抗il-36r抗體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明是關(guān)于抗IL-36R結(jié)合化合物，特別是新的抗IL-36R抗體，及使用其之治療及診斷方法及組合物。
【專利說明】抗IL-36R抗體
[0001]序列表
[0002]本申請案含有已以ASCII格式經(jīng)由EFS-Web遞交的序列表且其以引用的方式整體并入本文中。該ASCII拷貝在2012年11月12日創(chuàng)建，命名為09-0583W0.txt且大小為147，390個字節(jié)。
[0003]【發(fā)明所屬的【技術(shù)領(lǐng)域】】
[0004]一般而言，本發(fā)明是關(guān)于用于診斷及治療用途的抗IL-36R抗體。該等抗體可用于包含該等化合物的醫(yī)藥組合物及套組中。該等抗體可用于治療人類中的各種疾病或病癥(例如免疫學(xué)疾病、發(fā)炎性疾病、自體免疫疾病、纖維變性疾病及呼吸疾病)的方法。
【【背景技術(shù)】】
[0005]細胞因子的IL-1家族是由11個不同配體組成，即IL-1a (亦稱為IL-1F1)、IL-1 β (IL-1F2)、IL-1 受體拮抗劑(IL-1Ra 或 IL-1F3)、IL-18 (IL-1F4)、IL-1F5 至 IL-1F10及IL-1FlK或IL-33)。已知IL-1 α及IL-1 β誘導(dǎo)與I型IL-1受體(IL-1RI)結(jié)合的促發(fā)炎活性及常見共受體IL-1受體輔助蛋白(IL-1RAcP)的募集，而IL-1Ra作為與IL-1RI結(jié)合的IL-1的競爭性抑制劑起作用，從而發(fā)揮抗發(fā)炎活性。大量研究報導(dǎo)IL-18是為IFN-Y的誘導(dǎo)物的促發(fā)炎細胞因子，而IL-33是闡述為參與(具體而言)Th2反應(yīng)的控制的免疫調(diào)節(jié)細胞因子。藉助在DNA數(shù)據(jù)庫中搜索IL-1的同系物來識別-1家族的新成員(包括IL-1F5、IL-1F6、IL-1F8及IL-1F9)。在人類及小鼠中，所有編碼該等細胞因子的基因映像至小于300kb的染色體2q，其中其由IL1A、IL1B及ILlRN基因側(cè)接。IL-1F6、IL-1F8及IL-1F9與IL-1及IL-1Ra共享21%至37 %氨基酸序列同源性，而IL-1F5與IL-1Ra展示52%氨基酸序列同源性，此表明IL-1F5可代表內(nèi)源性受體拮抗劑。
[0006]IL-1F6、IL-1F8 及 IL-1F9 與 IL-lRrp2(IL-lR家族的受體)結(jié)合，且使用 IL-1RAcP作為共受體來刺激與那些由IL-1誘導(dǎo)的信號類似的細胞內(nèi)信號，而顯示IL-1F5抑制過表達IL-lRrp2的Jurkat T細胞中IL-1F9誘導(dǎo)的NF- κ B活化。如IL-1 β 一般，所有該等IL-1同系物缺少前導(dǎo)肽且不能藉助常規(guī)分泌途徑來釋放，但研究表明IL-lRrp2激動劑的釋放可藉由與那些調(diào)節(jié)IL-1 β分泌的機制不同的機制來控制。為認(rèn)可該等細胞因子的具體生物學(xué)效應(yīng)并確認(rèn)其全部與同一受體結(jié)合，最近已提出修正IL-1同系物的命名法。因此，IL-lRrp2 現(xiàn)稱為 IL-36R，且其配體命名為 IL-36 a (IL-1F6)、IL-36 β (IL-1F8)及IL-36 Y (IL-1F9)。另外，已顯示發(fā)揮受體拮抗劑活性的IL-1F5已重命名為IL_36Ra。
[0007]IL-36 α、IL-36 β及IL-36 Y的信使RNA在若干組織中、具體而言在暴露于病原體及皮膚中的內(nèi)部上皮組織中大量表達。令人感興趣的，IL_36Ra及IL-36a的表達在IL-1 β /TNF- α刺激的人類角化細胞中顯著上調(diào)，且IL_36Ra及IL-36 Y mRNA在牛皮癬損傷皮膚中極大增加。此外，在TNF-α及IFN-Y刺激后，人類角化細胞中的IL-36 Y蛋白質(zhì)產(chǎn)生提高。在慢性腎病中亦報導(dǎo)升高的IL-36 a mRNA及蛋白質(zhì)表達。
[0008]在角化細胞中過表達IL_36a的轉(zhuǎn)基因小鼠呈現(xiàn)與牛皮癬共有一些特征的發(fā)炎性皮膚損傷。當(dāng)轉(zhuǎn)基因小鼠與缺乏IL-36Ra的小鼠雜交時，此表現(xiàn)型更嚴(yán)重，此支持IL-36Ra在活體內(nèi)的調(diào)節(jié)功能。若利用12_0_十四?；鸩ù?3-乙酸酯治療角化細胞特異性IL-36CI轉(zhuǎn)基因小鼠，則該等小鼠中的發(fā)炎皮膚病狀與人類牛皮癬甚至更類似，其在組織學(xué)上、分子上及在其對治療法的反應(yīng)上與人類疾病類似。此外，當(dāng)利用抗IL-36R抗體治療免疫缺陷型小鼠時，移植至該小鼠的人類牛皮癬損傷皮膚正?；?，此證明需要IL-36軸來維持人類牛皮癬皮膚中的損傷表現(xiàn)型。該等數(shù)據(jù)合起來指示IL-36R配體(包括IL-36a、IL-36 β及IL-36 Y)在活體外及活體內(nèi)發(fā)揮促發(fā)炎效應(yīng)且IL_36Ra作為天然拮抗劑起作用，由此模擬IL-1/IL-lRa系統(tǒng)。
[0009]因此，有證據(jù)證明許多疾病病狀中涉及IL-36R配體，且業(yè)內(nèi)需要靶向此途徑、具體而言用于治療發(fā)炎性疾病的新治療劑。
【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0010]本發(fā)明藉由提供與IL-36R結(jié)合的生物治療藥物、具體而言抗體來解決上文需要。在一方面中，本發(fā)明抗體阻斷IL36配體介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)(α、β及/或Y)。在一方面中，本發(fā)明抗體可用于(例如)治療諸如牛皮癬、發(fā)炎性腸疾病、硬皮病、coro及慢性腎病等疾病中上皮介導(dǎo)的發(fā)炎/纖維變性。
[0011]在一方面中，本發(fā)明提供抗具有一或多種以下性質(zhì)的IL-36R抗體。
[0012]在一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體具有較高分子/細胞結(jié)合效能。在一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體以KD〈0.1nM與人類IL-36R結(jié)合。在又一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體、具體而言人類化抗IL-36R抗體以KD〈50pM與人類IL-36R結(jié)合。在一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體以EC9Q〈5nM與IL-36R表達細胞結(jié)合。
[0013]在另一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體具有較高的基于細胞的功能阻斷效能。在一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體在疾病相關(guān)細胞以及原代細胞中以IC9(l〈5nM阻斷所有三種IL-36R激動配體(α、β、Y )。
[0014]在一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體具有上文所述的分子/細胞結(jié)合效能及基于細胞的功能阻斷效能。
[0015]在又一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體對人類IL-1R1或IL-36R陰性細胞是具有高選擇性、例如大于1000倍的選擇性。在又一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體不與人類IL-1Rl或IL-36R陰性細胞是結(jié)合。
[0016]在實施方案一中，本發(fā)明提供抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其以等于或〈0.1nM的Kd與人類IL-36R結(jié)合。
[0017]在實施方案二中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案一的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或抗原結(jié)合片段是單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0018]在實施方案三中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案一或二的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或抗原結(jié)合片段是人類化的抗體或其抗原結(jié)合片段。
[0019]在實施方案四中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案三的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其以等于或<50ρΜ的Kd與人類IL-36R結(jié)合。
[0020]在實施方案五中,本發(fā)明提供根據(jù)實施方案一至實施方案四中任一者的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其不與人類IL-1Rl結(jié)合。
[0021]在實施方案六中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案一的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:
[0022]a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO: 35、102、103、104、105、106 或 140 (L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0023]b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0024]在實施方案七中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案六的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:
[0025]a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:102(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0026]b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0027]在實施方案八中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案六的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:
[0028]a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:103(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0029]b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0030]在實施方案九中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案六的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:
[0031]a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:104(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0032]b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0033]在實施方案十中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案六的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:
[0034]a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:105(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0035]b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0036]在實施方案^ 中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案六的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:
