專利名稱：一種山茶苷a的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及一種山茶苷A的制備方法，特別是涉及一種應(yīng)用高速逆流色譜法純化山茶苷A的方法。
背景技術(shù)：
亮葉楊桐fliiii/a Merr. ex Li )，又名亮葉紅淡木，俗稱石芽菜，為山茶科楊桐屬植物，主要分布于我國廣西、廣東和貴州等地區(qū)，資源豐富。亮葉楊桐具有消炎、 解毒、退熱、止血和降壓等多種功效，民間常用來防止各種炎癥、無名腫瘤和外傷等，效果顯著。近年來，研究顯示亮葉楊桐葉中黃酮含量超過30%以上，并且有明顯的抗氧化、降血脂、 抗菌、抗高血壓等功效。其中山茶苷A是亮葉楊桐葉中主要的黃酮類物質(zhì)，含量可達(dá)25%以上。中國專利(申請?zhí)枮?00810062110. 5)“山茶苷A和山茶苷B的制備方法及用途”， 該專利以石崖茶為原料，用水醇溶劑系統(tǒng)提取，減壓濃縮，以中極性有機(jī)溶劑萃取脫脂，水相繼續(xù)濃縮石崖茶總黃酮，將總黃酮經(jīng)水醇系統(tǒng)重結(jié)晶得到山茶苷A，將總黃酮用碳酸鉀是山茶苷A轉(zhuǎn)化成山茶苷B后通過陽離子交換層析或直接用水醇系統(tǒng)重結(jié)晶，得到山茶苷B， 該方法提取率低、樣品損失量大、周期長。袁爾東等(食品工業(yè)科技，2008，4 (29) :212-214)采用大孔樹脂分離純化得到 91. 7%的山茶苷A，該方法所獲得的上茶苷A純度不能達(dá)到對照品的要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種山茶苷A的制備方法，應(yīng)用高速逆流色譜分離純化山茶苷A，操作簡單、樣品損失少、產(chǎn)品純度高。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下 一種山茶苷A的制備方法，其特征在于具體步驟如下
(1)提取以亮葉楊桐葉為原料，粉碎，置于液體動(dòng)態(tài)連續(xù)逆流提取裝置中醇提，以 60-85%的食用乙醇溶液為提取溶劑，在40-65°C的提取溫度下，提取2_3次，合并提取液；
(2)膜分離上述提取液回收乙醇，離心取上清液，在卷式膜分離設(shè)備中依次進(jìn)行微濾、 超濾，得到透過液；
(3)柱層析透過液上大孔樹脂，吸附完成后，用水和40-60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得到山茶苷A粗品；
(4)高速逆流色譜分離采用高速逆流色譜法對所得粗品進(jìn)行分離純化，制備得到山茶苷A。所述步驟(1)中液體動(dòng)態(tài)連續(xù)逆流裝置為多個(gè)提取裝置串聯(lián)或并聯(lián)或串并聯(lián)合用，每次提取乙醇溶液用量為原料質(zhì)量的3-5倍(v/w)。所述步驟(2)中膜材料為聚醚砜膜或聚砜膜，微濾膜孔徑為0. 2-0. 45 μ m，超濾膜截留分子量為30000-1000，操作壓力為0. 1-0. 15Mpa。
所述步驟(3)中的大孔吸附樹脂為AB-8、D3520、HPD100或ADS-7型。所述步驟(4)中高速逆流色譜法分離溶劑系統(tǒng)選用正己烷-正丁醇-甲醇-0. 5% 乙酸水溶液，體積比為(1-3) (3-5) (1-3) (4-6)，溶劑系統(tǒng)混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，流動(dòng)相流速控制在1. 5-2. 5ml/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速控制在750-900r/min。本發(fā)明的有益效果是
(1)利用液體動(dòng)態(tài)連續(xù)逆流提取技術(shù)，通過循環(huán)的提取液不斷地將有效成分提取出來， 大大縮短了提取周期和溶劑的用量。(2)采用膜分離、大孔吸附樹脂和高速逆流色譜技術(shù)相結(jié)合分離制備山茶苷A，工藝簡單、成本低、產(chǎn)品含量高。下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施例。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
以亮葉楊桐葉為原料，粉碎，取3kg，平均置于3個(gè)串聯(lián)的提取裝置中，加入12L60%的食用乙醇溶液，在40°C的提取溫度下，提取3次，每次池，合并提取液，回收乙醇，離心取上清液，在卷式膜分離設(shè)備中依次進(jìn)行微濾、超濾，操作壓力為0. 15Mpa，得到透過液，通過AB-8 型大孔吸附樹脂柱，吸附完成后，先用水洗脫至無色，再用50%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液， 濃縮干燥得到山茶苷A粗品，采用高速逆流色譜法對所得粗品進(jìn)行分離純化，按體積比為 1 :3:1 :4配制正己烷-正丁醇-甲醇-0. 5%乙酸水溶液溶劑系統(tǒng)，溶劑系統(tǒng)混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至 800r/min,泵入下相作流動(dòng)相，動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速控制在1. 5ml/min,將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測，收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，得到山茶苷A，含量98. 8%。實(shí)施例2:
