一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析機(jī)制的乳鐵蛋白制備方法
【專(zhuān)利摘要】一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析機(jī)制的乳鐵蛋白制備方法，步驟為：（1）對(duì)新鮮牛乳進(jìn)行殺菌處理；（2）對(duì)殺菌后的新鮮牛乳進(jìn)行脫脂處理，脫脂后即為脫脂乳產(chǎn)品；（3）對(duì)脫脂乳進(jìn)行濃縮；（4）對(duì)微濾膜過(guò)濾截留液進(jìn)行透析處理，以除去其它雜蛋白；（5）加入NaCl，間歇攪拌；（6）采用透析的方式將步驟（5）中的乳鐵蛋白進(jìn)行回收；（7）對(duì)透析液進(jìn)行超濾處理；（8）對(duì)超濾膜截留液進(jìn)行透析處理，得到牛乳蛋白濃縮液；（9）對(duì)牛乳蛋白濃縮液進(jìn)行干燥處理。本發(fā)明充分利用牛乳體系中酪蛋白與乳鐵蛋白的動(dòng)態(tài)包裹解析機(jī)制，實(shí)現(xiàn)乳鐵蛋白最大程度的釋放，使得乳鐵蛋白制備得率與現(xiàn)有技術(shù)相比提高15-30%，實(shí)現(xiàn)技術(shù)的重大突破。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析機(jī)制的乳鐵蛋白 制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種乳鐵蛋白的制備方法，具體涉及一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài) 吸附解析機(jī)制的乳鐵蛋白制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 牛乳蛋白主要是酪蛋白和乳清蛋白，其中乳鐵蛋白（Lactoferrin，LF)主要存在于 乳清蛋白中，在牛乳中的含量約為〇. 1-0. 4mg/mL。LF具有多種重要的生物學(xué)功能，例如抗 菌活性、很強(qiáng)的離子親和力、抵抗病毒對(duì)機(jī)體的入侵、提高機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)能力、促進(jìn)傷口 的愈合、增強(qiáng)機(jī)體對(duì)于病的抵抗能力、促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖等等。廣泛應(yīng)用于嬰幼兒配方奶 粉、食品、醫(yī)藥、保健等領(lǐng)域，具有非常廣泛的市場(chǎng)應(yīng)用前景。
[0003] 從1960年開(kāi)始，人們就開(kāi)始從不同的原料乳如牛乳、牛初乳、人乳、山羊乳和駱駝 初乳等中，采用各種方法如超濾、鹽析、硫酸銨沉淀、離子交換色譜法、鹽析結(jié)合凝膠層析 法、超濾結(jié)合離子交換色譜法、親和色譜法、混合模式擴(kuò)張床吸附法、固定化單克隆抗體等 方法。Groves采用了 DEAE陰離子交換層析成功地分離出了 LF，接著Foley又對(duì)Groves 的磷酸纖維素交換層析進(jìn)行了改進(jìn)，制備了純度達(dá)81%的LF，隨后人們又研究出更有效的 羧甲基陽(yáng)離子交換層析法分離LF。目前，主要采用強(qiáng)陽(yáng)離子交換層析梯度洗脫的方法，結(jié)合 超濾濃縮以及凝膠過(guò)濾層析相結(jié)合的方法分離高純度的乳鐵蛋白。如S Sepharose Fast Flow、SP Sepharose Big Beads等陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂方法最后獲得LF 純度>95%，與親和層析法相比成本較低且應(yīng)用廣泛。而硫酸銨沉淀和超濾等方法則成本低 廉，易操作，但獲得的LF純度（〈50%)較低，所以該方法通常用于分離LF粗品及輔助陽(yáng)離子 交換層析和親和層析等方法以獲取高純度LF。生產(chǎn)及實(shí)驗(yàn)中通常采用陽(yáng)離子交換層析和超 濾、凝膠層析等方法相結(jié)合以快速獲取高純度LF。
