專利名稱：Il-17結(jié)合化合物及其醫(yī)藥用途的制作方法
IL-17結(jié)合化合物及其醫(yī)藥用途本發(fā)明涉及新的IL-17抑制多肽、相應(yīng)的融合蛋白、組合物及其醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
CD4+T細(xì)胞通過協(xié)助適應(yīng)性或先天性免疫系統(tǒng)的其它細(xì)胞而在指導(dǎo)免疫應(yīng)答中起重要作用。在早先研究中，鑒定了兩類⑶4+T細(xì)胞(Thl和Th2)。新近鑒定了⑶4+T細(xì)胞的新亞組，即Thl7譜系。Thl7細(xì)胞似乎進(jìn)化為適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的分支，專門用于針對Thl或Th2免疫未完全涵蓋的胞外細(xì)菌以及一些真菌和微生物的增強(qiáng)的宿主保護(hù)。Thl7細(xì)胞是在發(fā)現(xiàn)新的細(xì)胞因子家族即IL-17家族(目前已知其包括6個成員(IL-17A-F))的背景下而鑒定的。IL-17(先前稱為CTLA-8)主要由Thl7細(xì)胞表達(dá)并且將其命名為IL-17A以表明它是該細(xì)胞因子家族的創(chuàng)建成員。IL-17成員與其它目前已知的哺乳動物蛋白無序列同源性并且因此構(gòu)成不同的細(xì)胞因子家族。從IL-17F晶體結(jié)構(gòu)推導(dǎo) 出的IL-17家族成員的結(jié)構(gòu)特征表明，與許多細(xì)胞因子類似，每一家族成員可能作為同二聚體產(chǎn)生，但結(jié)構(gòu)相似性暗示可存在異二聚體。最近鑒定了由活化的人⑶4+T細(xì)胞表達(dá)的IL-17A和IL-17F的異二聚體，其通過IL-17RA/IL-17RC復(fù)合物進(jìn)行信號轉(zhuǎn)導(dǎo)(Wright J. F等· (2008) J. of Immunol.，181，第 2799-2805 頁)。對在慢性炎性過程中作為中心介質(zhì)(mediator)以及在若干類型的自身免疫病況(先前認(rèn)為這些是Thl介導(dǎo)的)中作為主要病原性效應(yīng)物的Thl7細(xì)胞的鑒定預(yù)示將出現(xiàn)新的治療方法(Weaver T 等.(2008) Annu. Rev. Immunol.，25，第 821-852 頁)。事實(shí)上，促炎細(xì)胞因子IL-17主要由Thl7細(xì)胞表達(dá)并且在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)患者的滑液中以升高的水平存在，并且已顯示參與早期RA的發(fā)展。此外，IL-17是TNF-α和IL-I的強(qiáng)有力誘導(dǎo)物，后者主要導(dǎo)致受影響患者的骨侵蝕以及非常疼痛的后果(Lubberts E. (2008)Cytokine,41，第84-91頁)。此外，IL-17的不適當(dāng)或過度產(chǎn)生與以下各種其他疾病和病癥的病理相關(guān)例如骨關(guān)節(jié)炎、骨植入物松弛、急性移植排斥(Antonysamy等.,(1999) J. Immunol, 162,第 577-584 頁；van Kooten 等· (1998) J. Am. Soc. Nephrol. , 9,第 1526-1534 頁)、敗血病、胺毒性休克或內(nèi)毒素性休克、變態(tài)反應(yīng)、哮喘(Molet等.(2001) J. Allergy Clin. Immunol.,108,第 430-438 頁)、骨丟失、牛皮癖(Teunissen 等.(1998) J. Invest. Dermatol, 111,第645-649 頁)、局部缺血、系統(tǒng)性硬化病(Kurasawa 等.(2000) Arthritis Rheum. ,43,第2455-2463頁)、中風(fēng)和其它炎性病癥。因此，抗-IL-17化合物具有作為抗炎劑的潛能，這是與許多體內(nèi)研究(其證明中和IL-17減輕炎性過程例如關(guān)節(jié)炎)一致的治療方法。例如，在關(guān)節(jié)炎的初期期間在免疫接種方案后啟動的IL-17受體-IgGl-Fc融合蛋白對內(nèi)源性IL-17的早期中和抑制實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)作(Lubberts等·(2001) J. Immunol. , 167,第1004-1013頁)。此外，在動物模型中在膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎發(fā)作后，用中和抗-IL-17抗體的治療減少關(guān)節(jié)炎癥、軟骨破壞和骨侵蝕(Lubberts 等· (2004) Arthritis and Rheumatism, 50 ;650_659)。組織學(xué)分析證實(shí)用抗-IL-17抗體治療后關(guān)節(jié)炎癥被抑制，并且系統(tǒng)性IL-6水平顯著降低。相比之下，使用表達(dá)鼠IL-17的腺病毒載體過表達(dá)系統(tǒng)性以及局部的IL-17，加速了膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)發(fā)作并且加劇了位點(diǎn)處的滑液炎癥(Lubberts等.(2001) J. Immunol.，167，第1004-1013頁以及 Lubberts 等.(2002)，Inf lamm. Res. 51,第 102-104 頁)。雖然抗體通常用于分析、純化、診斷和治療目的，這是由于它們易于制備、對實(shí)際上任何所需靶抗原的高親和力和特異性，但它們?nèi)杂性S多嚴(yán)重缺點(diǎn)，例如需要復(fù)雜的哺乳動物細(xì)胞生產(chǎn)系統(tǒng)、依賴于二硫鍵穩(wěn)定性、一些抗體片段易于聚集、溶解度有限以及最后但并非最不重要的，它們(即使人源化時(shí))可引發(fā)非合乎需要的免疫應(yīng)答。結(jié)果，最近出現(xiàn)如下集中關(guān)注開發(fā)小的球狀蛋白，將其作為用于產(chǎn)生新類別多用途的結(jié)合蛋白的支架。為產(chǎn)生多樣性和靶特異性，通常使具有合適生物物理性質(zhì)的蛋白框架的表面組分(例如胞外環(huán))組合地突變，用于產(chǎn)生蛋白質(zhì)文庫，以篩查目標(biāo)靶結(jié)合特異性(Binz，H. K.，和Pluckthun, A. (2005)Curr. Opin. Biotechnol. 16,459-469)。這些非免疫球蛋白-來源的結(jié)合劑統(tǒng)稱為“支架(scaffold) ” (Skerra A. (2000)J. Mol. Recognit. 13，167-187)。在過去的10至15年內(nèi)，已提出多于50種的不同蛋白支架，該領(lǐng)域最先進(jìn)的方法是(如 Gebauer M和 Skerra A. (2009) Curr Opinion in ChemicalBiology 13 :245-255中總結(jié)的)親合體(affibody)(基于葡萄球菌蛋白A的Z-結(jié)構(gòu)域)、Kunitz型結(jié)構(gòu)域、adnectin(基于人纖連蛋白的第10個結(jié)構(gòu)域)、anticalin(源自 脂質(zhì)運(yùn)載蛋白)、DARPin(源自錨蛋白重復(fù)序列蛋白)、avimer(基于多聚化的LDLR-A)、affitin(基于來自極端嗜熱古細(xì)菌的Sac7d)和源自人Fyn SH3結(jié)構(gòu)域的Fynomer。通常，SH3結(jié)構(gòu)域存在于多種參與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的蛋白中(Musacchio等.(1994)Prog. Biophys. Mol. Biol. 61 ;283_297)。這些結(jié)構(gòu)域在蛋白質(zhì)內(nèi)不占據(jù)固定位置并且可獨(dú)立地表達(dá)和純化。目前已知存在多于1000種結(jié)構(gòu)域，其中有約300種人SH3結(jié)構(gòu)域(Musacchio A. (2003) Advances in Protein Chemistry. 61 ;211_268)。盡管 SH3 結(jié)構(gòu)域之間存在極大序列多樣性，但它們?nèi)抗灿斜Ｊ卣郫B由兩個反-平行β-片層形成的緊湊 β 桶(Musacchio A. (2003)Advances in Protein Chemistry. 61 ;211_268)。通常，SH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合含有PXXP核心-結(jié)合基序的富含脯氨酸的肽(Ren等.(1993) Science259 ；1157-1161)，但也已描述了非常規(guī)SH3結(jié)合位點(diǎn)的實(shí)例(Kark_kainen等.(2006) EMBORep. 7 ; 186-191)。迄今為止大多數(shù)已測序的SH3結(jié)構(gòu)域的總長為約60至65個氨基酸，但由于連接二級結(jié)構(gòu)的主要保守元件的環(huán)中的插入片段，它們中的一些可具有多達(dá)85個氨基酸(Koyama等.(1993)Cell 72(6) ;945_952)。不同SH3結(jié)構(gòu)域的比對揭示了負(fù)責(zé)形成適當(dāng)結(jié)構(gòu)以及識別規(guī)范的富含脯氨酸基序的保守氨基酸殘基(Larson等.(2000)ProteinScience 9 ;2170_2180)。最近本發(fā)明人證明Fyn SH3結(jié)構(gòu)域是用于產(chǎn)生結(jié)合蛋白的特別引人關(guān)注的支架(“Fynomer”)，因?yàn)樗?i)可以可溶形式在細(xì)菌中大量表達(dá)，(ii)是單體的并且當(dāng)儲存在溶液中時(shí)不聚集，(iii)非常穩(wěn)定(Tm70. 5°C )，(iii)缺少半胱氨酸殘基，和(iv)是人源的，其特征為氨基酸序列從小鼠至人完全保守，并且因此是非免疫原性的(Grabulovski等· (2007) JBC, 282，第 3196-3204 頁)。本發(fā)明的目標(biāo)是提供新的IL-17A結(jié)合分子，特別為對IL-17A具有高特異性以及高親和力的結(jié)合分子。另一目標(biāo)是提供適合研究、診斷和醫(yī)學(xué)治療，優(yōu)選用于治療和/或預(yù)防IL-17A-介導(dǎo)的疾病和醫(yī)學(xué)病癥的藥物中的用途的IL-17A-結(jié)合分子，優(yōu)選IL-17抑制劑。意想不到的是，上述目標(biāo)通過包含選自以下的氨基酸序列的多肽而解決