以亮葉楊桐葉為原料，粉碎，取3kg，平均置于3個(gè)串聯(lián)的提取裝置中，加入15L85%的食用乙醇溶液，在40°C的提取溫度下，提取2次，每次3h，合并提取液，回收乙醇，離心取上清液，在卷式膜分離設(shè)備中依次進(jìn)行微濾、超濾，操作壓力為0. 15Mpa，得到透過液，通過 HPD100型大孔吸附樹脂柱，吸附完成后，先用水洗脫至無色，再用40%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得到山茶苷A粗品，采用高速逆流色譜法對所得粗品進(jìn)行分離純化，按體積比為2 3 3 5配制正己烷-正丁醇-甲醇-0. 5%乙酸水溶液溶劑系統(tǒng)，溶劑系統(tǒng)混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至850r/min，泵入下相作流動(dòng)相，動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速控制在1. 5ml/min,將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測，收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，得到山茶苷A，含量 98. 5%ο實(shí)施例3:
以亮葉楊桐葉為原料，粉碎，取^g，平均置于5個(gè)串聯(lián)的提取裝置中，加入25L80%的食用乙醇溶液，在50°C的提取溫度下，提取2次，每次4h，合并提取液，回收乙醇，離心取上清液，在卷式膜分離設(shè)備中依次進(jìn)行微濾、超濾，操作壓力為0. 15Mpa，得到透過液，通過 ADS-7型大孔吸附樹脂柱，吸附完成后，先用水洗脫至無色，再用45%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得到山茶苷A粗品，采用高速逆流色譜法對所得粗品進(jìn)行分離純化，按體積比為3 4 3 5配制正己烷-正丁醇-甲醇-0. 5%乙酸水溶液溶劑系統(tǒng)，溶劑系統(tǒng)混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至750r/min，泵入下相作流動(dòng)相，動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速控制在2. 5ml/min,將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測，收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，得到山茶苷A，含量 98. 6%ο實(shí)施例4:
以亮葉楊桐葉為原料，粉碎，取^g，平均置于5個(gè)串聯(lián)的提取裝置中，加入25L70%的食用乙醇溶液，在65°C的提取溫度下，提取3次，每次池，合并提取液，回收乙醇，離心取上清液，在卷式膜分離設(shè)備中依次進(jìn)行微濾、超濾，操作壓力為0. IMpa，得到透過液，通過D3520 型大孔吸附樹脂柱，吸附完成后，先用水洗脫至無色，再用40%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液， 濃縮干燥得到山茶苷A粗品，采用高速逆流色譜法對所得粗品進(jìn)行分離純化，按體積比為
1:3:1 :4配制正己烷-正丁醇-甲醇-0. 5%乙酸水溶液溶劑系統(tǒng)，溶劑系統(tǒng)混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至 800r/min,泵入下相作流動(dòng)相，動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速控制在2ml/min，將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測，收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，得到山茶苷A，含量98. 1%。實(shí)施例5:
以亮葉楊桐葉為原料，粉碎，取^g，平均置于5個(gè)串聯(lián)的提取裝置中，加入25L80%的食用乙醇溶液，在55°C的提取溫度下，提取2次，每次4h，合并提取液，回收乙醇，離心取上清液，在卷式膜分離設(shè)備中依次進(jìn)行微濾、超濾，操作壓力為0. IMpa，得到透過液，通過ADS-7 型大孔吸附樹脂柱，吸附完成后，先用水洗脫至無色，再用60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液， 濃縮干燥得到山茶苷A粗品，采用高速逆流色譜法對所得粗品進(jìn)行分離純化，按體積比為
