專利名稱：虎杖中白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的提取與純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥材對(duì)照品制備方法，具體是一種虎杖中白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的提取與純化方法。
背景技術(shù)：
2008年我國(guó)首次把中藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究列入國(guó)家科技計(jì)劃，建立我國(guó)中藥材標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、中藥材物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)、中藥材標(biāo)準(zhǔn)分析方法技術(shù)規(guī)范和國(guó)際上通行的中藥標(biāo)準(zhǔn)是實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵。黃芪作為非常中藥的一味補(bǔ)氣中藥，具有清熱解毒、清涼解署、健胃清食作用之功效。臨床上應(yīng)用非常廣泛，主要用于治療關(guān)節(jié)痹痛，濕熱黃疸，經(jīng)閉，癥瘕，咳嗽痰多， 水火燙傷，跌撲損傷，癰腫瘡毒等病癥。目前對(duì)虎杖藥材質(zhì)量控制的對(duì)照品白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的提取制備與純化方法還沒有相關(guān)報(bào)導(dǎo)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種高效率、低成本中藥材對(duì)照品虎杖中白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的提取與純化方法。本發(fā)明以如下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題本發(fā)明虎杖中白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的提取與純化方法，包括以下步驟1)浸膏的制備稱取虎杖藥材粗粉，用8-12倍重量的體積濃度為70-85%的乙醇提取1-2次，每次1-2小時(shí)，過濾，合并濾液，濃縮至膏狀，浸膏水分散，備用；2)化合物的分離純化2. 1大孔樹脂富集將浸膏水分散液過大孔樹脂，先用蒸餾水洗脫，至洗下的洗脫液澄清無(wú)色，棄去水洗部分，再用體積濃度為40-60%的乙醇洗脫，收集洗脫液至顏色淡為止，此部分為白藜蘆醇和虎杖苷富集部位，將乙醇洗脫液濃縮至干備用；2. 2白藜蘆醇和白藜蘆醇苷供試品的制備將大孔樹脂富集部位通過半制備型高效液相色譜分離純化；色譜條件色譜柱Inertsil〇RPREP-ODSlOnm, IOmmX 250mm，流動(dòng)相采用體積比為20 80的乙腈-水溶液；體積流量5mL/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)2Mnm ；柱溫 室溫；取體積濃度為50%的甲醇稀釋液，進(jìn)樣量10mL，收集時(shí)間分別為6-8min、10-i;3min兩個(gè)流分，分別合并流分，于60°C減壓濃縮后，置干燥器內(nèi)干燥，得白藜蘆醇、白藜蘆醇苷。采用本發(fā)明方法可制取中藥材對(duì)照品白藜蘆醇和白藜蘆醇苷，而且效率高、成本低。
具體實(shí)施例方式
以下通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例1(1)浸膏的制備稱取虎杖藥材粗粉(60目)10Kg，用SOKg體積濃度為70%的乙醇提取2次，每次1. 5小時(shí)，過濾，合并濾液，濃縮至膏狀，浸膏水分散，備用。
