專利名稱：通過中電導鈣激活鉀通道調控細胞-細胞融合的組合物及方法
技術領域：
本發(fā)明總的涉及調控細胞-細胞融合(也稱為細胞內攝作用(cellocytosis))的組合物和方法，更具體地涉及調控巨噬細胞同型和異型細胞-細胞融合的組合物和方法。 本發(fā)明因此提供組合物和方法，其用于調控細胞融合，以及與多種疾病或障礙相關的破骨細胞分化和功能。
背景技術：
細胞融合是重要的生物學事件，對于多種發(fā)育和穩(wěn)態(tài)過程是必要的。盡管眾所周知在細胞器轉運(organelle trafficking)期間胞內膜融合，但對于介導精子-卵母細胞、 成肌細胞-成肌細胞的細胞-細胞融合，以及巨噬細胞-巨噬細胞融合還知之甚少。參見 Vignery(2000)Int. J. Exp. Pathol. 81 :291_304。就巨噬細胞而言，這些細胞在組織中可與其自身融合(即同型融合)從而形成巨細胞，巨細胞與慢性炎性疾病有關。參見MacLauchlan等，(2009) J. Leukoc. Biol. 85 617-626 ；和上述Vignery (2000)。另外，巨噬細胞在骨中可與其自身融合從而形成破骨細胞，破骨細胞介導骨質吸收。最近，人們認為巨噬細胞可與體細胞或癌細胞融合(即異型融合)。參見 VignerH2005) TrendsCell Biol. 15 :188_193。遺憾的是，巨噬細胞通過何種機制與其自身及其他細胞融合在很大程度上仍然是未知的。參見上述MacLauchlan等，(2009)；和上述Vignery (2005)。當這些細胞以不適當或未經(jīng)調控的方式融合時，了解該過程可能有助于調節(jié)巨噬細胞功能，還可能限制由炎性和感染性疾病引起的損傷?；谏鲜鲈颍枰种凭奘杉毎诤系慕M合物和方法。破骨細胞通過單核細胞-巨噬細胞細胞系的細胞融合而形成。破骨細胞是一類大細胞，特征在于多細胞核以及高濃度小泡(vesicle)和液泡(vacuole)。破骨細胞在骨質吸收活躍的部位形成特殊的細胞膜，促進移除骨基質(bonymatrix)。該機制引起骨質疏松癥(osteoporosis)或骨質減少(osteopenia)(骨礦物質密度低于正常水平，但并沒有足夠低至界定成骨質疏松)。由于破骨細胞增加骨質吸收，類類風濕性關節(jié)炎(Mieumatoid arthritis)通常合并全身骨質減少。因此，存在對組合物和方法的需要，其用于調控，特別是抑制，破骨細胞分化和功能。發(fā)明概述本發(fā)明總的涉及調控細胞-細胞融合的組合物和方法，通過利用調控中電導 (intermediate-conductance) 1 ^ 7 ffl iS (calcium-activated potassiumchannel) (SK4通道或IK通道或KCNN4通道或KCa3. 1通道或IKCal通道)表達、活性或功能的試劑。 本發(fā)明的組合物包括有效量的SK4通道調節(jié)劑(抑制劑或激活劑)，單獨或與其他治療劑組合。在一個實施方案中，本發(fā)明的方法包括向具有融合可能性的細胞或正活躍融合的細胞提供有效量的SK4通道抑制劑。任選地，所述方法包括隨SK4通道抑制劑一起聯(lián)合提供治療劑。還包括鑒定能夠抑制細胞-細胞融合的SK4通道抑制劑的方法。
在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及激活細胞-細胞融合。因此，方法包括向具有融合可能性的細胞或正活躍融合的細胞提供有效量的SK4通道激活劑。還包括鑒定能夠促進細胞_細胞融合的SK4通道激活劑的方法。在一些實施方案中，本發(fā)明的組合物和方法提供巨噬細胞融合的調控。在其他實施方案中，所述組合物和方法提供破骨細胞分化和功能的調控，包括其抑制作用。本發(fā)明的組合物和方法用于預防或治療由源自巨噬細胞的多核細胞介導的疾病或障礙，包括與破骨細胞、巨細胞或轉移癌細胞有關的疾病。本發(fā)明包括以下實施方案。
1. 一種調控表達中電導鈣激活鉀(SK4)通道的細胞的細胞融合的方法，所述方法包括使細胞與有效量的SK4通道抑制劑或激活劑接觸的步驟，其中細胞融合受到調控。2.實施方案1的方法，其中細胞融合受到抑制。3.實施方案1的方法，其中所述細胞為造血細胞。4.實施方案1的方法，其中所述細胞選自巨噬細胞、樹突細胞和B細胞。5.實施方案1的方法，其中所述細胞為巨噬細胞。6.實施方案1的方法，其中所述細胞融合為同型或異型。7.實施方案1的方法，其中所述SK4通道抑制劑選自抑制性核酸、單克隆抗體和小分子抑制劑。8.實施方案7的方法，其中所述抑制性核酸靶向包含SEQ ID NO :2所示序列的SK4 通道的表達。9.實施方案7的方法，其中所述單克隆抗體識別SK4通道的孔道區(qū)(poreregion) 或小分子結合區(qū)。10.實施方案7的方法，其中所述小分子抑制劑選自1-[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-咪唑；2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺；1- [ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-[(2-氟苯基)二苯基甲基]-1Η-吡唑；1-[(4_氯苯基)二苯基甲基]-1Η-吡唑； 1_[ (2-氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；以及1-[ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-四唑。11.實施方案7的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)_ 二苯基甲基]-IH-咪唑。12.實施方案7的方法，其中所述小分子抑制劑為2，2-雙(4_氟苯基)_2_苯基乙酰胺。13.實施方案7的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑。14.實施方案7的方法，進一步包括測定細胞中SK4通道表達或活性的步驟。15.實施方案1的方法，其中所述方法為體內方法，其中所述的SK4通道抑制劑的有效量為向已有或者懷疑有異常細胞融合的受試者提供的治療有效量。16.實施方案15的方法，進一步包括向受試者聯(lián)合提供治療有效量的抗炎劑、抗骨丟失劑(anti-bone-loss agent)、免疫抑制劑，或者化療劑。17. 一種調控破骨細胞分化和功能的方法，所述方法包括使破骨細胞或破骨細胞前體與有效量的中電導鈣激活鉀(SK4)通道抑制劑或激活劑接觸的步驟。18.實施方案17的方法，其中破骨細胞形成受到抑制。