25 2 4配制正己烷-正丁醇-甲醇-0. 5%乙酸水溶液溶劑系統(tǒng)，溶劑系統(tǒng)混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至 900r/min,泵入下相作流動(dòng)相，動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速控制在2ml/min，將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測，收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，得到山茶苷A，含量98. 1。實(shí)施例6:
以亮葉楊桐葉為原料，粉碎，取^g，平均置于5個(gè)串聯(lián)的提取裝置中，加入20L60%的食用乙醇溶液，在65°C的提取溫度下，提取2次，每次4h，合并提取液，回收乙醇，離心取上清液，在卷式膜分離設(shè)備中依次進(jìn)行微濾、超濾，操作壓力為0. 15Mpa，得到透過液，通過 HPD100型大孔吸附樹脂柱，吸附完成后，先用水洗脫至無色，再用60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得到山茶苷A粗品，采用高速逆流色譜法對所得粗品進(jìn)行分離純化，按體積比為3 5 3 6配制正己烷-正丁醇-甲醇-0. 5%乙酸水溶液溶劑系統(tǒng)，溶劑系統(tǒng)混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機(jī)轉(zhuǎn)速調(diào)至850r/min，泵入下相作流動(dòng)相，動(dòng)態(tài)平衡后，流動(dòng)相流速控制在2. 5ml/min,將粗品溶于下相由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，HPLC檢測，收集目標(biāo)成分，減壓濃縮干燥流分，得到山茶苷A，含量 98. 3%ο
權(quán)利要求
1.一種山茶苷A的制備方法，其特征在于具體步驟如下(1)提取以亮葉楊桐葉為原料，粉碎，置于液體動(dòng)態(tài)連續(xù)逆流提取裝置中醇提，以 60-85%的食用乙醇溶液為提取溶劑，在40-65°C的提取溫度下，提取2_3次，合并提取液；(2)膜分離上述提取液回收乙醇，離心取上清液，在卷式膜分離設(shè)備中依次進(jìn)行微濾、 超濾，得到透過液；(3)柱層析透過液上大孔樹脂，吸附完成后，用水和40-60%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得到山茶苷A粗品；(4)高速逆流色譜分離采用高速逆流色譜法對所得粗品進(jìn)行分離純化，制備得到山茶苷A。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種山茶苷A的制備方法，其特征在于所述步驟(1)中液體動(dòng)態(tài)連續(xù)逆流裝置為多個(gè)提取裝置串聯(lián)或并聯(lián)或串并聯(lián)合用，每次提取乙醇溶液用量為原料質(zhì)量的3-5倍(v/w)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種山茶苷A的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中膜材料為聚醚砜膜或聚砜膜，微濾膜孔徑為0. 2-0. 45 μ m，超濾膜截留分子量為30000-1000，操作壓力為0. 1-0. 15Mpa。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種山茶苷A的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中的大孔吸附樹脂為AB-8、D3520、HPD100或ADS-7型。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種山茶苷A的制備方法，其特征在于所述步驟(4)中高速逆流色譜法分離溶劑系統(tǒng)選用正己烷-正丁醇-甲醇-0. 5%乙酸水溶液，體積比為(1-3) (3-5) :(1-3): (4-6)，溶劑系統(tǒng)配制后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動(dòng)相，流動(dòng)相流速控制在1. 5-2. 5ml/min，主機(jī)轉(zhuǎn)速控制在750_900r/min。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種山茶苷A的制備方法，以亮葉楊桐葉為原料，粉碎，置于液體動(dòng)態(tài)連續(xù)逆流提取裝置中醇提，合并提取液，回收乙醇，采用膜分離進(jìn)行純化，透過液上大孔樹脂，吸附完成后，水和醇溶液洗脫，收集目標(biāo)流分，濃縮，干燥即得粗品，采用高速逆流色譜法分離粗品中的山茶苷A。本方法工藝流程簡單，提取效率高，十分利于工業(yè)化生產(chǎn)，且制備過程中，污染少，成本低，制備的山茶苷A純度達(dá)到98%以上。
文檔編號(hào)C07H17/07GK102268052SQ201110226588
公開日2011年12月7日 申請日期2011年8月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月9日
發(fā)明者萬冬梅, 劉東鋒 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司