專利名稱：從植物鵲腎樹中分離提取和純化異厚樸酚的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥成分異厚樸酚的提取、分離，具體說是一種從植物鵲腎樹中提取、 分離和純化異厚樸酚的方法。
背景技術(shù)：
異厚樸酚是一種木脂素類化合物，其結(jié)構(gòu)式為1983 年由 El-Feraly 等(El-Feraly，et al, ournal ofNatural Products, 1983) 從臺灣檫樹樹皮中首次分離得到。它對乙肝病毒、奧里斯葡萄球菌、恥垢分枝桿菌、啤酒酵母菌、須瘡小孢子菌等許多菌類和?；o酶A-膽固醇?；D(zhuǎn)移酶顯示很好的抑制活性。迄今為止，從天然植物中提取分離得到異厚樸酚，只檢索到從臺灣檫樹中提取分離的報道文獻(xiàn)一篇(El-Feraly, et al，Journal of Natural Products，1983)。鵲腎樹為?？迄o腎樹屬植物，屬于喬木或灌木，主要分布在廣西、廣東、云南、海南等省。鵲腎樹具有多種藥用療效，其提取物可以抗菌、治療發(fā)燒、痢疾、牙齦炎、口腔潰瘍等。本發(fā)明的目的是要提供一種從天然植物鵲腎樹中提取、分離和純化異厚樸酚的方法。實現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是本發(fā)明的要旨是以鵲腎樹(Streblus asper)的根、皮、莖為原料提取、分離和純化異厚樸酚的方法。其制備方法包括如下步驟(1)將鵲腎樹的干品或新鮮藥材切碎；(2)用溶媒加熱回流提取法提取步驟(1)中經(jīng)切碎的原料藥材向原料中按比例加入溶媒，反復(fù)加熱回流提取2-5次，每次加熱回流時間為1-4小時；將上述操作得到的提取液過濾，收集濾液；在低于70°C溫度下，對濾液進(jìn)行減壓濃縮，除去溶媒，得比重為 1. 1-1. 4的浸膏狀提取物A ；所述溶媒的加入量為每次加入溶媒的體積升數(shù)最初加入干品重量公斤數(shù)=6-12 1，或為溶媒的體積升數(shù)新鮮藥材重量公斤數(shù)=4-8 1 ；(3)對步驟⑵中得到的提取物A，先加入水混懸溶解，提取物A的重量公斤數(shù)水的體積升數(shù)=1 3-6，然后以溶媒I萃取1-4次，每次水相與溶媒相的體積比= 1 0.2-2，分離出溶媒層，水層再用溶媒II萃取1-4次，每次水相與溶媒相的體積比例為 1 0.2-3;合并各次萃取后的溶媒II液，得溶媒液B，其中含有異厚樸酚；(4)對步驟(3)中收集到的溶媒液B，在低于70°C條件下進(jìn)行減壓濃縮，得到膏狀
發(fā)明內(nèi)容濃縮物Bl ；(5)對步驟中得到的膏狀濃縮物Bi，用層析法進(jìn)行一次或多次的同種或不同種的填料層析純化，得到含量為> 98%的油狀異厚樸酚；本發(fā)明從鵲腎樹中提取、分離和純化異厚樸酚的另一種方法是(1)取原料藥材鵲腎樹，將生藥干品或新鮮藥材切碎；(2)用浸泡滲漉法滲漉步驟(1)中經(jīng)切碎的原料藥材在原料藥材中按比例加入溶媒，在常溫下對藥材進(jìn)行1-4次滲漉提取，每次滲漉1-3天；將上述操作得到的提取液過濾，收集濾液；在低于70°C溫度下，對濾液進(jìn)行減壓濃縮，除去溶媒，得比重為1. 1-1. 