專利名稱：一種青霉素類藥物通用半抗原、人工抗原、廣譜單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食品安全領(lǐng)域，具體涉及ー種青霉素類藥物的通用半抗原、人工抗原和廣譜單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
青霉素類藥物是ー類能破壞細菌細胞壁并在細菌繁殖期起殺菌作用的抗生素，主要包括芐青霉素、甲氧西林、羧芐西林、氨芐西林、阿莫西林、苯唑西林、氯唑西林、雙氯西林等。此類藥物主要對革蘭氏陽性菌有效，對革蘭陽性球菌及革蘭陽性桿菌、螺旋體、梭狀芽孢桿菌、放線菌以及部分擬桿菌也有抗菌作用。因此，青霉素類藥物在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中被大量用于治療動物的多種細菌性疾病。但青霉素類藥物對畜禽有一定的毒性，動物大劑量或長期連續(xù)服用青霉素類藥物易引起毒性反應(yīng)，引起動物抽搐、大小便失禁、甚至癱瘓等。更重要的是，青霉素類藥物大量 使用會在動物性食品中造成殘留而被消費者食入，這對人類身體健康有巨大危害。因此，世界各國都對動物性食品中殘留的青霉素類藥物進行嚴格的監(jiān)控，并且規(guī)定了多種青霉素類藥物在不同動物性食品中的最高殘留限量，如中國農(nóng)業(yè)部規(guī)定幾種青霉素類藥物在牛奶中的最高殘留限量為青霉素，4ng/mL ;阿莫西林，10ng/mL ;氨節(jié)西林，10ng/mL。目前，國內(nèi)外己發(fā)表的有關(guān)青霉素類藥物殘留檢測的方法有高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜ー質(zhì)譜法(LC-MS)、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)。這些常用方法實際操作中需要有昂貴的儀器，且前處理復(fù)雜、繁瑣、操作時間長、操作技術(shù)要求高。免疫分析方法有很高的精確度、靈敏性和特異性，且對技術(shù)要求不高，具有檢測時間短，適用于大批量測定等優(yōu)點。免疫分析法的核心試劑是抗體。目前已有的針對青霉素類藥物的免疫分析報道中，均是以某一種青霉素類藥物為基礎(chǔ)去制備抗體，所得抗體只對該藥物有較高識別能力，而對其他青霉素類藥物識別能力低，也就是說不能識別所有青霉素類藥物。因此，提供一種廣譜適用的青霉素類藥物免疫分析用抗體就成為該技術(shù)領(lǐng)域急需解決的技術(shù)難題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之ー是提供一種青霉素類藥物的通用半抗原。本發(fā)明的上述發(fā)明目的是通過以下技術(shù)方案達到的一種青霉素類藥物的通用半抗原，其分子結(jié)構(gòu)式如式I所示
H。で·
COOH
式I。本發(fā)明的目的之ニ是上述青霉素類藥物通用半抗原的制備方法。本發(fā)明的上述發(fā)明目的是通過以下技術(shù)方案達到的一種青霉素類藥物通用半抗原的制備方法，包括如下步驟(a)將6-氨基青霉素酸的ニ氧六環(huán)溶液與對羥基苯甲醛的ニ氧六環(huán)溶液混合后，加熱回流；(b)反應(yīng)完全后，冷卻，抽濾，水洗得到式I結(jié)構(gòu)的化合物。所用6-氨基青霉烷酸和對羥基苯甲醛的摩爾比為I : I 2，優(yōu)選I : I。本發(fā)明的目的之三是提供一種青霉素類藥物的通用人工抗原。本發(fā)明的上述發(fā)明目的是通過以下技術(shù)方案達到的一種青霉素類藥物的通用人工抗原，其分子結(jié)構(gòu)式如式II所示
權(quán)利要求
1.一種青霉素類藥物通用半抗原，其分子結(jié)構(gòu)式如式I所示
2.一種如權(quán)利要求I所述青霉素類藥物的通用半抗原的制備方法，包括如下步驟(a)將6-氨基青霉烷酸的ニ氧六環(huán)溶液與對羥基苯甲醛的ニ氧六環(huán)溶液混合后，加熱回流；(b)反應(yīng)完全后，冷卻，抽濾，水洗得到式I結(jié)構(gòu)的化合物。
3.—種如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所用6-氨基青霉烷酸和對羥基苯甲醛的摩爾比為I : I 2。
4.一種青霉素類藥物的通用人工抗原，其分子結(jié)構(gòu)式如式II所示
5.如權(quán)利要求4所述的青霉素類藥物的通用人工抗原，其特征在于，所述的載體蛋白為卵清蛋白或牛血清白蛋白。
6.如權(quán)利要求4或5所述青霉素類藥物通用人工抗原的制備方法，包括如下步驟(a)將N，N-羰基ニ咪唑和式I結(jié)構(gòu)化合物溶于無水丙酮，將該溶液在37°C振蕩培養(yǎng)箱中反應(yīng)2小時，反應(yīng)后使丙酮揮發(fā)，得到中間產(chǎn)物，將該中間產(chǎn)物溶解于磷酸鹽緩沖溶液中，得到溶液A ;(b)將所述載體蛋白溶解于磷酸鹽緩沖溶液中，得到溶液B;(c)將所述溶液B滴加至所述溶液A中，得到式II結(jié)構(gòu)的人工抗原。
7.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于還包括如下步驟(d)將由步驟(c)得到的人工抗原在4 20°C用磷酸鹽緩沖溶液透析48 84小吋。
8.一種青霉素類藥物的廣譜單克隆抗體，是能與權(quán)利要求4或5所述的青霉素類藥物通用人工抗原發(fā)生特異性免疫反應(yīng)的免疫球蛋白。
9.如權(quán)利要求8所述的青霉素類藥物的廣譜單克隆抗體的應(yīng)用，用于動物源性食品中青霉素類藥物的免疫檢測。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種青霉素類藥物通用半抗原、人工抗原、廣譜單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用。設(shè)計合成了一種含有青霉素類藥物母核結(jié)構(gòu)的通用半抗原、人工抗原，制備出了針對該母核的能識別多種青霉素類藥物的單克隆抗體。本發(fā)明的青霉素類藥物通用半抗原、人工抗原以及單克隆抗體可以用于青霉素類藥物的免疫分析和篩選，提高檢測效率，縮短檢測時間，降低檢測成本。
文檔編號C07K14/765GK102827188SQ20121031573
公開日2012年12月19日 申請日期2012年8月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月25日
發(fā)明者王建平, 趙國先, 焦賽南, 張會彩, 劉靜 申請人:河北農(nóng)業(yè)大學