專利名稱：一種從蘋果皮中分離熊果酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬天然藥物領(lǐng)域，具體涉及一種從蘋果皮中分離活性成分熊果酸的方法。
背景技術(shù)：
我國蘋果產(chǎn)地主要集中在河南、山東、陜西等地，并且在蘋果產(chǎn)地建有較大數(shù)量和規(guī)模的果脯或果汁等生產(chǎn)企業(yè)，這些企業(yè)在生產(chǎn)過程中每天有大量的蘋果皮渣產(chǎn)生并成為廢物被處理掉。因此，產(chǎn)生大量浪費(fèi)的同時(shí)還造成了環(huán)境的污染。蘋果皮中熊果酸含量較高，為提取和分離熊果酸提供了優(yōu)良的原料。本發(fā)明分離工藝簡單，成本低，收率高，非常適合工業(yè)化生產(chǎn)，具有很高的經(jīng)濟(jì)與社會效益。熊果酸(Ursolic acid)又名烏蘇酸或?yàn)跛魉?屬三職類化合物,分子式為C3tlH18O3,化學(xué)名稱為3 β -羥基-熊果烷-12-烯-28-羧酸。熊果酸具有鎮(zhèn)靜、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗?jié)?、降低血糖等多種生物學(xué)效應(yīng)；同時(shí)熊果酸還具有明顯的抗氧化性，因而被廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥和化妝品原料。在一些重大疾病上，熊果酸具有保肝、抗肝炎、抗腫瘤的作用，甚至對于艾滋病亦有很好的抑制作用。韓寧娟申請的“一種蘋果中總?cè)祁惢衔锏奶崛》蛛x方法有其應(yīng)用”的發(fā)明專利(申請?zhí)?00910021258.9)以及何祥久等人申請的“一種蘋果總?cè)频闹苽浞椒坝迷摲ㄖ苽涞奶O果總?cè)啤钡陌l(fā)明專利(申請?zhí)?01010163527.8)都是申請制備蘋果總?cè)频陌l(fā)明專利，并沒有具體涉及制備熊果酸晶體的內(nèi)容。本發(fā)明人曾申請的發(fā)明專利“一種從車前草中分離熊果酸的方法”(申請?zhí)?01210120392.6)公開了從車前草中分離熊果酸的方法，但是車前草與蘋果皮在性質(zhì)上存在較大的差異，直接采用申請?zhí)?01210120392.6的方法所得熊果酸提取效率低、純度較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種從蘋果皮中分離熊果酸的方法。

經(jīng)過本發(fā)明人的大量實(shí)驗(yàn)、摸索，發(fā)現(xiàn)蘋果皮中存在較多的水溶性成分如蘋果膠等，嚴(yán)重影響對熊果酸的分離提取。所以本申請?jiān)谔崛≈安扇×怂岬确绞饺コ苄猿煞痔O果膠等成分。本工藝具體步聚如下:
(I)取新鮮蘋果皮、或干蘋果皮、或榨汁后的蘋果渣，粉碎，按液固比ml/g20/l 100/1加入水、或鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、亞硫酸、檸檬酸、酒石酸、乙酸、乳酸和蘋果酸的水溶液任一種或幾種混合物、或纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶的水溶液任一種或幾種混合物，在20-100°C下加熱回流或功率100 IOOOw的超聲波或100 IOOOw功率的微波輔助提取I 3次，每次0.1 3小時(shí)，攪拌速度O 2000r/min，過濾或離心后得蘋果渣，備用；或直接取脫除蘋果膠后的果皮備用；
(3)取濾渣，按液固比mL/g 4/1 40/1加入中等極性溶劑、體積比濃度50% 100%的低碳鏈醇水溶液，在20-90°C下，加熱回流或功率100 IOOOw的超聲波或100 IOOOw功率的微波輔助提取I 3次，每次0.1 3小時(shí)，攪拌速度O 2000r/min，合并提取液，常壓或減壓回收溶劑得浸膏；
(4)取浸膏，按液固比mL/g10/1 100/1加入低極性溶劑，在20_90°C下，加熱回流脫脂或功率100 IOOOw的超聲或100 IOOOw功率的微波輔助脫脂I 4次，每次0.1 3小時(shí)，攪拌速度O 2000r/min，過濾或離心，取不溶物，得到脫脂后的浸膏；
(5)取脫脂后的浸膏，按液固比mL/g10/1 500/1加入體積比濃度50% 100%低碳鏈醇或它們的水溶液，使脫脂后浸膏溶解，在20-90°C下，按脫脂后浸膏質(zhì)量g/g的1/50 5/1加入活性炭，加熱回流或功率100 IOOOw的超聲或100 IOOOw功率的微波輔助脫色I(xiàn) 5次每次0.1 3小時(shí)，攪拌速度O 2000r/min，過濾或離心，常壓或減壓回收溶劑得到熊果酸粗品；如果前一步驟所得脫脂后的浸膏顏色較淺，則本步驟可以省略；
