專利名稱：一種分離純化利卡靈b的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物領(lǐng)域，具體涉及一種分離純化利卡靈B的方法。
背景技術(shù)：
利卡靈B(Licarin B)分子式為C2tlH2tlO4,分子量為324. 38，為無色針晶，mp. 91-92°C (甲醇)。是從ongoing樟科(Lauraceae)植物中分離得到的一種木脂素類化合物，如李卡
Licarin aritu Ducke 樹干、日本潤楠ifecAi/ws japonica Sieb. et Zucc.葉以及紅楠 Machilus thunbergii Sieb. et Zucc.樹皮、木材和葉。藥理研究表明，利卡靈B具有免疫抑制活性，對促細(xì)胞分裂劑(刀豆球蛋白A)誘導(dǎo)的人外周血液淋巴細(xì)胞增生有抑制作用，其 IC5tl為1.25yg/mL。迄今為止，尚未發(fā)現(xiàn)大量分離純化利卡靈B的方法報(bào)道，亦沒有采用酶法和高速逆流色譜法分離純化利卡靈B的工藝報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種分離純化利卡靈B的方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
一種分離純化利卡靈B的方法，其特征在于包括以下步驟取原料李卡樟樹干經(jīng)粉碎處理后，用酶溶液水浴浸泡4-12小時，充分?jǐn)嚢琛⑦^濾，取濾渣用5-10倍量的95%乙醇回流提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，用正丁醇萃取得萃取物，再以正己烷-甲醇-乙腈-水為溶劑系統(tǒng)，采用高速逆流色譜分法分離萃取物，流分減壓濃縮，乙醇重結(jié)晶即得利卡靈B。所述酶溶液為纖維素酶溶液或果膠酶溶液，酶含量為0. 4-0. 8%，酶溶液pH為 4. 0-4. 5，酶解溫度為 35-450C。所述高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)正己烷-甲醇-乙腈-水體積比為(4-8) :(3-6) (1-3):(2-5)。本發(fā)明的有益效果在于采用酶法提取，使有效成分更易溶出，可提高提取率；采用高速逆流色譜法分離純化，具有分離效果好，高效、快速、產(chǎn)品純度高等特點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
取原料李卡樟樹干經(jīng)粉碎過60目篩后，稱取2kg加6LpH4. 2的纖維素酶溶液(纖維素酶加入量為藥材量的0. 4%)于40°C水浴浸泡酶解8小時，充分?jǐn)嚢?、過濾，取濾渣用6倍量的95%乙醇回流提取2次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，用正丁醇萃取得萃取物，再以正己烷-甲醇-乙腈-水為溶劑系統(tǒng)，按體積比為5:3:2:4配制，將溶劑系統(tǒng)置于分液漏斗中振搖，靜置，分出上相和下相，上相為固定相，下相為流動相，用下相溶解萃取物，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機(jī)轉(zhuǎn)動，控制轉(zhuǎn)速為850r/min，同時以2ml/min流速泵入流動相，待兩相達(dá)到動態(tài)平衡后，進(jìn)樣，紫外檢測，收集流出液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，乙醇重結(jié)晶，干燥得4. 87g利卡靈B產(chǎn)品，含量98. 6%。實(shí)施例2
取原料李卡樟樹干經(jīng)粉碎過60目篩后，稱取2kg加8LpH4. 4的纖維素酶溶液(纖維素酶加入量為藥材量的0. 5%)于38°C水浴浸泡酶解4小時，充分?jǐn)嚢?、過濾，取濾渣用5倍量的95%乙醇回流提取3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，用正丁醇萃取得萃取物，再以正己烷-甲醇-乙腈-水為溶劑系統(tǒng)，按體積比為7 5 3 2配制，將溶劑系統(tǒng)置于分液漏斗中振搖，靜置，分出上相和下相，上相為固定相，下相為流動相，用下相溶解萃取物，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機(jī)轉(zhuǎn)動，控制轉(zhuǎn)速為850r/min，同時以2ml/min流速泵入流動相，待兩相達(dá)到動態(tài)平衡后，進(jìn)樣，紫外檢測，收集流出液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，乙醇重結(jié)晶，干燥得4. 76g利卡靈B產(chǎn)品，含量97. 3%。實(shí)施例3:
取原料李卡樟樹干經(jīng)粉碎過60目篩后，稱取2kg加10LpH4. 0的纖維素酶溶液(纖維素酶加入量為藥材量的0. 8%)于35°C水浴浸泡酶解10小時，充分?jǐn)嚢?、過濾，取濾渣用8倍量的95%乙醇回流提取3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，用正丁醇萃取得萃取物，再以正己烷-甲醇-乙腈-水為溶劑系統(tǒng)，按體積比為4 6 1 5配制，將溶劑系統(tǒng)置于分液漏斗中振搖，靜置，分出上相和下相，上相為固定相，下相為流動相，用下相溶解萃取物，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機(jī)轉(zhuǎn)動，控制轉(zhuǎn)速為850r/min，同時以2ml/min流速泵入流動相，待兩相達(dá)到動態(tài)平衡后，進(jìn)樣，紫外檢測，收集流出液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，乙醇重結(jié)晶，干燥得4. 64g利卡靈B產(chǎn)品，含量98. 7%。實(shí)施例4:
取原料李卡樟樹干經(jīng)粉碎過60目篩后，稱取2kg加7LpH4. 5的纖維素酶溶液(纖維素酶加入量為藥材量的0. 6%)于45°C水浴浸泡酶解12小時，充分?jǐn)嚢?、過濾，取濾渣用10倍量的95%乙醇回流提取2次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，用正丁醇萃取得萃取物，再以正己燒-甲醇-乙腈-水為溶劑系統(tǒng)，按體積比為8 3 3 5配制，將溶劑系統(tǒng)置于分液漏斗中振搖，靜置，分出上相和下相，上相為固定相，下相為流動相，用下相溶解萃取物，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿，再啟動主機(jī)轉(zhuǎn)動，控制轉(zhuǎn)速為850r/min，同時以2ml/min流速泵入流動相，待兩相達(dá)到動態(tài)平衡后，進(jìn)樣，紫外檢測，收集流出液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，乙醇重結(jié)晶，干燥得4. 92g利卡靈B產(chǎn)品，含量98. 1%。
權(quán)利要求
1.一種分離純化利卡靈B的方法，其特征在于包括以下步驟取原料李卡樟樹干經(jīng)粉碎處理后，用酶溶液水浴浸泡4-12小時，充分?jǐn)嚢?、過濾，取濾渣用5-10倍量的95%乙醇回流提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，用正丁醇萃取得萃取物，再以正己烷-甲醇-乙腈-水為溶劑系統(tǒng)，采用高速逆流色譜分法分離萃取物，流分減壓濃縮，乙醇重結(jié)晶即得利卡靈B。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述酶溶液為纖維素酶溶液或果膠酶溶液，酶含量為0. 4-0. 8%，酶溶液pH為4. 0-4. 5，酶解溫度為35-45°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)正己烷-甲醇-乙腈-水體積比為(4-8) :(3-6) :(1-3) (2-5)。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然藥物領(lǐng)域，具體涉及一種分離純化利卡靈B的方法。方法包括取原料李卡樟樹干經(jīng)粉碎處理后，用酶溶液水浴浸泡，攪拌、過濾，取濾渣用5-10倍量的95%乙醇回流提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，用正丁醇萃取得萃取物，再以正己烷-甲醇-乙腈-水為溶劑系統(tǒng)，采用高速逆流色譜分法分離萃取物，流分減壓濃縮，乙醇重結(jié)晶即得利卡靈B。本發(fā)明采用酶法和高速逆流色譜技術(shù)結(jié)合，具有提取條件溫和、高效的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號C07D307/86GK102391223SQ201110303500
公開日2012年3月28日 申請日期2011年10月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月10日
發(fā)明者劉東鋒, 郭琴 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司