4的浸膏狀提取物A ；所述溶媒的加入量為每次加入溶媒的體積升數(shù)最初加入干品重量公斤數(shù)=6-12 1，或為溶媒的體積升數(shù)新鮮藥材重量公斤數(shù)=4-8 1 ；(3)對步驟O)中得到的提取物A，先加入水混懸溶解，提取物A的重量公斤數(shù)水的體積升數(shù)=1 3-6，然后以溶媒I萃取14次，每次水相與溶媒相的體積比= 1 0.2-2，分離出溶媒層，水層再用溶媒II萃取1-4次，每次水相與溶媒相的體積比例為 1 0.2-3;合并各次萃取后的溶媒II液，得溶媒液B，其中含有異厚樸酚；(4)對步驟(3)中收集到的溶媒液B，在低于70°C條件下進(jìn)行減壓濃縮，得到膏狀濃縮物Bl ；(5)對步驟中得到的膏狀濃縮物Bi，用層析法進(jìn)行一次或多次的同種或不同種的填料層析純化，得到含量為> 98%的油狀異厚樸酚；上述步驟O)中所述的溶媒為體積比為30-95%乙醇水溶液，或為氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮和甲醇中的一種；步驟(3)中所述的溶媒I為石油醚、己烷、環(huán)己烷和正己烷中的一種；優(yōu)選的是石油醚；步驟(3)中所述的溶媒II為乙酸乙酯、二氯甲烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳、 乙醚、乙酸丁酯、乙酸戊酯和C3-C5的脂肪醇中的一種；優(yōu)選的是乙酸乙酯；步驟( 所述層析法純化中層析柱的填料為硅膠、DlOl大孔樹脂、中性氧化鋁、聚酰胺、反相硅膠C-18和反相硅膠C-8中的一種；優(yōu)選的是硅膠；本發(fā)明各種填料的層析柱的純化方法分別是所述層析法中硅膠層析柱是以60-400目硅膠為填料的，膏狀濃縮物Bl與硅膠重量份數(shù)比為1 10 100，以石油醚乙酸乙酯的混合溶劑、石油醚氯仿的混合溶劑和石油醚乙醚的混合溶劑中的一種，按體積比從100 0至50 50為洗脫液，即依次以 100 0,95 5,90 10,85 15,70 30,50 50的混合液為梯度洗脫液，進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度，將收集到的含異厚樸酚的洗脫液，在低于70°C溫度下減壓濃縮成油狀液體；所述層析法中DlOl大孔樹脂層析柱是以DlOl大孔樹脂為填料的，膏狀濃縮物Bl 與填料的重量份數(shù)比在1 20 100，用水洗脫至洗脫流出液無色，然后再依次用體積百分比為40^^60^^80%,95%的乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，每次洗脫至洗脫流出液無色再增加梯度，收集含異厚樸酚洗脫流出液，再在低于70°C溫度下將洗脫流出液減壓濃縮成油狀液體；所述層析法中中性氧化鋁層析柱是以60-300目中性氧化鋁為填料的，膏狀濃縮物Bl與中性氧化鋁的重量份數(shù)比在1 20 100，以石油醚乙酸乙酯的混合溶劑、石油醚氯仿的混合溶劑和石油醚乙醚的混合溶劑中的一種，按體積比從100 0至50 50 為梯度洗脫液，即依次以100 0,95 5,90 10,85 15,70 30,50 50的極性梯度增加，進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度，收集含異厚樸酚的洗脫流出液，控制溫度低于70°C，將洗脫流出液減壓濃縮成油狀液體；所述層析法中聚酰胺層析柱是以60-300目聚酰胺為填料的，膏狀濃縮物Bl與聚酰胺的重量份數(shù)比在1 20 100，以石油醚乙酸乙酯的混合溶劑，按體積比從100 0 至 50 50 為梯度洗脫液，即依次以 100 0、95 5、90 10,85 15,70 30,50 50 為梯度洗脫液，或以石油醚氯仿的混合溶劑，按體積比從100 0至50 50為梯度洗脫液，即依次以100 0,95 5,90 10,85 15,70 30,50 50的混合液為梯度洗脫液， 進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度，收集含異厚樸酚的洗脫流出液，控制溫度低于70°C，將洗脫流出液減壓濃縮成油狀液體；所述層析法中反相硅膠層析柱是以100-300目反相硅膠C-18或C-8為填料的，膏狀濃縮物Bl與反相硅膠C-18或C-8的重量份數(shù)比在1 