一種快速從新鮮明日葉中提取查爾酮的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從新鮮明日葉中提取查爾酮的方法，屬于天然產(chǎn)物分離純化【技術領域】。本發(fā)明方法包括：將適量新鮮明日葉粉碎、勻漿，得到勻漿液；向勻漿液中加入復合酶并充分攪拌，過濾收集濾液，得濾液一；向濾液一中加入四氯合鋁酸（1-乙基-3-甲基）咪唑溶液，常溫萃取1～2h，過濾收集濾液，得濾液二；將濾液二采用聚酰胺色譜柱進行層析分離、用乙醇洗脫、低壓干燥后，得到查爾酮。本發(fā)明選用復合酶及非揮發(fā)性四氯合鋁酸（1-乙基-3-甲基）咪唑溶液有效替代傳統(tǒng)揮發(fā)性有機溶劑的使用，最大程度地消除了揮發(fā)性有機溶劑的危害，消除了安全隱患。本方法制備得到的查爾酮純品，其純度為96%以上，得率為93%以上。
【專利說明】一種快速從新鮮明日葉中提取查爾酮的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離純化【技術領域】，具體涉及一種從新鮮明日葉中清潔化、快速提取查爾酮的方法。
【背景技術】
[0002]查爾酮(chalcone)是指一類分子中含有1，3_ 二苯基丙烯酮結(jié)構(gòu)的天然化合物，在甘草、紅花等多種藥用植物的根、葉和皮中大量存在，其分子結(jié)構(gòu)柔性較大，可與多種受體結(jié)合，表現(xiàn)出多方面的生物活性，已見諸報道的有抗腫瘤、抗寄生蟲、抗HIV、抗菌、抗炎、抗血小板凝集等作用。
[0003]明日葉(Angelica keiskei Koidzumi )又名明日草、明月草、八丈草等,原產(chǎn)日本八丈島、三浦兩半島等近海地方，是一種芹科草本植物，其具有抗衰老、降血糖、降血壓、抗腫瘤等多重功效。明日葉中主要含有黃酮類及香豆素類化合物成分，其中黃酮類化合物則以查爾酮成分居多。作為一種含量豐富的天然查爾酮良好植物資源，國內(nèi)外對于明日葉查爾酮的提取利用均有研究報道。
[0004]目前現(xiàn)有技術中從明日葉中提取查爾酮的方法主要為有機溶劑熱浸法，提取溶劑多為甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有機溶劑，通過上述溶劑多次浸提得到粗提物后進行層析純化而得查爾酮。例如:專利CN201010299189.0采用干葉為原料，經(jīng)乙醇、乙酸乙酯、氯仿-甲醇混合液的多次萃取和兩次柱分離得到查爾酮，該方法不僅有機溶劑數(shù)量多、用量大，而且兩次柱分離使得產(chǎn)率低，耗時多、效率低；專利CN201010127425.0采用干明日葉粉為原料，經(jīng)異戊醇、丙酮、氯仿、異丙醚等有機溶劑萃取、重結(jié)晶而得查爾酮，在該生產(chǎn)過程中選用了易燃易爆的丙酮、氯仿、異丙醚等有機溶劑，不僅污染大，而且安全隱患大；專利CN201110218657.1采用石油醚、丙酮、乙酸乙酯及其硫酸銨、磷酸氫二鉀、磷酸鉀等無機鹽萃取制備查爾酮，不僅流程·長、有機溶劑多，而且大量含磷廢水排放還會造成水體富營養(yǎng)化；發(fā)明專利CN200910266615.8直接采用鮮明日葉為原料，簡化了工藝步驟，但制備過程仍采用了乙酸乙酯、乙氰、二甲基亞砜等有機溶劑，污染問題仍沒有得到解決。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了解決上述現(xiàn)有技術中存在的問題，本發(fā)明提出了一種從新鮮明日葉中提取查爾酮的方法，本發(fā)明提取方法中沒有采用有機溶劑，而且通過本方法制備得到的查爾酮純品，經(jīng)實驗證實純度達96%以上，得率達93%以上。
[0006]本發(fā)明技術方案包括:
[0007]—種從新鮮明日葉中提取查爾酮的方法，所述方法包括以下步驟:
[0008]a、將適量新鮮明日葉粉碎、勻漿，得到勻漿液；
[0009]b、向上述勻漿液中加入復合酶并充分攪拌，復合酶與所述新鮮明日葉的重量比為
0.1~5:100，控制pH為5.0~6.0、溫度為35~40°C、酶解40~60min，過濾收集濾液，得濾液一；[0010]C、向所述濾液一中加入四氯合鋁酸(1-乙基-3-甲基)咪唑溶液，常溫萃取I~2h，過濾收集濾液，得濾液二 ；
[0011]d、將步驟c所得濾液二過聚酰胺色譜柱進行層析分離、用乙醇洗脫，在55~60°C低壓干燥后，即得查爾酮。
[0012]作為本發(fā)明的一個優(yōu)選方案，上述步驟b中復合酶由纖維素酶、葡聚糖酶和植酸酶組成，上述纖維素酶、葡聚糖酶和植酸酶三者的質(zhì)量比為5~8:2~5:1~2。
[0013]更進一步的，上述步驟c中，四氯合鋁酸(1-乙基-3-甲基)咪唑溶液與濾液一的體積比為2.5~3.5:1。
[0014]上述纖維素酶、葡聚糖酶和植酸酶三種組分的質(zhì)量比為7:3:2。
[0015]上述步驟a中，加入水進行勻漿，水的加入量為新鮮明日葉體積的3~5倍。
[0016]上述步驟d層析分離中流速控制在1.5~2.0mL/min。
[0017]本發(fā)明所帶來的有益技術效果:
[0018]( I)本發(fā)明以新鮮明日葉為原料，通過添加復合酶制劑有效降解細胞壁組織，大大降低了提取溫度、相對縮短了提取時間，節(jié)能減排效果十分顯著；由于該復合酶中包括植酸酶，有效降解明日葉細胞壁中的由半纖維素、植酸與鈣鎂離子形成的復合網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組織，不僅使得提取率提高，而且更有利于查爾酮的濃縮、純化、縮短工藝流程、提高生產(chǎn)效率。 [0019](2)由纖維素酶、葡聚糖酶和植酸酶組成的復合酶的使用，生物化學作用省去了丙酮、氯仿、異丙醚、石油醚、乙酸乙酯、異戊醇、乙氰、二甲基亞砜等有毒或易燃易爆有機溶劑的多級萃取步驟，也避免了采用含磷無機鹽的富營養(yǎng)化污染等問題。
[0020](3)四氯合鋁酸(1-乙基-3-甲基)咪唑的使用，其pH值符合本發(fā)明復合酶的最佳PH作用條件范圍(pH為5.0~6.0)，能夠與復合酶協(xié)同使用，四氯合鋁酸(1-乙基-3-甲基)咪唑溶液較強的極性與明日葉中查爾酮的極性更為接近，選擇性更好，同時也排除了提取物中更多的雜質(zhì)成分，能夠顯著提升查爾酮的提取率，并有利于明日葉中查爾酮的后續(xù)分離提純；另外，非揮發(fā)性四氯合鋁酸(1-乙基-3-甲基)咪唑溶液作為一種新型綠色萃取劑用于分離過程中，能夠有效替代傳統(tǒng)揮發(fā)性有機溶劑的使用，最大程度地消除了揮發(fā)性有機溶劑的危害，消除了安全隱患，實現(xiàn)了常溫一步萃取，節(jié)省能源，大大縮短了工藝流程，提高生產(chǎn)效率2-3倍，達到了清潔化、快速提取查爾酮的目的。
[0021](4)使用聚酰胺色譜柱分離查爾酮選擇性更高、與前序工藝配合分離效果更好，得率更高，而且操作簡單，成本低廉，更加適合工業(yè)化生產(chǎn)。通過本發(fā)明方法制備得到的查爾酮純品經(jīng)實驗證實純度在96%以上，得率在93%以上。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明做進一步說明:
[0023]圖1為本發(fā)明吸光度㈧與查爾酮標準品溶液濃度間(C)的線性關系圖。
【具體實施方式】
[0024]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進一步清楚、完整的說明。
[0025]本發(fā)明中所涉及的原料和設備均可通過商業(yè)渠道購買得到，本發(fā)明纖維素酶購自濰坊康地恩生物科技有限公司，酶活為3，000U/g ;葡聚糖酶購自青島蔚藍生物集團有限公司，酶活為20，000U/g ;植酸酶購自濰坊康地恩生物科技有限公司，酶活為50，000U/g。