(i) (G/E) VTLFVALYDY- (X) a_D_ (X) b-SFHKGEKF- (X) C_I_ (X) d_G_ (X) e-ffff- (X)f-A- (X) g-SLTTG- (X) hGYIPSNYVAPVDSIQ (I)其中a至h為0至20，優(yōu)選a為I至10,更優(yōu)選2至8,最優(yōu)選6 ;優(yōu)選b為O至5,更優(yōu)選I至3,最優(yōu)選I ;優(yōu)選c為O至5,更優(yōu)選I至3,最優(yōu)選I ;優(yōu)選d為I至10，更優(yōu)選3至9，最優(yōu)選5或7 ;優(yōu)選e為O至5,更優(yōu)選I至3,最優(yōu)選I ;優(yōu)選f為O至5，更優(yōu)選I至3，最優(yōu)選I ; 優(yōu)選g為O至5,更優(yōu)選I至3,最優(yōu)選I ;優(yōu)選h為O至6，更優(yōu)選I至3，最優(yōu)選I或2 ;(ii)與(i)具有至少至少70%、優(yōu)選至少80 %、更優(yōu)選至少90 %、最優(yōu)選至少
95%氨基酸序列同一性的氨基酸序列；(iii)由與編碼(i)的核酸的互補(bǔ)鏈雜交的核酸編碼的氨基酸序列，優(yōu)選在嚴(yán)格條件下雜交；(iv)可通過至少一個氨基酸的取代、添加和/或缺失而得到的⑴至(iii)的片段或功能衍生物，其中所述多肽結(jié)合IL-17A。上述通式(I)是人Fyn SH3支架的重復(fù)和廣泛突變分析以及基于IL-17A結(jié)合的選擇的結(jié)果。標(biāo)為X的位置可因氨基酸類型以及氨基酸數(shù)目而大不相同。優(yōu)選地，X無一是半胱氨酸。X的優(yōu)選氨基酸數(shù)目由a至h的下標(biāo)表示，其全部優(yōu)選為O至20，更優(yōu)選O或I至10。在天然人Fyn SH3中，(幻3和(X)d將分別與RT環(huán)和Src環(huán)相關(guān)。優(yōu)選但非必需的是，》\和(X)d提供環(huán)結(jié)構(gòu)。已知典型的環(huán)結(jié)構(gòu)包括2個至不止20個氨基酸(Larson等· (2000) Protein Science 9 ;2170_2180)。因此，優(yōu)選(X) a 和 / 或(X) d 具有 2 至 20 個氨基酸。優(yōu)選a為I至10,更優(yōu)選2至8,最優(yōu)選為6。優(yōu)選d為I至10,更優(yōu)選3至9,最優(yōu)選為5或7。優(yōu)選(X) a為TAFWPG，更優(yōu)選為VAFWPG，最優(yōu)選為KAFWPG。優(yōu)選(X) d為LNSSE，更優(yōu)選為TRTSD或LHTSD，最優(yōu)選為LRTSD。(X)b, (X)c, (X)e, (X)f和(X)g彼此獨(dú)立地優(yōu)選為O至5，更優(yōu)選為I至3，最優(yōu)選為
I。(X)h優(yōu)選為O至6，更優(yōu)選I至3，最優(yōu)選為I。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，式(I)為(G/E) VTLFVALYDY- (X) 6-D_ (X)「SFHKGEKF- (X)「I- (X) 5_7-G_ (X)「ffff- (X)「A- (X)「SLTTG- (X) ^2Gyipsnyvapvdsiq (ia)當(dāng)然，式⑴的氨基酸序列中存在許多變異，這仍將允許本發(fā)明多肽的IL-17A結(jié)合。因此，本發(fā)明還涵蓋包含與(i)具有至少50、60或70%，優(yōu)選至少80%，更優(yōu)選至少90%,最優(yōu)選至少95%的氨基酸序列同一性的氨基酸序列的多肽。本文使用的術(shù)語氨基酸序列之間的“氨基酸序列同一性”意指涉及生物化學(xué)技術(shù)人員通常并且廣泛使用的比對和比較技術(shù)。兩個氨基酸序列的氨基酸序列同一性可通過常用的比對方法和工具來確定。例如為確定任意多肽相對式(I)氨基酸序列的氨基酸序列同一11"生程度，可采用SIM局部相似性程序(Xiaoquin Huang和Webb Miller, " ATime-Efficient, Linear-Space Local Similarity Algorithm. " Advances in AppliedMathematics，第12卷337_357，1991.)，這可從作者及其研究所免費(fèi)獲得(也可參見萬維網(wǎng)http://www. expasy. org/_tools/sim-prot. html);就多重比對分析而言，可使用 Clustalff(Thompson 等，CLUSTAL Wimproving the sensitivity of progressivemultiple sequence alignment through sequence weighting, position-specific gappenalties and weight matrix choice. “，Nuclei Acids Res. ,22(22) :4673-4680,1994.)。優(yōu)選地，本發(fā)明多肽、片段或功能衍生物與式(I)氨基酸序列的氨基酸序列同一性程度相對式(I)的完整序列來確定。此外，本發(fā)明還涵蓋包含由與編碼⑴的核酸的互補(bǔ)鏈(優(yōu)選在嚴(yán)格條件下)雜交的核酸編碼的氨基酸序列的多肽。換言之，由本發(fā)明多肽涵蓋的氨基酸序列優(yōu)選由其編碼核酸間接限定，該核酸仍必須能與編碼式(I)氨基酸序列的核酸的互補(bǔ)鏈雜交。在本領(lǐng)域中，核酸是否彼此雜交通常通過特定比對和比較工具以及通過實(shí)驗(yàn)來確定。在現(xiàn)有技術(shù)中，除了用于確定在嚴(yán)格條件下一種核酸與特別參考的核酸序列雜交的能力的常用和/或 標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方案(例如 Sambrook 和 Russell, Molecular cloning A laboratory manual (3卷)，2001)之外，優(yōu)選通過用比對工具，例如BLASTN (Altschul等·，J. Mol. Biol. ,215,403-410,1990)和LALIGN比對工具來比較編碼目標(biāo)多肽的任意核酸與編碼式(I)氨基酸序列的核酸序列的互補(bǔ)鏈，從而分析并確定在嚴(yán)格條件下這兩種核苷酸序列雜交的能力。最優(yōu)選地，編碼疑似為本發(fā)明多肽的目標(biāo)多肽的核酸與編碼式(I)氨基酸序列的核酸的互補(bǔ)鏈雜交的能力在以下條件下用DNA印跡測定來證實(shí)在45°C下的6x氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)，隨后在 65°C下于 O. 2x SSC, O. 1% SDS 中洗滌。此外，本發(fā)明涵蓋包含上述本發(fā)明氨基酸序列中任一種的片段、優(yōu)選功能片段、或功能衍生物的多肽。因此，術(shù)語“本發(fā)明的多肽或氨基酸序列”還涵蓋具有上述鑒定性質(zhì)(即結(jié)合IL-17A)的本發(fā)明多肽或氨基酸序列的功能片段和衍生物。本發(fā)明多肽或氨基酸序列的功能衍生物意欲涵蓋任何氨基酸序列和/或其化學(xué)衍生物(非天然氨基酸等同物、糖基化、化學(xué)衍生)，其具有基本上足夠可及的氨基酸殘基或非天然等同物以證明結(jié)合IL-17A。本發(fā)明多肽或氨基酸序列的功能衍生物中，可缺失、修飾、插入和/或取代一個或多個氨基酸。此外，在"功能衍生物"的背景下，插入是指一個或多個氨基酸插入到上述非衍生化的結(jié)合蛋白中。優(yōu)選(越來越優(yōu)選)的是，功能衍生物不包括多于5、4、3、2個，或也不包括多于I個氨基酸的改變(即缺失、修飾、插入和/或取代的氨基酸)。在另一實(shí)施方案中，優(yōu)選(越來越優(yōu)選)的是，多肽或氨基酸序列的全部氨基酸中，不多于