[0037]a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:106(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0038]b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0039]在實施方案十二中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案六的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:
[0040]a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:140(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0041]b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0042]在實施方案十三中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案一的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含SEQ ID N0:76、77、78、79、80、81、82或83中的任一者的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；及包含SEQ ID N0:87、88、89、90、91、92、93、94或95中的任一者的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。
[0043]在實施方案十四中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案十三的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID N0:77的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:87的重鏈可變區(qū)；或
[0044]包含氨基酸序列SEQ ID NO:77的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:88的重鏈可變區(qū)；或
[0045]包含氨基酸序列SEQ ID NO:77的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:89的重鏈可變區(qū)。
[0046]在實施方案十五中，本發(fā)明提供抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID N0:80的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ IDNO:87的重鏈可變區(qū)；或
[0047]包含氨基酸序列SEQ ID NO:80的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:88的重鏈可變區(qū)；或
[0048]包含氨基酸序列 SEQ ID NO:80的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:89的重鏈可變區(qū)。
[0049]在實施方案十六中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案一的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:
[0050]輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 107 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO:63 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:73(H-CDR3);或
[0051]輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 107 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO:64 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:73(H-CDR3);或
[0052]輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:54(H-CDR1);氨基酸序列 SEQ ID NO:63 或 64(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:73(H-CDR3)。
[0053]在實施方案十七中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案一的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含SEQ ID N0:84、85或86中的任一者的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；及包含SEQ ID N0:96、97、98、99、100或101中的任一者的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。
[0054]在實施方案十八中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案十七的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID N0:85的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 100的重鏈可變區(qū)；或
[0055]包含氨基酸序列SEQ ID NO:85的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 101的重鏈可變區(qū)。
[0056]在實施方案十九中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案十七的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID N0:86的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 100的重鏈可變區(qū)；或
[0057]包含氨基酸序列SEQ ID NO:86的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 101的重鏈可變區(qū)。
[0058]在實施方案二十中，本發(fā)明提供抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含SEQ IDN0:114、115、116、117、118、119、120或121中任一者的氨基酸序列的輕鏈；及包含SEQ IDN0:125、126、127、128、129、130、131、132或133中的任一者的氨基酸序列的重鏈。
[0059]在實施方案二十一中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案二十的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 115的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 125的重鏈。
[0060]在實施方案二十二中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案二十的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 115的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 126的重鏈。
[0061]在實施方案二十三中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案二十的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 115的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 127的重鏈。
[0062]在實施方案二十四中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案二十的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 118的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 125的重鏈。
[0063]在實施方案二十五中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案二十的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 118的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 126的重鏈。
[0064]在實施方案二十六中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案二十的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 118的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 127的重鏈。
[0065]在實施方案二十七中，本發(fā)明提供抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含SEQ IDN0:122、123或124中的任一者的氨基酸序列的輕鏈;及包含SEQID NO: 134、135、136、137、138或139中的任一者的氨基酸序列的重鏈。
[0066]在實施方案二十八中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案二十七的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 123的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 138的重鏈。
[0067]在實施方案二十九中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案二十七的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 123的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 139的重鏈。
[0068]在實施方案三十中，本發(fā)明提供根據(jù)二十七的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 124的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 138的重鏈。
[0069]在實施方案三^ 中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案一的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:
[0070]a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:103(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0071]b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0072]在實施方案三十二中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案一的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:
[0073]a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:104(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及
[0074]b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:62(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