[0004] 盡管利用上述方法可以得到純度高達(dá)90%以上的乳鐵蛋白產(chǎn)品，但這些方法本身 也存在諸多技術(shù)局限性，如生產(chǎn)成本過(guò)高，生產(chǎn)步驟繁瑣，需要對(duì)層析材料進(jìn)行洗脫等。固 定化單克隆抗體法分離效果好純度高，但制備工藝復(fù)雜、成本昂貴，難以工業(yè)化生產(chǎn)；而超 濾法操作簡(jiǎn)便，費(fèi)用相對(duì)低，易形成工業(yè)化規(guī)模，但超濾膜需經(jīng)常處理，其產(chǎn)品純度不如層 析法高。此外，乳鐵蛋白本身在牛乳中的含量極低，而在酪蛋白膠體中的分布又使得存在于 乳清中的乳鐵蛋白（僅有30%到50%)更是少之又少，這無(wú)疑加大了處理液體的體積，增加 了提取難度。因此人們最終不得不考慮在工業(yè)生產(chǎn)中利用其他技術(shù)方法，對(duì)牛乳中的乳鐵 蛋白進(jìn)行分離提取。近年來(lái)，膜過(guò)濾技術(shù)被廣泛應(yīng)用。其2007年Jimenez-Lopez研究了微 膜過(guò)濾對(duì)牛乳中各成分的影響，從而可以通過(guò)膜過(guò)濾技術(shù)對(duì)乳鐵蛋白進(jìn)行分離提取。
[0005] 有研究表明，在牛乳體系中乳鐵蛋白以?xún)煞N形式存在，一種是自由乳鐵蛋白，即自 由存在于牛乳乳清蛋白中；一種是與酪蛋白膠體（Casein micelles, CM)相互作用的固定 乳鐵蛋白，形成酪蛋白膠體與乳鐵蛋白復(fù)合物（LF-CM)。根據(jù)L. Phelebon的研究結(jié)果表 明，二者之間存在著一個(gè)可逆平衡。酪蛋白（Casein，CN)在牛乳條件下并不是以單分子形 式存在的，而是主要由4種不同類(lèi)型的酪蛋白a si-、a S2-、β-、κ -CN相互結(jié)合形成酪蛋 白膠體復(fù)合物（Casein micelles, CM)。利用牛乳體系中酪蛋白與乳鐵蛋白的動(dòng)態(tài)包裹解析 機(jī)制，可以在工業(yè)化生產(chǎn)中開(kāi)發(fā)一種新型的乳鐵蛋白純化方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析機(jī)制的乳鐵蛋白 制備方法，充分利用牛乳體系中酪蛋白與乳鐵蛋白的動(dòng)態(tài)包裹解析機(jī)制，實(shí)現(xiàn)乳鐵蛋白最 大程度的釋放，使得乳鐵蛋白制備得率與現(xiàn)有技術(shù)相比提高15%_30%，實(shí)現(xiàn)技術(shù)的重大突 破。
[0007] 本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： 一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析機(jī)制的乳鐵蛋白制備方法，包括如下步驟： (1) 對(duì)新鮮牛乳進(jìn)行殺菌處理； (2) 對(duì)殺菌后的新鮮牛乳進(jìn)行脫脂處理，脫脂后即為脫脂乳產(chǎn)品； (3) 采用0. 1 μ m的微濾膜過(guò)濾方法對(duì)脫脂乳進(jìn)行濃縮，溫度控制在35-55 °C，將濃縮倍 數(shù)控制在1-3倍； (4) 對(duì)微濾膜過(guò)濾截留液進(jìn)行透析處理，透析膜規(guī)格為0. 1 μ m的微濾膜，溫度控制在 35-55°C，采用去離子水作為透析溶液，控制截留溶液中總蛋白濃度為20-50g/L ; (5) 向截留溶液中加入100-500 mmol/L的NaCl，并將pH值調(diào)為6. 0-7.0,溫度控制在 25-35°C ;經(jīng)過(guò)調(diào)配后在4-6°C條件下間歇攪拌2-8h ; (6) 采用透析的方式將步驟（5)中的乳鐵蛋白進(jìn)行回收，透析膜規(guī)格為0. 1 μ m的微濾 膜，溫度控制在35-55°C，采用去離子水作為透析溶液； (7) 采用截流分子量為5-10kDa的超濾膜對(duì)透析液進(jìn)行超濾處理，達(dá)到固形物含量 15-50wt.%，溫度控制在 35-55°C ; (8) 對(duì)超濾膜截留液進(jìn)行透析處理，得到牛乳蛋白濃縮液，透析膜規(guī)格為3500-1000Da， 采用去離子水作為透析溶液； (9) 對(duì)牛乳蛋白濃縮液進(jìn)行干燥處理。