4%、3%、2%或不多于1%被改變(即是缺失、修飾、插入和/或取代的氨基酸)。衍生物中的取代可為保守或非保守取代，但優(yōu)選保守取代。在一些實(shí)施方案中，取代還包括天然存在氨基酸與非天然存在氨基酸的交換。保守取代包括用另一具有與被取代氨基酸相似的化學(xué)性質(zhì)的氨基酸來取代氨基酸。優(yōu)選地，保守取代是選自以下的取代(i)用不同的堿性氨基酸來取代堿性氨基酸；(ii)用不同的酸性氨基酸來取代酸性氨基酸；(iii)用不同的芳族氨基酸來取代芳族氨基酸；(iv)用不同的非極性、脂族氨基酸來取代非極性、脂族氨基酸；和(V)用不同的極性、不帶電氨基酸來取代極性、不帶電氨基酸。堿性氨基酸選自精氨酸、組氨酸和賴氨酸。酸性氨基酸選自天冬氨酸或谷氨酸。芳族氨基酸選自苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。非極性、脂族氨基酸選自甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸和異亮氨酸。極性、不帶電氨基酸選自絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、脯氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。與保守氨基酸取代相比，非保守氨基酸取代是一個氨基酸與任何氨基酸的交換，其不屬于上述α)至(V)的保守取代。若功能衍生物包括缺失，則衍生物中，一個或數(shù)個存在于參考多肽中的氨基酸被除去。然而，缺失不應(yīng)過于廣泛而使衍生物包含總數(shù)少于3個、優(yōu)選少于4個、更優(yōu)選少于5個以及最優(yōu)選少于6個的氨基酸。如上所述，本發(fā)明多肽或氨基酸序列的氨基酸也可被修飾，例如化學(xué)修飾。例如，多肽的氨基酸的側(cè)鏈或自由氨基端或羧基端可被修飾，例如通過糖基化、酰胺化、磷酸化、泛素化等來進(jìn)行。如本領(lǐng)域熟知的，化學(xué)修飾還可發(fā)生在體內(nèi)，例如在宿主細(xì)胞中。例如，合適的化學(xué)修飾基序，例如存在于多肽的氨基酸序列中的糖基化序列基序?qū)⒅率苟鄪y被糖基化。在本發(fā)明所有提及功能衍生物的實(shí)施方案中，須理解的是，具有本文上述限定的式(I)的氨基酸序列是其中引入功能衍生物的起始分子。在插入和具有相同序列的兩個起始分子(只是第一分子中Xa等于4，而在第二分子中Xa等于5)的情況下，若到例如Xa的C-末端中的插入在第一分子中是兩個氨基酸，而在第二分子中是一個氨基酸，那么將產(chǎn)生具有相同長度以及可能相同氨基酸序列的分子。本發(fā)明多肽結(jié)合IL-17A，優(yōu)選人IL-17A。優(yōu)選地，它們特異性結(jié)合IL-17A，即它們·不結(jié)合其它細(xì)胞因子或者結(jié)合程度低得多，優(yōu)選低至至少2、5、10、50、100、500或1000分之一。用于確定本發(fā)明多肽的結(jié)合特異性的示例性以及優(yōu)選的ELISA測定在實(shí)施例6和7中提供。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明多肽特異性地以高結(jié)合親和力結(jié)合人以及食蟹猴(cynomolgus)IL-17A。在另外的優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明多肽具有與人IL-17A的特異性(體內(nèi)和/或體外)結(jié)合親和力，優(yōu)選Kd為10_7至10_12M、更優(yōu)選10_8至10_12M、最優(yōu)選低于10_12M。例如并且還優(yōu)選的，本發(fā)明多肽的結(jié)合親和力可通過下述實(shí)施例2來確定。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明多肽選自附于說明書的SEQ ID NO 1至119或其功能衍生物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明多肽不僅結(jié)合而且實(shí)際上抑制IL-17A(功能)。該能力在實(shí)施例3和10中證明，其中證明了多肽響應(yīng)加入IL-17A而抑制人皮膚成纖維細(xì)胞中IL-6的誘導(dǎo)的能力。此外，本發(fā)明多肽在溶液中具有高的穩(wěn)定性，例如在4°C下它們在單純磷酸緩沖鹽水中在至少6個月內(nèi)是穩(wěn)定的(參見實(shí)施例4)。然而，穩(wěn)定性不局限于體外組合物，而是還已在靜脈內(nèi)注射本發(fā)明多肽的小鼠中被證明(參見實(shí)施例5和12)?？傊景l(fā)明多肽非常適合用于研究、診斷和醫(yī)療應(yīng)用。除取代IL-17A抗體之外，它們還得以設(shè)計(jì)新且較小免疫原性的融合蛋白，用于體內(nèi)和體外藥物和診斷應(yīng)用。因此，在第二方面，本發(fā)明涉及融合蛋白，其包含與藥學(xué)上和/或診斷上的活性組分融合的本發(fā)明多肽。如上所述，本發(fā)明的融合蛋白可包含非多肽組分，例如非肽接頭、非肽配體，例如用于治療上或診斷上相關(guān)的放射性核素。優(yōu)選地，所述活性組分是選自以下的細(xì)胞因子IL_2、IL-12、TNF-α、IFNa、IFNβ , IFN y , IL-10、IL-15、IL-24、GM-CSF、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6, IL-7、IL-9、IL-IUIL-13、LIF、CD80、B70、TNF β、LT- β、CD-40 配體、Fas-配體、TGF- β、IL-1 α 和 IL-1 β。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述活性組分是毒性化合物，優(yōu)選小的有機(jī)化合物或多肽，更優(yōu)選選自以下的毒性化合物加利車霉素(calicheamicin)、美登木素生物堿(maytansinoid)、新制癌菌素(neocarzinostatin)、埃斯波霉素(esperamicin)、達(dá)內(nèi)霉素(dynemicin)、可達(dá)菌素(kedarcidin)、maduropeptin、多柔I匕星(doxorubicin)、柔紅霉素(daunorubicin)、auristatin、蓖麻毒蛋白-A鏈、蒴蓮根毒蛋白II (modeccin)、截短的假單胞菌外毒素A、白喉毒素和重組白樹毒蛋白(recombinant gelonin)。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的融合蛋白為這樣的融合蛋白，其中所述活性組分為優(yōu)選選自以下的趨化因子IL_8、GROa、GROP、GRO y , ENA-78, LDGF-PBP, GCP-2、PF4、Mig、IP-10、SDF-I a / β、BUNZ0/STRC33、I-TAC, BLC/BCA-1、MIP-I a、MIP-I β、MDC,TECK, TARC, RANTES, HCC-I、HCC-4, DC-CKl、MIP-3 a、MIP-3 β、MCP-1-5、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(Eotaxin)、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子_2、1-309、MPIF_l、6Ckine、CTACK, MEC、淋巴細(xì)胞趨化蛋白(Lymphotactin)和 CXXXC 趨化因子(Fractalkine)。在又一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明多肽或融合蛋白含有人工氨基酸。在本發(fā)明融合蛋白的另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述活性組分為熒光染料，優(yōu)選選自以下的組分Alexa Fluor 或 Cy 染料(Berlier 等，“Quantitative Comparison ofLong-wavelength Alexa Fluor Dyes to Cy Dyes Fluorescence of the Dyes and TheirBioconjugates”，J. Histochem. Cytochem. 51 (12) 1699-1712, 2003.);光敏劑，優(yōu)選光毒的紅色突光蛋白 KillerRed(Bulina 等· (2006)Nat Biotechnol.，24，95-99)或血卩卜啉；前凝血劑因子，優(yōu)選組織因子；用于前藥活化的酶，優(yōu)選選自羧肽酶、葡糖醛酸糖苷酶和葡糖苷酶的酶；來自以下的放射性核素Y -發(fā)射同位素，優(yōu)選99mTc、123I、mIn，或者正電子發(fā)射體，優(yōu)選 18F、64Cu、68Ga、86Y、124I，或者 β -發(fā)射體，優(yōu)選 131I、90Y、177Lu、67Cu，或 α -發(fā)射體，優(yōu)選213Bi^211At0在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明多肽可直接或通過化學(xué)接頭連接本文上述限定的一種或多種非-多肽組分。在本發(fā)明融合蛋白的更優(yōu)選實(shí)施方案中，所述活性組分為一個或多個功能Fe結(jié)構(gòu)域，優(yōu)選一個或多個人功能Fe結(jié)構(gòu)域(參見例如SEQ ID NO :117-119和SEQ ID NO :130)，其允許延長本發(fā)明IL-17A結(jié)合多肽的體內(nèi)半衰期，并且其中的一些將哺乳動物的免疫應(yīng)答指向本發(fā)明的融合蛋白多肽組分的特異性靶結(jié)合位點(diǎn)，例如在治療、預(yù)防和/或診斷應(yīng)用中。本發(fā)明多肽可與一個或多個功能Fe結(jié)構(gòu)域的N-或C-端或者與一個或多個Fe結(jié)構(gòu)域的N-和C-端兩者融合。優(yōu)選本發(fā)明融合蛋白包括與一個或多個(優(yōu)選一個)Fe結(jié)構(gòu)域的至少一側(cè)(優(yōu)選N-端)融合的本發(fā)明多肽的多聚體，優(yōu)選四聚體、三聚體或最優(yōu)選二聚體。在這一方面，注意的是，命名為(2C1)2-Fc的Fynomer-Fynomer-Fc融合蛋白證明了多聚體的多肽-Fe融合物的優(yōu)點(diǎn)，其對IL-17A具有比相應(yīng)單體2C1-Fc融合蛋白更高的親和力，如下述實(shí)施例2中圖3e和3f以及表II證明的。因此，本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案涉及多聚體的多肽-Fe融合蛋白。