[0075]在實施方案三十三中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案一的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:
[0076]a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:36(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及
[0077]b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 107 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:63(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 73 (H-CDR3)。
[0078]在實施方案三十四中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案一的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:
[0079]a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:36(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及
[0080]b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 107 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:64(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO:73 (H-CDR3)。
[0081]在一實施方案中,根據(jù)實施方案一至三十四中的任一者的抗體或其抗原結(jié)合片段是單克隆抗體。在一實施方案中，根據(jù)實施方案一至三十四中的任一者的抗體或其抗原結(jié)合片段是人類化的抗體。在一實施方案中，根據(jù)實施方案一至三十四中的任一者的抗體或其抗原結(jié)合片段是單克隆人源化抗體。
[0082]在實施方案三十五中，本發(fā)明提供抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:
[0083]輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:21 (L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:30(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 39 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 48 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 57 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:67(H-CDR3);或
[0084]輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 22 (L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:31(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO:40 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 49 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 58 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:68(H-CDR3);或
[0085]輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 23 (L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:32(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO:41 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 50 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 59 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:69(H-CDR3);或
[0086]輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:24(L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:33(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 42 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:51(H-CDR1);氨基酸序列 SEQ ID NO: 60 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:70(H-CDR3);或
[0087]輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 25 (L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:34(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO:43 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:52(H-CDR1);氨基酸序列 SEQ ID NO:61 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:71(H-CDR3);或
[0088]輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 26 (L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:35(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO:44(L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 62 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:72(H-CDR3);或
[0089]輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27 (L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 54 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 63 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:73(H-CDR3);或
[0090]輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:54(H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO:64(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:73(H-CDR3);或
[0091]輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 28 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:37(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 46 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 55 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 65 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:74(H-CDR3);或
[0092]輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 29 (L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:38(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 47 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 56 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 66 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:75(H-CDR3)。
[0093]在實施方案三十六中，本發(fā)明提供抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 11的重鏈可變區(qū)；或
[0094]包含氨基酸序列SEQ ID N0:2的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12的重鏈可變區(qū)；或
[0095]包含氨基酸序列SEQ ID N0:3的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 13的重鏈可變區(qū)；或
[0096]包含氨基酸序列SEQ ID N0:4的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 14的重鏈可變區(qū)；或
[0097]包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 15 ；的重鏈可變區(qū)或
[0098]包含氨基酸序列SEQ ID N0:6的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 16的重鏈可變區(qū)；或
[0099]包含氨基酸序列SEQ ID N0:7的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 17的重鏈可變區(qū)；或
[0100]包含氨基酸序列SEQ ID N0 :8的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 18的重鏈可變區(qū)；或
[0101]包含氨基酸序列SEQ ID N0:9的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 19的重鏈可變區(qū)；或
[0102]包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:20的重鏈可變區(qū)。
[0103]在又一實施方案三十七中，本發(fā)明提供醫(yī)藥組合物，其包含根據(jù)先前實施方案中的任一者的抗體或抗原結(jié)合片段及醫(yī)藥上可接受的載劑。
[0104]在又一實施方案三十八中，本發(fā)明提供根據(jù)先前實施方案中的任一者的抗體或抗原結(jié)合片段或醫(yī)藥組合物，其用于醫(yī)學(xué)中。
[0105]在又一實施方案三十九中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案I至37中任一者的抗體或抗原結(jié)合片段或醫(yī)藥組合物，其中該用途是治療發(fā)炎性疾病、自體免疫疾病、呼吸疾病、代謝病癥、上皮介導(dǎo)的發(fā)炎病癥、纖維變性或癌癥。
[0106]在又一實施方案四十中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案I至37中任一者的抗體或抗原結(jié)合片段或醫(yī)藥組合物，其中該用途是用于治療牛皮癬、發(fā)炎性腸疾病、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、C0PD、慢性氣喘或關(guān)節(jié)粘連性脊椎炎。
[0107]在又一實施方案四十一中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案I至37中任一者的抗體或抗原結(jié)合片段或醫(yī)藥組合物，其中該用途是用于治療發(fā)炎性腸疾病。
