專利名稱：一種重金屬銅人工抗原的合成方法
技術領域：
一種重金屬銅人工抗原的合成方法，屬于生物化工技術領域。
背景技術：
隨著經(jīng)濟的迅猛發(fā)展重金屬污染在我國越來越嚴重。雖然，用植物修復重金屬污染土壤是當前國內(nèi)外學術界的研究熱點，但能有效減少環(huán)境中重金屬含量的技術還停留在試驗階段，為了減少重金屬從食物鏈進入人體，方便、簡單、可靠地檢測環(huán)境中重金屬含量的技術是關鍵?，F(xiàn)在常用的重金屬檢測技術，如原子吸收光譜法，電感耦合等離子體發(fā)射光譜法和動態(tài)磷光分析等技術，都需要昂貴的檢測儀器和復雜的前處理，如高溫、高壓、強酸消化等。并且由于儀器測定條件變化與檢測結(jié)果密切相關，需要非常專業(yè)的分析測試人員操作，因此，只有研究機構(gòu)的中心實驗室才具備測試條件，樣品的檢測周期相對較長，檢測過程復雜，檢測成本較高，不適應我國食品抽檢實踐中快速和簡便的需要。當前，免疫檢測技術已被廣泛應用于毒素、殺蟲劑、炸藥等的環(huán)境污染和危險物的檢測。與其他檢測系統(tǒng)相比，免疫檢測方法具有快速、廉價、簡便、靈敏和特異的優(yōu)點，可便攜進行現(xiàn)場檢測。近年來， 國內(nèi)外已經(jīng)開展了對重金屬免疫分析方法的研究，但國內(nèi)外尚沒有針對銅酶聯(lián)免疫檢測的報道，為了彌補這一空白，有必要制備重金屬銅人工抗原。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種重金屬銅人工抗原的合成方法。所制備的產(chǎn)品用于重金屬的免疫分析方法研究。為今后人們的研究提供了必需的人工抗原。本發(fā)明的技術方案一種重金屬銅人工抗原的合成方法，以二乙烯三胺五乙酸 DTPA為螯合劑，將銅離子與載體蛋白牛血清白蛋白BSA偶聯(lián)。工藝步驟為(1)重金屬銅人工抗原的合成稱取0. 147g的氯化銅溶于ImL濃硝酸中制備成銅離子溶液。稱取6mg的DTPA至1. 5mL離心管中，先加入10 μ L的10mol/L的Κ0Η，再加入 990 μ L的0. lmol/L，pH值為9. 7的羥乙基哌嗪乙硫磺酸HEPES溶液，溶解后即制備成DTPA 螯合劑溶液。稱取0. 25g BSA 溶于 5mL、0. lmol/L、pH 值為 7. 4 的 HEPES 中制備成 50mg/mL 的 BSA溶液。先往反應器中加入520 μ L的DTPA螯合劑溶液，再加入12 μ L的銅離子溶液。在室溫下、在磁力攪拌器上反應Ih以上，形成半抗原反應液。往半抗原反應液中幾乎同時加入500 μ L的BSA溶液和200 μ L的0. lmol/L、pH值為9. 7的HEPESdjff pH值至9. 0。反應過夜后，用Cenricon-30超濾離心管對蛋白質(zhì)復合物進行分離純化。即得重金屬銅人工抗原。(2)重金屬銅人工抗原的鑒定重金屬銅人工抗原采用凝膠電泳法鑒定其偶聯(lián)結(jié)
3果，利用標準蛋白得到標準曲線，計算其偶聯(lián)比。偶聯(lián)物蛋白濃度測定配制濃度為0，40，60，80，100，120，160, 200 μ g -πιΓ1的牛血清白蛋白溶液1. 5mL，加入5mL考馬斯亮藍染色液，立即混勻，30°C水浴溫熱5分鐘，每個濃度做平行樣.在595nm處測吸光值，繪制牛血清白蛋白濃度與吸光值的關系曲線。將抗原溶液按一定比例稀釋，在595nm處測定抗原溶液的吸光值，從曲線上得到抗原溶液的相應的蛋白濃度。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明成功合成了重金屬銅人工抗原，合成步驟簡潔，有效， 可完全用于免疫分析中，為以后人們的研究提供了方便的途徑，可以滿足國內(nèi)對重金屬研究的需要。