抗體的"功能Fe結(jié)構(gòu)域”是技術(shù)人員熟知的術(shù)語并且基于抗體的木瓜蛋白酶切割來定義。根據(jù)其重鏈恒定區(qū)的氨基酸序列，將免疫球蛋白分為以下類別IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且這些中的幾個可再分為亞類(同種型)，例如IgGl、IgG2、IgG3和IgG4、IgAl和IgA2。依據(jù)重鏈恒定區(qū)，將不同類別的免疫球蛋白分別稱為[α]、[δ]、[ε]、[y]和[μ ]?？贵w的功能Fe結(jié)構(gòu)域直接參與基于補(bǔ)體激活、Clq結(jié)合以及Fe受體結(jié)合的ADCC (抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性)和CDC(補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性)。4種人IgG同種型結(jié)合不同的受體，例如新生兒Fe受體、激活的Fe Y受體、Fe Y RI、Fe 丫1 11&和卩(^1 111&、抑制性受體Fe Y RIIb，以及具有不同親和力的Clq，從而產(chǎn)生非常不同的活性。已知激活和抑制人抗體Fe結(jié)構(gòu)域的受體的親和力可經(jīng)工程改造和改變(參見Strohl W. (2009) Curr OpinBiotechnol，20，第685-691頁)。如上所述，因此本發(fā)明包括Fe融合物，其允許延長本發(fā)明IL-17A結(jié)合多肽的體內(nèi)半衰期，并且其包含人源的功能Fe結(jié)構(gòu)域，優(yōu)選人IgGl抗體的功能Fe結(jié)構(gòu)域(參見例如SEQ ID NO :117-119以及SEQ ID NO :130)。在本發(fā)明融合蛋白的更優(yōu)選實(shí)施方案中，活性組分是一個或多個具有激活或沉默效應(yīng)物功能的IgGl工程改造的人功能Fe結(jié)構(gòu)域，優(yōu)選一個或多個具有沉默效應(yīng)物功能的 IgGl工程改造的人功能Fe結(jié)構(gòu)域，以及最優(yōu)選一個或多個具有沉默效應(yīng)物功能且在L234和L235中突變的IgGl工程改造的人功能Fe結(jié)構(gòu)域(參見例如SEQ ID NO :131-135)，依據(jù) Kabat 的 EU 索引(EU index)來編號(參見 Johnson G 和 Wu T. T. (2000) Nucleic AcidsRes. 28，第 214-218 頁)。又一優(yōu)選的實(shí)施方案涉及如上述的本發(fā)明多肽或融合蛋白，還包含調(diào)節(jié)血清半衰期的組分，優(yōu)選選自聚乙二醇(PEG)、免疫球蛋白和白蛋白-結(jié)合肽的組分。此外，優(yōu)選本發(fā)明的融合蛋白包含上述本發(fā)明IL-17A結(jié)合多肽的任一種，優(yōu)選選自SEQ ID NO :117至119以及SEQ ID NO =130-135或其功能衍生物的那些。注意的是，本發(fā)明的多肽或融合蛋白優(yōu)選本發(fā)明多肽的單體但還涵蓋多聚體，優(yōu)選四聚體、更優(yōu)選三聚體或最優(yōu)選二聚體。本發(fā)明的多肽和融合蛋白可通過許多常規(guī)且熟知的技術(shù)中的任一種來制備，例如普通的有機(jī)合成策略、固相輔助合成技術(shù)或通過市售的自動合成儀。在另一方面，它們還可通過單獨(dú)的常規(guī)重組技術(shù)或與常規(guī)合成技術(shù)組合的常規(guī)重組技術(shù)來制備。在這一方面，本發(fā)明的其它方面涉及(i)編碼本發(fā)明多肽或融合蛋白的核酸，
(ii)包含所述核酸的載體，和(iii)包含所述多核苷酸和/或所述載體的宿主細(xì)胞。優(yōu)選地，本發(fā)明涉及分離并純化的核酸，其包括(i)編碼本發(fā)明多肽，優(yōu)選編碼式(I)的氨基酸序列，更優(yōu)選編碼(G/E)VTLFVALYDY- (X) 6-D- (X) -SFHKGEKF- (X)「I- (X) 5_7-G- (X) rffff- (X) -A- (X) -SLTTG- (X) ^-GYIPSNYVAPVDSIQ的核酸；(ii)與⑴的核酸序列具有至少60或70%、優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少90%、最優(yōu)選至少95%序列同一性的序列的核酸；(iii)與(i)或(ii)的核酸互補(bǔ)鏈雜交的核酸；(iv)核酸，其中所述核酸可通過(i)、(ii)或(iii)的核酸之一的取代、添加和/或缺失而得到；(V)與編碼本發(fā)明多肽的(i)的核酸的互補(bǔ)鏈雜交的(i)至(iv)的核酸中任一種的片段。更優(yōu)選地，本發(fā)明的核酸包括編碼如上所述的多肽或融合蛋白的核酸。在這一方面，理解的是，上述核酸⑴至(V)中任一種優(yōu)選編碼結(jié)合IL-17A并更優(yōu)選抑制IL-17A功能的多肽。本發(fā)明的核酸可為DNA、RNA、PNA及其任何其它類似物。載體和宿主細(xì)胞可為適合目的的任何常規(guī)類型，例如本發(fā)明多肽和/或融合蛋白的制備，治療上有用的載體和宿主細(xì)胞，例如用于基因治療。技術(shù)人員將能從大量的現(xiàn)有技術(shù)中選擇那些核酸、載體和宿主細(xì)胞，并且通過常規(guī)方法以及無需過度負(fù)擔(dān)來確定它們針對所需目的的具體適合性。優(yōu)選地,核酸有效連接(operably linked)至啟動子,優(yōu)選連接至選自以下原核啟動子的啟動子T5啟動子/Iac操縱基因元件、T7啟動子/Iac操縱基因元件，或選自以下真核啟動子的啟動子hEFl-HTLV、CMV enh/hFerL啟動子。 還優(yōu)選的是，本發(fā)明的重組載體是包含本發(fā)明核酸并且優(yōu)選能產(chǎn)生本發(fā)明多肽或融合蛋白的載體。優(yōu)選這樣的載體選自PQE載體、pET載體、pFUSE載體、pUC載體、YAC載體、噬菌粒載體、噬菌體載體、用于基因治療的載體例如逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺伴隨病毒。此外，本發(fā)明涉及包含本發(fā)明核酸和/或載體的宿主細(xì)胞。此外，本發(fā)明涵蓋特異性結(jié)合本發(fā)明多肽或融合蛋白的抗體。若抗體結(jié)合融合蛋白，則它特異性結(jié)合其由本發(fā)明多肽或融合表位組成的一部分，即部分地由本發(fā)明多肽組成和部分地由藥學(xué)上和/或診斷上的活性組分組成的抗體的結(jié)合位點(diǎn)，其優(yōu)選為多肽或肽。抗體可為多克隆或單克隆抗體。本文使用的術(shù)語“抗體”不僅指完整的抗體分子，還指抗原-結(jié)合片段，例如Fab、F(ab’)2、Fv和單鏈Fv片段。還包括嵌合抗體,優(yōu)選人源化抗體。此類抗體作為用于區(qū)分任意蛋白和本發(fā)明多肽的研究工具是有用的。另一方面涉及表達(dá)本發(fā)明的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞系。因?yàn)楸景l(fā)明的多肽和融合蛋白證明了 IL-17A-結(jié)合和抑制性質(zhì)以及儲存和體內(nèi)穩(wěn)定性，所以本發(fā)明的另一方面涉及包含本發(fā)明的多肽或融合蛋白、核酸和/或重組載體以及任選的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。術(shù)語藥物組合物還意欲涵蓋用于體內(nèi)使用的診斷組合物。本發(fā)明的藥物組合物可用任何常規(guī)方法制備。在實(shí)現(xiàn)治療患有下文指出的疾病的受試者中，本發(fā)明的至少一種化合物可用任何形式或方式給予，其使治療性多肽或其治療性片段以有效量而生物可利用的，包括口服或胃腸外途徑。例如，本發(fā)明的組合物可經(jīng)皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、通過吸入等給予。制備制劑領(lǐng)域的本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地依據(jù)所選產(chǎn)品的具體性質(zhì)、待治療的疾病或病癥、疾病或病癥的階段以及其它相關(guān)情況選擇適當(dāng)?shù)慕o予形式和方式(參見例如 Remington' s Pharmaceutical Sciences, Mack PublishingCo. (1990))。合適的載體或賦形劑可為可作為活性成分的溶媒或介質(zhì)的液體物質(zhì)。合適的載體或賦形劑為本領(lǐng)域熟知并且包括，例如穩(wěn)定劑、抗氧化劑、PH-調(diào)節(jié)物質(zhì)、控釋賦形劑等。本發(fā)明的組合物優(yōu)選以凍干形式提供。就即刻給予而言，將其溶于合適的水性載體例如注射用無菌水或無菌的緩沖生理鹽水。若希望產(chǎn)生更大體積用于經(jīng)輸注而非推注給予，則有利的是，在最后制備時(shí)將人血清白蛋白或患者自身的肝素化血液摻入溶劑中?；蛘?，制劑可經(jīng)皮下給予。存在過量的生理上惰性蛋白例如人血清白蛋白，可防止由吸收至用于輸注溶液的容器和輸液管的壁上而導(dǎo)致的藥學(xué)上有效多肽的損失。