国产精品1024永久观看,大尺度欧美暖暖视频在线观看,亚洲宅男精品一区在线观看,欧美日韩一区二区三区视频,2021中文字幕在线观看

  • <option id="fbvk0"></option>
    1. <rt id="fbvk0"><tr id="fbvk0"></tr></rt>
      <center id="fbvk0"><optgroup id="fbvk0"></optgroup></center>
      <center id="fbvk0"></center>

      <li id="fbvk0"><abbr id="fbvk0"><dl id="fbvk0"></dl></abbr></li>

      用于在視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層變性治療中使用的針對rgma蛋白質(zhì)的單克隆抗體的制作方法

      文檔序號:3570995閱讀:389來源:國知局
      專利名稱:用于在視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層變性治療中使用的針對rgm a蛋白質(zhì)的單克隆抗體的制作方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本申請描述了用于在視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層變性(RNFL)治療中使用的RGM A結(jié)合蛋白,特別是單克隆抗體,且特別是其CDR移植、人源化形式,其具有與RGM A結(jié)合且阻止RGM蛋白質(zhì)與RGM A受體和其他RGM A結(jié)合蛋白結(jié)合的能力,并且因此中和RGM A的功能,以及針對RNFL變性在治療或預防上治療哺乳動物的方法。
      背景技術(shù)
      在哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)內(nèi)的損傷、炎癥攻擊或神經(jīng)變性疾病后的軸突再生幾乎一直是不可能的;結(jié)果取決于在CNS中的神經(jīng)纖維再生長的固有能力和在CNS內(nèi)定位于病損或損害部位的微環(huán)境中的抑制因子之間的平衡,所述抑制因子活躍阻止再生長,并且因此阻止受損纖維束的再生。已確定由少突膠質(zhì)細胞生成的CNS髓磷脂和病損瘢痕是關(guān)于在損傷早期中軸突生長的最相關(guān)的不允許結(jié)構(gòu),通過在體外以及在體內(nèi)促使生長錐坍塌和神經(jīng)突生長抑制,從而導致軸突再生長的直接抑制。RGM蛋白質(zhì),在CNS髓磷脂和瘢痕組織上的主要抑制因子已得到鑒定(Monnier 等人,Nature 419 :392 - 395, 2002 ;Schwab 等人,Arch. Neurol.62 :1561 - 8,2005a ;Schwab 等人及/r. J. Neurosci. 21 :1569 - 76,2005 b ;Hata 等人 J.Cell Biol. 173 :47 - 58,2006 ;關(guān)于綜述,參見Mueller 等人,Philos. Trans. R. Soc.Lond. B Biol. Sci. 361 :1513 - 29, 2006 ;Yamashita 等人 Ci/rr. Opin. Neurobiol. 17:29 - 34,2007)。RGM蛋白質(zhì)在死于腦外傷或缺血損傷的人中的損害或病損部位處是上調(diào)的(Schwab等人,ArcA. Neurol. 62 :1561 - 8, 2005a),并且在具有脊髓損傷的大鼠中的病損部位處是上調(diào)的(Schwab等人及/r. J. Neurosci. 21 1569 - 76, 2005 b ;Hata等人J. Cell Biol. 173 :47 - 58,2006,關(guān)于綜述參見Mueller 等人,Philos. Trans. R. Soc.Lond. B Biol. Sci. 361 :1513 - 29, 2006 ;Yamashita 等人 Ci/rr. Opin. Neurobiol. 17:29 - 34,2007)。此外,使用來自多發(fā)性硬化患者和健康人的臨床樣品的第一手數(shù)據(jù)暗示人RGM A在患有MS的患者的腦脊髓液中是上調(diào)的(數(shù)據(jù)未顯示)。為了評估RGM A特異性多克隆抗體的再生促進潛力,在中重度脊髄損傷模型中施用抗體,其中在胸椎水平9/10的約60%脊髄被橫切。