19.實施方案17的方法，其中所 述SK4通道抑制劑選自抑制性核酸、單克隆抗體和小分子抑制劑。20.實施方案19的方法，其中所述單克隆抗體識別SK4通道的孔道區(qū)或小分子結合區(qū)。21.實施方案19的方法，其中所述小分子抑制劑選自1-[(2_氯苯基)_ 二苯基甲基]-IH-咪唑；2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺；1- [ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-[(2-氟苯基)二苯基甲基]-1Η-吡唑；1-[(4_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑； 1_[ (2-氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；以及1-[ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-四唑。22.實施方案19的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)_ 二苯基甲基]-IH-咪唑。23.實施方案19的方法，其中所述小分子抑制劑為2，2-雙(4_氟苯基)_2_苯基
乙酰胺。24.實施方案19的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑。25.實施方案17的方法，其中所述方法為體內方法，其中所述的SK4通道抑制劑的有效量為向已有或者懷疑有異常破骨細胞分化或功能的受試者提供的治療有效量。26.實施方案25的方法，進一步包括向受試者聯(lián)合給藥治療有效量的抗炎劑、抗骨丟失劑、免疫抑制劑，或者化療劑。27. 一種預防或治療易患或已患骨丟失的受試者中骨丟失的方法，所述方法包括向受試者給藥治療有效量的中電導鈣激活鉀(SK4)通道抑制劑從而抑制破骨細胞形成的步驟，其中受試者中骨丟失得到預防或減少。28.實施方案27的方法，其中所述SK4通道抑制劑選自抑制性核酸、單克隆抗體和小分子抑制劑。29.實施方案28的方法，其中所述單克隆抗體識別SK4通道的孔道區(qū)或小分子結合區(qū)。30.實施方案28的方法，其中所述小分子抑制劑選自1-[(2_氯苯基)_ 二苯基甲基]-IH-咪唑；2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺；1- [ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-[(2-氟苯基)二苯基甲基]-1Η-吡唑；1-[(4_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑； 1_[ (2-氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；以及1-[ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-四唑。31.實施方案28的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)_ 二苯基甲基]-IH-咪唑。32.實施方案28的方法，其中所述小分子抑制劑為2，2-雙(4_氟苯基)_2_苯基
乙酰胺。33.實施方案28的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑。34.實施方案27的方法，進一步包括向受試者聯(lián)合給藥治療有效量的抗炎劑、抗骨丟失劑、免疫抑制劑，或者化療劑。35. 一種預防或治療易患或已患炎性疾病或自身免疫疾病的受試者中特征在于巨細胞形成的炎性疾病或自身免疫疾病的方法，所述方法包括向受試者給藥治療有效量的中電導鈣激活鉀(SK4)通道抑制劑以抑制巨細胞形成的步驟，其中受試者中所述炎性疾病或自身免疫疾病得到預防或治療。36.實施方案35的方法，其中所述SK4通道抑制劑選自抑制性核酸、單克隆抗體和小分子抑制劑。37.實施方案36的方法，其中所述單克隆抗體識別SK4通道的孔道區(qū)或小分子結 合區(qū)ο38.實施方案36的方法，其中所述小分子抑制劑選自1_[ (2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑；2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺；1- [ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-[(2-氟苯基)二苯基甲基]-1Η-吡唑；1-[(4_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑； 1_[ (2-氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；以及1-[ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-四唑。39.實施方案36的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)_ 二苯基甲基]-IH-咪唑。40.實施方案36的方法，其中所述小分子抑制劑為2，2-雙(4_氟苯基)_2_苯基
乙酰胺。41.實施方案36的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑。42.實施方案35的方法，進一步包括向受試者聯(lián)合給藥(co-administering)治療有效量的抗炎劑、抗骨丟失劑、免疫抑制劑，或者化療劑。43. 一種預防在有植入物或移植物位于其體內部位的受試者中，植入物或移植物排斥的方法，所述方法包括向受試者給藥治療有效量的中電導鈣激活鉀通道抑制劑以抑制巨細胞在該部位或該部位附近形成的步驟，其中受試者中植入物或移植物的排斥得到預防。44.實施方案43的方法，其中所述SK4通道抑制劑選自抑制性核酸、單克隆抗體和小分子抑制劑。45.實施方案44的方法，其中所述單克隆抗體識別SK4通道的孔道區(qū)或小分子結
