專利名稱：新的核酸衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及預(yù)期可用作醫(yī)藥如抗病毒藥、制癌劑等的新的核酸衍生物。
在核酸類物質(zhì)的領(lǐng)域中，有許多已知的具有抗病毒活性或制癌活性的物質(zhì)，其中的某些物質(zhì)臨床上可用作有用的醫(yī)藥。例如，已知的抗病毒劑有阿糖腺苷[M.Privat de Garilhe和J.de Rubber，C.R.Acad.Soc.D(Paris)259，2725(1964)]、阿昔洛維[G.B.Elion等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，74，5716(1977)]、疊氮胸腺嘧啶脫氧核苷[H.Mitsuya等人，Proc.Natl.Acad，Sci.，USA，82，7096(1985)]等。已知的制癌劑有5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷等。
除上面所述以外，已知由下面通式所表示的核酸衍生物也具有抗病毒活性[抗菌素雜志(J.A.)，Vol.XLII，No.12，1989，PP1854-1859，Antimicrob.Agents Chemother.Vol.32，No.7，1988，PP1053-1056;J.A.，Vol.XLII，No.4，1989，PP644-646]
其中B1表示腺嘌呤或鳥嘌呤，X表示氧原子或亞甲基。
本發(fā)明的目的是研制預(yù)期具有抗病毒活性的新的核酸衍生物。
本發(fā)明涉及由下面通式(Ⅰ)表示的新的核酸衍生物及其生理上可接受的鹽
其中B表示核酸堿衍生物，A1和A2獨(dú)立地表示OR1或OCOR1，R1表示氫原子、取代或未取代的烷基或取代或未取代的芳基，l表示數(shù)字0或1，m和n表示0到2的整數(shù)，其條件是當(dāng)l和m為0時(shí)，n為0或2。
在通式(Ⅰ)中，用B表示的核酸堿衍生物的實(shí)例包括嘌呤堿、嘧啶堿以及被保護(hù)基團(tuán)保護(hù)的這些堿。所述的嘌呤堿的實(shí)例包括由下列通式表示的化合物
其中Y表示氫、氨基、或鹵素如氯、溴、氟等，R5表示烷基如甲基、乙基、丁基、甲氧基乙基、芐基等。所述的嘧啶基的實(shí)例包括由下列通式表示的化合物。
其中R6表示氫、烷基如甲基、乙基、丁基、芐基等，乙烯基如2-溴乙烯基、2-碘乙烯基等，或鹵素如氟、氯、溴和碘。
取代或未取代的烷基的實(shí)例包括直鏈或支鏈烷基，如甲基、乙基、辛基、十八烷基等，引入羥基的烷基、如羥乙基等，引入氨基的烷基，如二甲氨基丙基、1，4-二氫-1-甲基吡啶基等，引入芳環(huán)的烷基，如芐基、對甲氧基芐基等，等等。所述的取代或未取代的芳基的實(shí)例包括苯基、對甲氧基苯基、鄰氯苯基等。
所述的生理上可接受的鹽的實(shí)例包括堿金屬鹽如鈉、鉀等，堿土金屬鹽如鈣、鎂等，銨鹽，取代的銨鹽，無機(jī)酸鹽如鹽酸、硫酸、硝酸等，以及有機(jī)酸鹽如乙酸、富馬酸、馬來酸、灑石酸、甲磺酸等。
在由通式(Ⅰ)所表示的本發(fā)明的化合物中，優(yōu)選由下面通式表示的化合物
其中m′表示0或2，n′表示1或2，B、A1和A2如上所定義，其條件是當(dāng)m′為0時(shí)，n′為2，而當(dāng)m′為2時(shí)，n′為1。優(yōu)選化合物的具體實(shí)例包括實(shí)施例5、16和21的化合物。在這些優(yōu)選的化合物中，特別優(yōu)選的是由下面通式表示的化合物
特別優(yōu)選的化合物的具體實(shí)例是指實(shí)施例5的化合物。
下面列出了由通式(Ⅰ)表示的化合物的具體實(shí)例。這些化合物的所有異構(gòu)體，旋光異構(gòu)體及外消旋混合物也包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)。在此未列出這些化合物的鹽。
1、9-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)丙基]-腺嘌呤，2、9-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)丙基]-鳥嘌呤，3、9-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)丙基]-次黃嘌呤，4、2-氨基-9-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)丙基]-嘌呤，5、2-氨基-9-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)丙基]-6-氯嘌呤，6、2，6-二氨基-9-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)丙基]-嘌呤，7、1-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)丙基]-2，4-(1H，3H)-嘧啶二酮，
8、1-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)丙基]-5-甲基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，9、1-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)丙基]-5-氟-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，10、1-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)丙基]-5-碘-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，11、1-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)丙基]-5-(2-溴乙烯基)-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，12、4-氨基-1-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)丙基]-2(1H)-嘧啶二酮，13、9-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-腺嘌呤，14、9-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-鳥嘌呤，15、9-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-次黃嘌呤，16、2-氨基-9-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-嘌呤，17、2-氨基-9-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-6-氯嘌呤，18、2，6-二氨基-9-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-嘌呤，19、1-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-2，4-(1H，3H)-嘧啶二酮，20、1-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-5-甲基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，21、1-[2，3-雙(羥甲基)1-環(huán)戊基]-5-氟-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，22、1-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-5-碘-2，4-(1H，3H)-嘧啶二酮，23、1-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-5-(2-溴乙烯基)-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，24、4-氨基-1-[2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-2(1H)-嘧啶二酮，25、9-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-腺嘌呤，26、9-