組織學檢查掲示此類病損切斷皮質(zhì)脊髓束的所有背側(cè)和外側(cè)纖維。經(jīng)由泵局部給予2周的RGM A特異性多克隆抗體誘導受損神經(jīng)纖維的長距離再生(Hata等人,プCell BioL 173 :47 - 58,2006)。數(shù)百根神經(jīng)纖維延伸經(jīng)過病損部位,并且最長的纖維再生超出病損多過10 mm,而在對照抗體處理的動物中未發(fā)現(xiàn)病損遠側(cè)的再生纖維。與對照抗體處理的、脊柱受損的大鼠比較,抗RGM A處理的大鼠的功能恢復得到顯著改善,從而證明RGM A是有力的神經(jīng)再生抑制劑和用于在特征在于軸突損害或神經(jīng)纖維損傷的適應癥中刺激恢復的有價值靶(Hata等人,プ Cell Biol. 173 :47 - 58,2006 ;Kyoto 等人Tfes. 1186 :74 - 86,2007)。 此外,用功能阻斷多克隆抗體中和RGM A蛋白質(zhì)不僅刺激在脊柱受損大鼠中損害神經(jīng)纖維的再生長,還增強其突觸形成,從而使得能夠再形成或恢復損害神經(jīng)元回路(Kyoto等人Brain Res. 1186:74 - 86,2007)。rgm基因家族涵蓋3種不同基因,其中2種,a和6在CNS產(chǎn)生RGM A和RGMB蛋白質(zhì)的哺乳動物中表達,而第三個成員,rgm c在外周中表達(Mueller等人,Philos.Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 361 :1513 - 29,2006),其中 RGM C 在鐵代謝中起重要作用。在體外,RGM A通過與Neogenin結(jié)合抑制神經(jīng)突長出,所述Neogenin已鑒定為RGM 受體(Rajagopalan 等人艙ヵ Cell Biol. :6 (8),756 - 62,2004)。Neogenin 首先被描述為netrin結(jié)合蛋白(Keino-Masu等人CWム87 (2) :175 - 85,1996)。這是重要發(fā)現(xiàn),因為Netrin-I與Neogenin或其緊密相關(guān)受體DCC (在結(jié)腸直腸癌中是缺失的)的結(jié)合已報道為刺激而不是抑制神經(jīng)突生長(Braisted等人プNeurosci. 20 :5792 - 801,2000)。阻斷RGM A因此通過使得Neogenin能夠結(jié)合其神經(jīng)突生長刺激配體Netrin而釋放RGM介導的生長抑制?;谶@些觀察,中和RGM A可以假定為在人脊髄損傷的模型中優(yōu)于中和Neogenin。除RGM A與Neogenin結(jié)合和誘導神經(jīng)突生長抑制外,RGM A或B與骨形態(tài)發(fā)生 蛋白BMP-2和BMP-4的結(jié)合可以代表關(guān)于成功神經(jīng)再生和功能恢復的另ー個障礙(Mueller等)K, Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 361 :1513 - 29,2006)。RNFL是視網(wǎng)膜的最內(nèi)層,并且主要由來自組成視神經(jīng)的神經(jīng)節(jié)細胞神經(jīng)元的軸突組成。在RNFL內(nèi)的軸突直到它們經(jīng)過眼的篩板才是有髓的。RNFL的這個結(jié)構(gòu)特征使得它成為檢查在CNS內(nèi)的神經(jīng)變性過程的理想組織,因為RNFL厚度反映軸突的貢獻,而無髓磷脂變性的潛在結(jié)構(gòu)效應(Frohman等人,Arch. Neurol. 65 (I) :26 - 35,2008)(還參見

      圖19)。Frisen, L.和Hoyl,W. F.首次報道了在具有多發(fā)性硬化(MS)的患者中RNFL的變薄(Fris6n,L.和 Hoyl, W. F. , Arch. Opthalmol. 92:91 - 97,1974)。在健康個體中,RNFL到15歲時僅約110-120 Mm厚,并且最正常的個體在視網(wǎng)膜厚度中將喪失約0,017 % /年,這經(jīng)過60年等于約10-20 Mm (Kanamori. A.等人,Ophthalmologica 217 :273 - 278,2003)。與這相反,已經(jīng)歷急性視神經(jīng)炎(AON)的具有MS的約75%患者顯示在最初炎癥事件后,在僅約3-6個月的時期內(nèi)10 - 40 Mm RNFL厚度喪失。還報道低于約75 Mm水平的RNFL變薄引起視覺功能的衰退(Costello等人,Ann.Neurol. 