20 100，以體積比從50 50 至100 0的甲醇和水的混合溶劑為洗脫液，收集含異厚樸酚的洗脫液，或以體積比從 50 50至100 0的甲醇水混合液為梯度洗脫液，即依次以50 50,65 35,80 20、 100 0為梯度洗脫液，進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度，收集含異厚樸酚的洗脫流出液；然后控制溫度低于70°C、將收集到的洗脫流出液減壓濃縮成油狀液體。在所述的提取步驟中，鵲腎樹藥材可以是新鮮的，但優(yōu)選地是干品，這樣可以提高提取率，藥材是切細(xì)的更好。在所述的提取步驟中，可以使用或不使用有機溶劑，然而，異厚樸酚不溶于水，所以優(yōu)選使用有機溶劑。本發(fā)明的優(yōu)點是找到了提取異厚樸酚的一個提取源，該方法提取、分離的異厚樸酚純度高。異厚樸酚對乙肝病毒、奧里斯葡萄球菌、恥垢分枝桿菌、啤酒酵母菌、須瘡小孢子菌等許多菌類和?；o酶A-膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶等顯示很好的抑制活性，為高活性成分， 異厚樸酚正中開發(fā)抗乙肝病毒和抗菌用的靶點藥物，對于開發(fā)高效低毒的天然口服藥、注射劑、外用藥等藥物具有重大意義；另外，鵲腎樹為一味經(jīng)典常用的中藥，藥性清楚，資源豐富，從鵲腎樹中提取分離抗乙肝病毒和抗菌的異厚樸酚分離工藝成熟、簡易；鵲腎樹抗乙肝病毒和抗菌的異厚樸酚的化學(xué)結(jié)構(gòu)與作用機理明確，以此開發(fā)抗乙肝病毒和抗菌的新藥前途非常光明，為鵲腎樹的開發(fā)利用創(chuàng)出了一條新路。


圖1是實施例中獲得的異厚樸酚的1H-NMR圖譜；圖2是實施例中獲得的異厚樸酚的"C-NMR圖譜。
具體實施例方式下面通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但不是用來限制本發(fā)明的范圍。實施例1
取3. 2Kg經(jīng)室溫自然干燥的鵲腎樹的根、皮、莖，經(jīng)切碎后用75%乙醇水溶液(乙醇水，體積比)加熱回流提取3次，每次加熱回流時間為2小時，75%乙醇水溶液的加入量按照原料加入量計算，每次加入75%乙醇水溶液的體積升數(shù)與鵲腎樹干品重量公斤數(shù)之比10 1，將上述操作得到的提取液過濾，收集濾液；在低于70°C溫度下，對濾液進(jìn)行減壓濃縮，除去乙醇，得比重為1.20的浸膏狀提取物A(380g)；然后向提取物A中加入適量水混懸溶解，提取物A的重量公斤數(shù)水的體積升數(shù)=1 5，用石油醚萃取混懸液4次，每次水相與溶媒相的體積比=1 2，分離出溶媒層，水層再用乙酸乙酯萃取4次，每次水相與乙酸乙酯相的體積比例為1 2;合并各次萃取后的乙酸乙酯液B，減壓濃縮，得到膏狀濃縮物Bl (175g)。取常壓玻璃層析柱，以60目硅膠為填料，膏狀濃縮物Bl與硅膠重量份數(shù)比在 1 50，以石油醚乙酸乙酯體積比在 100 0、95 5、90 10,85 15,70 30,50 50 的極性梯度增加，進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度，收集含異厚樸酚的洗脫流出液，控制溫度低于70°C，將洗脫流出液減壓濃縮成油狀液體(32g)；然后再取常壓玻璃層析柱，以200-300目硅膠為填料，含異厚樸酚的油狀濃縮物與硅膠重量份數(shù)比在1 100，以石油醚氯仿體積比在100 0、95 5、90 10,85 15,70 30、 50 50的極性梯度增加，進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度， 收集含異厚樸酚的洗脫流出液，控制溫度低于70°C，將洗脫流出液減壓濃縮，得到油狀液體異厚樸酚5g)。