[0008] 本發(fā)明根據(jù)"一種是與酪蛋白膠體（Casein micelles, CM)相互作用的乳鐵蛋白， 形成酪蛋白膠體與乳鐵蛋白復(fù)合物（LF-CM)，兩者之間存在可逆的動(dòng)態(tài)平衡"理論，通過(guò)調(diào) 控牛乳體系因素，如pH、離子強(qiáng)度和溫度等因素，實(shí)現(xiàn)了對(duì)CM與LF結(jié)合和釋放過(guò)程的控制； 通過(guò)工藝技術(shù)工藝參數(shù)優(yōu)化，可將原本包裹在酪蛋白膠束中的乳鐵蛋白（占總?cè)殍F蛋白含 量的15%-30%)從LF-CM復(fù)合物中釋放出來(lái)，并進(jìn)一步通過(guò)膜分離技術(shù)提取出來(lái)，從而使得 乳鐵蛋白的提取率較傳統(tǒng)技術(shù)提高15%_30% ;而且本發(fā)明的工藝技術(shù)中無(wú)需經(jīng)過(guò)離子交換 等耗時(shí)環(huán)節(jié)，大大提商了生廣效率。因此，本發(fā)明對(duì)于科研和工作生廣中能商效提取制備LF 具有重要的科學(xué)意義和經(jīng)濟(jì)效益。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0009] 圖1為乳鐵蛋白制備工藝流程圖。

【具體實(shí)施方式】
[0010]

【具體實(shí)施方式】一：如圖1所示，本實(shí)施方式提供了一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng) 態(tài)吸附解析機(jī)制的乳鐵蛋白制備方法，具體步驟如下： 一、乳鐵蛋白的制備 (1)殺菌處理：新鮮牛乳經(jīng)過(guò)低溫長(zhǎng)時(shí)巴氏殺菌（62-65°C保持25-35min)、高溫短時(shí)巴 氏殺菌（72-75°C保持10-20S)，或者經(jīng)過(guò)1. 4 μ m的微濾膜除菌，或者先經(jīng)過(guò)巴式殺菌再經(jīng) 過(guò)膜過(guò)濾除菌。
[0011] (2)牛乳樣品處理：殺菌后的新鮮牛乳于4-6°C條件下，5000-10000rpm離心15-30 min脫除脂肪，脫脂后即為脫脂乳產(chǎn)品。
[0012] (3)微濾膜過(guò)濾：采用0. 1 μ m的微濾膜進(jìn)行過(guò)濾，溫度控制在35-55°C，酪蛋白和 乳鐵蛋白得到同樣程度的濃縮，將濃縮倍數(shù)控制在1-3倍，即膜過(guò)濾截留液中總蛋白質(zhì)濃 度變?yōu)槌跏紳舛鹊?-3倍。
[0013] (4)透析處理：對(duì)膜過(guò)濾截留液進(jìn)行透析處理，以除去其它雜蛋白，保留乳鐵蛋白 和酪蛋白，透析膜規(guī)格為〇. 1 μ m的微濾膜，溫度控制在35_55°C，采用去離子水作為透析溶 液，使用量為脫脂后牛乳體積的4-6倍，并采用凱氏定氮法監(jiān)測(cè)截留溶液中的總蛋白濃度， 控制截留溶液中總蛋白濃度為20-50g/L。
[0014] (5)釋放乳鐵蛋白：向截留溶液中加入100-500 mmol/L的NaCl，并將pH值調(diào)為 6. 0-7. 0,溫度控制在25-35°C ;經(jīng)過(guò)調(diào)配后在4-6°C條件下間歇攪拌2-8h，得到乳鐵蛋白與 酪蛋白復(fù)合物。
[0015] (6)透析處理回收乳鐵蛋白：采用透析的方式將乳鐵蛋白進(jìn)行回收，透析膜規(guī)格為 〇. 1 μ m的微濾膜，溫度控制在35_55°C，采用去離子水作為透析溶液，使用量為脫脂后牛乳 體積的3-6倍。
