專利名稱：一種人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)及其合成和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及醫(yī)療、診斷用酶生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，具體是指一種人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)及其合成和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
人尿胰蛋白酶抑制劑是一種Kimitz型的廣譜蛋白酶抑制劑，能夠有效的抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、乳糖酶、脂肪酶、透明質(zhì)酸酶和其他胰腺酶的活性。此外，其具有穩(wěn)定溶酶體膜，抑制溶酶體酶的釋放，抑制心肌抑制因子(MDF)產(chǎn)生，清除氧自由基及抑制炎癥介質(zhì)釋放的作用。人尿胰蛋白酶抑制劑還可改善手術(shù)刺激引起的免疫功能下降、蛋白代謝異常和腎功能降低，防止手術(shù)刺激引起的對內(nèi)臟器官與細(xì)胞的損傷以及改善休克時的循環(huán)狀態(tài)等。其在臨床醫(yī)療中有廣泛的應(yīng)用，適用癥包括急性胰腺炎(包括外傷性、術(shù)后及內(nèi)窺鏡逆行性胰膽管造影術(shù)后的急性胰腺炎)、慢性復(fù)發(fā)性胰腺炎的急性惡化期，急性循環(huán)衰竭(出血性休克、細(xì)菌性休克、外傷性休克、燒傷性休克)；也廣泛用于胸外科手術(shù)、消化系統(tǒng)手術(shù)、腫瘤手術(shù)、器官移植、器官切除手術(shù)及CPB手術(shù)；還用于治療與預(yù)防腫瘤化療產(chǎn)生的腎功能障礙。目前，日本的Mochida Pharmaceutical (Tokyo, Japan)公司有較成熟的產(chǎn)品，分子量為 67kDa，國內(nèi)也有企業(yè)從健康男性尿液中提取該蛋白。然而人尿胰蛋白酶抑制劑的分離純化步驟通常包括了多步的硫酸銨沉淀，表面活化劑處理，熱處理，離子交換層析，分子篩層析等。而過多的純化步驟，導(dǎo)致了純化時間較長，蛋白和活性回收率較低的結(jié)果。為了大規(guī)模生產(chǎn)人尿胰蛋白酶抑制劑，必須減少分離純化的步驟。因此，需要提供快速高效的人尿胰蛋白酶抑制劑分離方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服了上述現(xiàn)有技術(shù)中的缺點(diǎn)，提供一種人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)及其合成和應(yīng)用，利用該人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)可以大規(guī)?？焖俜蛛x純化人尿胰蛋白酶抑制劑，可在僅用一步親和層析的情況下，得到人尿胰蛋白酶抑制劑純品，整個純化步驟消耗時間短，蛋白和活性回收率較高，適于大規(guī)模推廣應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，在本發(fā)明的第一方面，提供了一種人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)，其特點(diǎn)是，所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)由人尿胰蛋白酶抑制劑親和配體和層析介質(zhì)連接而成。較佳地，所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和配體是絲氨酸蛋白酶Sl位點(diǎn)結(jié)構(gòu)類似物， 所述層析介質(zhì)是kpharose、殼聚糖、硅膠或陶瓷顆粒。更佳地，所述絲氨酸蛋白酶Sl位點(diǎn)結(jié)構(gòu)類似物是-ASP-GLY或-SER-GLY。較佳地，所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)由人尿胰蛋白酶抑制劑親和配體和層析介質(zhì)通過三聚氯氰作為間隔臂進(jìn)行連接。