若使用白蛋白，合適的濃度為鹽水溶液的O. 5至4. 5%重量。本發(fā)明的IL-17A-結(jié)合和抑制多肽特別可用于治療和/或預(yù)防IL-17A-和/或Thl7相關(guān)疾病或醫(yī)學(xué)病癥。因此，本發(fā)明的又一方面涉及本發(fā)明的多肽或融合蛋白、核酸和/或重組載體用于醫(yī)藥用途的用途，即用于制備藥物的用途，所述藥物優(yōu)選用于治療和/或預(yù)防疾病或醫(yī)學(xué)病癥，優(yōu)選選自IL-17A和/或Thl7相關(guān)疾病或醫(yī)學(xué)病癥。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的醫(yī)藥用途涉及治療和/或預(yù)防選自以下的疾病或醫(yī)學(xué)病癥炎性、自身免疫和/或骨丟失相關(guān)疾病和病癥。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述炎性、自身免疫和/或骨丟失相關(guān)疾病和病癥選自關(guān)節(jié)炎、優(yōu)選類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性進(jìn)行性關(guān)節(jié)炎(arthritis chronica progrediente)、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、腸病性關(guān)節(jié)炎(enterophathic arthritis)和變形性關(guān)節(jié) 炎、風(fēng)濕性疾病、脊椎關(guān)節(jié)病、強(qiáng)直性脊椎炎、萊特爾綜合征(Reiter syndrome)、超敏反應(yīng)(包括呼吸道超敏反應(yīng)和皮膚超敏反應(yīng))、變態(tài)反應(yīng)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎性肌肉病癥、多軟骨炎、硬皮病(sclerodoma)、韋格納肉芽腫病(Wegner granulomatosis)、皮肌炎、史-約綜合征(Steven-Johnson syndrome)、慢性活動性肝炎、重癥肌無力、牛皮癬、特發(fā)性口炎性腹灣、自身免疫炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病(Crohn' s disease)、腸易激綜合征、內(nèi)分泌性眼病、格雷夫斯病(Graves disease)、結(jié)節(jié)病、局部缺血、系統(tǒng)性硬化病、多發(fā)性硬化、原發(fā)性膽汁性肝硬化、青少年糖尿病(I型糖尿病)、自身免疫血液病癥、溶血性貧血、再生障礙性貧血、單純紅細(xì)胞性貧血、特發(fā)性血小板減少癥、色素層炎(前眼色素層炎和后色素層炎)、干性角膜結(jié)膜炎、春季角膜結(jié)膜炎、間質(zhì)性肺纖維化、腎小球性腎炎(具有和不具有腎病綜合征)、特發(fā)性腎病綜合征或微小病變腎病、腫瘤、皮膚炎癥的炎性疾病、角膜炎癥、肌炎、骨植入物松弛(loosening of bone implants)、急性移植物排斥、代謝紊亂、動脈粥樣硬化、糖尿病，和血脂障礙(dislipidemia)、骨丟失、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、呼吸道阻塞疾病或呼吸道炎性疾病的牙周疾病、哮喘、支氣管炎、塵肺病、肺氣腫、急性及超急性炎性反應(yīng)、涉及IL-17A-介導(dǎo)的TNF-α的疾病、急性感染、敗血癥、感染性休克、內(nèi)毒素性休克、成年呼吸窘迫綜合征、腦膜炎、肺炎、嚴(yán)重?zé)齻翰≠|(zhì)、衰竭綜合征、中風(fēng)、皰疹性基質(zhì)性角膜炎(herpetic stromal keratitis)以及干眼疾病。上述說明的全部疾病和醫(yī)學(xué)病癥具有的共同點(diǎn)是它們的起因和/或癥狀均為IL-17A-和/或Th-17相關(guān)的。用于治療和/或預(yù)防疾病或醫(yī)學(xué)病癥，優(yōu)選選自IL-17A-和/或Thl7_相關(guān)的疾病或醫(yī)學(xué)病癥，更優(yōu)選上文列舉的疾病或醫(yī)學(xué)病癥的本發(fā)明化合物，即多肽、融合蛋白、核酸、載體和宿主細(xì)胞的給予量和方式當(dāng)然將因下列因素而不同本發(fā)明特定的多肽或融合蛋白抑制劑、單個患者組或患者、另外的醫(yī)學(xué)上有效化合物的存在情況以及接受治療的病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重程度。然而，目前優(yōu)選的是，應(yīng)給予預(yù)防性和/或治療性使用劑量為約O. Olmg至約20mg/千克體重、優(yōu)選約O. Img至約5mg/千克體重。優(yōu)選地，預(yù)防性和/或治療性使用的給予頻率在以下范圍內(nèi)約每周兩次至約每3月一次、優(yōu)選約每2周一次至約每10周一次、更優(yōu)選每4至8周一次。本發(fā)明的IL-17A-結(jié)合多肽和融合蛋白合宜地并優(yōu)選地經(jīng)胃腸外、靜脈內(nèi)(優(yōu)選給予到肘前或其它外周靜脈中)、肌內(nèi)或皮下給予。IL-17A-結(jié)合多肽還可作為滴眼劑局部遞送。優(yōu)選的對患者的預(yù)防性和/或治療性治療涉及每月一次至每2至3月一次或頻率更低地給予本發(fā)明多肽。因此，本發(fā)明還涉及治療方法，其中將藥理學(xué)上有效量的上述藥物組合物給予有需要的患者，優(yōu)選患有IL-17A-和/或Thl7-相關(guān)疾病或醫(yī)學(xué)病癥，更優(yōu)選患有上文說明的疾病或醫(yī)學(xué)病癥之一的患者。本文使用的術(shù)語“治療”涉及疾病或醫(yī)學(xué)病癥的預(yù)防性和/或治療性治療。本發(fā)明的IL-17A-結(jié)合多肽和融合蛋白可作為單獨(dú)有效成分給予，或與其它藥物(例如免疫抑制劑或免疫調(diào)節(jié)劑或其它抗炎劑)聯(lián)合給予，例如作為其它藥物的佐劑或與其它藥物組合，例如用于治療或預(yù)防上述疾病。例如，本發(fā)明的IL-17A-結(jié)合多肽和融合蛋白可與以下組合使用免疫抑制單克隆抗體，例如對白細(xì)胞受體(例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD25、CD28、CD40、CD45、CD58、CD80、CD86 或其配體)具有親和力的單克隆抗體；其它免疫調(diào)節(jié)化合物，例如具有CTLA4或其突變體至少一部分胞外域(例如與非-CTLA4蛋白序列連接的CTLA4或其突變體的至少胞外部分(例如CTLA4Ig (例如命名為ATCC 68629)或其突變體，例如LEA29Y))的重組結(jié)合分子；粘著分子抑制劑，例如LFA-I拮抗物、ICAM-I或-3拮抗物、VCAM-4拮抗物或VLA-4拮抗物。此外，本發(fā)明的多肽和融合蛋白可與以下組合使用DMARD,例如金鹽(Gold salts)、柳氮磺卩比唳(sul phasalazine)、抗痕藥(antimalarias)、甲氨喋呤(methotrexate)、D-青霉胺(D-penicillamine)、硫唑嘌呤(azathioprine)、麥考酌·酸(mycophenolic acid)、環(huán)抱霉素 A、他克莫司(tacrolimus)、西羅莫司(sirolimus)、二甲胺四環(huán)素(minocycline)、來氟米特(lefIunomide)、糖皮質(zhì)激素；鈣依賴磷酸酶抑制劑，例如環(huán)孢菌素A或FK 506 ;淋巴細(xì)胞再循環(huán)的調(diào)節(jié)劑，例如FTY720和FTY720類似物；mT0R抑制劑，例如雷帕霉素(rapamycin) ,40-0- (2-羥乙基)-雷帕霉素、CCI779、ABT578、AP23573或TAFA-93 ;具有免疫抑制性質(zhì)的子囊霉素(ascomycin)，例如ABT-281、ASM981等；皮質(zhì)類固醇；環(huán)磷酰胺；硫唑嘌呤(azathioprene);甲氨喋呤；來氟米特；咪唑立賓(mizoribine)、麥考酹酸；麥考酹酸嗎乙酯(mycophenolate mofetil)；15-脫氧精胍菌素(15-deoxyspergualine)或其免疫抑制同源物、類似物或衍生物；或化療齊U，例如紫杉醇、吉西他濱(gemcitabine)、順鉬(cisplatinum)、多柔比星(doxorubicin)或5-氟尿卩密唳；抗-TNF劑,例如針對TNF的單克隆抗體,例如英夫利昔單抗(infliximab)、阿達(dá)木單抗(adal imumab)、CDP870，或TNF-RI或TNF-RII的受體構(gòu)建體，例如依那西普(Etanerc印t)、PEG-TNF-RI ;促炎細(xì)胞因子的阻斷劑，IL-1阻斷劑，例如阿那白滯素(Anakinra)或IL-1阱(trap)、AAL160、ACZ 885、IL-6阻斷劑；蛋白酶的抑制劑或激活劑，例如金屬蛋白酶、抗-IL-15抗體、抗-IL-6抗體、抗-IL-23抗體、抗-IL-22抗體、抗-IL-21抗體、抗-IL-12抗體、抗-IFN- Y抗體、抗-IFN- α抗體、抗-⑶20抗體，NSAID，例如阿斯匹林或抗感染劑。當(dāng)然，所列舉的用于同時(shí)給予的藥劑是非限制性且不完整的。通過下列實(shí)施例中的說明進(jìn)一步描述本發(fā)明，無一實(shí)施例將被理解為限制如所附權(quán)利要求書概述的本發(fā)明范圍。附I顯示本發(fā)明IL-17-結(jié)合多肽的實(shí)施方案的SDS PAGE分析(a)Bl_2 (SEQ IDNo :39)(第 I 道)、E4(SEQ ID NO :57)(第 2 道)、2C1 (SEQ ID NO :107)(第 3 道)、E4_Fc (SEQID NO :117)(第4道非還原條件，第5道還原條件)、2Cl-Fc(SEQ ID NO :118)(第6道:非還原條件，第7道還原條件)的SDS PAGE ； (b) [(2C1)2-Fc] (SEQ ID NO :119)(第I道:非還原條件，第2道還原條件)的SDSPAGE。根據(jù)參考分子量全范圍蛋白標(biāo)記物(marker)來估計(jì)(2C1) 2-Fc的分子量(未顯示)。