[0016] (7)超濾處理：采用截流分子量為5-10kDa的超濾膜對(duì)乳鐵蛋白進(jìn)行超濾處理，一 方面脫出乳鐵蛋白中殘留的NaCl，另一方面使乳鐵蛋白溶液得到濃縮，達(dá)到固形物含量(即 質(zhì)量濃度）為15-50%，溫度控制在35-55°C。
[0017] (8)透析處理：對(duì)超濾膜截留液進(jìn)行透析處理以進(jìn)一步除去鹽，實(shí)現(xiàn)保留乳鐵蛋白 和酪蛋白，透析膜規(guī)格為3500-1000Da，采用去離子水作為透析溶液，使用量為超濾膜截留 液體積的3-6倍，最終保持固形物含量為15-50wt. %。
[0018] (9)乳鐵蛋白干燥：采用噴霧干燥技術(shù)對(duì)牛乳蛋白濃縮液進(jìn)行干燥，進(jìn)口溫度 130-170°C，出口溫度60-90°C，進(jìn)行噴霧干燥之前的濃縮液固形物含量在15-50%。
[0019] 也可以采用低溫噴霧干燥的方式進(jìn)行干燥，進(jìn)風(fēng)溫度60-80°C，出風(fēng)溫度30-45°C; 進(jìn)行低溫噴霧干燥之前的濃縮液固形物含量要求15-50%。
[0020] 也可以采用真空冷凍干燥的方式，冷阱溫度-73~-40°C，真空度0. 01~0. 5mbar，時(shí) 間：T24h。
[0021] 干燥之后的產(chǎn)品水分含量控制在5%以?xún)?nèi)。
[0022] 二、主要相關(guān)測(cè)定方法 (1)蛋白質(zhì)測(cè)定 采用自動(dòng)凱氏定氮儀法進(jìn)行測(cè)定。計(jì)算的時(shí)候氮的換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)為6. 38。以重 復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，蛋白質(zhì)含量>1 g/l〇〇 g時(shí)，結(jié) 果保留三位有效數(shù)字。
[0023] (2)免疫擴(kuò)散方法（IDR)測(cè)定乳鐵蛋白含量 IDR方法是利用乳鐵蛋白與對(duì)應(yīng)抗體的免疫反應(yīng)而對(duì)樣品中乳鐵蛋白定量的一種方 法。測(cè)量中所需的試劑盒和標(biāo)準(zhǔn)乳鐵蛋白購(gòu)買(mǎi)自Sigma公司。乳鐵蛋白含量根據(jù)如下公式 進(jìn)行計(jì)算： mLF =[LFtotal] XV樣品= [LFtotal] X (m樣品/p 樣品）。
[0024] 式中-總?cè)殍F蛋白質(zhì)量（g) ;[LFtotal]-乳鐵蛋白總含量（g. I71); ￥樣品一樣品體積（L) ;m樣品一樣品質(zhì)量（g) ;P樣品一樣品密度（g-Γ1)。 (3)反相高效液相色譜RP-HPLC測(cè)定蛋白質(zhì)組成 最終樣品的蛋白質(zhì)組成成分分析，采用反相高效液相色譜法HPLC-RP。在本課題研究 過(guò)程中，這種方法被運(yùn)用于確定樣品中的不同種類(lèi)的可溶性蛋白質(zhì)含量。樣品首先進(jìn)行超 速離心處理（100000Xg，l h)，取其離心液，為進(jìn)一步去除其中的微量酪蛋白，加入三氟乙 酸（0. 2%體積質(zhì)量）進(jìn)行酸沉淀處理，進(jìn)行第二次離心處理（13000 X g，5 min)，取最終離 心液進(jìn)行分析。
[0025] 三、檢測(cè)結(jié)果 本發(fā)明中的工藝參數(shù)具有多種組合，相應(yīng)的乳鐵蛋白產(chǎn)品的組成相差較大，乳鐵蛋白 的含量范圍為23?87. 3%，α-乳白蛋白3. 5?16%，β-乳球蛋白3. 2?15%，血清蛋白f 12%，免 疫球蛋白1?13%，β -酪蛋白(Γ17%，水分3%，灰分1%。
[0026]