實施例2取3. OKg經(jīng)室溫自然干燥的鵲腎樹的根、皮、莖，經(jīng)切碎后用氯仿加熱回流提取3 次，每次加熱回流時間為2小時，氯仿的加入量按照原料加入量計算，每次加入氯仿的體積升數(shù)與鵲腎樹干品重量公斤數(shù)之比12 1，將上述操作得到的提取液過濾，收集濾液；在低于70°C溫度下，對濾液進(jìn)行減壓濃縮，除去氯仿，得比重為1.21的浸膏狀提取物A(360g)； 然后向提取物A中加入適量水混懸溶解，提取物A的重量公斤數(shù)水的體積升數(shù)=1 5， 用石油醚萃取混懸液4次，每次水相與溶媒相的體積比=1 2，分離出溶媒層，水層再用氯仿萃取4次，每次水相與氯仿相的體積比例為1 2;合并各次萃取后的氯仿液B，減壓濃縮，得到膏狀濃縮物Bl (175g)。層析時取常壓玻璃層析柱，以DlOl大孔樹脂為填料，膏狀濃縮物Bl與填料的重量份數(shù)比是1 50，用水洗脫至洗脫流出液無色，然后再依次用體積百分比為40^^60^^80%,95%的乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，每次洗脫至洗脫流出液無色再增加梯度，收集主含異厚樸酚洗脫流出液，在低于70°C溫度下將洗脫流出液減壓濃縮成油狀液體(117g)；取常壓玻璃層析柱，以200-300目硅膠為填料，提取濃縮油狀液體與硅膠重量份數(shù)比在1 10，以石油醚乙醚體積比在100 0、95 5、90 10,85 15、 70 30,50 50的極性梯度增加，進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度，收集含異厚樸酚的洗脫流出液，控制溫度低于70°C，將洗脫流出液減壓濃縮成油狀液體(27g)；然后再取常壓玻璃層析柱，以200-300目硅膠為填料，含異厚樸酚的油狀濃縮物與聚酰胺重量份數(shù)比在1 50，以石油醚氯仿體積比在100 0,95 5,90 10、 85 15,70 30,50 50的極性梯度增加，進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度，收集含異厚樸酚的洗脫流出液，控制溫度低于70°C，將洗脫流出液減壓濃縮，得到油狀液體異厚樸酚3g)。實施例3
取3. OKg經(jīng)室溫自然干燥的鵲腎樹的根、皮、莖，經(jīng)切碎后用甲醇加熱回流提取3 次，每次加熱回流時間為2小時，甲醇的加入量按照原料加入量計算，每次加入甲醇的體積升數(shù)與鵲腎樹干品重量公斤數(shù)之比6 1，將上述操作得到的提取液過濾，收集濾液；在低于70°C溫度下，對濾液進(jìn)行減壓濃縮，除去甲醇，得比重為1. 19的浸膏狀提取物A(375g)； 然后向提取物A中加入適量水混懸溶解，提取物A的重量公斤數(shù)水的體積升數(shù)=1 5， 用正己烷萃取混懸液4次，每次水相與正己烷的體積比=1 2，分離出正己烷層，水層再用二氯甲烷萃取4次，每次水相與二氯甲烷相的體積比例為1 2;合并各次萃取后的二氯甲烷液B，減壓濃縮，得到膏狀濃縮物Bl (196g)。取常壓玻璃層析柱，以中性氧化鋁為填料，膏狀濃縮物Bl與中性氧化鋁重量份數(shù)比在1 50，以石油醚乙酸乙酯體積比在100 0、 95 5,90 10,85 15,70 30,50 50的極性梯度增加，進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度，收集含異厚樸酚的洗脫流出液，控制溫度低于70°C， 將洗脫流出液減壓濃縮成油狀液體(30g)；然后再取常壓玻璃層析柱，以200-300目硅膠為填料，含異厚樸酚的油狀濃縮物與硅膠重量份數(shù)比在1 100，以石油醚氯仿體積比在 100 0,95 5,90 10,85 15,70 30,50 50的極性梯度增加，進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度，收集含異厚樸酚的洗脫流出液，控制溫度低于 70°C，將洗脫流出液減壓濃縮，得到油狀液體異厚樸酚(19. Sg)。