[0108]在再一實施方案四十二中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案41的抗體或抗原結(jié)合片段或醫(yī)藥組合物，其中該疾病是克隆氏病(Crohns disease)。
[0109]在另一實施方案四十三中，本發(fā)明提供治療疾病的方法，該方法包含向有需要的患者投與根據(jù)實施方案I至37中任一者的抗體或抗原結(jié)合片段或醫(yī)藥組合物，其中該疾病是選自發(fā)炎性疾病、自體免疫疾病、呼吸疾病、代謝病癥、上皮介導(dǎo)的發(fā)炎病癥、纖維變性及癌癥。
[0110]在另一實施方案四十四中，本發(fā)明提供根據(jù)實施方案43的方法，其中該疾病是選自牛皮癬、發(fā)炎性腸疾病、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、C0PD、慢性氣喘及關(guān)節(jié)粘連性脊椎炎。
[0111]在再一實施方案四十五中，本發(fā)明提供治療克隆氏病的方法。
[0112]本發(fā)明的其它實施方案涵蓋:
[0113]-分離多核苷酸，其包含編碼本發(fā)明的抗IL-36R抗體或抗原結(jié)合片段的序列，較佳DNA或RNA序列；
[0114]-本發(fā)明的分離多核苷酸，其編碼藉由SEQID N0.1至140中的一或多者定義的序列；
[0115]-載體,其包含本發(fā)明的多核苷酸，較佳為表達載體，更佳為包含本發(fā)明多核苷酸與表達控制序列功能聯(lián)結(jié)的載體；
[0116]-宿主細胞，其包含本發(fā)明多核苷酸及/或本發(fā)明載體；
[0117]-產(chǎn)生本發(fā)明的抗IL-36R抗體或抗原結(jié)合片段的方法，較佳重組產(chǎn)生方法，其包含使用本發(fā)明多核苷酸及/或本發(fā)明載體及/或本發(fā)明宿主細胞；
[0118]-此一方法較佳包含以下步驟:(a)在允許抗IL-36R抗體或抗原結(jié)合片段表達的條件下培養(yǎng)宿主細胞及(b)回收抗IL-36R抗體或抗原結(jié)合片段；
[0119]-診斷套組或診斷方法，其包含本發(fā)明的抗IL-36R抗體或抗原結(jié)合片段或其使用；
[0120]-本發(fā)明的診斷套組或診斷方法，其用于診斷發(fā)炎性疾病、自體免疫疾病、呼吸疾病、代謝病癥、上皮介導(dǎo)的發(fā)炎病癥、纖維變性、癌癥、牛皮癬、發(fā)炎性腸疾病、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、C0PD、慢性氣喘、關(guān)節(jié)粘連性脊椎炎或克隆氏病。
[0121]【附圖簡述】
[0122]圖1:1L-36 拮抗配體(IL-36RA/IL1F5、IL-38/ILF10)抑制信號傳導(dǎo)級聯(lián)。
[0123]圖2:基因芯片分析表明IL-36R配體在牛皮癬皮膚中上調(diào)(IL-36RA、IL-36 α及IL-36Y)。
[0124]圖3:使用人類皮膚切片的表現(xiàn)剖面。
[0125]經(jīng)福爾馬林(Formalin)固定，石蠟包埋且使用抗體33D10進行抗體滴定。
[0126]圖4:評估人類皮膚切片的表皮厚度的方法。
[0127]【實施方式】
[0128]本發(fā)明是關(guān)于抗IL-36R抗體。在一方面中，本發(fā)明抗體在(例如)人類中是用于診斷及治療用途。
[0129]本發(fā)明提供與IL-36R、具體而言人類IL-36R結(jié)合的抗體。本發(fā)明亦是關(guān)于結(jié)合IL-36R的人源化抗體。在具體實施方案中，已基于某些主要小鼠抗體的序列確定該等人源化抗體的序列。
[0130]不希望受此理論限制，認(rèn)為抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段與人類IL-36R結(jié)合且從而干擾IL-36激動劑的結(jié)合，且這樣做時至少部分地阻斷自IL-36R至發(fā)炎媒介物的信號傳導(dǎo)級聯(lián)。此藉由圖1來圖解說明。
[0131]在一方面中，本發(fā)明抗體是用于人類疾病模型。IL-36R亦稱為IL-1RL2及IL-lRrp2。已報導(dǎo)，IL-36激動配體(α、β或Y )藉由接合IL-36受體、然后與IL-1受體輔助蛋白(IL-1RAcP)形成異源二聚體來起始信號傳導(dǎo)級聯(lián)。IL-36拮抗配體(IL-36RA/IL1F5、IL-38/ILF10)抑制信號傳導(dǎo)級聯(lián)(參見圖1)。
[0132]在一方面中，本發(fā)明提供抗具有一或多種以下性質(zhì)的IL-36R抗體。
[0133] 在一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體具有較高分子/細胞結(jié)合效能。在一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體以KD〈0.1nM與人類IL-36R結(jié)合。在又一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體、具體而言人類化抗IL-36R抗體以KD〈50pM與人類IL-36R結(jié)合。在一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體以EC9Q〈5nM與IL-36R表達細胞結(jié)合。
[0134]在另一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體具有較高的基于細胞的功能阻斷效能。在一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體在疾病相關(guān)細胞以及原代細胞中以IC9tl≤5nM阻斷所有三種IL-36R激動配體(α、β、Y )。
[0135]在一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體具有上文所述的分子/細胞結(jié)合效能及基于細胞的功能阻斷效能。
[0136]在一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體是人源化抗體。在一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體是單克隆抗體。在一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體是全長抗體。在一方面中，本發(fā)明的抗IL-36R抗體是人類化單克隆抗體，例如全長人類化單克隆抗體。
[0137]本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段識別特異性「IL-36R抗原表位」或「IL-36R表位」。如本文所用，該等術(shù)語是指能夠與抗IL-36R抗體產(chǎn)生免疫反應(yīng)性的分子(例如，肽)或分子片段。
[0138]最常見表位是蛋白質(zhì)、短寡肽、寡肽模擬物(即，模擬IL-36R抗原的抗體結(jié)合性質(zhì)的有機化合物)或其組合。認(rèn)為抗體的肽或多肽表位的最小尺寸是約4個至5個氨基酸。肽或多肽表位含有(例如)至少7個氨基酸或(例如)至少9個氨基酸或(例如)介于約15個至約20個之間的氨基酸。由于抗體可識別呈三級形式的抗原肽或多肽，故包含表位的氨基酸不需為鄰接的，且在一些情形下，可甚至不在同一肽鏈上。表位可藉由業(yè)內(nèi)已知的各種技術(shù)來測定，例如X 射線結(jié)晶學(xué)、氫/氘交換質(zhì)譜法(HXMS)、定點誘變、丙胺酸掃描誘變及妝篩選法。
[0139]抗體或免疫球蛋白的一般化結(jié)構(gòu)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。該等分子是通常為約150，000道耳頓(dalton)的異源四聚體糖蛋白，其由兩個相同輕(L)鏈及兩個相同重(H)鏈組成且通常稱為全長抗體。每一輕鏈?zhǔn)墙逵梢粋€二硫鍵與重鏈共價連接而形成異源二聚體，且異源四聚體分子是藉助異源二聚體中兩個相同重鏈之間的共價二硫鍵來形成。盡管輕鏈及重鏈?zhǔn)墙逵梢粋€二硫鍵連接在一起，但兩個重鏈間的二硫鍵數(shù)可隨免疫球蛋白同型而變。每一重鏈及輕鏈亦具有規(guī)則間隔的鏈內(nèi)二硫鍵。每一重鏈在胺基末端具有可變結(jié)構(gòu)域(Vh)，的后是三個或四個恒定結(jié)構(gòu)域(CH1、CH2, Ch3及Ch4)，以及Chi與Ch2之間的鉸鏈區(qū)。每一輕鏈具有兩個結(jié)構(gòu)域，即胺基末端可變結(jié)構(gòu)域(')及羧基末端恒定結(jié)構(gòu)域(CJ。'結(jié)構(gòu)域與Vh結(jié)構(gòu)域非共價結(jié)合，而Q結(jié)構(gòu)域通常經(jīng)由二硫鍵與Chi結(jié)構(gòu)域共價連接。據(jù)信，特定氨基酸殘基在輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與重鏈可變結(jié)構(gòu)域的間形成接口(Chothia等人，1985，J.Mol.B1l.186:651-663)?？勺兘Y(jié)構(gòu)域在本文中亦稱為可變區(qū)。
[0140]在不同抗體間，可變結(jié)構(gòu)域內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)域廣泛不同，即具有「超變性」。該等超變結(jié)構(gòu)域含有直接參與每一特定抗體與其特異性抗原決定簇的結(jié)合及特異性的殘基。輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與重鏈可變結(jié)構(gòu)域二者中的超變性均集中于三個稱為互補決定區(qū)(CDR)或超變環(huán)(HVL)的區(qū)段中。⑶R是藉由以下文獻中的序列比較來定義:Kabat等人，1991, Sequencesof Proteins of Immunological Interest,第 5 版，Public Health Service, Nat1nalInstitutes of Health, Bethesda, MD.,而HVL (在本文中亦稱為⑶R)是根據(jù)可變結(jié)構(gòu)域的三維結(jié)構(gòu)在結(jié)構(gòu)上定義,如Chothia及Lesk, 1987, J.Mol.B1l.196:901-917中所述。其中該兩種方法識別的CDR略有不同。如由Kabat所定義，在輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中，CDR-Ll大致位于殘基24-34處，⑶R-L2大致位于殘基50-56處，且⑶R-L3大致位于殘基89-97處；在重鏈可變結(jié)構(gòu)域中，CDR-Hl大致位于殘基31-35處，CDR-H2大致位于殘基50-65處，且CDR-H3大致位于殘基95-102處。涵蓋特定CDR的確切殘基數(shù)將視CDR的序列及尺寸而變。給定抗體的可變區(qū)氨基酸序列，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以常規(guī)方式確定哪些殘基包含特定⑶R。重鏈及輕鏈的CDR1、CDR2、CDR3由此界定對于給定抗體具有特異性的獨特功能性質(zhì)。
[0141]每一重鏈及輕鏈內(nèi)的三個CDR是由框架區(qū)(FR)來間隔，框架區(qū)含有可變性往往較低的序列。自重鏈及輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的胺基末端至羧基末端，F(xiàn)R及CDR是以以下順序排列:FRl、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。FR的較大β -折迭構(gòu)型使每一鏈內(nèi)的CDR彼此緊鄰且與另一鏈中的⑶R緊鄰。所得構(gòu)象有助于抗原結(jié)合位點(參見Kabat等人，1991，NIHPubl.第91-3242號，第I卷，第647頁-第669頁)，但并非所有⑶R殘基均必須直接參與抗原結(jié)合。
[0142]FR殘基及Ig恒定結(jié)構(gòu)域并不直接參與抗原結(jié)合，但有助于抗原結(jié)合及/或介導(dǎo)抗體效應(yīng)子功能。人們認(rèn)為，一些FR殘基以至少三種方式對抗原結(jié)合產(chǎn)生顯著效應(yīng):直接與表位非共價結(jié)合，與一或多個CDR殘基相互作用，及影響重鏈與輕鏈之間的接口。恒定結(jié)構(gòu)域并不直接參與抗原結(jié)合，但介導(dǎo)各種Ig效應(yīng)子功能，例如介導(dǎo)抗體參與抗體依賴性細胞毒性(ADCC)、補體依賴性細胞毒性(CDC)及抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)。