59 :963 - 969,2006)。由Frohman等人提出了 RNFL用于建模響應MS治療的神經(jīng)保護用途的潛在效用,其還描述了允許測量RNFL厚度的作為重現(xiàn)性成像技術(shù)的光學相干斷層掃描(OTC) (Frohman 等人,參見上文;和 Frohman 等人;Nature Clinical PracticeNeurology 4:12,664 - 675,2008)。RNFL的變性在眾多其他疾病的過程期間也觀察到,如糖尿病視網(wǎng)膜病、缺血性視神經(jīng)病、X染色體連鎖視網(wǎng)膜劈裂癥、藥物造成的視神經(jīng)病、視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良、年齡相關(guān)的黃斑變性、特征在于視神經(jīng)乳頭玻璃疣的眼病、特征在于光感受器變性的遺傳決定子的眼病、常染色體隱性遺傳視錐視桿營養(yǎng)不良、線粒體病癥伴視神經(jīng)病、i.p.弗里德賴希(Friedreich’s)共濟失調(diào)、阿爾茨海默氏病、輕度認知損害(MCI)、帕金森氏病和朊病毒病、i.p.克雅病(i.p. Creutzfeld-Jakob),瘙庫病(Scrapie), BSE (還參見 Sakata LM 等人Clin. Experiment Ophtalmol. 2009,37 90 - 99 ;Morris 例等kOptometry 2009,80,83-100 ;Kallenbach K. & Frederiksen J. Eur. J. Afearo7. 2007,14 :841-849 ;Trick 等人 J. Neuroophtthalmol. 2006,26 :284-295 ;Tantri A.等)^Surv. Ophtalmol. 49 :214-230)。本領(lǐng)域存在關(guān)于允許直接治療RNFL變性的治療方法的需要。待由本發(fā)明解決的問題因此是提供允許如在大量疾病狀況中觀察到的RNFL變性的直接治療特別是神經(jīng)保護治療的方法。發(fā)明概述
      本發(fā)明的一個實施方案涉及使用能夠結(jié)合RGM A的抗體神經(jīng)保護治療如在大量疾病狀況中觀察到的RNFL變性。另ー個實施方案涉及單克隆抗體用于治療RNFL變性的用途,所述單克隆抗體阻斷RGM A且阻止RGM A及其受體和/或結(jié)合蛋白即Neogenin和BMP-2、BMP-4之間的相互作用。 另ー個實施方案是治療RNFL變性的方法,其包括給有此需要的哺乳動物施用有效量的組合物的步驟,所述組合物包含能夠結(jié)合RGM A的抗體。附圖簡述
      圖IA顯示了在ELISA測定中與hRGM A結(jié)合的單克隆抗體。圖IB描述了與HEK 293細胞中表達的hRGM A結(jié)合的單克隆抗體。圖IC描述了與HEK 293細胞中表達的大鼠RGM A結(jié)合的單克隆抗體。圖2顯示了全長RGM A與Neogenin的結(jié)合。MAB 5F9抑制全長fc偶聯(lián)的hRGM A與Neogenin的結(jié)合。圖3描述了全長RGM A與BMP-4的結(jié)合。MAB 5F9抑制fc偶聯(lián)的全長hRGM A片段(47- 422)與BMP-4的結(jié)合。圖4描述了 RGM A片段0與BMP-4的結(jié)合。MAB 5F9抑制fc偶聯(lián)的hRGM A片段
      0(47-168)與 BMP-4 的結(jié)合。圖5描述了全長RGM A與BMP-2的結(jié)合。MAB 5F9抑制fc偶聯(lián)的全長hRGM A片段(47- 422)與BMP-2的結(jié)合。圖6是顯示在NTera細胞神經(jīng)突長出測定中RGM A片段的mAb5F9中和的顯微照片組合。在具有人Ntera聚集體的神經(jīng)突生長測定中,MAB 5F9中和fc綴合的、有力hRGM A抑制劑片段的長出抑制活性。A.對照培養(yǎng),在層粘連蛋白上的Ntera神經(jīng)元生長,B.在層粘連蛋白-hRGM A 片段(47 - 168)底物上,C. - E.在 0. I 吒/ml MAB 5F9(C.)、1 吒/mlMAB 5F9 (D. )、10 l^g/ml MAB 5F9 (E)的存在下,在層粘連蛋白-hRGM A 片段(47 - 168)底物上。圖7顯示了 NTera2測定結(jié)果的定量分析。在具有人Ntera聚集體的神經(jīng)突生長測定中,MAB 5F9劑量依賴性中和fc綴合的、有力hRGM A抑制劑片段(片段0,47 - 168)的長出抑制活性。