實施例4取3. OKg經(jīng)室溫自然干燥的鵲腎樹的根、皮、莖，經(jīng)切碎后用丙酮浸泡滲漉提取3 次，每次浸泡滲漉時間為2天，丙酮的加入量按照原料加入量計算，每次加入丙酮的體積升數(shù)與鵲腎樹干品重量公斤數(shù)之比10 1，將上述操作得到的提取液過濾，收集濾液；在低于 70°C溫度下，對濾液進(jìn)行減壓濃縮，除去丙酮，得比重為1. 18的浸膏狀提取物A(302g) ’然后向提取物A中加入適量水混懸溶解，提取物A的重量公斤數(shù)水的體積升數(shù)=1 5，用環(huán)己烷萃取混懸液4次，每次水相與環(huán)己烷的體積比=1 2，分離出環(huán)己烷層，水層再用二氯甲烷萃取4次，每次水相與二氯甲烷相的體積比例為1 2;合并各次萃取后的二氯甲烷液B，減壓濃縮，得到膏狀濃縮物Bl (158g)。取常壓玻璃層析柱，以硅膠為填料，膏狀濃縮物 Bl與硅膠重量份數(shù)比在1 50，以石油醚乙酸乙酯體積比在100 0,95 5,90 10、 85 15,70 30,50 50的極性梯度增加，進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出， 再增加至下一梯度，收集含異厚樸酚的洗脫流出液，控制溫度低于70°C，將洗脫流出液減壓濃縮成油狀液體(31g)；然后再取常壓玻璃層析柱，以以300目反相硅膠C-18為填料，含異厚樸酚的油狀濃縮物與反相硅膠C-18重量份數(shù)比在1 50，以體積比甲醇水混合液在 50 50,65 35,80 20,100 0的極性梯度增加，進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度，收集含異厚樸酚的洗脫流出液，控制溫度低于70°C，將洗脫流出液減壓濃縮，得到油狀液體異厚樸酚(18. 7g)。實施例5取3. OKg經(jīng)室溫自然干燥的鵲腎樹的根、皮、莖，經(jīng)切碎后用95%乙醇水溶液(乙醇水，體積比)浸泡滲漉提取3次，每次浸泡滲漉時間為2天，95%乙醇水溶液的加入量按照原料加入量計算，每次加入95%乙醇水溶液的體積升數(shù)與鵲腎樹干品重量公斤數(shù)之比 10 1，將上述操作得到的提取液過濾，收集濾液；在低于70°C溫度下，對濾液進(jìn)行減壓濃縮，除去乙醇，得比重為1. 18的浸膏狀提取物iU298g)；然后向提取物A中加入適量水混懸溶解，提取物A的重量公斤數(shù)水的體積升數(shù)=1 5，用己烷萃取混懸液4次，每次水相與己烷的體積比=1 2，分離出己烷，水層再用二氯甲烷萃取4次，每次水相與二氯甲烷相的體積比例為1 2;合并各次萃取后的二氯甲烷液B，減壓濃縮，得到膏狀濃縮物Bl (150g)。 取常壓玻璃層析柱，以硅膠為填料，膏狀濃縮物Bl與硅膠重量份數(shù)比在1 50，以石油醚 乙酸乙酯體積比在100 0,95 5,90 10,85 15,70 30,50 50的極性梯度增加， 進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度，收集含異厚樸酚的洗脫流出液，控制溫度低于70°C，將洗脫流出液減壓濃縮成油狀液體；然后再取常壓玻璃層析柱，以以300目反相硅膠C-8為填料，含異厚樸酚的油狀濃縮物與反相硅膠C-8重量份數(shù)比在1 50，以體積比甲醇水混合液在50 50,65 35,80 20,100 0的極性梯度增加，進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度，收集含異厚樸酚的洗脫流出液，控制溫度低于70°C，將洗脫流出液減壓濃縮，得到油狀液體異厚樸酚(18. Sg)。