專利名稱：一種從爵床中提取山荷葉素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種從爵床中提取山荷葉素的方法。
背景技術(shù)：
爵床為爵床科植物爵床Tfo1SteBWaria procumbens (Linn. ) Nees的干燥全草。別名小青草、六角英、赤眼老母草、節(jié)節(jié)寒等。收載于中國藥典(1977年版，一部)，在東漢前已載入《神農(nóng)本草經(jīng)》。具有清熱解毒，利尿消腫的功效，用于治療感冒發(fā)熱、咳嗽、喉痛、瘧疾、 腎盂腎炎、乳糜尿、肝硬化腹水、疳積等癥，分布在我國西南部和南部各省及臺灣等地，資源十分豐富。爵床的化學(xué)成分主要是木脂素及其苷類。山荷葉素(diphyllin)是近期所發(fā)現(xiàn)的具有抗腫瘤活性的新結(jié)構(gòu)的天然產(chǎn)物，分子式=C21H16O7,分子量380. 353，屬于1_芳基萘木脂素類，主要從爵床中分離得到。它具有抗癌、抗菌和抗病毒等廣泛的生物活性。Diphyllin具有較好的抗腫瘤活性，對于人鼻咽癌細(xì)胞(KB)的ED5(1<3ymol/mL。研究發(fā)現(xiàn)Diphyllin類化合物能夠作用于細(xì)胞分裂周期的 S期，Gl期，使細(xì)胞分裂停留在Gl期，對于S期有很強(qiáng)的抑制作用。實驗證明，用于HCT116 細(xì)胞時，在M小時內(nèi)，能夠使S期的細(xì)胞的比率從70%下降到41%，而使Gl期細(xì)胞所占比重由21%增加到42%，對MCF-7細(xì)胞也有類似的結(jié)果。Diphyllin類化合物具有廣泛的生理活性，已引起許多藥學(xué)家、化學(xué)家的廣泛關(guān)注?，F(xiàn)有技術(shù)中，張永利采用80%乙醇回流提取，所得浸膏依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取部分再分別利用硅膠柱色譜、VLC色譜、Diaion HP_20、MC1 Gel CHP-20, Sephadex LH-20、RPC-18等柱層析及制備薄層層析分離純化單體化合物，該方法僅限于實驗室少量制備和化學(xué)成分分離鑒定。中國專利(申請?zhí)?01010535341.0)公開了一種乙醇熱回流、乙酸乙酯-水混合溶劑多級逆流萃取、大孔樹脂柱層析、丙酮結(jié)晶的方法制備山荷葉素，該方法萃取率低、產(chǎn)品純度不穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從爵床中提取山荷葉素的方法，該方法得到的山荷葉素純度大于98%，對促進(jìn)山荷葉素的應(yīng)用具有重要的意義。為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是
一種從爵床中提取山荷葉素的方法，其特征在于，該方法采用以下步驟
(1)以爵床為原料經(jīng)超微粉碎后，用60%-75%丙酮滲漉提取，滲漉液濃縮得濃縮液；
(2)濃縮液用等體積量的二氯甲烷萃取3-4次，合并二氯甲烷相并濃縮成浸膏；
(3)將上述浸膏用中性氧化鋁拌樣，上樣至300-400目的氧化鋁中低壓柱，用二氯甲烷-丙酮混合溶液按15:1-5:2的配比進(jìn)行梯度洗脫，收集各部分洗脫液；
(4)將洗脫液5:2部分用高效液相色譜法進(jìn)行分離純化，流速為10-50ml/min，以甲醇-水為流動相，即得到山荷葉素。為使細(xì)胞中的有效組分充分提取出來，步驟1中山荷葉經(jīng)超微粉碎至粒徑10 μ m以下。步驟3中氧化鋁中低壓柱的柱壓為4_7bar，柱內(nèi)徑為20-100mm，層析柱徑高比為 1:5-15。本發(fā)明的優(yōu)勢在于本發(fā)明采用超微粉碎，再滲漉提取，操作簡單，提取率高；采用二氯甲烷-丙酮混合溶劑洗脫，危害小，污染低；使用中低壓柱進(jìn)行層析，上樣量大，周期短，分離度好，產(chǎn)品純度高。
具體實施例方式下面將通過以下實施例作進(jìn)一步闡述，但并不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。實施例1:
取IOkg經(jīng)超微粉碎粒徑10 μ m以下的爵床用65%丙酮滲漉提取，滲漉液減壓回收試劑得濃縮液，用等體積量的二氯甲烷萃取3次，合并二氯甲烷萃取相，濃縮得浸膏，將浸膏用少量中性氧化鋁拌樣，上樣至300-400目的氧化鋁中低壓柱，其中中低壓的柱壓為7bar，中低壓柱內(nèi)徑為20mm，層析柱徑高比為1 5，用二氯甲烷-丙酮(15 1 — 5 2)進(jìn)行梯度洗脫， 收集各個部分洗脫液，將洗脫液的5:2部分用高效液相色譜法分離純化，流速為20ml/min， 以甲醇-水為流動相，逐步調(diào)整二者比例逐級細(xì)分，即得到白色針晶，經(jīng)結(jié)構(gòu)檢測確認(rèn)，該白色針晶為純度98. 5%的山荷葉素。實施例2:
取IOkg經(jīng)超微粉碎粒徑10 μ m以下的爵床用70%丙酮滲漉提取，滲漉液減壓回收試劑得濃縮液，用等體積量的二氯甲烷萃取4次，合并二氯甲烷萃取相，濃縮得浸膏，將浸膏用少量中性氧化鋁拌樣，上樣至300-400目的氧化鋁中低壓柱，其中中低壓的柱壓為6bar，中低壓柱內(nèi)徑為25mm，層析柱徑高比為1 7，用二氯甲烷-丙酮(15 1 — 5 2)進(jìn)行梯度洗脫， 收集各個部分洗脫液，將洗脫液的5:2部分用高效液相色譜法分離純化，流速為lOml/min， 以甲醇-水為流動相，逐步調(diào)整二者比例逐級細(xì)分，即得到白色針晶，經(jīng)結(jié)構(gòu)檢測確認(rèn)，該白色針晶為純度98. 8%的山荷葉素。實施例3:
取IOkg經(jīng)超微粉碎粒徑10 μ m以下的爵床用65%丙酮滲漉提取，滲漉液減壓回收試劑得濃縮液，用等體積量的二氯甲烷萃取4次，合并二氯甲烷萃取相，濃縮得浸膏，將浸膏用少量中性氧化鋁拌樣，上樣至300-400目的氧化鋁中低壓柱，其中中低壓的柱壓為4bar，中低壓柱內(nèi)徑為100mm，層析柱徑高比為1:15，用二氯甲烷-丙酮(15:1 —5:2)進(jìn)行梯度洗脫，收集各個部分洗脫液，將洗脫液的5:2部分用高效液相色譜法分離純化，流速為40ml/ min，以甲醇-水為流動相，逐步調(diào)整二者比例逐級細(xì)分，即得到白色針晶，經(jīng)結(jié)構(gòu)檢測確認(rèn)，該白色針晶為純度98. 4%的山荷葉素。實施例4:
取IOkg經(jīng)超微粉碎粒徑10 μ m以下的爵床用60%丙酮滲漉提取，滲漉液減壓回收試劑得濃縮液，用等體積量的二氯甲烷萃取3次，合并二氯甲烷萃取相，濃縮得浸膏，將浸膏用少量中性氧化鋁拌樣，上樣至300-400目的氧化鋁中低壓柱，其中中低壓的柱壓為^ar,中低壓柱內(nèi)徑為36mm，層析柱徑高比為1 12，用二氯甲烷-丙酮(15 1 — 5 2)進(jìn)行梯度洗脫， 收集各個部分洗脫液，將洗脫液的5:2部分用高效液相色譜法分離純化，流速為50ml/min，以甲醇-水為流動相，逐步調(diào)整二者比例逐級細(xì)分，即得到白色針晶，經(jīng)結(jié)構(gòu)檢測確認(rèn)，該白色針晶為純度98. 6%的山荷葉素。
權(quán)利要求
1.一種從爵床中提取山荷葉素的方法，其特征在于，該方法采用以下步驟(1)以爵床為原料經(jīng)超微粉碎后，用60%-75%丙酮滲漉提取，滲漉液濃縮得濃縮液；(2)濃縮液用等體積量的二氯甲烷萃取3-4次，合并二氯甲烷相并濃縮成浸膏；(3)將上述浸膏用中性氧化鋁拌樣，上樣至300-400目的氧化鋁中低壓柱，用二氯甲烷-丙酮混合溶液按15:1-5:2的配比進(jìn)行梯度洗脫，收集各部分洗脫液；(4)將洗脫液5:2部分用高效液相色譜法進(jìn)行分離純化，流速為10-50ml/min，以甲醇-水為流動相，即得到山荷葉素。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種從爵床中提取山荷葉素的方法，其特征在于步驟1山荷葉經(jīng)超微粉碎至粒徑10 μ m以下。
3.按照權(quán)利要求1所述的一種從爵床中提取山荷葉素的方法，其特征在于步驟3中氧化鋁中低壓柱的柱壓為4-7bar，柱內(nèi)徑為20_100mm，層析柱徑高比為1:5-15。
全文摘要
一種從爵床中提取山荷葉素的方法，具體步驟為將爵床經(jīng)超微粉碎后用丙酮滲漉提取，滲漉液濃縮后用二氯甲烷萃取3-4次，二氯甲烷相上樣至氧化鋁為300-400目的氧化鋁柱，用二氯甲烷-丙酮混合溶劑洗脫，洗脫液濃縮過濾后采用高效液相制備色譜進(jìn)一步分離，即可獲得純度大于98%的山荷葉素。該方法操作流程簡單，所獲得的化合物純度高，工業(yè)化生產(chǎn)容易實現(xiàn)。
文檔編號C07D407/04GK102311429SQ20111018745
公開日2012年1月11日 申請日期2011年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月6日
發(fā)明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司