(2)化合物的分離純化浸膏水分散液過大孔樹脂(HG2-885-76)，先用蒸餾水洗脫，至洗下的洗脫液澄清無(wú)色，棄去水洗部分，再用體積濃度為50 %的乙醇洗脫，收集洗脫液至顏色淡為止，此部分為白藜蘆醇和白藜蘆醇苷富集部位，將乙醇洗脫液濃縮至干備用。將大孔樹脂富集部位通過半制備型高效液相色譜分離純化。色譜條件色譜柱 Inertsil〇RPREP-ODS (lOnm, IOmmX 250mm)，流動(dòng)相采用體積比為20 80的乙腈-水溶液；體積流量5mL/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)2Mnm ；柱溫室溫；取體積濃度為50%的甲醇稀釋液， 進(jìn)樣量10mL，收集時(shí)間分別為6-8min、10-i;3min兩個(gè)流分。分別合并流分，于60°C減壓濃縮后，置干燥器內(nèi)干燥，得白藜蘆醇2. lg、白藜蘆醇苷1. Sg。實(shí)施例2(1)浸膏的制備稱取虎杖藥材粗粉(60目)20Kg，用200Kg體積濃度為80%的乙醇提取2次，第一次2小時(shí)，第二次1. 5小時(shí)，過濾，合并濾液，濃縮至膏狀，浸膏水分散，備用。(2)化合物的分離純化浸膏水分散液過大孔樹脂(HG2-885-76)，先用蒸餾水洗脫，至洗下的洗脫液澄清無(wú)色，棄去水洗部分，再用體積濃度為50 %的乙醇洗脫，收集洗脫液至顏色淡為止，此部分為白藜蘆醇和白藜蘆醇苷富集部位，將乙醇洗脫液濃縮至干備用。將大孔樹脂富集部位通過半制備型高效液相色譜分離純化。色譜條件色譜柱 Inertsil〇RPREP-ODS (lOnm, IOmmX 250mm)，流動(dòng)相采用體積比為20 80的乙腈-水溶液；體積流量5mL/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)2Mnm ；柱溫室溫；取體積濃度為50%的甲醇稀釋液， 進(jìn)樣量10mL，收集時(shí)間分別為6-8min、10-i;3min兩個(gè)流分。分別合并流分，60°C減壓濃縮后，置干燥器內(nèi)干燥，得白藜蘆醇4. Og、白藜蘆醇苷3. 7g。實(shí)施例3(1)浸膏的制備稱取虎杖藥材粗粉(60目)30Kg，用360Kg體積濃度為80%的乙醇提取2次，每次2小時(shí)，過濾，合并濾液，濃縮至膏狀，浸膏水分散，備用。(2)化合物的分離純化浸膏水分散液過大孔樹脂(HG2-885-76)，先用蒸餾水洗脫，至洗下的洗脫液澄清無(wú)色，棄去水洗部分，再用體積濃度為60 %的乙醇洗脫，收集洗脫液至顏色淡為止，此部分為白藜蘆醇和白藜蘆醇苷富集部位，將乙醇洗脫液濃縮至干備用。將大孔樹脂富集部位通過半制備型高效液相色譜分離純化。色譜條件色譜柱 Inertsil〇RPREP-ODS (lOnm, IOmmX 250mm)，流動(dòng)相采用體積比為20 80的乙腈-水溶液；體積流量5mL/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)2Mnm ；柱溫室溫；取體積濃度為50%的甲醇稀釋液， 進(jìn)樣量10mL，收集時(shí)間分別為6-8min、10-i;3min兩個(gè)流分。分別合并流分，于60°C減壓濃縮后，置干燥器內(nèi)干燥，得白藜蘆醇5. 7g、白藜蘆醇苷5. 2g。以下為純度檢測(cè)學(xué)和結(jié)構(gòu)鑒定實(shí)驗(yàn)資料1樣品純度檢測(cè)1.1TLC 法檢測(cè)白藜蘆醇的檢測(cè)取適量制備所得的白藜蘆醇供試品以盡可能大的量點(diǎn)于硅膠G 板上，以白藜蘆醇對(duì)照品溶液為對(duì)照，分別以丙酮-氯仿(體積比為5 1.5)、石油醚-丙酮(體積比為5 3.5)及石油醚-乙酸乙酯(體積比為5 4)為展開劑，展開，晾干，噴以體積濃度為10%濃硫酸-香草醛于105°C加熱直至顯紫紅色斑點(diǎn)。結(jié)果在供試品色譜中， 僅在于對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯一個(gè)紫紅色斑點(diǎn)。