合區(qū)ο46.實施方案44的方法，其中所述小分子抑制劑選自1_[ (2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑；2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺；1- [ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-[(2-氟苯基)二苯基甲基]-1Η-吡唑；1-[(4_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑； 1_[ (2-氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；以及1-[ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-四唑。47.實施方案44的方法，其中所述小分子抑制劑為1_[ (2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑。48.實施方案44的方法，其中所述小分子抑制劑為2，2-雙(4_氟苯基)_2_苯基
乙酰胺。49.實施方案44的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑。50.實施方案43的方法，進一步包括向受試者聯(lián)合給藥治療有效量的抗炎劑或免疫抑制劑。51.實施方案43的方法，其中所述移植物為細胞、器官或組織移植物。
52. 一種預防患癌癥的受試者中癌癥轉移的方法，所述方法包括向受試者給藥治療有效量的中電導鈣激活鉀(SK4)通道抑制劑從而抑制轉移癌細胞形成的步驟，其中受試者中癌癥轉移得到預防。
53.實施方案52的方法，其中所述SK4通道抑制劑選自抑制性核酸、單克隆抗體和小分子抑制劑。54.實施方案53的方法，其中所述單克隆抗體識別SK4通道的孔道區(qū)或小分子結
合區(qū)ο55.實施方案53的方法，其中所述小分子抑制劑選自1_[ (2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑；2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺；1- [ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-[(2-氟苯基)二苯基甲基]-1Η-吡唑；1-[(4_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑； 1_[ (2-氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；以及1-[ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-四唑。56.實施方案53的方法，其中所述小分子抑制劑為1_[ (2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑。57.實施方案53的方法，其中所述小分子抑制劑為2，2-雙(4_氟苯基)_2_苯基
乙酰胺。58.實施方案53的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑。59.實施方案52的方法，進一步包括向受試者聯(lián)合給藥治療有效量的抗炎劑、抗骨丟失劑、免疫抑制劑，或者化療劑。60. 一種鑒定抑制細胞-細胞融合的中電導鈣激活鉀(SK4)通道的抑制劑的方法， 所述方法包括以下步驟使細胞群與候選SK4通道抑制劑接觸；和確定是否候選試劑抑制細胞群內的細胞_細胞融合。61.實施方案60的方法，其中所述細胞群包括巨噬細胞，所述SK4通道抑制劑抑制巨噬細胞的細胞-細胞融合。62.實施方案60的方法，其中所述細胞群包括至少兩種細胞類型，其中一種為巨噬細胞。63.組合物，包括有效量的中電導鈣激活鉀(SK4)通道抑制劑；和治療劑，其中所述治療劑選自抗炎劑、抗骨丟失劑、免疫抑制劑和化療劑。64.實施方案63的組合物，其中所述SK4通道抑制劑選自抑制性核酸、單克隆抗體和小分子抑制劑。65.實施方案64的組合物，其中所述單克隆抗體識別SK4通道的孔道區(qū)或小分子
結合區(qū)。66.實施方案64的組合物，其中所述小分子抑制劑選自1-[(2_氯苯基)_ 二苯基甲基]-IH-咪唑；2，2-雙(4-氟苯基)-2_苯基乙酰胺；1-[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-[(2-氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-[(4_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-[(2_氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；以及1-[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-四唑。
67.實施方案64的組合物，其中所述小分子抑制劑為1_[ (2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑。68.實施方案64的組合物，其中所述小分子抑制劑為2，2-雙(4_氟苯基)_2_苯
基乙酰胺。69.實施方案64的組合物，其中所述小分子抑制劑為1_[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑。70.實施方案63的組合物，進 一步包括藥學可接受載體。71. 一種鑒定激活細胞-細胞融合的中電導鈣激活鉀(SK4)通道的激活劑的方法， 所述方法包括以下步驟使細胞群與候選SK4通道激活劑接觸；和確定候選試劑是否激活該細胞群內的細胞_細胞融合。72.實施方案71的方法，其中所述細胞群包括巨噬細胞，所述SK4通道激活劑激活巨噬細胞的細胞-細胞融合。73.實施方案71的方法，其中所述細胞群包括至少兩種細胞類型，其中一種為巨噬細胞。