圖1重金屬銅人工抗原制備前后的紫外掃描圖。
具體實施例方式實施例1(1)重金屬銅人工抗原的合成稱取0. 147g的氯化銅溶于ImL濃硝酸中制備成銅離子溶液。稱取6mg的DTPA至1. 5mL離心管中，先加入10 μ L的10mol/L的KOH溶液，再加入990 μ L的0. lmol/L、pH值為9. 7的羥乙基哌嗪乙硫磺酸HEPES溶液，溶解后即制備成DTPA螯合劑溶液。稱取0. 25g BSA溶于5mL、0. lmol/L、pH值為7. 4的HEPES中制備成 50mg/mL的BSA溶液。先往反應器中加入520 μ L的DTPA螯合劑溶液，再加入12 μ L的銅離子溶液。在室溫下、在磁力攪拌器上反應Ih以上，形成半抗原反應液。往半抗原反應液中幾乎同時加入500 μ L的BSA溶液和200 μ L的0. lmol/L,pH值為9. 7的HEPES,調(diào)節(jié)pH值至9.0。反應過夜后，用Centricon-30超濾離心管對蛋白質(zhì)復合物進行分離純化。即得重金屬銅人工抗原。(2)重金屬銅人工抗原的鑒定人工抗原采用凝膠電泳法鑒定其偶聯(lián)結(jié)果，利用標準蛋白得到標準曲線，計算其偶聯(lián)比。
權(quán)利要求
1. 一種重金屬銅人工抗原的合成方法，其特征在于以二乙烯三胺五乙酸DTPA為螯合劑，將銅離子與載體蛋白牛血清白蛋白BSA偶聯(lián)；(1)重金屬銅人工抗原的合成稱取0. 147g的氯化銅溶于ImL濃硝酸中制備成銅離子溶液；稱取6mg的DTPA至1. 5mL離心管中，先加入10 μ L的10mol/L的KOH溶液，再加入 990 μ L的ρ H 9. 7,0. lmol/L的羥乙基哌嗪乙硫磺酸HEPES溶液，溶解后即制備成DTPA螯合劑溶液；稱取0. 25g牛血清白蛋白BSA溶于5mL、0. lmol/L、pH值為7. 4的HEPES溶液中制備成 50mg/mL 的 BSA 溶液；先往反應器中加入520 μ L的DTPA螯合劑溶液，再加入12 μ L的銅離子溶液，在室溫下在磁力攪拌器上反應Ih以上，形成半抗原反應液；往半抗原反應液中幾乎同時加入500 μ L的BSA溶液和200 μ L的0. lmol/L、pH值為 9. 7的HEPES溶液，調(diào)節(jié)pH值至9. 0 ；反應過夜后用Centricon-30超濾離心管對蛋白質(zhì)復合物進行分離純化，即得重金屬銅人工抗原；(2)重金屬銅人工抗原的鑒定重金屬銅人工抗原采用凝膠電泳法鑒定其偶聯(lián)結(jié)果， 利用標準蛋白得到標準曲線，計算其偶聯(lián)比。
全文摘要
一種重金屬銅人工抗原的合成方法，屬于生物化工技術領域。本發(fā)明以二乙烯三胺五乙酸(DTPA)為螯合劑，將銅離子與載體蛋白牛血清白蛋白BSA偶聯(lián)，成功合成了重金屬銅的人工抗原，所制備的產(chǎn)品用于重金屬的免疫分析方法研究。本發(fā)明合成步驟簡潔，有效，可完全用于免疫分析中，為以后人們的研究提供了方便的途徑，可以滿足國內(nèi)對重金屬免疫分析方法研究的需要。
文檔編號C07K14/765GK102219852SQ20101020828
公開日2011年10月19日 申請日期2010年6月18日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月18日
發(fā)明者嚴文靜, 勇倩倩, 胥傳來, 鄧小芳, 陳蓮君, 馬文蔚 申請人:江南大學