑AG-825，酪氨酸磷酸化抑制劑9，酪氨酸磷酸化抑制劑23，酪氨酸磷酸化抑制劑25，酪氨酸磷酸化抑制劑46，酪氨酸磷酸化抑制劑47，酪氨酸磷酸化抑制劑 53，紫鉚查爾酮，姜黃素，AG-1478，AG-879，環(huán)丙烷羧酸-(3-(6-(3-三氟甲基苯胺)-嘧啶-4-yl氨基)-苯基)-酰胺，N8-(3-氯-4-氟苯基)-Ν2_(1-甲基哌啶-4_yl)-嘧啶并[5,4-d]嘧啶-2，8-二胺，2HC1(CAS 196612-93-8)，4-(4-芐氧基苯胺)-6，7-二甲氧基，N-G-((3-氯-4-氟苯基)氨基)吡啶并[3，4 - δ]嘧啶-6-yl)2-布替那明(CAS 881001-19-0)，EKB-569, HKI-272 和 HKI-357。
45.根據(jù)權(quán)利要求44所述的用法中，該蛋白酪氨酸激酶抑制劑選自吉非替尼，厄洛替尼，拉帕替尼，卡奈替尼和索拉菲尼。
46.根據(jù)權(quán)利要求44所述的用法中，該蛋白酪氨酸激酶抑制劑是吉非替尼。
47.在由目標(biāo)為HER3的LNA寡核苷酸組成的藥劑中，所述藥劑是與蛋白酪氨酸激酶抑制劑組合用來治療腫瘤的藥劑。
48.癌癥治療的組合裝中，該組合裝包括酪氨酸蛋白激酶與目標(biāo)為HER3的LNA寡核苷酸。
全文摘要
本發(fā)明涉及目標(biāo)為HER3的治療方法和治療藥物組合物。本發(fā)明涉及的藥物組合物包括細(xì)胞中目標(biāo)為HER3(可選一個或多個HER2和EGFR)mRNA的寡核苷酸，能降低HER3和可選HER2和/或EGFR的表達(dá)。包括對一個或多個酪氨酸激酶受體的小分子蛋白酪氨酸激酶抑制劑，能夠抑制受體二聚體信號傳輸和/或進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)在化。這種組合療法是給許多內(nèi)科疾病患者帶來益處，比如增生過多癥(如癌癥)。本發(fā)明提供了一種用寡核苷酸和蛋白酪氨酸激酶抑制劑組合治療增生癥的方法。
文檔編號C07H21/04GK102223886SQ200980144709
公開日2011年10月19日 申請日期2009年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月7日
發(fā)明者廖柏松, 張易賢 申請人:安龍制藥公司, 森塔瑞斯制藥股份有限公司