【具體實(shí)施方式】二：本實(shí)施方式提供了一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析 機(jī)制的乳鐵蛋白制備方法，具體步驟如下： (1)殺菌處理：新鮮牛乳經(jīng)過(guò)低溫長(zhǎng)時(shí)巴氏殺菌（62-65°C保持30min)。
[0027] (2)牛乳樣品處理：殺菌后的新鮮牛乳于4_6°C條件下，6000離心15 min脫除脂 肪，脫脂后即為脫脂乳產(chǎn)品。
[0028] (3)微濾膜過(guò)濾：采用0. 1 μ m的微濾膜進(jìn)行過(guò)濾，溫度35°C，該過(guò)程的操作終點(diǎn)通 過(guò)"膜過(guò)濾截留液中總蛋白質(zhì)濃度變?yōu)槌跏紳舛鹊?倍"判斷。
[0029] (4)透析處理：對(duì)膜過(guò)濾截留液進(jìn)行透析處理，透析膜規(guī)格為0. 1 μ m的微濾膜，溫 度控制在35°C，采用去離子水作為透析溶液，使用量為脫脂后牛乳體積的4倍。
[0030] (5)釋放乳鐵蛋白：控制截留溶液中總蛋白濃度為20g/L，加入200 mmol/L的 NaCl，并將pH值調(diào)為6. 4,溫度控制在25°C ;4°C條件下攪拌3h。
[0031] (6)透析處理回收乳鐵蛋白：透析膜規(guī)格為0. ιμπι的微濾膜，溫度35°C，采用去離 子水作為透析溶液，使用量為脫脂后牛乳體積的3倍。
[0032] (7)超濾處理：采用截流分子量為5kDa的超濾膜對(duì)乳鐵蛋白進(jìn)行超濾處理，達(dá)到 固形物含量（即質(zhì)量濃度）為20%，溫度控制在35°C。
[0033] (8)透析處理：對(duì)超濾膜截留液進(jìn)行透析處理以進(jìn)一步除去鹽，透析膜規(guī)格為 5000Da，采用去離子水作為透析溶液，使用量為超濾膜截留液體積的3倍。
[0034] (9)乳鐵蛋白干燥：采用噴霧干燥技術(shù)對(duì)牛乳蛋白濃縮液進(jìn)行干燥，進(jìn)口溫度 170°C，出口溫度70°C，進(jìn)行噴霧干燥之前的濃縮液固形物含量在30%。
[0035] 經(jīng)過(guò)上述工序操作，最終得到的乳鐵蛋白粉組成及成份含量如下：乳鐵蛋白的含 量為23%，α-乳白蛋白16%，β-乳球蛋白15%，血清蛋白12%，免疫球蛋白13%，β-酪蛋白 17%，水分3%，灰分1%。
[0036]

【具體實(shí)施方式】三：本實(shí)施方式提供了一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析機(jī) 制的乳鐵蛋白制備方法，具體步驟如下： (1)殺菌處理：新鮮牛乳經(jīng)高溫短時(shí)巴氏殺菌（72-75°C保持10-20S)再經(jīng)過(guò)膜過(guò)濾除 菌。
[0037] (2)牛乳樣品處理：殺菌后的新鮮牛乳于4°C條件下，SOOOrpm離心20 min脫除脂 肪，脫脂后即為脫脂乳產(chǎn)品。
[0038] (3)微濾膜過(guò)濾：采用0. 1 μ m的微濾膜進(jìn)行過(guò)濾，溫度控制在45°C，該過(guò)程的操作 終點(diǎn)通過(guò)"膜過(guò)濾截留液中總蛋白質(zhì)濃度變?yōu)槌跏紳舛鹊?倍"判斷。
[0039] (4)透析處理：對(duì)膜過(guò)濾截留液進(jìn)行透析處理，透析膜規(guī)格為0. 1 μ m的微濾膜，溫 度控制在45°C，采用去離子水作為透析溶液，使用量為脫脂后牛乳體積的6倍，并采用凱氏 定氮法監(jiān)測(cè)截留溶液中的總蛋白濃度。
[0040] (5)釋放乳鐵蛋白：控制截留溶液中總蛋白濃度為40g/L，加入300 mmol/L的 NaCl，并將pH值調(diào)為6. 6,溫度控制在35°C ;經(jīng)過(guò)調(diào)配后在4°C條件下間歇攪拌8h。
[0041] (6)透析處理回收乳鐵蛋白：透析膜規(guī)格為0. Ιμπι的微濾膜，溫度控制在55°C，采 用去離子水作為透析溶液，使用量為脫脂后牛乳體積的4倍。