實施例6按實施例4的方法步驟，不同的是原料藥經(jīng)切碎后用浸泡滲漉方法進(jìn)行提取，在常溫下對藥材進(jìn)行乙酸乙酯浸泡提取。上面所獲得的流份異厚樸酚經(jīng)檢測，物理數(shù)據(jù)如下經(jīng)液相色譜法檢測，異厚樸酚的含量大于98% ；異厚樸酚，分子式C18H18O2,無色油狀液體；UV 2=)" nm(log ε ) 289 (2. 33), 254 (2. 65), 208 (4. 54)；IR(KBr) vmax (cm-1) :3467,1673 (C = 0)，1641，1600，1496，1423 ；ESI-MS m/z(% ) :265(100) [Μ-ΗΓ ；1H NMR (500MHz, CD3COCD3) δ H(ppm) :6. 86 (1H, d, J = 1. 6Hz, H_3)，7· 07 (1H, d, J =8. 4Hz, H-5)，6· 92 (1H, dd, J = 8. 4，1. 6Hz, H_6)，3. 36 (2H, d, J = 6. 8Hz, H_7)，6. 03 (H, m, H-8), 5. 13 (2H, m, H_9)，6. 96 (2H, d，J = 8. 5Hz，H_2 ‘，6' ),7. 14 (1H，dd, J = 8. 5Hz, H-3' ,5' ) ,3. 29 (2H, d, J = 6. 7Hz, H-7' )，6. 03 (1H，m，H_8' ), 5. 13 (2H, m, H-9');13C NMR (125MHz，CD3COCD3) δ C (ppm) :147. 3 (C-I) , 143. 6 (C-2) , 120. 8 (C-3), 132. 1 (C-4) , 125. 1 (C_5) ,117.2 (C_6) , 39. 4 (C_7) , 137. 9 (C-8) , 115. 5 (C_9)， 156. 5 (C-I' ), 117. 3 (C-2 ‘，6' ), 129. 8 (C-3 ‘，5' ), 134. 2 (C-4 ' )，39. 3 (C_7 ')， 137. 9 (C-8' ), 115. 4(C-9')。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(El-Feraly, et al，Journal of Natural Products, 1983)記載
相一致。
權(quán)利要求
1.一種從鵲腎樹中提取分離和純化異厚樸酚的方法，其特征是包括如下步驟(1)取原料藥材鵲腎樹，將生藥干品或新鮮藥材切碎；(2)用溶媒加熱回流提取法提取步驟(1)中經(jīng)切碎的原料藥材向藥材中按比例加入溶媒，反復(fù)加熱回流提取2-5次，每次加熱回流時間為1-4小時；將上述操作得到的提取液過濾，收集濾液；在低于70°C溫度下，對濾液進(jìn)行減壓濃縮，除去溶媒，得比重為1. 1-1. 4的浸膏狀提取物A ；所述溶媒的加入量為每次加入溶媒的體積升數(shù)最初加入干品重量公斤數(shù)=6-12 1，或為溶媒的體積升數(shù)新鮮藥材重量公斤數(shù)=4-8:1;(3)對步驟O)中得到的提取物A，先加入水混懸溶解，提取物A的重量公斤數(shù)水的體積升數(shù)=1 3-6，然后以溶媒I萃取1-4次，每次水相與溶媒相的體積比=1 0.2-2， 分離出溶媒層，水層再用溶媒II萃取1-4次，每次水相與溶媒相的體積比例為1 0.2-3; 合并各次萃取后的溶媒Π液，得溶媒液B，其中含有異厚樸酚；(4)對步驟(3)中收集到的溶媒液B，在低于70°C條件下進(jìn)行減壓濃縮，得到膏狀濃縮物Bl ；(5)對步驟中得到的膏狀濃縮物Bi，用色譜法進(jìn)行一次或多次的同種或不同種的填料層析法純化，得到含量為> 98%的油狀異厚樸酚。