圖2顯示本發(fā)明IL-17A-結(jié)合多肽的尺寸排阻色譜圖(SEC) (a)克隆B1_2(SEQID NO :39)、(b)E4(SEQ ID NO :57)、(c)2Cl (SEQ ID NO :107)、(d)E4_Fc(SEQ ID NO:117)、(e) SEC-峰純化的E4-Fc (在純化后的40天后進(jìn)行分析并且在4°C于PBS中儲存)、(f)2C1-Fc(SEQ ID NO :118)、(g)(2C1)2_Fc(SEQ ID NO :119)。圖3描述本發(fā)明IL-17A-結(jié)合多肽的BIAcore傳感圖(a)克隆B1_2(SEQ IDNO :39)、(b) E4 (SEQ ID NO :57)、(c)2Cl(SEQ ID NO :107)、(d)E4_Fc(SEQ ID NO :117)、(e)2Cl-Fc(SEQ ID NO :118)、f) (2C1)2-Fc (SEQ ID NO :119)。圖4描述IL-17A抑制細(xì)胞測定的結(jié)果(a)在用IL-17A孵育NHDF細(xì)胞后IL_6的劑量依賴性誘導(dǎo)。(b)Fyn SH3來源的IL-17結(jié)合劑和IL-17A受體-Fe嵌合體劑量依賴性抑制NHDF細(xì)胞中IL-17A-誘導(dǎo)的IL-6產(chǎn)生。(c)與b)相同，F(xiàn)yn SH3野生型蛋白用作無IL-17A結(jié)合親和力的對照蛋白。(d)XTT-測定存活的細(xì)胞能將四唑鹽XTT代謝生成有色產(chǎn)物。在我們的實(shí)驗(yàn)中，在用IL-17A、IL-17A和Fyn SH3結(jié)合劑、或IL-17A以及IL_17R_Fc 嵌合體孵育24小時(shí)后所有細(xì)胞是存活的。圖5描述用命名為G3(SEQ ID NO :34)的本發(fā)明IL-17A-結(jié)合多肽在純化后一天(在4°C儲存于PBS中)進(jìn)行的尺寸排阻色譜。采用Superdex 75 (GE Healthcare)柱進(jìn)行色譜。圖6描述用命名為G3 (SEQ ID NO 34)并儲存在4°C (a)和_20°C (b)多于6個月的本發(fā)明IL-17A-結(jié)合多肽進(jìn)行的尺寸排阻色譜。圖7顯示小鼠中命名為E4-Fc(SEQ ID NO :117)的本發(fā)明IL-17A-結(jié)合多肽的藥代動力學(xué)數(shù)據(jù)(a)繪制血清中E4-Fc濃度對比靜脈內(nèi)注射后時(shí)間的圖像，(b)與(a)相同，但用半對數(shù)顯示。最后4個時(shí)間點(diǎn)用于計(jì)算最終半衰期(50. 6小時(shí))。圖8顯示命名為2C1 (SEQ ID NO :107)的本發(fā)明多肽的結(jié)合特異性的表。吸光度結(jié)果涉及使用不同靶蛋白進(jìn)行的ELISA 人IL-17A、人IL-17F、mIL_17A(鼠IL-17A)、TNF-α (人腫瘤壞死因子a)、BSA(牛血清白蛋白)、卵白蛋白(母雞蛋清)、IL_6 (人白細(xì)胞介素6)。圖9顯示本發(fā)明2C1 (SEQ ID NO :107)的Fyn SH3-來源的多肽的特異性。在ELISA中使用不同IL-17家族成員、不同物種的IL-17A以及其它不相關(guān)的抗原，并將本發(fā)明2C1 (SEQ ID NO :107)的FynSH3_來源的多肽作為結(jié)合劑。本發(fā)明2C1(SEQ ID NO :107)的FynSH3-來源的多肽僅結(jié)合人和食蟹猴IL-17A。未能檢測到與任何其它抗原的結(jié)合。在圖右邊(虛線右邊)，顯示對人IL-17C的ELISA信號，其通過在另一天用人IL-17A對照而測定。圖例hIL-17A :人白細(xì)胞介素17A，hIL-17B :人白細(xì)胞介素17B，hIL_17D :人白細(xì)胞介素17D，hIL-17E :人白細(xì)胞介素17E，hIL-17F :人白細(xì)胞介素17F，小鼠IL-17A :小鼠白細(xì)胞介素17A，大鼠IL-17A :大鼠白細(xì)胞介素17A，犬IL-17A :犬白細(xì)胞介素17A，cyno I1-17A 食蟹猴白細(xì)胞介素17A，EDB :纖連蛋白的外結(jié)構(gòu)域B，hIL-6 :人白細(xì)胞介素6，hTNF a :人腫瘤壞死因子a，卵白蛋白來自雞蛋清的白蛋白，BSA:牛血清白蛋白陰性對照沒有抗原用于包被，hIL-17C :人白細(xì)胞介素17C。

圖10描述在用食蟹猴IL_17A(由包涵體再折疊的)包被的芯片上的本發(fā)明2C1 (SEQ ID NO :107)的 Fyn SH3-來源的多肽的 Biacore 傳感圖。圖11顯示Fe融合蛋白的SDS PAGE分析。第I道完整范圍的彩色蛋白標(biāo)記物(GE Healthcare)，第2道2C1-Fc (SEQ ID NO :130)，第3道完整范圍的彩色蛋白標(biāo)記物(GE Healthcare)，第 4 道2Cl-m5-Fc (LALA) (SEQ ID NO : 133)，第 5 道2Cl-mlO_Fc (LALA)(SEQ ID NO :134)，第 6道2Cl-ml5-Fc (LALA) (SEQ ID NO :135)，第 7道2Cl-m5E-Fc (LALA)(SEQ ID NO :132)，第 8 道2Cl-Fc(LALA)(SEQ ID NO :131)。圖12顯示與4°C下在PBS中儲存的標(biāo)準(zhǔn)對照2Cl_Fc(SEQ ID NO :130) (x)相比，在37°C下人血清中儲存5天后結(jié)合IL-17A的2Cl_Fc(SEQ ID NO :130) ( ·)的ELISA0圖13顯示在單次靜脈內(nèi)注射到小鼠中后，2C1-Fc (LALA) (SEQ ID NO :131)在不同時(shí)間點(diǎn)的血清濃度。將哺乳動物細(xì)胞中產(chǎn)生的2C1-Fc (LALA)融合蛋白(SEQ ID NO :131)經(jīng)靜脈內(nèi)(iv)(n = 5)注射(40yg/動物)到小鼠中。PK圖的最后4個時(shí)間點(diǎn)用于計(jì)算2C1-Fc融合蛋白的最終半衰期(53小時(shí))。圖14顯示急性炎癥模型中本發(fā)明抗-IL-17Fyn SH3-來源的多肽2C1 (SEQ ID NO:107)抑制人IL-17A誘導(dǎo)的KC產(chǎn)生。經(jīng)皮下注射3 μ g人IL-17A(IL-17)、PBS (PBS)、3 μ g 人 IL-17A 與 17μ g 本發(fā)明單體 Fyn SH3-來源的多肽 2C1 (SEQ ID NO : 107) (IL-17+2C1)、3 μ g人IL-17A與16 μ g野生型Fyn SH3單體(IL-17+野生型)、僅17 μ g本發(fā)明單體FynSH3-來源的多肽2C1(SEQ ID NO :107) (2C1)或僅16 μ g野生型Fyn SH3單體(野生型)的2小時(shí)后，取血液樣品并定量小鼠-血清中的KC水平。顯示4只小鼠/組的平均KC水平(土SD)，只有野生型對照組(不含或含IL-17A的Fyn SH3)除外，其中顯示3只小鼠的平均水平(土 SD)。圖15描述急性炎癥模型中2C1-Fc融合蛋白(SEQ ID NO :130)抑制人IL-17A誘導(dǎo)的KC產(chǎn)生。靜脈內(nèi)注射2Cl-Fc/IL-17:44yg的2Cl-Fc(SEQ ID NO : 130)，隨后皮下注射3yg人IL-17A。在給予IL-17A 2小時(shí)后，從小鼠中取血液樣品并且通過ELISA測量KC血清水平。如下進(jìn)行對照實(shí)驗(yàn)PBS/IL-17 :靜脈內(nèi)注射PBS，隨后皮下注射IL-17 ；2C1-Fc/PBS :靜脈內(nèi)注射2Cl-Fc(SEQ ID NO :130)，隨后皮下注射BPS ；PBS/PBS :靜脈內(nèi)注射PBS，隨后皮下注射PBS ;顯示3-5只小鼠/組的平均KC水平(土SD)。