圖8顯示了 SH-SY5Y條紋測定的定量分析。MAB 5F9在條紋膜地毯(stripemembrane carpets)中中和通過條紋誘導的排斥,所述條紋由人神經(jīng)元細胞的全長人RGM A組成。在不存在MAB 5F9的情況下(A)或在低MAB濃度的存在下,SH-SY5Y神經(jīng)元優(yōu)先避免RGM A條紋。這種行為通過增加濃度的MAB 5F9得到逆轉(zhuǎn)(B至D)。在最高的MAB濃度下(10 l^g/ml) CE),與膠原I條紋比較,SH-SY5Y神經(jīng)元顯示對于RGM A條紋的強優(yōu)先。圖9概括了 mABs 5F9和8D1結(jié)合特征的定量分析。mABs 5F9和8D1在不同濃度下在 hRGM A - neogenin、hRGM A - BMP-2 和 hRGM A - BMP-4 結(jié)合測定中進行評估。圖10顯示了在SH-SY5Y趨化現(xiàn)象測定中關(guān)于人源化5F9抗體(h5F9. 21、h5F9. 23、h5F9. 25)的hRGM A的化學排斥活性的中和活性。圖11顯示了在視神經(jīng)損傷的動物模型中局部5F9應用的體內(nèi)神經(jīng)再生活性。在視神經(jīng)壓傷的大鼠動物模型中MAB 5F9的局部應用中和RGM A且刺激損害視神經(jīng)軸突的再生生長。在5F9處理的動物(A)中,與不與大鼠RGM A結(jié)合的對照MAB 8D1 (B)比較,許多GAP-43陽性纖維延伸超過壓傷部位。圖12A和圖12B顯示在視神 經(jīng)損傷的動物模型中局部5F9應用的定量分析。(A)5F9而不是對照MAB 8D1顯著增加再生GAP-43陽性纖維的數(shù)目。在距離200 Mm、400 Mm和600 Mm處,在用5F9處理的動物中觀察到顯著更多的纖維(p < 0. 05),并且在1200 Mm處的纖維僅在5F9處理的動物而不是對照動物中發(fā)現(xiàn)。(B)與對照抗體8D1和媒介物(vehicle)對照PBS比較,5F9顯著增加在視神經(jīng)病損部位處的GAP-43陽性面積。使用Axiovision軟件(Zeiss)測量再生生長的面積(GAP-43陽性面積)。圖13顯示了在視神經(jīng)損傷的動物模型中全身性5F9應用的體內(nèi)神經(jīng)再生活性。動物在第0天和第21天時分別用2 mg/kg和10 mg/kg的5F9治療。抗體或媒介物腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)給予。大鼠視神經(jīng)的復合圖像。在5F9處理的動物(A)中,與用PBS處理的對照動物(B)比較,許多GAP-43陽性纖維延伸超過壓傷部位。壓傷部位定位于左側(cè)邊緣處,并且再生纖維用針對GAP-43的抗體染色。在5F9處理的動物而不是PBS動物中在視神經(jīng)的上和下邊上觀察到許多纖維。圖14 A和圖14 B顯示了在視神經(jīng)損傷的動物模型中全身性5F9應用的定量分析。圖15顯示了在視神經(jīng)損傷的動物模型中全身性5F9應用的體內(nèi)髓鞘再生活性。動物在第0天和第21天時分別用2 mg/kg和10 mg/kg的5F9治療。抗體或媒介物腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)給予。大鼠視神經(jīng)的復合圖像。使用針對髓磷脂標記髓磷脂堿蛋白MBP的抗體顯現(xiàn)髓鞘形成。壓傷部位定位于復合神經(jīng)的中間,并且該區(qū)域在媒介物處理的對照動物中是空的(A和B)。在5F9處理的動物中(C和D),在視神經(jīng)的中間區(qū)域(壓傷中心)觀察到許多MBP陽性結(jié)構(gòu)。圖16顯示了在視神經(jīng)損傷的動物模型中全身性5F9應用對髓鞘再生的定量作用。圖17舉例說明了抗體5F9對來自具有視神經(jīng)壓傷的動物眼的RNFL的優(yōu)良保護作用。在用5F9全身性處理的動物的視網(wǎng)膜中觀察到顯著更高密度的神經(jīng)纖維束。圖18舉例說明了抗體5F9對來自具有視神經(jīng)壓傷的動物眼的視網(wǎng)膜內(nèi)神經(jīng)元的影響。在用5F9抗體全身性處理的動物的視網(wǎng)膜中觀察到顯著更高數(shù)目的萌芽視網(wǎng)膜內(nèi)神經(jīng)元。圖19舉例說明了視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層(RNFL),這是與玻璃球(vitreous bulb)直接相鄰的層。它由視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的軸突形成。