在本發(fā)明的第二方面，提供了一種上述的人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)的合成方法，其特點(diǎn)是，將所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和配體和所述層析介質(zhì)進(jìn)行連接得到。較佳地，所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)由人尿胰蛋白酶抑制劑親和配體和層析介質(zhì)通過三聚氯氰作為間隔臂進(jìn)行連接。在本發(fā)明的第三方面，提供了一種利用上述的人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)大規(guī)模純化人尿胰蛋白酶抑制劑的方法，其特點(diǎn)是，將含有人尿胰蛋白酶抑制劑的溶液流經(jīng)所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)進(jìn)行親和吸附，然后采用清洗液沖洗所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)，最后用洗脫緩沖液洗脫所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)上吸附的人尿胰蛋白酶抑制劑，從而純化人尿胰蛋白酶抑制劑。較佳地，所述的含有人尿胰蛋白酶抑制劑的溶液是采用將人尿液過濾并凍干處理后復(fù)溶得到。較佳地，所述親和吸附的條件為pH值6. 0 7. 0，電導(dǎo)率為5-lOms/cm。較佳地，采用清洗液沖洗所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)的清洗條件為pH值 6. 0 7. 0，電導(dǎo)率 5 10ms/cm。較佳地，用洗脫緩沖液洗脫所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)上吸附的人尿胰蛋白酶抑制劑的洗脫條件為pH值2. O 3. O。本發(fā)明的有益效果具體如下1、本發(fā)明通過采用絲氨酸蛋白酶Sl位點(diǎn)結(jié)構(gòu)類似物作為人尿胰蛋白酶抑制劑親和配體，與層析介質(zhì)連接合成人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)，可快速高效純化人尿胰蛋白酶抑制劑，適于大規(guī)模推廣應(yīng)用；2、本發(fā)明通過優(yōu)化蛋白質(zhì)吸附條件使得人尿胰蛋白酶抑制劑的純化效率顯著增力口，具有較大工業(yè)應(yīng)用潛力，體現(xiàn)出較大的經(jīng)濟(jì)效益。


圖IA是本發(fā)明的人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)的第一具體實(shí)施例(簡寫為 S-D-G)的人尿胰蛋白酶抑制劑親和配體的結(jié)構(gòu)示意圖。圖IB是本發(fā)明的人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)的第二具體實(shí)施例(簡寫為 S-S-G)的人尿胰蛋白酶抑制劑親和配體的結(jié)構(gòu)示意圖。圖2是圖IA所示的第一具體實(shí)施例和和圖IB所示的第二具體實(shí)施例對人尿胰蛋白酶抑制劑吸附時PH值對人尿胰蛋白酶抑制劑吸附量的影響。圖3是pH6. O下圖IA所示的第一具體實(shí)施例和和圖IB所示的第二具體實(shí)施例對人尿胰蛋白酶抑制劑的吸附量，其中橫坐標(biāo)表示靜態(tài)吸附過程中，游離未吸附的人尿胰蛋白酶抑制劑；縱坐標(biāo)為親和介質(zhì)吸附的人尿胰蛋白酶抑制劑。圖4是以圖IA所示的第一具體實(shí)施例和和圖IB所示的第二具體實(shí)施例對為人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)時洗脫緩沖液對人尿胰蛋白酶抑制劑回收率的影響。
具體實(shí)施例方式為了能夠更清楚地理解本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，特舉以下實(shí)施例詳細(xì)說明。下述實(shí)施例1-2和對比例1所用的人胰蛋白酶抑制劑溶液的制備將來自于健康男性的尿液進(jìn)行自然沉降lh，取200ml液體，使用濾紙過濾去除顆粒，在-80攝氏度冷凍池后用真空冷凍干燥機(jī)凍干為粉末狀。粉末用加入200ml緩沖液QOmM PBs pH 6. 0) (pH 6. 0，電導(dǎo)率5 lOms/cm)復(fù)溶。取溶解后溶液12000rpm離心15min，取上清使用。涉及的采用清洗液為沖洗所述人胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)的清洗條件為pH值 6. O 7. 0，電導(dǎo)率5 10ms/cm。例如采用20mM PBs pH 6. O的清洗液。實(shí)施例1 :kpharose-ASP-GLY的合成及應(yīng)用Sepharose CL 4B(100g)用10倍體積的去離子水洗滌，抽干成濕餅狀；懸浮于 50ml活化緩沖液(0. 8M NaOH，20%二甲亞砜，10%環(huán)氧氯丙烷，0. 5mg/ml硼氫化鈉)40°C 搖床震蕩2.證，然后倒入玻璃磨砂漏斗中，在抽濾下經(jīng)過每次10倍體積的蒸餾水洗滌，直到洗滌液PH至中性，在抽干成濕餅狀?；罨膋pharose CL 4B介質(zhì)懸浮于500ml0. IM NaOH溶液，加入20ml乙二胺溶液，凝膠在攪拌QOOrpm)下30°C恒溫12h。用去離子水清洗。NH2-kpharose CL 4B懸浮在350ml 50% (ν/ν)冰浴丙酮溶液中，隨后將4g三氮嗪溶于80ml-20°C預(yù)冷丙酮，快速加入介質(zhì)懸浮液，實(shí)時檢測pH值，用飽和NaHCO3將pH維持在