[0143]可基于恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列將脊椎動物免疫球蛋白的輕鏈分配至兩個顯著不同的類別(卡帕(O及蘭布達U))中的一類中。藉由比較，根據(jù)恒定結(jié)構(gòu)域的序列將哺乳動物免疫球蛋白的重鏈分配至五個主要類別中的一類中:IgA、IgD、IgE、IgG及IgM。將IgG及IgA進一步分為亞類(同型)，例如IgGp IgG2、IgG3、IgG4 JgA1 &IgA2。與免疫球蛋白的不同類別相對應(yīng)的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域分別稱為α、β、ε、Y及μ。各天然免疫球蛋白類別的亞單元結(jié)構(gòu)及三維構(gòu)型為人所熟知。
[0144]術(shù)語「抗體」、 「抗IL-36R抗體」、「人類化抗IL-36R抗體」、「人類化抗IL-36R表位抗體」及「變體人類化抗IL-36R表位抗體」具體涵蓋單克隆抗體(包括全長單克隆抗體)、多克隆抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)及抗體片段，例如抗體中呈現(xiàn)期望生物學(xué)活性(例如，IL-36R結(jié)合)的可變結(jié)構(gòu)域及其它部分。術(shù)語「單克隆抗體」(mAb)是指具有高度特異性且針對單一抗原決定簇(「表位」)的抗體。因此，修飾詞「單克隆」指示針對相同表位的抗體，且不應(yīng)理解為需要藉由任何特定方法來產(chǎn)生該抗體。應(yīng)理解，單克隆抗體可藉由業(yè)內(nèi)已知的任何技術(shù)或方法來制備；包括(例如)融合瘤方法(Kohler等人，1975，Nature256:495)，或業(yè)內(nèi)已知的重組DNA方法(例如，參見美國專利第4，816，567號)，或使用噬菌體抗體文庫并使用以下文獻中所述技術(shù)分離以重組方式產(chǎn)生的單克隆抗體的方法:Clackson 等人，1991, Nature352:624-628 ；及 Marks 等人，1991, J.Mol.B1l.222:581-597。
[0145]術(shù)語「單體」是指抗體的均質(zhì)形式。例如，對于全長抗體而言，單體意指具有兩個相同重鏈及兩個相同輕鏈的單體抗體。
[0146]嵌合抗體是由來自一物種(例如，非人類哺乳動物，例如小鼠)的抗體的重鏈及輕鏈可變區(qū)及另一物種(例如，人類)抗體的重鏈及輕鏈恒定區(qū)組成，且可藉由以下方式來獲得:連接來自第一物種(例如，小鼠)的編碼抗體可變區(qū)的DNA序列與來自第二物種(例如人類)的編碼抗體恒定區(qū)的DNA序列，并用含有該等經(jīng)連接序列的表達載體轉(zhuǎn)化宿主，從而使其產(chǎn)生嵌合抗體?；蛘撸逗峡贵w亦可是其中重鏈及/或輕鏈中的一或多個區(qū)域或結(jié)構(gòu)域與來自另一免疫球蛋白類別或同型的單克隆抗體中的對應(yīng)序列相同、同源或是其變體，或來自共有序列或種是序列者。嵌合抗體可包括該等抗體的片段，限制條件是抗體片段呈現(xiàn)其親代抗體的期望生物學(xué)活性，例如與相同表位結(jié)合(例如，參見美國專利第4，816，567號；及 Morrison 等人，1984，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA81:6851-6855)。
[0147]術(shù)語「抗體片段」、「抗IL-36R抗體片段」、「抗IL-36R表位抗體片段」、「人類化抗IL-36R抗體片段」、「人類化抗IL-36R表位抗體片段」、「變體人類化抗IL-36R表位抗體片段」是指全長抗IL-36R抗體的一部分，其中保留可變區(qū)或功能能力，例如，特異性IL-36R表位結(jié)合。抗體片段的實例包括(但不限于)Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、Fv、scFv及scFv-Fc片段、雙鏈抗體、線性抗體、單鏈抗體、微小抗體、自抗體片段形成的雙鏈抗體及自抗體片段形成的多特異性抗體。
[0148]可用諸如木瓜酶或胃蛋白酶等酶處理全長抗體以生成可用抗體片段。使用木瓜酶消化來產(chǎn)生兩個相同的稱作「Fab」片段的抗原結(jié)合抗體片段(各自具有單一抗原結(jié)合位點)及殘留「Fe」片段。Fab片段亦含有輕鏈的恒定結(jié)構(gòu)域及重鏈的C01結(jié)構(gòu)域。胃蛋白酶處理產(chǎn)生F (ab’)2片段，其具有兩個抗原結(jié)合位點且仍能交聯(lián)抗原。
[0149]Fab’片段與Fab片段的不同的處在于在Cm結(jié)構(gòu)域的C末端存在額外殘基，包括一或多個來自抗體鉸鏈區(qū)的半胱胺酸。F(ab’)2抗體片段是藉由鉸鏈區(qū)中的半胱胺酸殘基連接的Fab’片段對。亦已知抗體片段的其它化學(xué)偶合。
[0150]「Fv」片段含有完整抗原識別及結(jié)合位點，該位點是由一個重鏈可變結(jié)構(gòu)域與一個輕鏈可變結(jié)構(gòu)域呈緊密非共價連接的二聚體組成。在此構(gòu)型中，每一可變結(jié)構(gòu)域的三個CDR相互作用，從而在該Vh-' 二聚體的表面上界定抗原結(jié)合位點。該六個CDR共同賦予該抗體抗原結(jié)合特異性。
[0151]「單鏈Fv」或「scFv」抗體片段是包含抗體的Vh及Vlj結(jié)構(gòu)域的單鏈Fv變體,其中該等結(jié)構(gòu)域存于單一多肽鏈中。單鏈Fv能識別并結(jié)合抗原。scFv多肽視情況亦可含有位于Vh結(jié)構(gòu)域與\結(jié)構(gòu)域之間的多肽連接體，以促進scFv形成用于抗原結(jié)合的期望三維結(jié)構(gòu)(例如，參見Pluckthun, 1994, In The Pharmacology of monoclonal Antibodies,第 113卷，Rosenburg 及 Moore 編輯，Springer-Verlag, New York,第 269 頁-第 315 頁)。
[0152]「雙鏈抗體」是指具有兩個抗原結(jié)合位點的小抗體片段，該等片段包含在同一多肽鏈(Vh-'或'-Vh)中連接至輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(Vh)。雙鏈抗體是更充分地闡述于(例如)HolIiger 等人(1993) Proc.Natl.Acad.Sc1.USA90:6444-6448 中。
[0153]其它已識別抗體片段包括那些包含串聯(lián)Fd區(qū)段(Vh-Ch1-Vh-Chi)對以形成抗原結(jié)合區(qū)對者。該等「線性抗體」可具有雙特異性或單特異性，如于(例如)Zapata等人，1995，Protein Eng.8 (10): 1057-1062 中所闡述。
[0154]「人源化抗體」或「人源化抗體片段」是特定類型的嵌合抗體，其包括免疫球蛋白氨基酸序列變體或其片段，其能與預(yù)定抗原結(jié)合，且其包含一或多個實質(zhì)上具有人類免疫球蛋白氨基酸序列的FR及一或多個實質(zhì)上具有非人類免疫球蛋白氨基酸序列的CDR。此常稱作「導(dǎo)入」序列的非人類氨基酸序列通常取自「導(dǎo)入」抗體結(jié)構(gòu)域，具體而言可變結(jié)構(gòu)域。通常，人源化抗體至少包括非人類抗體的CDR或HVL，其插入人類重鏈或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的FR的間。本發(fā)明闡述具體人類化抗IL-36R抗體，其含有源自小鼠單克隆抗體的CDR或人類化CDR，該等CDR插入人類種是序列重鏈及輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的FR的間。應(yīng)理解，某些小鼠FR殘基可對人源化抗體的功能具有重要意義，且因此修飾某些人類種是序列重鏈及輕鏈可變結(jié)構(gòu)域殘基以使其與對應(yīng)小鼠序列中的那些相同。
[0155]在另一方面中，人類化抗IL-36R抗體包含實質(zhì)上所有的至少一個(且通常兩個)可變結(jié)構(gòu)域(例如含于(例如)Fab、Fab’、F (ab’)2、Fabc及Fv片段中者)，其中所有或?qū)嵸|(zhì)上所有CDR均與非人類免疫球蛋白中的那些相對應(yīng)，且在本文中具體而言，所有CDR均是下文中所詳述的小鼠或人類化序列，且所有或?qū)嵸|(zhì)上所有FR均是人類免疫球蛋白共有序列或種是序列中的那些。在另一方面中，人類化抗IL-36R抗體亦包括免疫球蛋白Fe區(qū)的至少一部分，通常是人類免疫球蛋白中者。通常，抗體可含有輕鏈以及至少重鏈的可變結(jié)構(gòu)域二者。若適宜,抗體亦可包括重鏈的Ch1、鉸鏈、CH2> Ch3及/或Ch4區(qū)中的一或多者。
[0156]人類化抗IL_36r抗體可選自任一免疫球蛋白類別(包括IgM、IgG、IgD、IgA及IgE)及任一同型(包括IgG1^IgG2>IgG3>IgG4>IgA1及IgA2)。例如,恒定結(jié)構(gòu)域可是補體固定的恒定結(jié)構(gòu)域，其中期望人源化抗體呈現(xiàn)細胞毒性活性，且同型通常是IgG115若不期望該細胞毒性活性，則恒定結(jié)構(gòu)域可為另一同型，例如IgG2。替代性人類化抗IL-36R抗體可包含來自不止一個免疫球蛋白類別或同型的序列，且本領(lǐng)域技術(shù)人員可選擇特定恒定結(jié)構(gòu)域來優(yōu)化期望效應(yīng)子功能。在具體實施方案中，本發(fā)明所提供抗體是IgGl抗體，且更具體而言是剔除效應(yīng)子功能的IgGl抗體。
[0157]人類化抗IL-36R抗體的FR及⑶R或HVL不需要與親代序列精確對應(yīng)。例如，可藉由取代、插入或缺失來改變(例如，誘變處理)導(dǎo)入CDR或HVL或共有或種是FR序列中的一或多個殘基，從而使得所得氨基酸殘基不再與任一親代序列中對應(yīng)位置的原始殘基相同，但抗體仍保留與IL-3 6R結(jié)合的功能。該改變通?？刹⒎菑V泛改變且可是保守改變。通常，至少75%的人源化抗體殘基可與親代共有或種是FR及導(dǎo)入CDR序列中的那些殘基相對應(yīng)，更通常有至少90 %、且最通常有超過95 %或超過98 %或超過99 %的殘基相對應(yīng)。
[0158]影響重鏈與輕鏈可變區(qū)之間的接口(「'_VH接口」)的免疫球蛋白殘基是那些影響兩條鏈相對于彼此的接近或定向者。某些可能參與鏈間相互作用的殘基包括'殘基34、
36、38、44、46、87、89、91、96 及 98 以及 Vh 殘基 35、37、39、45、47、91、93、95、100 及 103 (采用Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest (Nat1nal Institutesof Health, Bethesda, Md., 1987)中所述的編號系統(tǒng))。美國專利第6，407，213號亦論述，諸如\殘基43及85以及Vh殘基43及60等殘基亦可能參與此相互作用。盡管僅針對人類IgG闡述該等殘基，但其亦適用于其它物種。選擇合理地預(yù)期參與鏈間相互作用的重要抗體殘基用于共有序列中的取代。
[0159]術(shù)語「共有序列」及「共有抗體」是指在任一特定類別、同型或亞單元結(jié)構(gòu)的所有免疫球蛋白(例如人類免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域)中的每一位置處包含最常出現(xiàn)的氨基酸殘基的氨基酸序列。共有序列可是基于特定物種或多個物種的免疫球蛋白?！腹灿小剐蛄小⒔Y(jié)構(gòu)或抗體可理解為涵蓋某些實施方案中所述的共有人類序列，且是指在任一特定類別、同型或亞單元結(jié)構(gòu)的所有人類免疫球蛋白中的每一位置處包含最常出現(xiàn)的氨基酸殘基的氨基酸序列。因此，共有序列含有在每一位置處具有存于一或多種已知免疫球蛋白中的氨基酸的氨基酸序列，但其可能并不完全復(fù)制任一單一免疫球蛋白的整個氨基酸序列?？勺儏^(qū)共有序列并非自任一天然產(chǎn)生的抗體或免疫球蛋白獲得。Kabat等人，1991，Sequencesof Proteins of Immunological Interest,第 5 版，Public Health Service, Nat1nalInstitutes of Health, Bethesda, Md.及其變化形式。
[0160]人類種是序列天然存于人類種群中。該等種是基因的組合產(chǎn)生抗體多樣性。抗體輕鏈的種是抗體序列來自保守人類種是κ或λ V-基因及j-基因。類似地，重鏈序列來自種是 V-、d-及 j-基因(LeFranc, M-P 及 LeFranc, G,「The Immunoglobulin Facts BookJAcademic Press, 2001)。
[0161]如本文所用，「變體」、「抗IL-36R變體」、「人類化抗IL-36R變體」或「變體人類化抗IL-36R」各自是指至少具有輕鏈可變鼠類⑶R的人類化抗IL-36R抗體。變體包括那些在輕鏈或重鏈可變結(jié)構(gòu)域的一或兩者中具有一或多處氨基酸變化者，限制條件是該等氨基酸變化不會實質(zhì)上損害抗體與IL-36R的結(jié)合。
[0162]「經(jīng)分離」抗體是已經(jīng)識別且已自其天然環(huán)境的組份中分離及/或回收的抗體?？贵w天然環(huán)境中的污染物組份是那些可干擾抗體的診斷或治療用途的材料，且可是酶、激素或其它蛋白質(zhì)性或非蛋白質(zhì)性溶質(zhì)。在一方面中，可將抗體純化至以抗體重量計至少大于95%的分離度。