參考本發(fā)明下文的詳細描述，本發(fā)明將得到更好理解，而且除了上文所述的那些之外的特征、方面和優(yōu)勢將更加顯而易見。所述詳細描述參考以下附圖，其中圖IA顯示新近接種到平板的大鼠肺泡巨噬細胞的照片；圖IB顯示在成融條件 (fusogenic condition)下培養(yǎng)5天后，從融合的大鼠肺泡巨噬細胞形成的多核細胞的照片。圖2顯示，在成融條件下，24小時大鼠肺泡巨噬細胞中SK4通道m(xù)RNA表達上調，其持續(xù)至第5天(χ軸代表在0小時、1小時、24小時或120小時平行測定肺泡巨噬細胞樣本)。 數(shù)據(jù)顯示為3個單個樣本的平均信號(+標準差)，利用Affymetrix Genechip RAT230 Plus Array experiments (Probe ID1368930_at)得至lj。圖3A顯示，在M-CSF和RANKL刺激下，人外周血單核細胞(PBMCs)分化成破骨細胞期間，SK4通道表達上調(χ軸代表在0小時、3天、7天、14天或21天平行測定人PBMC 樣本)。數(shù)據(jù)顯示為4個單個樣本的平均信號(+標準差)，利用Affymetrix Genechip U133 Plus 2 Array chips 得到。圖 3B 顯示利用TaqMan Real-Time RT-PCR進一步證實 Genechip 數(shù)據(jù)(χ軸代表在0小時、3天、7天、14天或21天平行測定人PBMC樣本)。圖 3C顯示與其他細胞相比，SK4/IK在人B細胞、樹突細胞和巨噬細胞中的高mRNA表達。圖3C 的數(shù)據(jù)來自于Affymetrix Genechip RAT230 Plus Array芯片，顯示為細胞樣本的平均信號。細胞采樣和平行測定的次數(shù)在圖3C中標明。圖4A顯示，與純合野生型(WT ； sk4+/+)小鼠相比，SK4通道在M-CSF和RANKL下培養(yǎng)7天，雜合(sk4+勺和純合敲除(sk4+)小鼠的脾細胞產(chǎn)生的破骨細胞樣細胞(即TRAP+) 減少。圖4B顯示與WT小鼠相比，這些細胞的表面積減少。圖5顯示，與WT(sk4v+)小鼠相比(上圖)，SK4通道缺乏不明顯影響來自純合敲除(sk4+)小鼠(下圖)的巨噬細胞的相對比例。FACS圖從左至右顯示不同組合(全部細胞、CDllb/F480、CD11C/F480、CDllC/CDllb)。圖6A顯示，與WT (sk4+/+)小鼠相比，由在成融條件(M-CSF+RANKL)下培養(yǎng)7天的純合敲除(sk4+)小鼠骨髓來源的巨噬細胞產(chǎn)生的破骨細胞樣細胞(即TRAP+)減少。圖6B 顯示與WT小鼠相比，這些細胞的總表面積減少。圖7A-B 顯示，兩種不同的SK4通道抑制劑(ICA-17043，圖7A ；和TRAM-34， 圖7B)以劑量依賴性方式，阻止WT小鼠骨髓來源的巨噬細胞中破骨細胞形成 (osteoclastogenesis)。評估了 TRAP+破骨細胞樣細胞的表面積(P0C是相對于無化合物對照的百分比)。數(shù)據(jù)來自于5次平行測定，誤差線代表標準差。圖7C顯示ICA-17043治療的樣本的TRAP-染色圖。圖8A-B顯示，在抗膠原抗體誘導的關節(jié)炎模型中，與WT小鼠(M和F)相比，純合敲除(sk4+)小鼠(雄性(M)和雌性(F))的關節(jié)炎評分明顯降低。顯示了兩次單獨實驗的數(shù)據(jù)。各研究組中動物的數(shù)量在圖8A-B中標明，誤差線代表平均值的標準差。圖9A顯示，在抗膠原抗體誘導的關節(jié)炎模型中(圖8，實驗2)，與WT小鼠相比，純合敲除(sk4+)小鼠(雌性(F))的骨損傷、軟骨損傷、血管翳(parmus)和爪關節(jié)炎癥的組織學評分明顯降低。圖9B顯示，在抗膠原抗體誘導的關節(jié)炎模型中，與WT小鼠相比，純合敲除(sk4+)小鼠(雄性(M))的骨損傷評分明顯降低。圖10A-B顯示，兩種不同的SK4通道抑制劑(ICA-17043和TRAM-34，分別為圖IOA 和圖10B)以劑量依賴性方式，預防在M-CSF+RANKL刺激下人PBMCs中的破骨細胞形成。評估了 TRAP+破骨細胞樣細胞的表面積(P0C是相對于無化合物對照的百分比)。數(shù)據(jù)來自于 4次平行測定，誤差線代表標準差。圖IlA顯示，SK4-缺乏的破骨細胞在吸收骨礦物質方面有缺陷。源自sk4v+和 sk4+小鼠的骨髓來源巨噬細胞在M-CSF(20ng/ml)和RANKL(100ng/ml)存在下，在涂有由磷酸鈣晶體構成的人工骨的BiOCoatTM0SteologiCTM載玻片上培養(yǎng)20天。通過記錄每孔溶解的磷酸鈣表面積估計破骨細胞活性。結果代表3次獨立實驗(η = 3 ；SD)。圖IlB顯示 sk4+A和sk4+小鼠的骨吸收陷窩(resorption pits)的典型圖像。圖12顯示，SK4-缺乏的小鼠的小梁骨密度(trabecular bone density)增加。 雄性和雌性sk4+小鼠股骨遠端骨的小梁骨密度比sk4v+小鼠更高。8周齡雄性和雌性 sk4+和sk4+/+小鼠的股骨遠端利用pQCT掃描(η = 8 ；SD)。圖13顯示小鼠頭部的背外側解剖圖。箭頭代表在體內的破骨細胞形成試驗中，顱蓋以上局部皮下注射脂多糖(lipolysaccharide，LPS)的部位。注射LPS引起局部、迅速、 有效的炎癥應答，導致吸收骨質的破骨細胞形成。圖14顯示，SK4缺乏顯著阻止應答在顱蓋之上局部皮下注射LPS的骨吸收。向8 周齡sk4v+和sk4+雄性和雌性小鼠右顱蓋的骨膜中注射2 μ 1體積25 μ g LPS (見圖13)。 頭部經(jīng)顯微CT掃描。記錄SK4-缺乏的小鼠對LPS應答的缺乏(η = 5)。圖15A-C顯示，sk4v+相對于SK4-缺乏(sk4+)的顱蓋3D參數(shù)的體內反應，以應答在顱蓋之上局部皮下注射LPS。顱蓋骨表面密度(骨表面積相對于骨體積，圖15A)；骨厚度(圖15B)；以及骨密度(圖15C)。SK4-缺乏的小鼠在注射LPS 5天后，保持較高的顱蓋骨厚度和密度，以及較少的吸收的骨表面。
發(fā)明詳述 本發(fā)明涉及在細胞-細胞融合期間，尤其是在涉及巨噬細胞的同型和異型融合期間，增加的中電導鈣激活鉀(SK4或KCNN4或IK)通道表達的鑒定。本發(fā)明包括利用SK4抑制劑或激活劑調節(jié)細胞_細胞融合。即，本發(fā)明提供組合物和方法，通過調節(jié)SK4通道表達、 活性或功能，從而調控細胞-細胞融合。因此，SK4通道表達、活性或功能可能減少(即抑制)或增加，以分別降低(即抑制)或增加細胞-細胞融合。特別感興趣的是調節(jié)包括巨噬細胞的細胞-細胞融合。例如，細胞(例如巨噬細胞)的融合可導致多核破骨細胞形成，其與骨發(fā)育、骨再塑和骨修復有關。功能失調的破骨細胞活性可能是骨疾病，例如骨質疏松癥和類類風濕性關節(jié)炎的成因。同樣，巨噬細胞的融合可導致多核巨細胞形成，用于應答異物例如病原體或植入物。本發(fā)明因此集中研究SK4通道在巨噬細胞融合中的作用。在一些實施方案中，本發(fā)明提供抑制細胞-細胞融合的方法，更具體地為巨噬細胞的細胞-細胞融合。在此類實施方案中，SK4通道表達、活性或功能，以及該細胞-細胞融合，可例如通過使所研究細胞與有效量的SK4通道抑制劑接觸而減少(即抑制)。