6.5-7. O之間，反應(yīng)溫度維持在0-4°C繼續(xù)攪拌2-4h，至白色消失，混合物呈透明狀停止反應(yīng)。用3倍介質(zhì)體積的丙酮，丙酮去離子水(1 1)，去離子水，順序洗滌反應(yīng)，得二氯三氮嗪-氨基-S印harose CL 4B。稱取40g 二氯三氮嗪-氨基-S印harose CL 4B,稱取IOg 天冬氨酸，溶解于80ml去離子水中，50-60°C振蕩Mh，反應(yīng)過程中時常檢查pH，用IM NaOH 使溶液保持在11-12之間。反應(yīng)完畢，用500ml去離子水充分洗滌，抽干。稱取20g甘氨酸， 溶解于80ml去離子水中，與上步抽干的介質(zhì)混合，85-95°C振蕩60h ；反應(yīng)過程中時常檢查 pH，用IM NaOH使溶液保持在11-12之間。反應(yīng)完畢，用500ml去離子水充分洗滌，抽干。(1)最佳吸附pH值的確定取人尿胰蛋白酶抑制劑標(biāo)準(zhǔn)品，用去離子水稀釋至濃度為600μ g/ml，分為6組， 每組溶液調(diào)節(jié)PH值為4，5，6，7，8，9，體積lml，分別加入0. Olg濕介質(zhì)，4°C充分振蕩2h后， 測定上清人尿胰蛋白酶抑制劑濃度，計(jì)算介質(zhì)的吸附量，選擇最佳吸附的PH值。初始人尿胰蛋白酶抑制劑 0. 6mg/l，在不同pH值下與介質(zhì)充分振蕩池后，大量人尿胰蛋白酶抑制劑被親和介質(zhì)吸附，上清中的含量降低，吸附量與PH值關(guān)系見圖2。較佳吸附條件為，溫度為4°C，pH為6. 0-7. 0，電導(dǎo)率為5-lOms/cm。最佳吸附條件為，溫度為 4°C, pH為6，電導(dǎo)率為5 10ms/cm。(2)介質(zhì)最大吸附量的確定在pH值優(yōu)化的基礎(chǔ)上，確定介質(zhì)的最大吸附量。取人尿胰蛋白酶抑制劑標(biāo)準(zhǔn)品， 用去離子水稀釋至濃度為100，200，300，400，500，600，700，800，900 μ g/ml,調(diào)節(jié)pH值為
7.8，分別加入0. Olg濕介質(zhì)，4°C充分振蕩池后，測定上清人尿胰蛋白酶抑制劑濃度，計(jì)算介質(zhì)的最大吸附量。吸附量與上清蛋白濃度關(guān)系，見圖3，計(jì)算單位介質(zhì)最大吸附量為 31. 7mg/g 介質(zhì)。(3)最佳洗脫條件的確定在培養(yǎng)吸附條件和最大吸附量的基礎(chǔ)上，考察洗脫液pH值對洗脫結(jié)果的影響，洗脫液為0. OlM HC1，結(jié)果見圖4。從圖中可見，較佳洗脫條件為pH值2.0 3.0 ；最適洗脫條件為PH值為2.0。實(shí)施例2 =Sepharose-SER-GLY的合成及應(yīng)用
Sepharose CL 4B(100g)用10倍體積的去離子水洗滌，抽干成濕餅狀；懸浮于 50ml活化緩沖液(0. 8M NaOH，20%二甲亞砜，10%環(huán)氧氯丙烷，0. 5mg/ml硼氫化鈉)40°C 搖床震蕩2.證，然后倒入玻璃磨砂漏斗中，在抽濾下經(jīng)過每次10倍體積的蒸餾水洗滌，直到洗滌液PH至中性，在抽干成濕餅狀?；罨膋pharose CL 4B介質(zhì)懸浮于500ml0. IM NaOH溶液，加入20ml乙二胺溶液，凝膠在攪拌QOOrpm)下30°C恒溫12h。用去離子水清洗。NH2-kpharose CL 4B懸浮在350ml 50% (ν/ν)冰浴丙酮溶液中，隨后將4g三氮嗪溶于80ml-20°C預(yù)冷丙酮，快速加入介質(zhì)懸浮液，實(shí)時檢測pH值，用飽和NaHCO3將pH維持在
6.5-7. 0之間，反應(yīng)溫度維持在0-4°C繼續(xù)攪拌2-4h，至白色消失，混合物呈透明狀停止反應(yīng)。用3倍介質(zhì)體積的丙酮，丙酮去離子水(1 1)，去離子水，順序洗滌反應(yīng)，得二氯三氮嗪-氨基-S印harose CL 4B。稱取40g 二氯三氮嗪-氨基-S印harose CL 4B，稱取IOg 絲氨酸，溶解于80ml去離子水中，50-60°C振蕩Mh，反應(yīng)過程中時常檢查pH，用IM NaOH使溶液保持在11-12之間。反應(yīng)完畢，用500ml去離子水充分洗滌，抽干。稱取20g甘氨酸， 溶解于80ml去離子水中，與上步抽干的介質(zhì)混合，85-95°C振蕩60h ；反應(yīng)過程中時常檢查 pH，用IM NaOH使溶液保持在11-12之間。反應(yīng)完畢，用500ml去離子水充分洗滌，抽干。