[0163]由于抗體天然環(huán)境中的至少一種組份不會存在，故分離抗體包括產(chǎn)生其的重組細胞內(nèi)的原位抗體。然而，分離抗體通常可藉由至少一個純化步驟來制備，其中移除重組細胞材料。
[0164]術(shù)語「抗體性能」是指有助于抗體識別抗原或抗體的活體內(nèi)效力的因素。抗體的氨基酸序列的變化可影響諸如折迭等抗體性質(zhì)，且可影響諸如以下等物理因素:抗體與抗原結(jié)合的初始速率CO、抗體與抗原的解離常數(shù)(kd)、抗體對抗原的親和常數(shù)(Kd)、抗體構(gòu)象、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性及抗體半衰期。
[0165]本文所用術(shù)語「經(jīng)表位標(biāo)記」是指抗IL-36R抗體與「表位標(biāo)簽」融合。「表位標(biāo)簽」是具有足量氨基酸以為抗體產(chǎn)生提供表位的多肽，且其經(jīng)設(shè)計以使得其不干擾人類化抗IL-36R抗體的期望活性。表位標(biāo)簽通常具有充分獨特性以使得針對該表位標(biāo)簽產(chǎn)生的抗體實質(zhì)上不會與其它表位發(fā)生交叉反應(yīng)。適宜標(biāo)簽多肽通常含有至少6個氨基酸殘基且通常含有約8個至50個氨基酸殘基或約9個至30個殘基。表位卷標(biāo)及結(jié)合表位的抗體的實例包括流感HA卷標(biāo)多肽及其抗體12CA5 (Field等人，1988Mol.Cell.B1l.8:2159-2165) ；c-myc 標(biāo)簽及其 8F9、3C7、6E10、G4、B7 及 9E10 抗體(Evan 等人，1985, Mol.Cell.B1l.5(12):3610-3616);及皰疹單純型病毒糖蛋白D (gD)標(biāo)簽及其抗體(Paborsky 等人，1990, Protein Engineerings (6): 547-553)。在某些實施方案中，表位標(biāo)簽是「補救受體結(jié)合表位」。本文所用術(shù)語「補救受體結(jié)合表位」是指IgG分子(例如IgGpIgG2, IgG3或IgG4)的Fe區(qū)中的表位，其負(fù)責(zé)延長IgG分子的活體內(nèi)血清半衰期。
[0166]在一些實施方案中，本發(fā)明抗體可與細胞毒性劑偶聯(lián)。此是抑制或防止細胞功能及/或引起細胞破壞的任何物質(zhì)。該術(shù)語意欲包括放射性同位素(例如I131、I125、Y9tl及Re186)、化學(xué)治療劑及毒素(例如細菌、真菌、植物或動物源的酶促活性毒素)及其片段。該等細胞毒性劑可使用標(biāo)準(zhǔn)程序與本發(fā)明的人源化抗體偶合，且可用于(例如)治療適用抗體療法的患者。
[0167]「化學(xué)治療劑」是可用于治療癌癥的化學(xué)化合物?；瘜W(xué)治療劑有多種實例可與本發(fā)明的治療性抗體偶聯(lián)。該等化學(xué)治療劑的實例包括烷基化劑，例如噻替哌(th1tepa)及環(huán)磷酰胺；磺酸烷基酯，例如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan);氮雜環(huán)丙焼，例如苯并多巴(benzodopa)、卡波酉昆(carboquone)、美妥替哌(meturedepa)及烏瑞替哌(uredepa);伸乙亞胺及甲基密胺，包括六甲密胺(altretamine)、三伸乙基密胺、三伸乙基磷酰胺、三伸乙基硫代磷酰胺及三羥甲基密胺；番蒸枝內(nèi)酯(acetogenin)(尤其是布拉它辛(bulIatacin)及布拉它辛酮(bullatacinone));喜樹堿(camptothecin)(包括合成類似物托泊替康(topotecan))；苔蘚蟲素(bryostatin);卡利抑制素(callystatin) ;CC_1065 (包括其合成類似物阿多來新(adozelesin)、卡澤來新(carzelesin)及比澤來新(bizelesin));克利特非辛(cryptophycin)(尤其是克利特非辛I及克利特非辛8);尾海兔素(dolastatin);奧里斯他汀(auristatin)(包括類似物單甲基-奧里斯他汀E及單甲基-奧里斯他汀F);多卡米星(duocarmycin)(包括合成類似物 KW-2189 及 CB1-TMI);艾植塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉堿(pancratistatin);匍枝珊瑚醇(sarcodictyin);海綿抑制素(spongistatin)；氮芥(nitrogen mustard)，例如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlomaphazine)、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)、二氯甲二乙胺(mechlorethamine)、鹽酸甲氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、霉法蘭(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯乙酸氮芥膽留醇酯(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine);曲磷胺(trofosfamide)、尿啼唳氮芥；硝基脲，例如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(1mustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷莫司汀(ranimnustine);抗生素，例如烯二炔抗生素(例如，卡奇霉素(calicheamicin)，尤其是卡奇霉素Y II及卡奇霉素—I (例如，參見 Agnewj Chem.1ntl.Ed.Engl.，33:183-186)；達內(nèi)霉素(dynemicin)，包括達內(nèi)霉素A ;雙膦酸鹽，例如氯屈膦酸鹽(clodronate);埃斯培拉霉素(esperamicin);以及新制癌菌素發(fā)色團(neoca rzinostatin chromophore)及相關(guān)色蛋白烯二炔抗生素發(fā)色團)、阿克拉霉素(aclacinomycin)、放線菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、偶氮絲胺酸、博萊霉素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、卡拉霉素(carabicin)、洋紅霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放線菌素 D (dactinomycin)、柔紅霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6_ 重氮基-5-側(cè)氧基-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin) (Adriamycin?)(包括嗎啉基-多柔比星、氰基嗎啉基-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星及脫氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅霉素(marcel1mycin)、絲裂霉素(mitomycin)(例如絲裂霉素 C)、霉酌.酸(mycophenolicacid)、諾拉霉素(nogalamycin)、橄欖霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(porfiromycin)、票呤霉素(puromycin)、三鐵阿霉素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑霉素(streptonigrin)、鏈脲霉素(streptozocin)、殺結(jié)核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、凈司他汀(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin);抗代謝物，例如甲胺蝶呤及5-氟尿嘧啶(5-FU);葉酸類似物，例如二甲葉酸(denopterin)、甲胺蝶呤、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate) ； P?呤類似物，例如氟達拉濱(fludarabine)、6_巰基票呤、硫咪票呤(thiamiprine)、硫鳥票呤；啼卩定類似物，例如安西他濱(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6_氮雜尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脫氧尿苷、脫氧氟尿苷（doxifIuridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(fIoxuridine);雄激素，例如卡普睪酮（calusterone)、丙酸屈他雄酮（dromostanolone propionate)、環(huán)硫雄醇 (epitiostanol)、美雄焼(mepitiostane)、睪內(nèi)酉旨(testolactone);抗腎上腺素，例如胺魯米特（aminoglutethimide)、米托坦（mitotane)、曲洛司坦(trilostane);葉酸補充劑，例如亞葉酸；乙酰葡醒酸內(nèi)酯(aceglatone);醒磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside);胺基乙酉先丙酸（aminolevulinic acid);恩尿啼唳（eniIuraciI);安 R丫唳 (amsacrine);百思布什(bestrabucil);比生群(bisantrene);依達曲沙(edatrexate)； 地磷酰胺(defosfamine);秋水仙胺(demecolcine);地口丫酉昆(diaziquone);依氟鳥胺酸(ef Iomithine);依利醋銨(elliptinium acetate);埃博霉素(epothilone);依托格魯（etoglucid);硝酸鎵；輕基脲；香燕多糖（Ientinan);氯尼達明（Ionidamine)； 類美坦辛（maytansinoid)，例如美坦辛（maytansine)及安絲菌素（ansamitocin)； 米托胍腙（mitoguazone);米托蒽醌（mitoxantrone);莫哌達醇（mopidamol) ； 二胺硝卩丫卩定(nitracrine);噴托他?。╬entostatin);蛋胺氮芥（phenamet)；卩比柔比星（pirarubicin);洛索蒽醌（Iosoxantrone);鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼 (procarbazine) ； FSK(S)；雷佐生(razoxane);根霉素(rhizoxin);西佐喃(sizofiran)； 鍺螺胺(spirogermanium);細格孢氮雜酸(tenuazonic acid);三亞胺酉昆(triaziquone)； 2，2’，2’’-三氯三乙胺；新月毒素（尤其是T-2毒素、疣皰菌素AGeiracurin A)、桿孢菌素(roridin A)及蛇形菌素(anguidine));烏拉坦(urethan);長春地辛(vindesine)； 達卡巴曝(dacarbazine);甘露莫司汀(mannomustine) ; 二漠甘露酉享(mitabronitol)； 二溴衛(wèi)矛醇(mitolactol);哌泊溴焼(pipobroman);噶薩托辛(gacytosine);阿拉伯糖苷(arabinoside) (「Ara-Cj );環(huán)磷酰胺；噻替哌；紫杉焼(taxoid)，例如紫杉醇 (paclitaxel) ( TAXOL⑩，Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N. J.)及多西紫杉醇（doxetaxel) ( TAXOTERE, Rhone-Poulenc Rorer，Antony，F(xiàn)rance)；苯丁酸氮芥；吉西他濱（gemcitabine) (Gemzar?) ;6_硫鳥_呤；巰基_呤；甲胺蝶呤；鉬類似物，例如順鉬（cisplatin)及卡鉬（carboplatin);長春花堿（vinblastine);鉬；依托泊苷（etoposide) (VP-16);異環(huán)磷酰胺；米托蒽醌；長春新堿（vincristine);長春瑞濱 (vinorelbine) (Navelbine?);諾安托(novantrone);替尼泊苷(teniposide);依達曲沙 (edatrexate);道諾霉素(daunomycin);胺基蝶呤(aminopterin);希羅達(xeloda);伊班膦酸鹽（ibanctonate) ;CPT_11 ;拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑RFS2000 ;二氟甲基鳥胺酸（DMFO)； 類視色素，例如視黃酸；卡培他濱（capecitabine);及上述藥劑中任一者的醫(yī)藥上可接受的鹽、酸或衍生物。此定義中亦包括用于調(diào)節(jié)或抑制激素對腫瘤的作用的抗激素劑，例如抗雌激素及選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑（SERM)，包括（例如)他莫昔芬（tamoxifen)(包括 Nolvadex?)、雷洛昔芬（raloxifene)、屈洛昔芬（droloxifene)、4_輕基他莫昔芬、曲沃昔芬（trioxifene)、鹽酸雷洛昔芬（keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)及托瑞米芬（toremifene) (Fareston?);抑制酶芳香酶的芳香酶抑制劑，其調(diào)節(jié)腎上腺中的雌激素產(chǎn)生，例如4(5)-咪唑、胺魯米特、乙酸甲地孕酮（megestrol acetate) (Megace?)、依西美坦（exemestane)、福美司坦（formestane)、法屈唑（fadrozole)、伏羅唑(vorozole) (Rivisor?)、來曲唑(Ietrozole) (Femara?)及阿那曲唑(anastrozole) (Arimidex?);及抗雄激素，例如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(Ieuprolide)及戈舍瑞林(goserelin);及上述藥劑中任一者的醫(yī)藥上可接受的鹽、酸或衍生物。該等藥劑中的任何一或多者可與本發(fā)明人源化抗體偶聯(lián)以提供用于治療各種病癥的有用治療劑。