[0042] (7)超濾處理：采用截流分子量為10kDa的超濾膜對(duì)乳鐵蛋白進(jìn)行超濾處理；對(duì) 截留液再用分子量為30kDa的超濾膜進(jìn)行處理，使截留液中固形物含量（即質(zhì)量濃度）達(dá)到 30%時(shí)終止，溫度控制在55 °C。
[0043] (8)透析處理：透析膜規(guī)格為5000Da，采用去離子水作為透析溶液，使用量為超濾 膜截留液體積的4倍。
[0044] (9)乳鐵蛋白干燥：采用低溫噴霧干燥的方式進(jìn)行干燥，進(jìn)風(fēng)溫度80°C，出風(fēng)溫度 45°C ;進(jìn)行低溫噴霧干燥之前的濃縮液固形物含量要求50%。
[0045] 經(jīng)過(guò)上述工序操作，最終得到的乳鐵蛋白粉組成及成份含量如下：乳鐵蛋白的含 量為87. 3%，α -乳白蛋白3. 4%，β -乳球蛋白3. 2%，血清蛋白1%，免疫球蛋白1%，水分3. 2%， 灰分0. 9%。
[0046]

【具體實(shí)施方式】四：本實(shí)施方式提供了一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析機(jī) 制的乳鐵蛋白制備方法，具體步驟如下： (1)殺菌處理：新鮮牛乳經(jīng)過(guò)低溫長(zhǎng)時(shí)巴氏殺菌（62°C保持30min)、再經(jīng)過(guò)1. 4 μπι的 微濾膜除菌。
[0047] (2)牛乳樣品處理：殺菌后的新鮮牛乳于4°C條件下，lOOOOrpm離心15 min脫除 脂肪，脫脂后即為脫脂乳產(chǎn)品。
[0048] (3)微濾膜過(guò)濾：采用0. 1 μ m的微濾膜進(jìn)行過(guò)濾，溫度控制在55°C，將濃縮倍數(shù)控 制在3倍。
[0049] (4)透析處理：對(duì)膜過(guò)濾截留液進(jìn)行透析處理，透析膜規(guī)格為0. 1 μ m的微濾膜，溫 度控制在55°C，采用去離子水作為透析溶液，使用量為脫脂后牛乳體積的5倍，并采用凱氏 定氮法監(jiān)測(cè)截留溶液中的總蛋白濃度。
[0050] (5)釋放乳鐵蛋白：控制截留溶液中總蛋白濃度為30g/L，加入200 mmol/L的 NaCl，并將pH值調(diào)為6. 8,溫度控制在35°C ;經(jīng)過(guò)調(diào)配后在4°C條件下間歇攪拌6h。
[0051] (6)透析處理回收乳鐵蛋白：透析膜規(guī)格為0. ιμπι的微濾膜，溫度控制在55°C，采 用去離子水作為透析溶液，使用量為脫脂后牛乳體積的5倍。
[0052] (7)超濾處理：采用截流分子量為5kDa的超濾膜對(duì)乳鐵蛋白進(jìn)行超濾處理，達(dá)到 固形物含量（即質(zhì)量濃度）為40%，溫度控制在50°C。
[0053] (8)透析處理：透析膜規(guī)格為3500Da，采用去離子水作為透析溶液，使用量為超濾 膜截留液體積的5倍。
[0054] (9)乳鐵蛋白干燥：采用真空冷凍干燥的方式，冷阱溫度_73°C，真空度0. Olmbar， 時(shí)間24h。
[0055] 經(jīng)過(guò)上述工序操作，最終得到的乳鐵蛋白粉組成及成份含量如下：乳鐵蛋白的含 量為56%，α -乳白蛋白16%，β -乳球蛋白16%，血清蛋白4%，免疫球蛋白4%，水分3%，灰分 1%〇
【權(quán)利要求】
1. 一種基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析機(jī)制的乳鐵蛋白制備方法，其特征在于所 述乳鐵蛋白制備方法為： (1) 對(duì)新鮮牛乳進(jìn)行殺菌處理； (2) 對(duì)殺菌后的新鮮牛乳進(jìn)行脫脂處理，脫脂后即為脫脂乳產(chǎn)品； (3) 采用0. 1 μ m的微濾膜過(guò)濾方法對(duì)脫脂乳進(jìn)行濃縮，溫度控制在35-55 °C，將濃縮倍 數(shù)控制在1-3倍； (4) 對(duì)微濾膜過(guò)濾截留液進(jìn)行透析處理，透析膜規(guī)格為0. 