(6)取熊果酸粗品，按液固比mL/g20/1 500/1加入體積比濃度50% 100%低碳鏈醇水溶液、或乙酸乙酯或乙酸乙酯與低碳鏈醇體積比1/9 9/1的混合物，進(jìn)行結(jié)晶或重結(jié)晶，過濾或離心得到熊果酸晶體。所述低碳鏈醇 是甲醇、乙醇或它們的任意比混合物中的一種。所述中等極性溶劑是二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、乙酸乙酯或它們的任意比混合物中的一種。所述低極性溶劑是石油醚、正己烷、環(huán)己烷、正庚烷或它們的任意比混合物中的一種。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:1與其它植物原料相比，本發(fā)明所用蘋果皮在我國果汁或果脯等產(chǎn)業(yè)上基本上屬副產(chǎn)物，且產(chǎn)量較大，常作為廢物處理且污染環(huán)境，這為本發(fā)明提供了豐富且價(jià)廉的原料，且屬于廢物回收利用；2、本發(fā)明所需化工原料易得，并且可以回收再用，因此“三廢”處理量小，對環(huán)境基本不產(chǎn)生污染；3、本發(fā)明不采用色譜技術(shù)，而是直接采用提取、脫脂、脫色、結(jié)晶等工藝，故本工藝簡便、所需裝置簡單，非常適合規(guī)?；a(chǎn)。4、在提取熊果酸之前先通過水提或酸法、酶法等方法去除水溶性成分如蘋果膠等，有效排除干擾，提高了熊果酸提取的效率和純度。5、針對蘋果皮的性質(zhì)，在提取時(shí)采用一步法加入中等極性溶劑、體積比濃度50% 100%的低碳鏈醇水溶液提取，簡化了步驟，在基本保持提取純度的前提下節(jié)約了材料、大大降低了成本。6、本發(fā)明方案提取分離熊果酸晶體濃度大于等于80%。綜上所述，本發(fā)明所需原料價(jià)廉易得，環(huán)境污染小，工藝簡便易行，生產(chǎn)裝置簡單，所以本發(fā)明制備熊果酸的成本較低并且非常適合規(guī)?；a(chǎn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:
取新鮮蘋果皮粉碎，用20倍量水提取2次(每次I小時(shí)，80°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min)，過濾取濾渣；濾渣用20倍量95%乙醇回流提取2次(每次2小時(shí)，700C，攪拌，轉(zhuǎn)速800r/min)，減壓回收乙醇得到黃白色浸膏；浸膏用15倍量的石油醚(沸點(diǎn)60-90°C)脫去脂溶性成分3次(每次I小時(shí)，50°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min);脫脂后浸膏溶于95%乙醇中，加入活性炭脫色3次(每次I小時(shí)，50°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min)，過濾，合并濾液，回收乙醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品按液固比mL/g20:1用95%乙醇重結(jié)晶得到熊果酸晶體，熊果酸純度為98%。實(shí)施例2:將干燥蘋果皮粉碎，用20倍量鹽酸水溶液提取2次(每次I小時(shí)，90°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min)，過濾取濾渣；濾渣用15倍量無水乙醇回流提取3次(每次2小時(shí)，60°C，攪拌，轉(zhuǎn)速600r/min)，減壓回收乙醇得到黃白色浸膏；浸膏用20倍量的正已烷脫去脂溶性成分3次(每次I小時(shí)，40°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min);脫脂后浸膏溶于無水乙醇中，加入活性炭脫色3次(每次I小時(shí)，60°C，攪拌，轉(zhuǎn)速400r/min)，過濾，合并濾液，回收乙醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品按液固比mL/g25:1用無水乙醇重結(jié)晶得到熊果酸晶體，熊果酸純度為95%。實(shí)施例3:
將新鮮榨汁后蘋果渣經(jīng)粉碎，用20倍量硝酸水溶液，，提取2次(每次I小時(shí)，30°C，攪拌，轉(zhuǎn)速600r/min)，過濾取濾渣；濾渣用12倍量甲醇超聲輔助提取3次(每次2小時(shí)，40°C，攪拌，轉(zhuǎn)速600r/min)，減壓回收甲醇得到黃白色浸膏；浸膏用20倍量的石油醚(沸點(diǎn)60-900C )脫去脂溶性成分3次(每次I小時(shí)，500C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min);脫脂后浸膏溶于無水乙醇中，加入活性炭脫色3次(每次I小時(shí)，40°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min)，過濾，合并濾液，回收乙醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品按液固比mL/g30:1用無水乙醇重結(jié)晶得到熊果酸晶體，熊果酸純度為80%。實(shí)施例4:
將新鮮蘋果皮粉碎，用20倍量亞硫酸水溶液，提取2次(每次I小時(shí)，300C，攪拌，轉(zhuǎn)速600r/min)，過濾取濾渣；濾渣用12倍量甲醇超聲輔助提取3次(每次2小時(shí)，40°C，攪拌，轉(zhuǎn)速600r/min)，減壓回收甲醇得到黃白色浸膏；浸膏用20倍量的石油醚(沸點(diǎn)60_90°C )脫去脂溶性成分3次(每次I小時(shí)，50°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min);脫脂后浸膏溶于無水乙醇中，加入活性炭脫色3次(每次I小時(shí)，40°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min)，過濾，合并濾液，回收乙醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品按液固比mL/g30:1用無水乙醇重結(jié)晶得到熊果酸晶體，熊果酸純度為90%。實(shí)施例5:`
將新鮮蘋果皮粉碎，用20倍量磷酸水溶液，提取2次(每次I小時(shí)，60°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min),過濾取濾渣；濾渣用20倍量甲醇超聲輔助提取3次(每次2小時(shí)，50°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min)，減壓回收溶劑得到近乎白色浸膏；浸膏用20倍量的正已烷脫去脂溶性成分3次(每次I小時(shí)，40°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min);脫脂后浸膏溶于甲醇中，加入活性炭脫色2次(每次0.5小時(shí)，40°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min)，過濾，合并濾液，回收甲醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用甲醇按液固比mL/g40:1重結(jié)晶得到熊果酸晶體，熊果酸純度為85%。實(shí)施例6:
將新鮮蘋果皮粉碎，用30倍量硫酸水溶液，超聲提取3次(每次I小時(shí)，500C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min)，過濾取濾渣；濾渣用30倍量甲醇超聲輔助提取3次(每次I小時(shí)，50°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min)，減壓回收溶劑得到近乎白色浸膏；浸膏用20倍量的正已烷脫去脂溶性成分3次(每次I小時(shí)，40°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min);脫脂后浸膏溶于甲醇中，回收甲醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用甲醇按液固比mL/gl50:1重結(jié)晶得到熊果酸晶體，熊果酸純度為97%。實(shí)施例7:
以提取完蘋果果膠后的蘋果皮為原料，取蘋果皮細(xì)粉，加入30倍量無水乙醇超聲輔助提取3次(每次I小時(shí)，30°C)，減壓回收乙醇得到黃白色浸膏；浸膏用30倍量的石油醚(沸點(diǎn)60-900C )脫去脂溶性成分3次(每次1.5小時(shí)，500C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min);脫脂后浸膏顏色很淺，直接按液固比mL/g 40:1加入乙醇和乙酸乙酯的混合物(體積比1:1)重結(jié)晶得到熊果酸晶體，熊果酸純度為92%。實(shí)施例8:
將新鮮蘋果皮粉碎，用30倍量醋酸溶液提取(2小時(shí)，60°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min)，過濾取濾渣；濾渣用20倍量95%乙醇微波輔助提取3次(每次0.5小時(shí))，減壓回收乙醇得到黃白色浸膏；浸膏用30倍量的石油醚(沸點(diǎn)60-90°C)脫去脂溶性成分2次(每次0.5小時(shí)，50°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min);脫脂后溶于無水乙醇中，加入活性炭脫色3次(每次I小時(shí)，50°C，攪拌，轉(zhuǎn)速600r/min)，過濾，合并濾液，回收乙醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用乙醇按液固比mL/g30:1重結(jié)晶得到熊果酸晶體，熊果酸純度為89%。實(shí)施例9:
以提取完蘋果果膠后的蘋果皮為原料，，取蘋果皮細(xì)粉，用25倍量果膠酶溶液提取(2小時(shí)，50°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min)，過濾取濾渣；濾渣采用滲漉法(增加量)，用95%乙醇提取，減壓回收乙醇得到黃白色浸膏；浸膏用25倍量的石油醚(沸點(diǎn)60-90°C)脫去脂溶性成分2次(每次I小時(shí)，500C，攪拌，轉(zhuǎn)速400r/min);脫脂后溶于甲醇中，加入活性炭脫色3次(每次I小時(shí)，30°C，攪拌，轉(zhuǎn)速600r/min)，過濾，合并清液，回收甲醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用甲醇和乙醇混合溶液按液固比mL/g300:1重結(jié)晶得到熊果酸晶體，熊果酸純度為99%。實(shí)施例10:
將蘋果皮自然涼干粉碎，取蘋果皮細(xì)粉，用25倍量纖維素酶水溶液提取(2小時(shí)，30°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min)，過濾取濾渣；濾渣用30倍量乙酸乙酯超聲輔助提取3次(每次I小時(shí))，減壓回收乙酸乙酯得到黃白色浸膏；浸膏用30倍量的石油醚(沸點(diǎn)60-90°C)脫去脂溶性成分3次(每次0.5小時(shí)，40°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min);脫脂后溶于甲醇中，加入活性炭脫色3次(每次0.5小時(shí)，60°C，攪拌，轉(zhuǎn)速400r/min)，過濾，合并濾液，回收乙醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用甲醇和乙酸乙酯按體積比1:1按液固比mL/g25:l重結(jié)晶得到熊果酸晶體，熊果酸純度為96%。實(shí)施例11:
以提取完蘋果果膠后的蘋果皮為原料，取蘋果皮細(xì)粉，用25倍量半纖維素酶水溶液提取(2小時(shí)，30°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min)，過濾取濾渣；濾渣用30倍量三氯甲烷超聲輔助提取3次(每次I小時(shí))，減壓回收三氯甲烷得到黃白色浸膏；浸膏用30倍量的石油醚(沸點(diǎn)60-900C )脫去脂溶性成分3次(每次0.3小時(shí)，40°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min);脫脂后溶于無水乙醇中，加入活性炭脫色3次(每次0.5小時(shí)，60°C，攪拌，轉(zhuǎn)速400r/min)，過濾，合并濾液，回收乙醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用無水乙醇按液固比mL/g200:1重結(jié)晶得到熊果酸晶體，熊果酸純度為94%。實(shí)施例12: 以提取完蘋果果膠后的蘋果皮為原料，，取蘋果皮細(xì)粉，用30倍量含纖維素酶和半纖維素酶的混合溶液提取(2小時(shí)，30°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min)，過濾取濾渣；濾渣用30倍量甲醇超聲輔助提取3次(每次I小時(shí))，減壓回收甲醇得到近乎白色浸膏；浸膏用30倍量的石油醚(沸點(diǎn)60-90°C )脫去脂溶性成分3次(每次0.5小時(shí)，40°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min)；脫脂后溶于無水乙醇中，按液固比mL/g30:1重結(jié)晶得到熊果酸晶體，熊果酸純度為98%。實(shí)施例13:
將新鮮蘋果皮粉碎，用40倍量磷酸和硝酸混合溶液提取(2小時(shí)，60°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min),過濾取濾渣；濾渣用20倍量無水乙醇微波輔助提取3次(每次0.5小時(shí))，減壓回收乙醇得到黃白色浸膏；浸膏用30倍量的石油醚(沸點(diǎn)60-90°C)脫去脂溶性成分2次(每次0.5小時(shí)，50°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min);脫脂后溶于無水乙醇中，加入活性炭脫色3次(每次I小時(shí)，50°C，攪拌，轉(zhuǎn)速600r/min)，過濾，合并濾液，回收乙醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用乙醇按液固比mL/gl00:1重結(jié)晶得到熊果酸晶體，熊果酸純度為99.5%。實(shí)施例14:
將干蘋果皮粉碎，用50倍量檸檬酸水溶液超聲輔助提取(2小時(shí)，30°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min)，過濾取濾渣；濾渣用20倍量二氯乙烷超聲輔助提取3次(每次I小時(shí))，減壓回收乙醇得到黃白色浸膏；浸膏用30倍量的環(huán)已烷脫去脂溶性成分2次(每次0.5小時(shí)，50°C，攪拌，轉(zhuǎn)速500r/min);脫脂后溶于甲醇中，加入活性炭脫色3次(每次I小時(shí)，40°C，攪拌，轉(zhuǎn)速600r/min)，過濾，合并濾液，回收甲醇得到白色熊果酸粗品。熊果酸粗品用甲醇按液固比mL/g50:1重結(jié)晶得到熊果酸晶體，熊果酸純度為93%。實(shí)施例15
將干蘋果皮粉碎，用50倍量鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、亞硫酸、檸檬酸、酒石酸、乙酸、乳酸和蘋果酸混合酸水溶液超聲輔助提取。 其余同實(shí)施例14。
權(quán)利要求
1.一種從蘋果皮中分離熊果酸的方法，其特征在于包括如下步驟: (I)取新鮮蘋果皮、或干蘋果皮、或榨汁后的蘋果渣，粉碎，按液固比ml/g20/l 100/1加入水、或鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、亞硫酸、檸檬酸、酒石酸、乙酸、乳酸和蘋果酸的水溶液任一種或幾種混合物、或纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶的水溶液任一種或幾種混合物，在20-100°C下加熱回流或功率100 IOOOw的超聲波或100 IOOOw功率的微波輔助提取I 3次，每次0.1 3小時(shí)，攪拌速度O 2000r/min，過濾或離心后得蘋果渣，備用；或直接取脫除蘋果膠后的果皮備用； (3)取濾渣，按液固比mL/g4/1 40/1加入中等極性溶劑、體積比濃度50% 100%的低碳鏈醇水溶液，在20-90°C下，加熱回流或功率100 IOOOw的超聲波或100 IOOOw功率的微波輔助提取I 3次，每次0.1 3小時(shí)，攪拌速度O 2000r/min，合并提取液，常壓或減壓回收溶劑得浸膏； (4)取浸膏，按液固比mL/g10/1 100/1加入低極性溶劑，在20_90°C下，加熱回流脫脂或功率100 IOOOw的超聲或100 IOOOw功率的微波輔助脫脂I 4次，每次0.1 3小時(shí)，攪拌速度O 2000r/min，過濾或離心，取不溶物，得到脫脂后的浸膏； (5)取脫脂后的浸膏，按液固比mL/g10/1 500/1加入體積比濃度50% 100%低碳鏈醇或它們的水溶液，使脫脂后浸膏溶解，在20-90°C下，按脫脂后浸膏質(zhì)量g/g的1/50 5/1加入活性炭，加熱回流或功率100 IOOOw的超聲或100 IOOOw功率的微波輔助脫色I(xiàn) 5次每次0.1 3小時(shí)，攪拌速度O 2000r/min，過濾或離心，常壓或減壓回收溶劑得到熊果酸粗品； (6)取熊果酸粗品，按液固比mL/g20/1 500/1加入體積比濃度50% 100%低碳鏈醇水溶液、或乙酸乙酯或乙酸乙酯與低碳鏈醇體積比1/9 9/1的混合物，進(jìn)行結(jié)晶或重結(jié)晶，過濾或離心得到熊果酸晶體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從蘋果皮中分離熊果酸的方法，其特征在于:所述低碳鏈醇是甲醇、乙醇或它們的任意比混合物中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從蘋果皮中分離熊果酸的方法，其特征在于:所述中等極性溶劑是二氯甲烷、三氯甲烷、二氯乙烷、乙酸乙酯或它們的任意比混合物中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從蘋果皮中分離熊果酸的方法，其特征在于:所述低極性溶劑是石油醚、正己烷、環(huán)己烷、正庚烷或它們的任意比混合物中的一種。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然藥物領(lǐng)域，涉及一種從蘋果皮中分離熊果酸的方法，包括粉碎過的蘋果皮脫除膠，過濾；濾渣用中等極性溶劑、低碳鏈醇或低碳鏈醇的水溶液進(jìn)行提取，提取液經(jīng)回收溶劑得浸膏；浸膏用低極性溶劑脫脂后，溶于低碳鏈醇中并用活性炭脫色；過濾并回收溶劑得到白色熊果酸粗品；熊果酸粗品經(jīng)低碳鏈醇、低碳醇水溶液、乙酸乙酯或它們混合物進(jìn)行重結(jié)晶后得熊果酸晶體。本發(fā)明原料易得、工藝簡單易行，所獲得的熊果酸純度高、成本低，非常適合規(guī)模化生產(chǎn)。
文檔編號C07J63/00GK103204895SQ20131011906
公開日2013年7月17日 申請日期2013年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月8日
發(fā)明者范杰平, 盧嬋, 鄺榮初, 金琴, 劉芬, 匡小軍 申請人:南昌大學(xué)