[0168]亦可使抗體與前藥偶聯(lián)?！盖八帯故轻t(yī)藥活性物質(zhì)的前體或衍生物形式，其對腫瘤細胞的細胞毒性與母體藥物相比較小，且能酶促活化或轉(zhuǎn)化為活性更強的形式。例如，參 JAL Wilman, 1986, 「Prodrugs in Cancer Chemotherapy」，B1chemical SocietyTransact1ns, 14,第 375 頁-第 382 頁，615th Meeting Belfast ；及 Stella 等人，1985,「Prodrugs:A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery」，Directed DrugDelivery, Borchardt等人(編輯),第247頁-第267頁,Humana Press。有用前藥包括(但不限于)含有磷酸根的前藥、含有硫代磷酸根的前藥、含有硫酸根的前藥、含有肽的前藥、經(jīng)D-氨基酸修飾的前藥、糖基化前藥、含有β -內(nèi)酰胺的前藥、含有視情況經(jīng)取代的苯氧基乙酰胺的前藥及含有視情況經(jīng)取代的苯基乙酰胺的前藥、5-氟胞嘧啶前藥及其它5-氟尿苷前藥，其可轉(zhuǎn)化成具有更高活性的無細胞毒性藥物。可衍生為前藥形式的細胞毒性藥物的實例包括(但不限于)那些上文所述的化學(xué)治療劑。
[0169]出于診斷性以及治療性監(jiān)測目的，亦可使本發(fā)明抗體與標(biāo)記(單獨的標(biāo)記或標(biāo)記及額外第二藥劑(前藥、化學(xué)治療劑及諸如此類))偶聯(lián)。標(biāo)記與其它第二藥劑不同，其是指可檢測化合物或組合物藥劑，且其可與本發(fā)明人源化抗體直接或間接偶聯(lián)。標(biāo)記可是自身可檢測(例如，放射性同位素標(biāo)記或熒光標(biāo)記)，或在酶標(biāo)記情形下，標(biāo)記可催化受質(zhì)化合物或組合物發(fā)生可檢測的化學(xué)變化?？芍苽浣?jīng)標(biāo)記人類化抗IL-36R抗體并用于各種應(yīng)用中，包括活體外及活體內(nèi)診斷學(xué)。
[0170]可將本發(fā)明抗體調(diào)配為脂質(zhì)體制劑的一部分以影響其活體內(nèi)遞送?！钢|(zhì)體」是由各種類別的脂質(zhì)、磷脂及 /或表面活性劑組成的小囊泡。脂質(zhì)體可用于向哺乳動物遞送化合物或調(diào)配物，例如本文所揭示的人類化抗IL-36R抗體，該抗體視情況與一或多種醫(yī)藥活性劑及/或標(biāo)記偶合或組合。脂質(zhì)體的組份通常以雙層結(jié)構(gòu)排列，此與生物膜的脂質(zhì)排列類似。
[0171]本發(fā)明某些方面是關(guān)于分離核酸，其編碼本發(fā)明人源化抗體的一或多個結(jié)構(gòu)域。「經(jīng)分離」核酸分子是自至少一種污染物核酸分子識別并分離的核酸分子，其在抗體核酸的天然來源中通常與該污染物核酸分子相結(jié)合。分離核酸分子與存于天然細胞中的核酸分子不同。
[0172]在本發(fā)明的各種方面中，可重組表達人源化抗體的一或多個結(jié)構(gòu)域。該重組表達可采用一或多種控制序列，即在特定宿主生物體中表達可操作連接的編碼序列所需的多核苷酸序列。適用于原核細胞中的控制序列包括(例如)啟動子、操縱子及核糖體結(jié)合位點序列。真核控制序列包括(但不限于)啟動子、聚腺苷酸化信號及增強子。該等控制序列可用于在原核及真核宿主細胞中表達及產(chǎn)生人類化抗IL-36R抗體。
[0173]在使核酸序列與另一核酸序列具有功能性聯(lián)是時，該核酸序列經(jīng)「可操作地連接」。例如，若核酸前序列或分泌前導(dǎo)序列表達為參與多肽分泌的前蛋白，則該核酸前序列或分泌前導(dǎo)序列與編碼該多肽的核酸可操作地連接；若啟動子或增強子影響編碼序列的轉(zhuǎn)錄，則該啟動子或增強子與該序列可操作地連接；或若核糖體結(jié)合位點經(jīng)定位以促進轉(zhuǎn)譯，則該核糖體結(jié)合位點與編碼序列可操作地連接。通常，「可操作連接」意指所連接的DNA序列是鄰接序列，且在分泌前導(dǎo)序列情形下是鄰接序列且位于讀碼框內(nèi)。然而，增強子視情況鄰接。可藉由在便捷的限制位點處接合來完成連接。若不存在該等位點，則可使用合成寡核苷酸銜接子或連接體。
[0174]本文所用表達「細胞」、「細胞是」及「細胞培養(yǎng)物」可互換使用，且所有該等名稱均包括其子代。因此，「轉(zhuǎn)化體」及「轉(zhuǎn)化細胞」包括原代個體細胞及源自其的培養(yǎng)物而不考慮轉(zhuǎn)移次數(shù)。
[0175]用于治療目的的術(shù)語「哺乳動物」是指任何歸類為哺乳動物的動物，包括人類、家畜及農(nóng)場動物，以及動物園動物、運動用動物或?qū)櫸?，例如狗、馬、貓、牛及諸如此類。較佳地，哺乳動物是人類。
[0176]本文所用「 病癥」是可受益于利用本文所述人類化抗IL-36R抗體治療的任何病狀。該術(shù)語包括慢性及急性病癥或疾病，包括那些使哺乳動物易患所述病癥的病理學(xué)病狀。本文欲治療的非限制性實例或病癥包括發(fā)炎性病癥、血管生成病癥、自體免疫病癥及免疫性病癥、呼吸病癥、癌癥、血液惡性腫瘤、良性腫瘤及惡性腫瘤、白血病及淋巴惡性腫瘤。
[0177]術(shù)語「癌癥」及「癌性」是指或描述哺乳動物中特征通常在于細胞生長失調(diào)的生理學(xué)病狀。癌癥的實例包括(但不限于)癌瘤、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤及白血病。
[0178]IL-36R相關(guān)病癥亦包括免疫系統(tǒng)疾病及病癥，例如自體免疫病癥及發(fā)炎性病癥。該等病狀包括(但不限于)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、硬皮癥、休格倫氏癥候群(Sjogren’s syndrome)、多發(fā)性硬化癥、牛皮癬、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、發(fā)炎性腸疾病(例如，潰瘍性結(jié)腸炎及克隆氏病(Crohn’s disease))、肺炎、氣喘及特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)、上皮性發(fā)炎病癥、纖維變性及關(guān)節(jié)粘連性脊椎炎。
[0179]術(shù)語「靜脈內(nèi)輸注」是指藥劑引入動物或人類患者的靜脈中經(jīng)大于約15分鐘、通常介于約30分鐘至90分鐘之間的時間。
[0180]術(shù)語「靜脈內(nèi)快速濃注(bolus)」或「靜脈內(nèi)推注」是指藥物投與動物或人類的靜脈中以使身體在約15分鐘或更短、通常5分鐘或更短時間內(nèi)接受藥物。
[0181 ] 術(shù)語「皮下投與」是指藥物引入動物或人類患者的皮膚下、較佳在皮膚與基底組織之間的囊內(nèi)，由藥物貯器相當(dāng)緩慢持續(xù)遞送。將皮膚向上捏離或拉離基底組織可產(chǎn)生囊。
[0182]術(shù)語「皮下輸注」是指藥物引入動物或人類患者的皮膚下、較佳在皮膚與基底組織之間的囊內(nèi)，由藥物貯器相當(dāng)緩慢持續(xù)遞送一段時間，包括(但不限于)30分鐘或更短、或90分鐘或更短。視情況，可由皮下植入藥物遞送幫浦植入動物或人類患者的皮膚下來實施輸注，其中該幫浦遞送預(yù)定量的藥物經(jīng)預(yù)定時間，例如30分鐘、90分鐘或跨越整個治療方案的時間。
[0183]術(shù)語「皮下快速濃注」是指藥物投與動物或人類患者的皮膚下，其中快速濃注藥物遞送短于約15分鐘；在另一方面中，短于5分鐘；且在又一方面中，短于60秒。在再一方面中，投與皮膚與基底組織之間的囊內(nèi)，其中該囊可由將皮膚向上捏離或拉離基底組織來產(chǎn)生。
[0184]所用術(shù)語「治療有效量」是指活性劑緩解或改善所治療病癥的一或多種癥狀的量。在另一方面中，治療有效量是指已顯示可有效例如減慢疾病進展的目標(biāo)血清濃度?？梢猿Ｒ?guī)方式測量功效，視欲治療病狀而定。
[0185]本文所用「治療」及「療法」及諸如此類意欲包括針對疾病或病癥的治療性以及預(yù)防性或抑制性措施，其產(chǎn)生任何臨床上期望或有益的效應(yīng)，包括(但不限于)減輕或緩解疾病或病癥的一或多個癥狀、使疾病或病癥消退、減慢或停止疾病或病癥的進展。因此，例如，術(shù)語治療包括在疾病或病癥的癥狀發(fā)作的前或的后投與藥劑，由此預(yù)防或消除疾病或病癥的一或多個體征。作為另一實例，該術(shù)語包括在疾病的臨床表現(xiàn)后投與藥劑，從而抵抗該疾病的癥狀。此外，在發(fā)作后及在已出現(xiàn)臨床癥狀后投與藥劑包含本文所用「治療」或「療法」，其中不論該治療是否引起疾病改善，投與均影響疾病或病癥的臨床參數(shù)，例如組織損傷度或轉(zhuǎn)移的量或程度。此外，只要單獨或與另一治療劑組合的本發(fā)明組合物與未使用人類化IL-36R抗體組合物時相比減輕或改善所治療病癥的至少一個癥狀，不論是否減輕該病癥的所有癥狀，該結(jié)果即應(yīng)視為可有效治療潛在病癥。
[0186]所用術(shù)語「包裝插頁」是指通常包括于治療產(chǎn)品的商業(yè)包裝內(nèi)的說明書，其含有關(guān)于適應(yīng)癥、用法、投與、禁忌及/或關(guān)于使用該等治療產(chǎn)品的警告的信息。
[0187]抗體
[0188]在一方面中，本文闡述并揭示抗IL-36R抗體、具體而言人類化抗IL-36R抗體，及包含本發(fā)明的一或多種抗IL-36R抗體、具體而言一或多種人類化抗IL-36R抗體的組合物及制品。亦闡述包括抗IL-36抗體、具體而言人類化抗IL-36R抗體的抗原結(jié)合片段的結(jié)合劑。
[0189]本發(fā)明的代表性抗體的可變區(qū)及CDR是揭示于下文中:
[0190]抗IL-36R小鼠抗體序列
[0191]本發(fā)明的代表性小鼠前導(dǎo)抗體的可變區(qū)及CDR(小鼠前導(dǎo)序列)是顯示于下文中:
[0192]輕鏈可變區(qū)(VK)氨基酸序列
[0193]
【權(quán)利要求】
1.一種抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其以等于或〈0.1nMiKrj與人類IL-36R結(jié)合。
2.如權(quán)利要求1的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或抗原結(jié)合片段是單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段。
3.如權(quán)利要求1和 /或2的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或抗原結(jié)合片段是人源化抗體或其抗原結(jié)合片段。
4.如權(quán)利要求1至3任一項的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其以等于或<50pM的Kd與人類IL-36R結(jié)合。
5.如權(quán)利要求1至4任一項的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其不與人類IL-1Rl結(jié)合 ?