2.一種從鵲腎樹中提取分離和純化異厚樸酚的方法，其特征是包括如下步驟(1)取原料藥材鵲腎樹，將生藥干品或新鮮藥材切碎；(2)用浸泡滲漉法滲漉步驟(1)中經(jīng)切碎的原料藥材在原料藥材中按比例加入溶媒， 在常溫下對藥材進(jìn)行1-4次滲漉提取，每次滲漉1-3天；將上述操作得到的提取液過濾，收集濾液；在低于70°C溫度下，對濾液進(jìn)行減壓濃縮，除去溶媒，得比重為1. 1-1. 4的浸膏狀提取物A ；所述溶媒的加入量為每次加入溶媒的體積升數(shù)最初加入干品重量公斤數(shù)= 6-12 1，或為溶媒的體積升數(shù)新鮮藥材重量公斤數(shù)=4-8 1 ；(3)對步驟O)中得到的提取物A，先加入水混懸溶解，提取物A的重量公斤數(shù)水的體積升數(shù)=1 3-6，然后以溶媒I萃取1-4次，每次水相與溶媒相的體積比=1 0.2-2， 分離出溶媒層，水層再用溶媒II萃取1-4次，每次水相與溶媒相的體積比例為1 0.2-3; 合并各次萃取后的溶媒Π液，得溶媒液B，其中含有異厚樸酚；(4)對步驟(3)中收集到的溶媒液B，在低于70°C條件下進(jìn)行減壓濃縮，得到膏狀濃縮物Bl ；(5)對步驟中得到的膏狀濃縮物Bi，用色譜法進(jìn)行一次或多次的同種或不同種的填料層析法純化，得到含量為> 98%的油狀異厚樸酚。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征是步驟O)中所述的溶媒為體積比為 30-95%乙醇水溶液，或為氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮和甲醇中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征是步驟C3)中所述的溶媒I為石油醚、己烷、環(huán)己烷和正己烷中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征是步驟(3)中所述的溶媒II為乙酸乙酯、二氯甲烷、二氯乙烷、三氯甲烷、四氯化碳、乙醚、乙酸丁酯、乙酸戊酯和C3-C5的脂肪醇中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征是步驟( 所述層析法純化中層析柱的填料為硅膠、DlOl大孔樹脂、中性氧化鋁、聚酰胺、反相硅膠C-18和反相硅膠C-8中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的方法，其特征是所述層析法中硅膠層析柱是以60-400 目硅膠為填料的，膏狀濃縮物Bl與硅膠重量份數(shù)比為1 10 100，以石油醚乙酸乙酯的混合溶劑、石油醚氯仿的混合溶劑和石油醚乙醚的混合溶劑中的一種，按體積比從 100 0 至 50 50 為洗脫液，即依次以 100 0、95 5、90 10,85 15,70 30、 50 50的混合液為梯度洗脫液，進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度，將收集到的含異厚樸酚的洗脫液，在低于70°C溫度下減壓濃縮成油狀液體。