通過這種方式，與適當對照相比，SK4通道表達、活性或功能在那些所研究細胞中可得到統(tǒng)計學顯著的降低，包括但不限于 5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、 60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 100%。在其他實施方案中，可能需要細胞-細胞融合增加，例如巨噬細胞融合增加。因此，例如巨噬細胞融合增加和多核破骨細胞形成可能是對抗異常增加的骨密度或者治療慢性感染或骨硬化癥所需的。在此類實施方案中，巨噬細胞的SK4通道表達、活性或功能可增力口，例如通過使巨噬細胞與有效量的SK4通道表達、活性或功能的激活劑接觸。當所需結果是細胞_細胞融合增加時，與適當對照相比，SK4通道表達、活性或功能在那些所需細胞中可得到統(tǒng)計學顯著量的增加，包括但不限于5% ,10% ,15%,20%,25%,30%,35%,40%, 45 %,50 %,55 %,60 %,65 %,70 %,75 %,80 %,85 %,90 %,95 %,100 %,110 %,120 130%、140%、150% 或更高。本發(fā)明的組合物和方法通過調控破骨細胞和/或破骨細胞前體的SK通道表達、活性或功能，從而用于調控破骨細胞分化和功能。破骨細胞是同型、特化、多核的源自巨噬細胞的細胞，通過除去骨組織的礦化基質而溶解骨組織。通過調控破骨細胞前體例如巨噬細胞的破骨細胞形成，可能改變破骨細胞形成，并因此改變破骨細胞數(shù)量和/或破骨細胞表面積，從而改變總體破骨細胞功能。破骨細胞功能可經(jīng)調節(jié)而改變，例如這些細胞的骨礦物質吸收活性。因此，在一些實施方案中，本發(fā)明提供調控破骨細胞分化和功能的方法，其中所述方法包括使破骨細胞和/或破骨細胞前體與有效量的SK4通道抑制劑或激活劑接觸。在一些實施方案中，利用SK通道抑制劑來抑制破骨細胞分化和/或功能。因此，當所需結果是降低破骨細胞分化和/或功能時，可以抑制破骨細胞前體例如巨噬細胞的SK4 通道表達、活性或功能，以減少巨噬細胞融合，從而減少破骨細胞形成(包括減少破骨細胞數(shù)量和/或破骨細胞表面積)，這導致破骨細胞功能的總體降低?？梢种破乒羌毎腟K4通道表達、活性或功能，從而降低破骨細胞功能，例如包括降低破骨細胞骨礦物質吸收活性。 與適當對照相比，SK4通道表達、活性或功能在破骨細胞和/或破骨細胞前體中可得到統(tǒng)計學顯著量的降低，包括但不限于 5% ,10% ,15%,20%,25%,30%,35%,40%,45%,50%,55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 100%。 在本發(fā)明其他實施方案中，本方法利用SK通道激活劑，提供增加的破骨細胞分化和/或功能。這樣，例如破骨細胞分化和/或功能增加可能是對抗異常增加的骨密度，或者治療慢性感染或骨硬化癥所需的。因此，當所需結果是破骨細胞分化和/或功能增加時， 可增加破骨細胞前體例如巨噬細胞的SK4通道表達、活性或功能，以增加巨噬細胞融合，從而增加破骨細胞形成(包括增加破骨細胞數(shù)量和/或破骨細胞表面積)，這導致破骨細胞功能的總體增加，例如包括破骨細胞骨礦物質吸收活性的增加。可增加破骨細胞的SK4通道表達、活性或功能，從而增加破骨細胞功能，例如增加破骨細胞骨礦物質吸收活性。與適當對照相比，SK4通道表達、活性或功能在破骨細胞和/或破骨細胞前體中可得到統(tǒng)計學顯著量的增加，包括但不限于 5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、 60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、110%、120%、130%、140%、150%或更高。抑制細胞-細胞融合不希望束縛于任何具體理論，但SK4通道抑制劑可調節(jié)SK4通道表達，SK4通道活性，或者正活躍融合的(actively fusing)細胞和/或新融合的多核細胞例如破骨細胞、巨細胞或轉移癌細胞的上游或下游SK4通道效應物。因此，描述了以SK4通道抑制劑來抑制細胞_細胞融合的組合物和方法，更具體地抑制巨噬細胞融合，包括導致破骨細胞、巨細胞和轉移癌細胞形成的同型和異型融合。SK4通道抑制劑因此可在體內或體外提供以抑制細胞_細胞融合。當在體外提供時，所述SK4通道抑制劑可用于抑制細胞-細胞融合或篩選調節(jié)細胞_細胞融合的試劑。當在體內提供時，所述SK4通道抑制劑可用于預防和/或治療涉及源自巨噬細胞的多核細胞， 尤其是破骨細胞、巨細胞或轉移癌細胞的多種疾病或障礙。特別地，所述SK4通道抑制劑可用于預防或減少骨吸收/骨丟失，預防或治療自身免疫或者炎性疾病或障礙，預防植入物或移植物排斥，或者預防癌癥轉移。如本文所用的,“中電導鈣激活鉀通道(intermediate-conductancecalcium-acti vated potassium channe) ”，“SK4通道(SK4 channel) ”指的是不依賴電壓的、內向整流的鉀通道,其電導小于IOOpS或在約12pS至約50pS之間(參見例如Christopherson (1991) J. Membr. Biol. 119 :75_83 ；禾口 Tharp &Bowles (2009)Cardiovasc. Hematological Agents Med. Chem. 7 :1_11 ；在此將每一篇以其整體引入作為參考)，但通常在約30pS至約40pS之間。SK4通道受亞微摩爾(submicromolar)的胞內鈣濃度(約100nmol/L至約300nmol/L) 激活，受北非蝎毒素(charybdotoxin)和三芳基甲烷例如克霉唑，TRAM-34和ICA-15451阻斷，但不受iberiotoxin、蜂毒明肽(apamin)或酮康唑阻斷。SK4通道在本領域以不同方式被理解為中電導鈣激活鉀通道蛋白4、Gardos, flK、hIK、mIK、IK、IKl、IKCal、IKCAl、ImK、 KCa4、KCA4、KCa3. 1、KCNN4 或 SK4 通道。參見例如 Cho 等，(2008) Expert Rev. Mol. Diagn. 8 179-187 ；和 Reich 等，(2005)Eur. J. Immunol. 35 :1027_1036 ；在此將每一篇以其整體引入作為參考。因此，為了本發(fā)明的目的，術語“SK4通道”預期包括這些通道所理解的各種名稱,包括KCNN4和SK4通道。對于許多物種例如小鼠、大鼠和人類來說，SK4通道單體的核酸和氨基酸序列是已知的。