6.如權(quán)利要求1至5任一項的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含: a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ ID NO: 35,102、103、104、105、106 或 140 (L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及 b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID N0:53(H-CDR1);氨基酸序列SEQ ID NO:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
7.如權(quán)利要求6的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含: a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:102(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及 b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID N0:53(H-CDR1);氨基酸序列SEQ ID NO:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
8.如權(quán)利要求6的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含: a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID N0:26(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:103(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及 b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID N0:53(H-CDR1);氨基酸序列SEQ ID NO:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
9.如權(quán)利要求6的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含: a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:104(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及 b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID N0:53(H-CDR1);氨基酸序列SEQ ID NO:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
10.如權(quán)利要求6的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含: a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:105(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID N0:53(H-CDR1);氨基酸序列SEQ ID NO:62、.108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
11.如權(quán)利要求6的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含: a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:106(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及 b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID N0:53(H-CDR1);氨基酸序列SEQ ID N0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
12.如權(quán)利要求6的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含: a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:140(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及 b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID N0:53(H-CDR1);氨基酸序列SEQ ID N0:62、108、109、110 或 111(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
13.如權(quán)利要求1至5任一項的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含SEQ ID N0:76、77、78、79、80、81、82或83中任一者的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；及包含SEQ ID N0:87、88、89、90、91、92、93、94或95中任一者的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。
14.如權(quán)利要求13的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO: 77的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 87的重鏈可變區(qū)；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO:77的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:88的重鏈可變區(qū)；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO:77的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:89的重鏈可變區(qū)。
15.如權(quán)利要求13的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO:80的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:87的重鏈可變區(qū)；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO:80的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:88的重鏈可變區(qū)；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO:80的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO:89的重鏈可變區(qū)。
16.如權(quán)利要求1-5任一項的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含: 輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:27(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDNO:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 107 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO:63 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:73(H-CDR3);或 輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 107 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO:64 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:73(H-CDR3);或 輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:27(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDNO:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:54(H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 63 或 64(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:73(H-CDR3)。
17.如權(quán)利要求1-5任一項的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含SEQ ID NO:84、85或86中任一者的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)；及包含SEQ ID N0:96、97、98、99、100或101中任一者的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)。
18.如權(quán)利要求17的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含該氨基酸序列SEQ ID NO:85的輕鏈可變區(qū)；及包含該氨基酸序列SEQ ID NO: 100的重鏈可變區(qū)；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO:85的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 101的重鏈可變區(qū)。
19.如權(quán)利要求17的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO:86的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 100的重鏈可變區(qū)；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO:86的輕鏈可變區(qū)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 101的重鏈可變區(qū)。
20.如權(quán)利要求1-5任一項的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含SEQID NO: 114、115、116、117、118、119、120或121中任一者的氨基酸序列的輕鏈；及包含SEQ ID NO: 125、126、127、128、129、130、131、132或133中任一者的氨基酸序列的重鏈。
21.如權(quán)利要求20的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQID NO: 115的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 125的重鏈。
22.如權(quán)利要求20的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQID NO:115的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 126的重鏈。
23.如權(quán)利要求20的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQID NO:115的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 127的重鏈。
24.如權(quán)利要求20的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQID NO: 118的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 125的重鏈。
25.如權(quán)利要求20的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQID NO: 118的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 126的重鏈。
26.如權(quán)利要求20的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQID NO: 118的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 127的重鏈。
27.如權(quán)利要求1-5任一項的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含SEQID NO: 122、123或124中任一者的氨基酸序列的輕鏈；及包含SEQ ID NO: 134、135、136、137、138或139中任一者的氨基酸序列的重鏈。
28.如權(quán)利要求27的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQID NO: 123的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 138的重鏈。
29.如權(quán)利要求27的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQID NO: 123的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 139的重鏈。
30.如權(quán)利要求27的抗IL-36R抗體，其中該抗體包含:包含氨基酸序列SEQID NO: 124的輕鏈；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 138的重鏈。
31.如權(quán)利要求1-5任一項的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含: a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:103(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 44 (L-CDR3);及 b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:62(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
32.如權(quán)利要求1-5任一項的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含: a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID NO: 26 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:104(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO:44(L-CDR3);及 b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:62(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 72 (H-CDR3)。
33.如權(quán)利要求1 -5任一項的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含: a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:36(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及 b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID NO: 107 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:63(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 73 (H-CDR3)。
34.如權(quán)利要求1-5任一項的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含: a)輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID NO: 27 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:36(L-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及 b)重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQID NO: 107 (H-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:64(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ ID NO:73 (H-CDR3)。
35.如權(quán)利要求1-5的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含: 輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 21 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDN0:30(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 39 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 48 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 57 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:67(H-CDR3);或 輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:22(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDNO:31(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO:40 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 49 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 58 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:68(H-CDR3);或 輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:23(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDN0:32(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID N0:41 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 50 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 59 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:69(H-CDR3);或 輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 24 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:33(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 42 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:51(H-CDR1);氨基酸序列 SEQ ID NO: 60 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDN0:70(H-CDR3);或 輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 25 (L-CDRl);氨基酸序列SEQ IDNO:34(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 43 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:52(H-CDR1);氨基酸序列 SEQ ID NO:61 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:71(H-CDR3);或 輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:26(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDNO:35(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO:44(L_CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 53 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 62 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:72(H-CDR3);或 輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:27(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDNO:36(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 54 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 63 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:73(H-CDR3);或 輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:27(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDNO:36(L-CDR2);氨基酸 序列SEQ ID NO: 45 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:54(H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO:64(H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:73(H-CDR3);或 輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:28(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDNO:37(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO:46 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 55 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 65 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:74(H-CDR3);或 輕鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:29(L-CDR1);氨基酸序列SEQ IDNO:38(L-CDR2);氨基酸序列SEQ ID NO: 47 (L-CDR3);及重鏈可變區(qū)，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 56 (H-CDRl);氨基酸序列 SEQ ID NO: 66 (H-CDR2);氨基酸序列 SEQ IDNO:75(H-CDR3)。
36.如權(quán)利要求1-5任一項的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含:包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的輕鏈蛋白質(zhì)；及包含氨基酸序列SEQ IDNO: 11的重鏈蛋白質(zhì)；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO: 2的輕鏈蛋白質(zhì)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 12的重鏈蛋白質(zhì)；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO: 3的輕鏈蛋白質(zhì)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 13的重鏈蛋白質(zhì)；或 包含氨基酸序列SEQ ID N0:4的輕鏈蛋白質(zhì)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 14的重鏈蛋白質(zhì)；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO: 5的輕鏈蛋白質(zhì)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 15的重鏈蛋白質(zhì)；或 包含氨基酸序列SEQ ID N0:6的輕鏈蛋白質(zhì)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 16的重鏈蛋白質(zhì)；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO: 7的輕鏈蛋白質(zhì)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 17的重鏈蛋白質(zhì)；或 包含氨基酸序列SEQ ID N0:8的輕鏈蛋白質(zhì)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 18的重鏈蛋白質(zhì)；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO:9的輕鏈蛋白質(zhì)；及包含氨基酸序列SEQ ID NO: 19的重鏈蛋白質(zhì)；或 包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10的輕鏈蛋白質(zhì)；及包含氨基酸序列SEQ ID N0:20的重鏈蛋白質(zhì)。
37.一種藥物組合物，包含權(quán)利要求1-36任一項的抗體或其抗原結(jié)合片段，以及藥學(xué)可接受的載體。
38.權(quán)利要求1-36任一項的抗體或其抗原可結(jié)合片段，或權(quán)利要求37的藥物組合物，用于醫(yī)學(xué)中。
39.權(quán)利要求38的抗體或其抗原可結(jié)合片段或藥物組合物，其中該于醫(yī)學(xué)中的用途是在治療炎癥疾病、自體免疫疾病、呼吸疾病、代謝病癥、上皮介導(dǎo)的發(fā)炎病癥、纖維變性或癌癥的方法中的用途。
40.如權(quán)利要求38或39的抗體或其抗原結(jié)合片段或藥物組合物，其中該于醫(yī)學(xué)中的用途是在治療牛皮癬、發(fā)炎性腸疾病、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、COPD、慢性氣喘或關(guān)節(jié)粘連性脊椎炎的方法中的用途。
41.如權(quán)利要求38-40任一項的抗體或其抗原結(jié)合片段或藥物組合物，其中該于醫(yī)學(xué)中的用途是在治療發(fā)炎性腸疾病的方法中的用途。
42.如權(quán)利要求38-41任一項的抗體或其抗原結(jié)合片段或藥物組合物，其中該于醫(yī)學(xué)中的用途是在治療克隆氏病(Crohn’s disease)的方法中的用途。
43.一種治療疾病的方法，包括給藥有此需要的患者權(quán)利要求1-36任一項的抗體或其抗原結(jié)合片段或權(quán)利要求38的藥物組合物，其中所述疾病選自:炎癥疾病、自體免疫疾病、呼吸疾病、代謝病癥、上皮介導(dǎo)的發(fā)炎病癥、纖維變性和癌癥。
44.如權(quán)利要求43的方法，其中所述疾病選自:牛皮癬、發(fā)炎性腸疾病、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、C0PD、慢性氣喘和關(guān)節(jié)粘連性脊椎炎。
45.如權(quán)利要求43和/或44的方法，其中所述疾病是克隆氏病。
46.一種分離的多核苷酸,其包含編碼如權(quán)利要求1至36中任一權(quán)利要求的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段的序列，較佳為DNA或RNA序列。
47.如權(quán)利要求46的分離的多核苷酸，其編碼如SEQID N0.1至140中的一或多者所定義的序列。
48.—種載體,其包含如權(quán)利要求46和/或47的多核苷酸,較佳為表達載體,更佳為包含本發(fā)明的多核苷酸與表達控制序列功能聯(lián)結(jié)的載體。
49.一種宿主細胞，其包含如權(quán)利要求46和/或47的多核苷酸和/或如權(quán)利要求48的載體。
50.—種制造如權(quán)利要求1至36中任一權(quán)利要求或多權(quán)利要求的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，較佳為重組制造方法，包含使用如權(quán)利要求46和/或47的多核苷酸、和/或如權(quán)利要求48的載體和/或如權(quán)利要求49的宿主細胞。
51.如權(quán)利要求50的方法，其包含以下步驟:(a)該宿主細胞在允許表現(xiàn)該抗IL-36R抗體或抗原結(jié)合片段的條件下培養(yǎng)，及(b)回收該抗IL-36R抗體或抗原結(jié)合片段。
52.一種診斷套組或診斷方法，包含如權(quán)利要求1至36中任一權(quán)利要求的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段，或使用如權(quán)利要求1至36中任一權(quán)利要求的抗IL-36R抗體或其抗原結(jié)合片段。
53.如權(quán)利要求52的診斷套組或診斷方法，其用于診斷炎癥疾病、自體免疫疾病、呼吸疾病、代謝病癥、上皮介導(dǎo)的發(fā)炎病癥、纖維變性、癌癥、牛皮癬、發(fā)炎性腸疾病、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥 、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、COPD、慢性氣喘、關(guān)節(jié)粘連性脊椎炎或克隆氏病。
【文檔編號】C07K16/28GK104080808SQ201280054425
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2012年11月14日 優(yōu)先權(quán)日:2011年11月16日
【發(fā)明者】S-E.布朗, K.卡納達, L.科勒維基, M.豪威爾, D.曼納里克, 小約瑟夫.R.沃斯卡 申請人:勃林格殷格翰國際有限公司