其他的層是內(nèi)叢狀層(IPL),其中無長突和雙極神經(jīng)元與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞形成突觸接觸。光感受器、水平神經(jīng)元和雙極神經(jīng)元在外叢狀層(OPL)中形成突觸。光感受器(視桿和視錐)定位于光感受器層(PRL)中。RPE是視網(wǎng)膜色素上皮(方案來自Frohman等人ArcA. Neurol. 65,26-35,2008)。發(fā)明詳述 I.術(shù)語定義除非本文另有定義,與本發(fā)明結(jié)合使用的科學和技術(shù)術(shù)語應具有由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。術(shù)語的含義和范圍應是明確的,然而,在任何潛在歧義的情況下,本文提供的定義優(yōu)先于任何字典或外部定義。進一歩地,除非上下文另有要求,単數(shù)術(shù)語應包括復數(shù),并且復數(shù)術(shù)語應包括単數(shù)。在本申請中,“或”的使用意指“和/或”,除非另有說明。此外,術(shù)語“包括”以及其他形式的使用不是限制性的。此外,術(shù)語例如“元件”或“組分”涵蓋包含一個單位的元件和組分以及包含超過ー個亞單位的元件和組分,除非另有具體說明。—般地,與本文描述的細胞和組織培養(yǎng)、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學以及蛋白質(zhì)和核酸化學和雜交結(jié)合使用的命名法和技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知且通常使用的那些。本發(fā)明的方法和技術(shù)一般根據(jù)本領(lǐng)域眾所周知且如各種一般和更具體的參考文獻中所述的常規(guī)方法執(zhí)行,所述參考文獻在本說明書自始至終引用且討論,除非另有說明。酶促反 應和純化技術(shù)根據(jù)制造商的說明書執(zhí)行,如本領(lǐng)域通常完成的或如本文描述的。與本文描述的分析化學、合成有機化學以及醫(yī)學和藥物化學結(jié)合使用的命名法以及實驗室程序和技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知且通常使用的那些。標準技術(shù)用于化學合成、化學分析、藥物制劑、配制和遞送、和患者的治療。如本說明書和附加權(quán)利要求自始至終使用的,下述術(shù)語具有下述含義
      術(shù)語“受體”和“受體抗體”指提供或編碼ー個或多個構(gòu)架區(qū)的至少80 %、至少85至少90 %、至少95 %、至少98 %或100 %氨基酸序列的抗體或核酸序列。在某些實施方案中,術(shù)語“受體”指提供或編碼ー個或多個恒定區(qū)的抗體氨基酸或核酸序列。在另外ー個實施方案中,術(shù)語“受體”指提供或編碼ー個或多個構(gòu)架區(qū)和一個或多個恒定區(qū)的抗體氨基酸或核酸序列。在ー個具體實施方案中,術(shù)語“受體”指人抗體氨基酸或核酸序列,其提供或編碼ー個或多個構(gòu)架區(qū)的至少80 %、特別是至少85 %、至少90 %、至少95 %、至少98 %或100 %氨基酸序列。依照這個實施方案,受體可以含有至少I、至少2、至少3、至少4、至少5或至少10個氨基酸殘基,其在人抗體的ー個或多個具體位置上不出現(xiàn)。受體構(gòu)架區(qū)和/或一個或多個受體恒定區(qū)可以例如衍生自或得自種系抗體基因、成熟抗體基因、功能抗體(例如本領(lǐng)域眾所周知的抗體、開發(fā)中的抗體、或商購可得的抗體)。如本文使用的,術(shù)語“抗體”泛指由4條多肽鏈,2條重(H)鏈和2條輕(L)鏈組成的任何免疫球蛋白(Ig)分子,或其任何功能片段、突變體、變體或衍生,其保留Ig分子的基本表位結(jié)合特征。此類突變體、變體或衍生抗體形式是本領(lǐng)域已知的。其非限制性實施方案在下文討論。如果抗體能夠與分子特異性反應,以從而結(jié)合分子與抗體,那么它被說成“能夠結(jié)合”分子。術(shù)語“抗體綴合物”指結(jié)合蛋白,例如與第二種化學部分例如治療劑或細胞毒劑化學連接的抗體。術(shù)語“試劑”指示化學化合物、化學化合物的混合物、生物大分子或由生物學材料制成的提取物。