參見例如 Joiner 等，(1997)Proc. Natl. Acad. Sci. USA94 11013-11018 ；Logsdon 等，(1997) J. Biol. Chem. 272 32723-32726 ；Neylon 等，(1999) Circ. Res. 85 E33-E43 ；Vandorpe 等，(1998) J. Biol. Chem. 273 :21542_21553 ；Warth 等，(1999)Pflugers Arch. 438 :437_444 ；以及美國專利6，692，937和6，894，147 ；在此將每一篇以其整體引入作為參考；還參見SEQID NOS :1-6。SK4通道單體有6個跨膜片段(S1-S6)，在S5和S6之間有一個孔基序(pore motif)，其包含鉀選擇性氨基酸序列GYG。SK4通道單體在孔基序附近還有N-連接糖基化位點。SK4通道的N端包含內質網(wǎng)滯留信號(endoplasmic retention signal)(上述 Tharp & Bowles(2009))，C端包含感受細胞內鈣的鈣調蛋白結合區(qū)(Fanger等，(1999) J. Biol. Chem. 274 :5746_5754 ；和 Joiner 等，(2001) J. Biol. Chem. 276 :37980_37985 ；在此將每一篇以其整體引入作為參考)。C端還包含蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)和蛋白激酶G(PKG)磷酸化的許多共有序列(上述Joiner等，(1997))，以及酪氨酸磷酸化的共有序列(RLLQEAWMY ;SEQ ID NO :7;上述 Tharp & Bowles (2009))。SK4 通道單體形成同源四聚體，以調節(jié)鉀離子外流。SK4通道在許多類型細胞中表達，包括T細胞、B細胞、巨噬細胞、小膠質細胞、紅細胞、平滑肌細胞、內皮細胞和上皮細胞，但該通道表達時機和作用在這些細胞中可能不同。 然而，SK4通道在正在融合或最近融合的細胞中的表達和作用以前并未見報道。

如本文所用的，“巨噬細胞(macrophage) ”指的是CD68+(人類)或F4/80+(小鼠) 單核白細胞，在組織穩(wěn)態(tài)以及先天免疫和獲得性免疫中發(fā)揮作用。巨噬細胞還可為CDllb+。 從形態(tài)學上，它們表現(xiàn)為大細胞( 25 μ m至50 μ m)，有圓形的核，包含一至兩個核仁，聚集染色質，有液泡和許多嗜苯胺藍顆粒(azurophilic granules)的豐富的細胞質。巨噬細胞位于身體各處組織中，源自循環(huán)的單核細胞(即血源性單核白細胞)。它們有兩個主要作用吞噬作用和抗原呈遞。作為吞噬細胞，巨噬細胞吞噬然后消化細胞碎片和病原體(例如細菌、真菌、原生動物、病毒和酵母)，刺激淋巴細胞和其他免疫細胞對這些病原體產(chǎn)生應答。作為抗原呈遞細胞，巨噬細胞處理來自吞噬的病原體的抗原，并將其呈遞到淋巴細胞和其他免疫細胞表面。巨噬細胞還分泌大量單核因子，包括酶、補體蛋白和調節(jié)因子，例如白細胞介素-ι和腫瘤壞死因子-α。另外，巨噬細胞有淋巴因子受體，使它們活化成攻擊性的病原體-和腫瘤-破壞細胞。一些巨噬細胞集中(即固定)在特定器官或組織，尤其是可能出現(xiàn)病原體侵襲或塵埃聚集的區(qū)域。固定的巨噬細胞的功能是不同的，被認為是受微環(huán)境刺激素例如細胞因子和病原性產(chǎn)物的影響。固定的巨噬細胞的實例列于表1。表1固定的巨噬細胞命名
權利要求
1.一種調控表達中電導鈣激活鉀(SK4)通道的細胞的細胞融合的方法，所述方法包括使細胞與有效量的SK4通道抑制劑或激活劑接觸的步驟，其中細胞融合受到調控。
2.權利要求1的方法，其中細胞融合受到抑制。
3.權利要求1的方法，其中所述細胞為造血細胞。
4.權利要求1的方法，其中所述細胞選自巨噬細胞、樹突細胞和B細胞。
5.權利要求1的方法，其中所述細胞為巨噬細胞。
6.權利要求1的方法，其中所述細胞融合為同型或異型。
7.權利要求1的方法，其中所述SK4通道抑制劑選自抑制性核酸、單克隆抗體和小分子抑制劑。
8.權利要求7的方法，其中所述抑制性核酸靶向包含SEQID N0:2所示序列的SK4通道的表達。
9.權利要求7的方法，其中所述單克隆抗體識別SK4通道的孔道區(qū)或小分子結合區(qū)。
10.權利要求7的方法，其中所述小分子抑制劑選自氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑；2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺；1- [ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-Κ2-氟苯基)二苯基甲基]-1Η-吡唑；1-[(4_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑； 1_[ (2-氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；以及1-[ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-四唑。
11.權利要求7的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑。
12.權利要求7的方法，其中所述小分子抑制劑為2，2_雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺。
13.權利要求7的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑。
14.權利要求7的方法，進一步包括測定細胞中SK4通道表達或活性的步驟。
15.權利要求1的方法，其中所述方法為體內方法，其中所述的SK4通道抑制劑的有效量為向已有或者懷疑有異常細胞融合的受試者提供的治療有效量。
16.權利要求15的方法，進一步包括向受試者聯(lián)合提供治療有效量的抗炎劑、抗骨丟失劑、免疫抑制劑，或者化療劑。
17.—種調控破骨細胞分化和功能的方法，所述方法包括使破骨細胞或破骨細胞前體與有效量的中電導鈣激活鉀(SK4)通道抑制劑或激活劑接觸的步驟。
18.權利要求17的方法，其中破骨細胞形成受到抑制。
19.權利要求17的方法，其中所述SK4通道抑制劑選自抑制性核酸、單克隆抗體和小分子抑制劑。
20.權利要求19的方法，其中所述單克隆抗體識別SK4通道的孔道區(qū)或小分子結合區(qū)。