實(shí)施例實(shí)施例I :如通過單克降噬菌體ELISA測定的，本發(fā)明Fyn SH3-來源的多肽結(jié)合IL-17A。方法將編碼SEQ ID NO :1至116中所示氨基酸序列的DNA克隆到噬菌粒載體pHENl中，如 Grabulovski 等(Grabulovski 等· (2007) JBC, 282,第 3196-3204 頁)中對 FYN SH3 文庫所述。按照標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行曬菌體的制備(Viti,F等·(2000)Methods Enzymol. 326,480-505)。含噬菌體的單克隆細(xì)菌上清液用于ELISA:將生物素化的IL-17A(購自R&DSystems,依據(jù)制造商的說明用NHS-PE04-生物素(Pierce)進(jìn)行生物素化)固定在鏈霉抗生物素-包被的孔(Streptaffells, High Bind, Roche)上，在用 PBS、2%牛奶(Rapilait,Migros, Switzerland)封閉后，施用20 μ I的PBS、10%牛奶和80 μ I的噬菌體上清液。在孵育Ih并洗滌后，用抗-M13-HRP抗體綴合物(GE Healthcare)檢測結(jié)合的噬菌體。通過加入BM藍(lán)色POD底物(Roche)來進(jìn)行過氧化物酶活性的檢測，并且通過加入IM H2SO4終止反應(yīng)。通過DNA測序來驗(yàn)證結(jié)合劑的DNA序列(BigDye Terminator v3. I循環(huán)測序試劑盒，ABI PRISM3130 Genetic Analyzer, Applied Biosystems)。結(jié)果Fyn SH3-來源的IL-17A結(jié)合劑的氨基酸序列示于如序列表中所附的SEQ ID NO:I至116中。 實(shí)施例2 :本發(fā)明的Fyn SH3-來源的多肽高親和力地結(jié)合人重組IL-17A。該實(shí)施例顯示不同形式的Fyn SH3-來源的IL-17A-結(jié)合多肽的克隆及表達(dá)，以及通過尺寸排阻色譜和表面等離振子共振實(shí)驗(yàn)來表征這些多肽。a) Fyn SH3-來源的IL-17A-結(jié)合多肽的克隆及表達(dá)將選擇的Fyn SH3-來源的IL-17A-結(jié)合多肽(克隆Bl_2 SEQ ID NO :39，克隆E4 SEQ ID勵57和克隆2(1 SEQ ID NO :107)克隆到胞質(zhì)表達(dá)載體pQE_12中并且表達(dá)以及純化，如 Grabulovski 等(Grabulovski 等.(2007) JBC, 282,第 3196-3204 頁)描述的。b)克隆并表達(dá)與人IgGl抗體的Fe部分融合的Fyn SH3-來源的IL-17A-結(jié)合多肽對克隆E4和2C1(SEQ ID NO :57和SEQ ID NO : 107)進(jìn)行克隆并且表達(dá)為含人IgGl抗體的Fe部分的融合蛋白(參見下文的程序；SEQ ID NO :117和118)。此外，克隆具有10個氨基酸的接頭的2C1 二聚體[(2C1)2-Fc]并表達(dá)為Fe融合蛋白(SEQ ID NO :119)。使用引物fm5(5，ATCGGGA-TCCGACAAAACTCACACATGCC3，，SEQ ID NO :121)和 fm6(5’ TACGAAGCT-TTCATTTACCCGGAGACAGGG 3’，SEQ ID NO :122)并且將市售pFUSE-hIgGl-Fc2 (Invivogen)真核載體用作模板，PCR擴(kuò)增人IgGl的Fe部分。用BamHI/HindHI消化所得PCR產(chǎn)物，并且與先前用相同酶消化的pASK_IBA2載體(IBA-Biotagnology)連接，從而產(chǎn)生新的載體pAF。用fm7(5，ATATCACCATGGGGCCGGAGTGACACTCTTT-GTGGCCCTTTATG 3，，SEQ ID NO:123)和 fm8(5’ CGTAGGA-TCCCTGGATAG-AGTCAACTGGAGC 3’，SEQ ID NO : 124)，PCR 擴(kuò)增克隆E4和2C1(SEQ ID NO :57和SEQ ID NO :107)的遺傳信息。為制備與Fe融合的2C1 二聚體，將2C1DNA模板用于兩次獨(dú)立的PCR。在第一反應(yīng)中，使用引物47b. fo (5’AGA GCC ACCTCC GCCTGA ACC GCC TCC ACC CTG GAT AGA GTC AAC TGG AGC CAC3，，SEQ ID NO :125)和52. ba(5’ GAC TAA CGA GAT CGC GGA TCCGGA GTG ACA CTC TTT GTG GCC CTT TAT 3’，SEQID NO :126)，并且在第二 PCR 中，使用引物 48b. ba (5，GGT GGA GGC GGT TCAGGC GGA GGTGGC TCT GGA GTG ACA CTC TTT GTG GCC CTTTAT 3，，SEQ ID NO : 127)和51. fo(5，ATC CCAAGC TTA GTG ATGGTG ATG GTG ATG CAG ATC CTC TTC TGA GAT GAG TTT TTGTTC ACC CTGGAT AGA GTC AAC TGG AGC CAC 3’，SEQ ID NO :128)。用PCR將兩個DNA片段組合，在兩結(jié)構(gòu)域之間產(chǎn)生具有10個氨基酸接頭(GGGGSGGGGS，SEQ ID NO :120)的2C1同二聚體。如針對2C1單體所描述的使用引物fm7和fm8進(jìn)一步擴(kuò)增所得DNA片段。隨后用NcoI/BamHI消化所得PCR產(chǎn)物并且將其克隆到雙重消化的周質(zhì)表達(dá)載體PAF中。將質(zhì)粒電穿孔到大腸桿菌TGl中并且用O. 2 μ g/ml無水四環(huán)素誘導(dǎo)蛋白質(zhì)表達(dá)。將細(xì)菌培養(yǎng)物在25°C下于旋轉(zhuǎn)搖床中培養(yǎng)過夜，并且在單個蛋白A-親和色譜步驟中從周質(zhì)級分純化Fynomer-Fc融合蛋白。用20 μ I的蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行SDSPAGE(Invitrogen)分析。c)尺寸排阻色譜(SEC)
使用Superdex 75 柱(10/300)或 Superdex 75Short Column(5/150)(GEHealthcare)在AJCTA FPLC系統(tǒng)上進(jìn)行尺寸排阻色譜(SEC)。d)親和力測量使用BIAcore 3000儀器(Biacore)進(jìn)行親和力測量。為分析生物素化IL-17A與單體的Fyn SH3-來源的IL-17A-結(jié)合多肽之間，以及生物素化IL-17A與E4-Fc(SEQ ID NO:117)之間的相互作用，使用鏈霉抗生物素SA芯片(Biacore)并分別固定化1300和510RU生物素化IL-17A。運(yùn)行緩沖液為PBS,O. I % NaN3和表面活性劑P20 (Biacore)。以20 μ I/min的流速并且注射不同濃度Fyn SH3-來源的IL-17A-結(jié)合多肽來測量相互作用。為分析IL-17A與2C1-Fc融合物以及(2C1)2_Fc融合物之間的相互作用，將CM5芯片(Biacore)用2900RU山羊抗-人IgG Fe-特異性抗體(Jackson Immunoresearch)包被。運(yùn)行緩沖液為HBS-EP (Biacore)。通過以10 μ Ι/min的流速注射約250至275RU Fe融合蛋白，隨后通過以30μ Ι/min的的流速注射不同濃度的IL_17A(R&D Systems)來測量相互作用。使用BIA評估3. 2RC1軟件評估相互作用的所有動力學(xué)數(shù)據(jù)(各自的kon/koff)。e)結(jié)果在未優(yōu)化條件下在搖瓶中，本發(fā)明單體的Fyn SH3-來源的IL-17A-結(jié)合多肽的表達(dá)產(chǎn)率范圍為60至85mg/升細(xì)菌培養(yǎng)物。Fe-融合蛋白的表達(dá)產(chǎn)率為O. 2至O. 4mg/升(表I)。Fe-融合蛋白具有所附SEQ ID NO :117至119中列舉的序列。表I.在未優(yōu)化條件下在搖瓶中，大腸桿菌中的細(xì)菌培養(yǎng)物在純化后的表達(dá)產(chǎn)率
權(quán)利要求
1.一種包含選自以下的氨基酸序列的多肽 (i)(G/E) VTLFVALYDY- (X) a_D_ (X) b_SFHKGEKF_ (X) C_I_ (X) d_G_ (X) e-ffff- (X) f_A_ (X)g-SLTTG- (X) hGYIPSNYVAPVDSIQ (I) 其中a至h為O至20， 優(yōu)選a為I至10、更優(yōu)選2至8、最優(yōu)選6 ； 優(yōu)選b為O至5、更優(yōu)選I至3、最優(yōu)選I ; 優(yōu)選c為O至5、更優(yōu)選I至3、最優(yōu)選I ; 優(yōu)選d為I至10、更優(yōu)選3至9、最優(yōu)選5或7 ; 優(yōu)選e為O至5、更優(yōu)選I至3、最優(yōu)選I ; 優(yōu)選f為O至5、更優(yōu)選I至3、最優(yōu)選I ; 優(yōu)選g為O至5、更優(yōu)選I至3、最優(yōu)選I ; 優(yōu)選h為O至6、更優(yōu)選I至3、最優(yōu)選I或2 ; (ii)與⑴具有至少70%、優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少90%、最優(yōu)選至少95%氨基酸序列同一性的氨基酸序列； (iii)由與編碼(i)的核酸的互補(bǔ)鏈雜交的核酸編碼的氨基酸序列，優(yōu)選在嚴(yán)格條件下雜交； (iv)可通過至少一個氨基酸的取代、添加和/或缺失而得到的(i)至(iii)的片段或功能衍生物， 其中所述多肽結(jié)合IL-17A。
2.權(quán)利要求I的多肽，所述多肽具有與人IL-17A的特異性結(jié)合親和力，優(yōu)選Kd為10_7至10_12M、更優(yōu)選10_8至10_12M、最優(yōu)選低于10_12M。
3.權(quán)利要求I或2的多肽，所述多肽選自SEQID NO :1至119或其功能衍生物。
4.一種融合蛋白，所述融合蛋白包含與藥學(xué)上和/或診斷上的活性組分融合的權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)的多肽。
5.權(quán)利要求4的融合蛋白，其中所述組分為細(xì)胞因子，優(yōu)選選自IL-2、IL-12、TNF-a、IFN a、IFN β,IFN Y、IL-10、IL-15、IL-24、GM-CSF、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-II、IL-13、LIF、CD80、B70、TNF β、LT-β、CD-40 配體、Fas-配體、TGF-β、IL-1 α 和IL-I β ο