特別地,治療劑或細胞毒劑包括但不限于百日咳毒素、泰素、細胞松弛素B、短桿菌肽D、溴化こ啶、依米丁、絲裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、長春新堿、長春堿、秋水仙堿、多柔比星、柔紅霉素、ニ羥基炭疽菌素ニ酮、米托蒽醌、光輝霉素、放線菌素D、l-去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾和嘌呤霉素及其類似物或同系物。如本文使用的,術(shù)語“抗體構(gòu)建體”指包含與接頭多肽或免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域連接的本發(fā)明的ー個或多個抗原結(jié)合部分的多肽。接頭多肽包含通過肽鍵連接的2個或更多個氨基酸殘基,并且用于連接ー個或多個抗原結(jié)合部分。此類接頭多肽是本領(lǐng)域眾所周知的(參見例如,Hol Iiger,P 等人(1993)Natl. Acad. Sci. USA90 :6444 - 6448 ;Poljak,R. J.等人(1994)泣ァ此如ァ吆1121 - 1123)。免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域指重或輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域。人IgG重鏈和輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域氨基酸序列是本領(lǐng)域已知的且在表I中表示。表I :人IgG重鏈恒定結(jié)構(gòu)域和輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域的序列
      權(quán)利要求
      1.一種用于在視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層(RNFL)變性治療中使用的對于人RGM A的結(jié)合蛋白。
      2.用于如權(quán)利要求I中定義使用的結(jié)合蛋白,其中所述治療是治療或預防、神經(jīng)再生或神經(jīng)保護、局部或全身性治療。
      3.用于如權(quán)利要求I或2中定義使用的結(jié)合蛋白,其中作為所述治療的結(jié)果 a).觀察到視網(wǎng)膜神經(jīng)元萌芽;和/或 b).在視網(wǎng)膜中的RGC(視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞)軸突保護免于變性。
      4.用于如前述權(quán)利要求之一中定義使用的結(jié)合蛋白,其中所述RNFL變性與選自下述的疾病相關(guān) 糖尿病視網(wǎng)膜病、缺血性視神經(jīng)病、X染色體連鎖視網(wǎng)膜劈裂癥、藥物造成的視神經(jīng)病、視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良、年齡相關(guān)的黃斑變性、特征在于視神經(jīng)乳頭玻璃疣的眼病、特征在于光感受器變性的遺傳決定子的眼病、常染色體隱性遺傳視錐視桿營養(yǎng)不良、和線粒體病癥伴視神經(jīng)病。
      5.用于如前述權(quán)利要求之一中定義使用的結(jié)合蛋白,其以IX 10_7 M或更少的Kd和IX IO-2 s—1或更少的I^ff速率常數(shù)與人RGM A解離,兩者都通過表面等離振子共振測定。
      6.用于如前述權(quán)利要求之一中定義使用的結(jié)合蛋白,如在標準體外測定中測定的,其與人RGM A結(jié)合且中和人RGM A的神經(jīng)突長出抑制活性。
      7.用于如前述權(quán)利要求之一中定義使用的結(jié)合蛋白,其為人源化抗體。
      8.用于如前述權(quán)利要求之一中定義使用的結(jié)合蛋白,其包含抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域,所述結(jié)合蛋白能夠結(jié)合RGM分子的表位,所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含選自下述的至少ー個CDR a)由SEQID NO 59和65組成的⑶R-H3組氨基酸序列,和與所述序列之一具有至少50 %序列同一性的修飾的CDR氨基酸序列; 和/或 b)由SEQID NO 62和68組成的⑶R-L3組氨基酸序列,和與所述序列之一具有至少50 %序列同一性的修飾的⑶R氨基酸序列。