21.權利要求19的方法，其中所述小分子抑制劑選自1-[(2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑；2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺；1- [ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-K2-氟苯基)二苯基甲基]-1Η-吡唑；1-[(4_氯苯基)二苯基甲基]-1Η-吡唑； 1_[ (2-氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；以及1-[ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-四唑。
22.權利要求19的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑。
23.權利要求19的方法，其中所述小分子抑制劑為2，2_雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺。
24.權利要求19的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑。
25.權利要求17的方法，其中所述方法為體內方法，其中所述的SK4通道抑制劑的有效量為向已有或者懷疑有異常破骨細胞分化或功能的受試者提供的治療有效量。
26.權利要求25的方法，進一步包括向受試者聯(lián)合給藥治療有效量的抗炎劑、抗骨丟失劑、免疫抑制劑，或者化療劑。
27.一種預防或治療易患或已患骨丟失的受試者中骨丟失的方法，所述方法包括向受試者給藥治療有效量的中電導鈣激活鉀(SK4)通道抑制劑以抑制破骨細胞形成的步驟，其中受試者中骨丟失得到預防或減少。
28.權利要求27的方法，其中所述SK4通道抑制劑選自抑制性核酸、單克隆抗體和小分子抑制劑。
29.權利要求觀的方法，其中所述單克隆抗體識別SK4通道的孔道區(qū)或小分子結合區(qū)。
30.權利要求觀的方法，其中所述小分子抑制劑選自1-[(2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑；2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺；1- [ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-K2-氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-[(4_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑； 1_[ (2-氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；以及1-[ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-四唑。
31.權利要求觀的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑。
32.權利要求觀的方法，其中所述小分子抑制劑為2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺。
33.權利要求觀的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑。
34.權利要求27的方法，進一步包括向受試者聯(lián)合給藥治療有效量的抗炎劑、抗骨丟失劑、免疫抑制劑，或者化療劑。
35.一種預防或治療易患或已患炎性疾病或自身免疫疾病的受試者中特征在于巨細胞形成的炎性疾病或自身免疫疾病的方法，所述方法包括向受試者給藥治療有效量的中電導鈣激活鉀(SK4)通道抑制劑以抑制巨細胞形成的步驟，其中受試者中所述炎性疾病或自身免疫疾病得到預防或治療。
36.權利要求35的方法，其中所述SK4通道抑制劑選自抑制性核酸、單克隆抗體和小分子抑制劑。
37.權利要求36的方法，其中所述單克隆抗體識別SK4通道的孔道區(qū)或小分子結合區(qū)。
38.權利要求36的方法，其中所述小分子抑制劑選自1-[(2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑；2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺；1- [ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-[(2_氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-[(4_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑； 1_[ (2-氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；以及1-[ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-四唑。
39.權利要求36的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑。
40.權利要求36的方法，其中所述小分子抑制劑為2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺。
41.權利要求36的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑。
42.權利要求35的方法，進一步包括向受試者聯(lián)合給藥治療有效量的抗炎劑、抗骨丟失劑、免疫抑制劑，或者化療劑。
43.一種預防在有植入物或移植物位于其體內部位的受試者中植入物或移植物排斥的方法，所述方法包括向受試者給藥治療有效量的中電導鈣激活鉀通道抑制劑以抑制巨細胞在該部位或該部位附近形成的步驟，其中受試者中植入物或移植物的排斥得到預防。
44.權利要求43的方法，其中所述SK4通道抑制劑選自抑制性核酸、單克隆抗體和小分子抑制劑。
45.權利要求44的方法，其中所述單克隆抗體識別SK4通道的孔道區(qū)或小分子結合區(qū)。