6.權(quán)利要求4的融合蛋白，其中所述組分為毒性化合物，優(yōu)選小的有機(jī)化合物或多肽，更優(yōu)選選自以下的毒性化合物加利車霉素、美登木素生物堿、新制癌菌素、埃斯波霉素、達(dá)內(nèi)霉素、可達(dá)菌素、maduropeptin、多柔比星、柔紅霉素、auristatin、蓖麻毒蛋白-A鏈、蒴蓮根毒蛋白II、截短的假單胞菌外毒素A、白喉毒素和重組白樹毒素。
7.權(quán)利要求4的融合蛋白，其中所述組分為趨化因子，優(yōu)選選自IL-8、GROa、GROβ、GRO Y、ENA-78、LDGF-PBP, GCP-2、PF4、Mig、IP-10、SDF-I a / β、BUNZ0/STRC33、I-TAC,BLC/BCA-1、MIP-I a、MIP-I β、MDC, TECK、TARC, RANTES, HCC-U HCC-4、DC-CK1、MIP-3 a、ΜΙΡ-3β、MCP-1-5、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子-2、1-309、MPIF-U6Ckine、CTACK, MEC、淋巴細(xì)胞趨化蛋白和CXXXC趨化因子。
8.權(quán)利要求4的融合蛋白，其中所述組分為突光染料,優(yōu)選選自AlexaFluor或Cy染料的組分。
9.權(quán)利要求4的融合蛋白，其中所述組分為光敏劑，優(yōu)選光毒的紅色熒光蛋白'KillerRed或血卩卜啉。
10.權(quán)利要求4的融合蛋白，其中所述組分為前凝血劑因子，優(yōu)選組織因子。
11.權(quán)利要求4的融合蛋白，其中所述組分為用于前藥活化的酶，優(yōu)選選自羧肽酶、葡糖醛酸糖苷酶和葡糖苷酶的酶。
12.權(quán)利要求4的融合蛋白，其中所述組分為來自以下的放射性核素Y-發(fā)射同位素，優(yōu)選99mTc、123I、mIn，或者正電子發(fā)射體，優(yōu)選18F、64Cu、68Ga、86Y、124I，*# β -發(fā)射體，優(yōu)選mI、9°Y、177Lu、67Cu，或者 α-發(fā)射體，優(yōu)選 213Bi、211At。
13.權(quán)利要求4的融合蛋白，其中所述組分為功能Fe結(jié)構(gòu)域，優(yōu)選人功能Fe結(jié)構(gòu)域，更優(yōu)選包含多聚體的、優(yōu)選二聚體的權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)的多肽的人功能Fe結(jié)構(gòu)域。
14.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的多肽或融合蛋白，其還包含調(diào)節(jié)血清半衰期的組分，優(yōu)選選自聚乙二醇(PEG)、免疫球蛋白和白蛋白-結(jié)合肽的組分。
15.權(quán)利要求4至14中任一項(xiàng)的融合蛋白，其包含權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)的多肽。
16.包含選自SEQID NO :1至119或其功能衍生物的多肽的融合蛋白。
17.權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)的多肽或權(quán)利要求4至16中任一項(xiàng)的融合蛋白，所述融合蛋白包含權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)多肽的多聚體，優(yōu)選二聚體或三聚體。
18.一種分離并純化的核酸，其包含 (i)編碼權(quán)利要求I 或 2 的多肽，優(yōu)選編碼(G/E) VTLFVALYDY-(X)6-D-(X)-SFHKGEKF-(X) rI-(X) 5_7-G- (X) !-Wff- (X) -A- (X) -SLTTG- (X) h-GYIPSNYVAPVDSIQ 的核酸； (ii)具有與(i)的核酸序列有至少70%、優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少90%、最優(yōu)選至少95%序列同一性的序列的核酸； (iii)與(i)或(ii)的核酸的互補(bǔ)鏈雜交的核酸； (iv)核酸，其中所述核酸可通過或(iii)的核酸之一的取代、添加和/或缺失而得到； (V)與編碼權(quán)利要求I或2的多肽的(i)的核酸的互補(bǔ)鏈雜交的(i)至(iv)的核酸中任一種的片段。
19.權(quán)利要求18的核酸，所述核酸編碼權(quán)利要求I至17中任一項(xiàng)的多肽或融合蛋白。
20.權(quán)利要求18或19的核酸，其中所述核酸為DNA、PNA或RNA。
21.權(quán)利要求18至20中任一項(xiàng)的核酸，其中所述核酸有效連接至啟動子，優(yōu)選連接至選自以下原核啟動子的啟動子T5啟動子/Iac操縱基因元件、Τ7啟動子/Iac操縱基因元件，或選自以下真核啟動子的啟動子hEFl-HTLV、CMV enh/hFerL啟動子。
22.—種重組載體，所述重組載體包含權(quán)利要求18至21中任一項(xiàng)的核酸，其中所述載體優(yōu)選能夠產(chǎn)生權(quán)利要求I至17中任一項(xiàng)的多肽或融合蛋白。
23.權(quán)利要求22的重組載體，其選自pQE載體、pET載體、pFUSE載體、pUC載體、YAC載體、噬菌粒載體、噬菌體載體、用于基因治療的載體例如逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺伴隨病毒。
24.—種宿主細(xì)胞,其包含前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的核酸和/或載體。
25.一種抗體，其特異性結(jié)合權(quán)利要求I至3中任一項(xiàng)的多肽。
26.一種雜交瘤細(xì)胞系，其表達(dá)權(quán)利要求26的單克隆抗體。
27.一種藥物組合物，其包含前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的多肽或融合蛋白、核酸和/或重組載體以及任選的藥學(xué)上可接受的載體。
28.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的多肽或融合蛋白、核酸和/或重組載體用于制備藥物的用途，所述藥物優(yōu)選用于治療和/或預(yù)防選自 IL-17A-和Thl7-相關(guān)疾病或醫(yī)學(xué)病癥的疾病或醫(yī)學(xué)病癥。
29.權(quán)利要求28的用途，其中所述疾病或醫(yī)學(xué)病癥選自炎性、自身免疫性和/或骨丟失相關(guān)的疾病和醫(yī)學(xué)病癥。
30.權(quán)利要求28和30的用途，其中所述疾病或醫(yī)學(xué)病癥選自關(guān)節(jié)炎、優(yōu)選類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性進(jìn)行性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、腸病性關(guān)節(jié)炎和變形性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性疾病、脊椎關(guān)節(jié)病、強(qiáng)直性脊椎炎、萊特爾綜合征、超敏反應(yīng)(包括呼吸道超敏反應(yīng)和皮膚超敏反應(yīng))、變態(tài)反應(yīng)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎性肌肉病癥、多軟骨炎、硬皮病、韋格納肉芽腫病、皮肌炎、史-約綜合征、慢性活動性肝炎、重癥肌無力、牛皮癬、特發(fā)性口炎性腹瀉、自身免疫炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、腸易激綜合征、內(nèi)分泌性眼病、格雷夫斯病、結(jié)節(jié)病、多發(fā)性硬化、原發(fā)性膽汁性肝硬化、青少年糖尿病(I型糖尿病)、自身免疫血液病癥、溶血性貧血、再生障礙性貧血、單純紅細(xì)胞性貧血、特發(fā)性血小板減少癥、色素層炎(前眼色素層炎和后色素層炎)、干性角膜結(jié)膜炎、春季角膜結(jié)膜炎、間質(zhì)性肺纖維化、腎小球性腎炎(具有和不具有腎病綜合征)、特發(fā)性腎病綜合征或微小病變腎病、腫瘤、皮膚炎性疾病、角膜炎癥、肌炎、骨植入物松弛、代謝紊亂、動脈粥樣硬化、糖尿病，和血脂障礙、骨丟失、骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、呼吸道阻塞疾病或呼吸道炎性疾病的牙周疾病、哮喘、支氣管炎、塵肺病、肺氣腫、急性及超急性炎性反應(yīng)、涉及IL-17A-介導(dǎo)的TNF- α的疾病、急性感染、感染性休克、內(nèi)毒素性休克、成年呼吸窘迫綜合征、腦膜炎、肺炎、嚴(yán)重?zé)齻翰≠|(zhì)、衰竭綜合征、中風(fēng)、皰疹性基質(zhì)性角膜炎以及干眼疾病。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的IL-17抑制多肽、相應(yīng)融合蛋白、組合物及其醫(yī)藥用途。
文檔編號C07K14/435GK102869678SQ201080049435
公開日2013年1月9日 申請日期2010年8月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月27日
發(fā)明者D·格拉布洛夫斯基, M·賽拉斯梅爾科, F·穆爾朗, S·S·布拉克, J·貝欽格, N·巴恩齊格, S·巴泰 申請人:科瓦根股份公司