[0026]本發(fā)明復合酶由纖維素酶、葡聚糖酶與植酸酶組成。復合酶中纖維素酶、葡聚糖酶與植酸酶的質(zhì)量比為5~8:2~5:1~2，對于本發(fā)明復合酶的組成及配比，做了如下對比實驗一復合酶協(xié)同效果對比實驗:
[0027]I)取新鮮明日葉作為原料，先簡單切割，然后加入新鮮明日葉體積3-5倍的水，進行勻衆(zhòng)，將勻衆(zhòng)液倒入萃取罐；
[0028]2)向上述勻漿液中加入復合酶并充分攪拌，復合酶與所述新鮮明日葉的重量比為
0.1~5:100，控制pH為5.0~6.0、溫度35~40°C、酶解40~60min，過濾、收集得到濾液一；
[0029]3)向上述濾液一中加入四氯合鋁酸(1-乙基-3-甲基)咪唑溶液，四氯合鋁酸(1-乙基-3-甲基)咪唑溶液與濾液一的體積比為2.5~3.5:1，常溫萃取I~2h，過濾、收集得到濾液二；
[0030]4)取步驟3)所得濾液二，過聚酰胺色譜柱進行層析分離，流速控制在1.5~
2.0ml/min ;用40%~60% (v/v)的乙醇洗脫；在55~60°C低壓干燥后，即得查爾酮。
[0031]本發(fā)明實驗設置分別設置了以下5組:
[0032]A組-只添加纖 維素酶；
[0033]B組-只添加葡聚糖酶；
[0034]C組-只添加植酸酶；
[0035]D組-只添加纖維素酶及葡聚糖酶；
[0036]E組-添加纖維素酶、葡聚糖酶和植酸酶，即本發(fā)明的復合酶，且各組分的質(zhì)量比為5~8:2~5:1~2。
[0037]分別對A組、B組、C組、D組和E組實驗得到的查爾酮的得率及純度進行測定，結(jié)果如表1所示:
[0038]表1
[0039]
【權利要求】
1.一種從新鮮明日葉中提取查爾酮的方法，其特征在于:所述方法包括以下步驟: a、將適量新鮮明日葉粉碎、勻漿，得到勻漿液； b、向上述勻漿液中加入復合酶并充分攪拌，復合酶與所述新鮮明日葉的重量比為0.1~5:100，控制pH為5.0~6.0、溫度為35~40°C、酶解40~60min，過濾收集濾液，得濾液一； C、向所述濾液一中加入四氯合鋁酸(1-乙基-3-甲基)咪唑溶液，常溫萃取I~2h，過濾收集濾液，得濾液二 ； d、將步驟c所得濾液二過聚酰胺色譜柱進行層析分離、用乙醇洗脫，在55~60°C低壓干燥后，即得查爾酮。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種從新鮮明日葉中提取查爾酮的方法，其特征在于:所述步驟b中復合酶由纖維素酶、葡聚糖酶和植酸酶組成，所述纖維素酶、葡聚糖酶和植酸酶的質(zhì)量比為5~8:2~5:1~2。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種從新鮮明日葉中提取查爾酮的方法，其特征在于:所述步驟c中，四氯合鋁酸(1-乙基-3-甲基)咪唑溶液與濾液一的體積比為2.5~3.5:1。
4.根據(jù)權利要求2所述的一種從新鮮明日葉中提取查爾酮的方法，其特征在于:所述纖維素酶、葡聚糖酶和植酸酶三者的質(zhì)量比為7:3:2。
5.根據(jù)權利要求3或4所述的一種從新鮮明日葉中提取查爾酮的方法，其特征在于:所述步驟a中，加入水進行勻漿，水的加入量為新鮮明日葉體積的3~5倍。
6.根據(jù)權利要求5所述的一種從新鮮明日葉中提取查爾酮的方法，其特征在于:所述步驟d層析分離中流速控制在1.5~2.0mL/min。
【文檔編號】C07C49/796GK103664562SQ201310681287
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月13日 優(yōu)先權日:2013年12月13日
【發(fā)明者】李子超, 鐘進義 申請人:青島大學