白藜蘆醇苷的檢測(cè)取適量制備所得的白藜蘆醇苷供試品以盡可能大的量點(diǎn)于硅膠G板上，以白藜蘆醇苷對(duì)照品溶液為對(duì)照，分別以丙酮-氯仿(體積比為5 1)、氯仿-甲醇(體積比為5 1.5)和乙酸乙酯-丙酮-甲酸(體積比為2 2 0.1)為展開劑，展開，晾干，噴以體積濃度為10%濃硫酸-香草醛于105°C加熱直至顯紫紅色斑點(diǎn)。結(jié)果在供試品色譜中，僅在于對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯一個(gè)紫紅色斑點(diǎn)。1.2HPLC 法檢測(cè)色譜條件色譜柱為Ultimate XB-C18 (4. 6mmX 250mm, 5 μ m)，流動(dòng)相A相為乙腈，B相為0. 3%磷酸水，梯度洗脫(15-40% A,0-25min)檢測(cè)波長(zhǎng)為2Mnm，柱溫為25°C， 流速為1. Oml/min。在上述條件下樣品中白藜蘆醇和白藜蘆醇苷能夠達(dá)到基線分離，分離度大于1.5，理論塔板數(shù)大于5000，穩(wěn)定性好，能夠用于白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的鑒別。產(chǎn)物經(jīng)分析型高效液相色譜檢測(cè)，面積歸一化法測(cè)定純度，白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的純度均大于 99%。2結(jié)構(gòu)鑒定
權(quán)利要求
1.虎杖中白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的提取與純化方法，其特征在于，包括以下步驟1)浸膏的制備稱取虎杖藥材粗粉，用8-12倍重量的體積濃度為70-85%的乙醇提取 1-2次，每次1-2小時(shí)，過濾，合并濾液，濃縮至膏狀，浸膏水分散，備用；2)化合物的分離純化.2.1大孔樹脂富集將浸膏水分散液過大孔樹脂，先用蒸餾水洗脫，至洗下的洗脫液澄清無(wú)色，棄去水洗部分，再用體積濃度為40-60%的乙醇洗脫，收集洗脫液至顏色淡為止，此部分為白藜蘆醇和虎杖苷富集部位，將乙醇洗脫液濃縮至干備用；.2.2白藜蘆醇和白藜蘆醇苷供試品的制備將大孔樹脂富集部位通過半制備型高效液相色譜分離純化；色譜條件色譜柱Inertsil〇RPREP-ODSlOnm，IOmmX 250mm，流動(dòng)相 采用體積比為20 80的乙腈-水溶液；體積流量5mL/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)2Mnm ；柱溫室溫； 取體積濃度為50%的甲醇稀釋液，進(jìn)樣量10mL，收集時(shí)間分別為6-8min、10-i;3min兩個(gè)流分，分別合并流分，于60°C減壓濃縮后，置干燥器內(nèi)干燥，得白藜蘆醇、白藜蘆醇苷。
全文摘要
本發(fā)明公開虎杖中白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的提取與純化方法，它主要包括以下步驟1)浸膏的制備稱取虎杖藥材粗粉，用8-12倍重量的體積濃度為70-85％的乙醇提取1-2次，每次1-2小時(shí)，過濾，合并濾液，濃縮至膏狀，浸膏水分散，備用；2)化合物的分離純化將浸膏水分散液過大孔樹脂，先用蒸餾水洗脫，至洗下的洗脫液澄清無(wú)色，棄去水洗部分，再用體積濃度為40-60％的乙醇洗脫，收集洗脫液至顏色淡為止，此部分為白藜蘆醇和虎杖苷富集部位，將乙醇洗脫液濃縮至干備用；將大孔樹脂富集部位通過半制備型高效液相色譜分離純化，得到白藜蘆醇、白藜蘆醇苷。采用本發(fā)明方法可制取中藥材對(duì)照品白藜蘆醇和白藜蘆醇苷，而且效率高、成本低。
文檔編號(hào)C07C39/21GK102531851SQ201110452519
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2011年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月29日
發(fā)明者周小雷, 周雅琴, 王碩, 繆劍華, 袁經(jīng)權(quán), 龔小妹 申請(qǐng)人:廣西壯族自治區(qū)藥用植物園