      9.用于如前述權(quán)利要求之一中定義使用的結(jié)合蛋白,其進ー步包含選自下述的至少ー個 CDR a).由SEQID NO 57和63組成的⑶R-Hl組的氨基酸序列;和/或 b).由SEQID NO 60和66組成的CDR-Ll組的氨基酸序列;和/或 c).由SEQID NO 58和64組成的⑶R-H2組的氨基酸序列;和/或 d).由SEQID NO :61和67組成的CDR-L2組的氨基酸序列; 和與所述序列之一具有至少50 %序列同一性的修飾的CDR氨基酸序列。
      10.用于如權(quán)利要求9中定義使用的結(jié)合蛋白,其包含選自由下述組成的可變結(jié)構(gòu)域⑶R組的至少3個⑶Rs VH5F9 組I:[: VH5F9CDR-Hl SEQIDN0. : 34 的殘基 31-35SEQIDN0:57 VH5F9CDR-H2 SEQIDN0. : 34 的殘基 50-66SEQIDN0:58 VH5F9CDR-H3 SEQIDN0. : 34 的殘基 99-104 SEQIDN0:59 VL5F9 組 VL5F9CDR-LI SEQIDN0. : 10 的殘基 24-39SEQIDN0:60 VL5F9CDR-L2 SEQIDN0. : 10 的殘基 55-61SEQIDN0:61 VL5F9CDR-L3 l|EQIDN0. : 10 的殘基 94-102 [SEQIDN0:62 :
      11.用于如權(quán)利要求10中定義使用的結(jié)合蛋白,其包含至少2個可變結(jié)構(gòu)域⑶R組。
      12.用于如權(quán)利要求11中定義使用的結(jié)合蛋白,其中所述至少2個可變結(jié)構(gòu)域CDR組選自 VH 5F9組和VL 5F9組;和 VH 8D1 組和 VL 8D1 組。
      13.用于如前述權(quán)利要求之一中定義使用的結(jié)合蛋白,其進ー步包含人受體構(gòu)架。
      14.用于如前述權(quán)利要求之一中定義使用的結(jié)合蛋白,其包含選自SEQID NO :35,36,37、38、39、40、41、42和43的至少ー個重鏈可變結(jié)構(gòu)域;和/或選自SEQ ID N0:44、45和46的至少ー個輕鏈可變結(jié)構(gòu)域。
      15.用于如權(quán)利要求13和14中任ー項中定義使用的結(jié)合蛋白,其中所述人受體構(gòu)架包含在關(guān)鍵殘基處的至少ー個構(gòu)架區(qū)氨基酸置換,所述關(guān)鍵殘基選自 (重鏈序列位置):1、5、37、48、49、88、98 ; (輕鏈序列位置)2、4、41、51。
      16.前述權(quán)利要求中任一項的結(jié)合蛋白,其中所述結(jié)合蛋白包含具有選自下述的氨基酸序列的至少ー個(構(gòu)架突變的)可變結(jié)構(gòu)域 (重鏈序列)SEQ ID NO :47、48、49、50 ;和 (輕鏈序列)SEQ ID NO :51、52、53 和 54。
      17.用于如前述權(quán)利要求中任ー項中定義使用的結(jié)合蛋白,其是選自5F9和8D1的抗體。
      18.ー種用于治療RNFL變性的方法,其包括給有此需要的哺乳動物施用有效量的組合物的步驟,所述組合物包含分離的如權(quán)利要求1-17中任一項中定義的結(jié)合蛋白。
      19.權(quán)利要求18的方法,其中所述治療是治療或預防、神經(jīng)再生或神經(jīng)保護、局部或全身性治療。
      全文摘要
      本申請描述了用于在視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層(RNFL)變性治療中使用的RGM A結(jié)合蛋白,特別是單克隆抗體,且特別是其CDR移植、人源化形式,其具有與RGM A結(jié)合且阻止RGM蛋白質(zhì)與RGM A受體和其他RGM A結(jié)合蛋白結(jié)合的能力,并且因此中和RGM A的功能,以及描述了針對RNFL變性在治療或預防上治療哺乳動物的方法。
      文檔編號C07K16/22GK102656190SQ201080055275
      公開日2012年9月5日 申請日期2010年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月8日
      發(fā)明者K. 米勒 B. 申請人:雅培股份有限兩合公司
      網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
      • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
      1