(1)最佳吸附pH值的確定取人尿胰蛋白酶抑制劑標(biāo)準(zhǔn)品，用去離子水稀釋至濃度為600μ g/ml，分為6組， 每組溶液調(diào)節(jié)PH值為4，5，6，7，8，9，體積lml，分別加入0. Olg濕介質(zhì)，4°C充分振蕩2h后， 測定上清人尿胰蛋白酶抑制劑濃度，計(jì)算介質(zhì)的吸附量，選擇最佳吸附的PH值。初始人尿胰蛋白酶抑制劑 0. 6mg/l，在不同pH值下與介質(zhì)充分振蕩池后，大量人尿胰蛋白酶抑制劑被親和介質(zhì)吸附，上清中的含量降低，吸附量與PH值關(guān)系見圖2。較佳吸附條件為，溫度為4°C，pH為6. 0-7. 0，電導(dǎo)率為5-lOms/cm。最佳吸附條件為，溫度為 4°C, pH為6，電導(dǎo)率為5 10ms/cm。(2)介質(zhì)最大吸附量的確定在pH值優(yōu)化的基礎(chǔ)上，確定介質(zhì)的最大吸附量。取人尿胰蛋白酶抑制劑標(biāo)準(zhǔn)品， 用去離子水稀釋至濃度為100，200，300，400，500，600，700，800，900 μ g/ml,調(diào)節(jié)pH值為
7.8，分別加入0. Olg濕介質(zhì)，4°C充分振蕩池后，測定上清人尿胰蛋白酶抑制劑濃度，計(jì)算介質(zhì)的最大吸附量。吸附量與上清蛋白濃度關(guān)系，見圖3，計(jì)算單位介質(zhì)最大吸附量為 30. lmg/g 介質(zhì)。(3)最佳洗脫條件的確定在培養(yǎng)吸附條件和最大吸附量的基礎(chǔ)上，考察洗脫液pH值對洗脫結(jié)果的影響，洗脫液為0. OlM HC1，結(jié)果見圖4。從圖中可見，較佳洗脫調(diào)節(jié)為pH值2.0 3.0;最適洗脫條件為PH值為2.0。對比例1 :kpharose-GLY-GLY的合成及應(yīng)用Sepharose CL 4B(100g)用10倍體積的去離子水洗滌，抽干成濕餅狀；懸浮于 50ml活化緩沖液(0. 8M NaOH，20%二甲亞砜，10%環(huán)氧氯丙烷，0. 5mg/ml硼氫化鈉)40°C 搖床震蕩2.證，然后倒入玻璃磨砂漏斗中，在抽濾下經(jīng)過每次10倍體積的蒸餾水洗滌，直到洗滌液PH至中性，在抽干成濕餅狀。活化的kpharose CL 4B介質(zhì)懸浮于500ml0. IM NaOH溶液，加入20ml乙二胺溶液，凝膠在攪拌QOOrpm)下30°C恒溫12h。用去離子水清洗。NH2-kpharoseCL 4B懸浮在350ml 50% (ν/ν)冰浴丙酮溶液中，隨后將4g三氮嗪溶于80ml-20°C預(yù)冷丙酮，快速加入介質(zhì)懸浮液，實(shí)時檢測pH值，用飽和NaHC03將pH維持在 6. 5-7. 0之間，反應(yīng)溫度維持在0-4°C繼續(xù)攪拌2-4h，至白色消失，混合物呈透明狀停止反應(yīng)。用3倍介質(zhì)體積的丙酮，丙酮去離子水(1 1)，去離子水，順序洗滌反應(yīng)，得二氯三氮嗪-氨基-S印harose CL4B。稱取40g 二氯三氮嗪-氨基-S印harose CL 4B，稱取IOg甘氨酸，溶解于80ml去離子水中，50-60°C振蕩Mh，反應(yīng)過程中時常檢查pH，用IM NaOH使溶液保持在7. 5-8.0之間。反應(yīng)完畢，用500ml去離子水充分洗滌，抽干。稱取20g甘氨酸， 溶解于80ml去離子水中，與上步抽干的介質(zhì)混合，85-95°C振蕩60h ；反應(yīng)過程中時常檢查 pH，用IM NaOH使溶液保持在11-12之間。反應(yīng)完畢，用500ml去離子水充分洗滌，抽干。采用kpharose-G-G進(jìn)行最佳吸附pH值的確定、介質(zhì)最大吸附量的確定及最佳洗脫條件的確定，實(shí)驗(yàn)過程同實(shí)施例1中相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)過程，結(jié)果顯示kpharose-G-G基本無吸附能力。因此，本發(fā)明提供了一種具有工業(yè)應(yīng)用潛力的分離純化人尿胰蛋白酶抑制劑的方法，其使用kpharose-ASP-GLY親和層析一步分離純化人尿胰蛋白酶抑制劑，蛋白回收率為 1. 4%，活性回收率為 77. 5%,比活性為 2840U/mg。其使用Sepharose-SER-GLY 親和層析一步分離純化人尿胰蛋白酶抑制劑，蛋白回收率為 11%，活性回收率為 73. 2%，比活性為 3210U/mg。在此說明書中，本發(fā)明已參照其特定的實(shí)施例作了描述。但是，很顯然仍可以作出各種修改和變換而不背離本發(fā)明的精神和范圍。因此，說明書和附圖應(yīng)被認(rèn)為是說明性的而非限制性的。
權(quán)利要求