1 μ m的微濾膜，溫度控制在 35-55°C，采用去離子水作為透析溶液，控制截留溶液中總蛋白濃度為20-50g/L ; (5) 向截留溶液中加入100-500 mmol/L的NaCl，并將pH值調(diào)為6. 0-7.0,溫度控制在 25-35°C ;經(jīng)過(guò)調(diào)配后在4-6°C條件下間歇攪拌2-8h ; (6) 采用透析的方式將步驟（5)中的乳鐵蛋白進(jìn)行回收，透析膜規(guī)格為0. 1 μ m的微濾 膜，溫度控制在35-55°C，采用去離子水作為透析溶液； (7) 采用截流分子量為5-10kDa的超濾膜對(duì)透析液進(jìn)行超濾處理，達(dá)到固形物含量 15-50wt.%，溫度控制在 35-55°C ; (8) 對(duì)超濾膜截留液進(jìn)行透析處理，得到牛乳蛋白濃縮液，透析膜規(guī)格為3500-1000Da， 采用去離子水作為透析溶液； (9) 對(duì)牛乳蛋白濃縮液進(jìn)行干燥處理。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析機(jī)制的乳鐵蛋白制備 方法，其特征在于所述步驟（1)中，殺菌處理方法為：巴氏殺菌或者經(jīng)過(guò)1. 4 μ m的微濾膜 除菌或者先經(jīng)過(guò)巴式殺菌再經(jīng)過(guò)膜過(guò)濾除菌。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析機(jī)制的乳鐵蛋白制備 方法，其特征在于所述巴氏殺菌方法為：62-65°C低溫長(zhǎng)時(shí)巴氏殺菌25-35min或72-75°C高 溫短時(shí)巴氏殺菌l〇-20s。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析機(jī)制的乳鐵蛋白制備 方法，其特征在于所述步驟（2 )中，脫脂方法為：于4-6 °C條件下，5000-1 OOOOrpm離心15-30 min脫除脂肪。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析機(jī)制的乳鐵蛋白制備 方法，其特征在于所述步驟（9)中，采用噴霧干燥技術(shù)對(duì)牛乳蛋白濃縮液進(jìn)行干燥，進(jìn)口溫 度 130-170°C，出 口溫度 60-90°C。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析機(jī)制的乳鐵蛋白制備 方法，其特征在于進(jìn)行噴霧干燥之前，濃縮液固形物含量在15-50wt. %。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析機(jī)制的乳鐵蛋白制備 方法，其特征在于所述步驟（9)中，采用低溫噴霧干燥的方式進(jìn)行干燥，進(jìn)風(fēng)溫度60-80°C， 出風(fēng)溫度30-45 °C。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析機(jī)制的乳鐵蛋白制備 方法，其特征在于進(jìn)行低溫噴霧干燥之前，濃縮液固形物含量要求15-50wt. %。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于酪蛋白與乳鐵蛋白動(dòng)態(tài)吸附解析機(jī)制的乳鐵蛋白制備 方法，其特征在于所述步驟（9)中，采用真空冷凍干燥的方式，冷阱溫度-73~-40°C，真空度 0· 01 ?5mbar，時(shí)間：T24h。
【文檔編號(hào)】C07K14/79GK104151423SQ201410368631
【公開(kāi)日】2014年11月19日 申請(qǐng)日期:2014年7月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月30日
【發(fā)明者】杜明, 張?zhí)m威, 周英爽, 王聰, 劉猛, 樊鳳嬌, 貝君, 白成軍 申請(qǐng)人:哈爾濱工業(yè)大學(xué)