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的方法，其特征是所述層析法中DlOl大孔樹脂層析柱是以DlOl大孔樹脂為填料的，膏狀濃縮物Bl與填料的重量份數(shù)比在1 20 100，用水洗脫至洗脫流出液無色，然后再依次用體積百分比為40^^60^^80%,95%的乙醇水溶液進(jìn)行梯度洗脫，每次洗脫至洗脫流出液無色再增加梯度，收集含異厚樸酚洗脫流出液，再在低于 70 V溫度下將洗脫流出液減壓濃縮成油狀液體。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的方法，其特征是所述層析法中中性氧化鋁層析柱是以 60-300目中性氧化鋁為填料的，膏狀濃縮物Bl與中性氧化鋁的重量份數(shù)比在1 20 100，以石油醚乙酸乙酯的混合溶劑、石油醚氯仿的混合溶劑和石油醚乙醚的混合溶劑中的一種，按體積比從100 0至50 50為梯度洗脫液，即依次以100 0,95 5、 90 10,85 15,70 30,50 50的極性梯度增加，進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度，收集含異厚樸酚的洗脫流出液，控制溫度低于70°C，將洗脫流出液減壓濃縮成油狀液體。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的方法，其特征是所述層析法中聚酰胺層析柱是以 60-300目聚酰胺為填料的，膏狀濃縮物Bl與聚酰胺的重量份數(shù)比在1 20 100，以石油醚乙酸乙酯的混合溶劑，按體積比從100 0至50 50為梯度洗脫液，即依次以 100 0,95 5,90 10,85 15,70 30,50 50為梯度洗脫液，或以石油醚氯仿的混合溶劑，按體積比從100 0至50 50為梯度洗脫液，即依次以100 0,95 5、 90 10,85 15,70 30,50 50的混合液為梯度洗脫液，進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度，收集含異厚樸酚的洗脫流出液，控制溫度低于70°C，將洗脫流出液減壓濃縮成油狀液體。
11.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的方法，其特征是所述層析法中反相硅膠層析柱是以 100-300目反相硅膠C-18或C-8為填料的，膏狀濃縮物Bl與反相硅膠C-18或C-8的重量份數(shù)比在1 20 100，以體積比從50 50至100 0的甲醇和水的混合溶劑為洗脫液， 收集含異厚樸酚的洗脫液，或以體積比從50 50至100 0的甲醇水混合液為梯度洗脫液，即依次以50 50,65 35,80 20、100 0為梯度洗脫液，進(jìn)行梯度洗脫，每一梯度洗脫至無樣品檢出，再增加至下一梯度，收集含異厚樸酚的洗脫流出液；然后控制溫度低于70°C、將收集到的洗脫流出液減壓濃縮成油狀液體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種從植物鵲腎樹中分離提取和純化異厚樸酚的方法，包括生藥干品或新鮮藥材的切碎、用溶煤加熱回流提取或滲漉提取、得到的浸膏狀提取物再用溶媒I、溶媒II萃取，萃取的溶媒II液減壓濃縮；然后進(jìn)行層析法純化，得到異厚樸酚純品。本發(fā)明的優(yōu)點是找到了提取異厚樸酚的一個提取源，提取、分離的異厚樸酚純度高，異厚樸酚正中開發(fā)抗乙肝病毒和抗菌用的靶點藥物，對于開發(fā)高效低毒的天然口服藥、注射劑、外用藥等藥物具有重大意義。
文檔編號C07C43/295GK102229526SQ20111009427
公開日2011年11月2日 申請日期2011年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月13日
發(fā)明者唐茂通, 孟愛萍, 朱圣軍, 李俊, 李珊, 陳自占, 黃紀(jì)國, 黎露清 申請人:廣西師范大學(xué)