1.一種人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)，其特征在于，所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)由人尿胰蛋白酶抑制劑親和配體和層析介質(zhì)連接而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)，其特征在于，所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和配體是絲氨酸蛋白酶Sl位點(diǎn)結(jié)構(gòu)類似物，所述層析介質(zhì)是kpharose、殼聚糖、硅膠或陶瓷顆粒。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)，其特征在于，所述絲氨酸蛋白酶Sl位點(diǎn)結(jié)構(gòu)類似物是-ASP-GLY或-SER-GLY。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)，其特征在于，所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)由人尿胰蛋白酶抑制劑親和配體和層析介質(zhì)通過三聚氯氰作為間隔臂進(jìn)行連接。
5.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)的合成方法，其特征在于，將所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和配體和所述層析介質(zhì)進(jìn)行連接得到。
6.一種利用根據(jù)權(quán)利要求1所述的人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)大規(guī)模純化人尿胰蛋白酶抑制劑的方法，其特征在于，將含有人尿胰蛋白酶抑制劑的溶液流經(jīng)所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)進(jìn)行親和吸附，然后采用清洗液沖洗所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)，最后用洗脫緩沖液洗脫所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)上吸附的人尿胰蛋白酶抑制劑，從而純化人尿胰蛋白酶抑制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)大規(guī)模純化人尿胰蛋白酶抑制劑的方法，其特征在于，所述的含有人尿胰蛋白酶抑制劑的溶液是采用將人尿液過濾并凍干處理后復(fù)溶得到。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)大規(guī)模純化人尿胰蛋白酶抑制劑的方法，其特征在于，所述親和吸附的條件為pH值6. 0 7. 0，電導(dǎo)率為5-lOms/cm。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)大規(guī)模純化人尿胰蛋白酶抑制劑的方法，其特征在于，采用清洗液沖洗所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)的清洗條件為pH值6. 0 7. 0，電導(dǎo)率5 10ms/cm。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)大規(guī)模純化人尿胰蛋白酶抑制劑的方法，其特征在于，用洗脫緩沖液洗脫所述人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)上吸附的人尿胰蛋白酶抑制劑的洗脫條件為pH值2. 0 3. 0。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)，由人尿胰蛋白酶抑制劑親和配體和層析介質(zhì)連接而成。較佳地，人尿胰蛋白酶抑制劑親和配體是絲氨酸蛋白酶S1位點(diǎn)結(jié)構(gòu)類似物，層析介質(zhì)是Sepharose、殼聚糖、硅膠或陶瓷顆粒，人尿胰蛋白酶抑制劑親和配體和層析介質(zhì)通過三聚氯氰作為間隔臂進(jìn)行連接。還提供了一種上述的人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)的合成方法，以及利用上述的人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)大規(guī)模純化人尿胰蛋白酶抑制劑的方法，利用該人尿胰蛋白酶抑制劑親和介質(zhì)可以大規(guī)?？焖俜蛛x純化人尿胰蛋白酶抑制劑，可在僅用一步親和層析的情況下，得到人尿胰蛋白酶抑制劑純品，整個純化步驟消耗時間短，蛋白和活性回收率較高，適于大規(guī)模推廣應(yīng)用。
文檔編號C07K1/22GK102516387SQ20111042550
公開日2012年6月27日 申請日期2011年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月16日
發(fā)明者仝艷軍, 張玉然, 張玲, 楊海麟, 辛瑜, 陳亦 申請人:江南大學(xué)