46.權利要求44的方法，其中所述小分子抑制劑選自氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑；2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺；1- [ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-Κ2-氟苯基)二苯基甲基]-1Η-吡唑；1-[(4_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑； 1_[ (2-氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；以及1-[ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-四唑。
47.權利要求44的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑。
48.權利要求44的方法，其中所述小分子抑制劑為2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺。
49.權利要求44的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑。
50.權利要求43的方法，進一步包括向受試者聯(lián)合給藥治療有效量的抗炎劑或免疫抑制劑。
51.權利要求43的方法，其中所述移植物為細胞、器官或組織移植物。
52.一種預防患癌癥受試者中癌癥轉移的方法，所述方法包括向受試者給藥治療有效量的中電導鈣激活鉀(SK4)通道抑制劑以抑制轉移性癌細胞形成的步驟，其中所述受試者中癌癥轉移得到預防。
53.權利要求52的方法，其中所述SK4通道抑制劑選自抑制性核酸、單克隆抗體和小分子抑制劑。
54.權利要求53的方法，其中所述單克隆抗體識別SK4通道的孔道區(qū)或小分子結合區(qū)。
55.權利要求53的方法，其中所述小分子抑制劑選自1-[(2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑；2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺；1- [ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-K2-氟苯基)二苯基甲基]-1Η-吡唑；1-[(4_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑； 1_[ (2-氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；以及1-[ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-四唑。
56.權利要求53的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑。
57.權利要求53的方法，其中所述小分子抑制劑為2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺。
58.權利要求53的方法，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑。
59.權利要求52的方法，進一步包括向受試者聯(lián)合給藥治療有效量的抗炎劑、抗骨丟失劑、免疫抑制劑，或者化療劑。
60.一種鑒定抑制細胞-細胞融合的中電導鈣激活鉀(SK4)通道的抑制劑的方法，所述方法包括以下步驟使細胞群與候選SK4通道抑制劑接觸；和確定所述候選試劑是否抑制該細胞群內的細胞-細胞融合。
61.權利要求60的方法，其中所述細胞群包括巨噬細胞，所述SK4通道抑制劑抑制巨噬細胞的細胞-細胞融合。
62.權利要求60的方法，其中所述細胞群包括至少兩種細胞類型，其中一種為巨噬細胞。
63.組合物，包括有效量的中電導鈣激活鉀(SK4)通道抑制劑；和治療劑，其中所述治療劑選自抗炎劑、抗骨丟失劑、免疫抑制劑和化療劑。
64.權利要求63的組合物，其中所述SK4通道抑制劑選自抑制性核酸、單克隆抗體和小分子抑制劑。
65.權利要求64的組合物，其中所述單克隆抗體識別SK4通道的孔道區(qū)或小分子結合區(qū)。
66.權利要求64的組合物，其中所述小分子抑制劑選自1-[(2_氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑；2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺；1- [ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-K2-氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；1-[(4_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑； 1_[ (2-氟苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑；以及1-[ (2-氯苯基)二苯基甲基]-IH-四唑。
67.權利要求64的組合物，其中所述小分子抑制劑為1_[(2-氯苯基)-二苯基甲基]-IH-咪唑。
68.權利要求64的組合物，其中所述小分子抑制劑為2，2-雙(4-氟苯基)-2-苯基乙酰胺。
69.權利要求64的組合物，其中所述小分子抑制劑為1-[(2_氯苯基)二苯基甲基]-IH-吡唑。
70.權利要求63的組合物，進一步包括藥學可接受載體。
全文摘要
本發(fā)明提供通過利用調節(jié)中電導鈣激活鉀(SK4)通道表達、活性或功能的試劑用于調控細胞-細胞融合的組合物和方法。在一些實施方案中，本發(fā)明所述的組合物和方法抑制多核破骨細胞形成和細胞-細胞融合，尤其是涉及巨噬細胞的細胞融合。在此類實施方案中，所述組合物可包括SK4通道的抑制性核酸、單克隆抗體或者小分子抑制劑，可用于預防和/或治療多種疾病或障礙，包括骨丟失、自身免疫和炎性疾病或障礙、植入物和移植排斥，以及癌癥轉移。在其他實施方案中，本發(fā)明所述的組合物和方法激活細胞-細胞融合。本發(fā)明還提供篩選SK4通道調節(jié)劑(抑制劑或激活劑)的方法，所述SK4通道調節(jié)劑調控細胞-細胞融合(特別是巨噬細胞的細胞融合)。
文檔編號C07K14/705GK102272152SQ200980154131
公開日2011年12月7日 申請日期2009年11月10日 優(yōu)先權日2008年11月10日
發(fā)明者李軍, 阿格尼斯.維格納里 申請人:耶魯大學, 貝林格爾.英格海姆國際有限公司