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-鳥嘌呤，27、9-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-次黃嘌呤，28、2-氨基-9-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-嘌呤，29、2-氨基-9-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-6-氯嘌呤，30、2，6-二氨基-9-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-嘌呤，31、1-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-2，4-(1H，3H)-嘧啶二酮，32、1-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-5-甲基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，33、1-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-5-氟-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，34、1-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-5-碘-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，35、1-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-5-(2-溴乙烯基)-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，36、4-氨基-1-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-2(1H)-嘧啶二酮，37、9-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)己基]-腺嘌呤，38、9-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)己基]-鳥嘌呤，39、9-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)己基]-次黃嘌呤，40、2-氨基-9-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)己基]-嘌呤，41、2-氨基-9-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)己基]-6-氯嘌呤，42、2，6-二氨基-9-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)己基]-嘌呤，43、1-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)己基]-2，4-(1H，3H)-嘧啶二酮，44、1-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)己基]-5-甲基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，45、1-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)己基]-5-氟-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，46、1-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)己基]-5-碘-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，47、1-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)己基]-5-(2-溴乙烯基)-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，48、4-氨基-1-[3，4-雙(羥甲基)-1-環(huán)己基]-2(1H)-嘧啶二酮，49、9-[4，5-雙(羥甲基)-2-羥基-1-環(huán)己基]-腺嘌呤，50、9-[4，5-雙(羥甲基)-2-羥基-1-環(huán)己基]-鳥嘌呤，51、9-[4，5-雙(羥甲基)-2-羥基-1-環(huán)己基]-次黃嘌呤，52、2-氨基-9-[4，5-雙(羥甲基)-2-羥基-1-環(huán)己基]嘌呤，53、2-氨基-9-[4，5-雙(羥甲基)-2-羥基-1-環(huán)己基]-6-氯嘌呤，54、2，6-二氨基-9-[4，5-雙(羥甲基)-2-羥基-1-環(huán)己基]-嘌呤，55、1-[4，5-雙(羥甲基)-2-羥基-1-環(huán)己基]-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，56、1-[4，5-雙(羥甲基)-2-羥基-1-環(huán)己基]-5-甲基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，57、1-[4，5-雙(羥甲基)-2-羥基-1-環(huán)己基]-5-氟-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，58、1-[4，5-雙(羥甲基)-2-羥基-1-環(huán)己基]-5-碘-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，59、1-[4，5-雙(羥甲基)-2-羥基-1-環(huán)己基]-5-(2-溴乙烯基)-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，60、4-氨基-1-[4，5-雙(羥甲基)-2-羥基-1-環(huán)己基-2(1H)-嘧啶二酮。
由通式(Ⅰ)表示的本發(fā)明化合物可以通過，例如，使由下列通式(Ⅱ)式(Ⅲ)表示的化合物
在溶劑中與核酸堿衍生物反應(yīng)，其中X代表離去基團(tuán)，A3和A4各自獨(dú)立地代表OR3或OCOR1，R1代表氫原子，取代或未取代的烷基或取代或未取代的芳基，R3代表氫原子、保護(hù)基，取代或未取代的烷基或取代或未取代的芳基，m和n各自代表0到2的整數(shù)，其條件是當(dāng)m為0時(shí)n為0或2，得到由下列通式(Ⅴ)表示的化合物
其中B為核酸衍生物，A3、A4、l、m和n如上定義。當(dāng)式(Ⅴ)化合物有保護(hù)基團(tuán)或當(dāng)式(Ⅴ)中l(wèi)為1時(shí)，如果需要，可以接著消去保護(hù)基或l表示的羥基。
作為式(Ⅱ)化合物，由下面的通式表示的化合物
(其中m′、n′、x、A3和A4如上述定義)是優(yōu)選的，由下面的通式表示的化合物
(其中X和R3如上述定義)是更為優(yōu)選的。
在通式(Ⅱ)中離去基團(tuán)X的實(shí)例包括容易消去的取代基，如磺酰氧基(例如，甲碘酰氧基、對甲苯磺酰氧基、三氟甲磺酰氧基等)，鹵原子(例如，氯、溴、碘等)，等等。
就常用的保護(hù)基而論，保護(hù)基并非關(guān)鍵?？捎糜诒景l(fā)明的保護(hù)基包括酯類保護(hù)基，如?；?例如，乙?；⒈郊柞；?、氨基甲?；?例如，二甲氨基甲?；?、二苯基氨基甲酰基等)，醚類保護(hù)基，如甲硅烷基(例如，叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基等)，(C1-C4烷氧基)-(C1-C4烷基)基團(tuán)(例如，甲氧基甲基等)，四氫呋喃基，以及具有一個(gè)或多個(gè)取代或未取代苯基取代基的取代的甲基(例如，芐基、4-甲氧基芐基、三苯甲基等)。
所述的核酸堿衍生物的實(shí)例包括嘌呤堿，例如，腺嘌呤、次黃嘌呤、鳥嘌呤、2-氨基-6-氯嘌呤、2-氨基嘌呤、2，6-二氨基嘌呤、2-氨基-6-乙氧基嘌呤、2-氨基-6-(2-甲氧基乙氧基)-嘌呤等。這些化合物可任意地帶有保護(hù)基。因而，由下列通式(Ⅵ)表示的化合物可看作是核酸堿衍生物的例子
其中R7代表氫或保護(hù)基，Y1代表氫或NHR7，Y2代表Y1或OR3，以及R3代表氫或保護(hù)基。
在此，所述保護(hù)基可被認(rèn)為是上面提到的保護(hù)基。除了上面提到的保護(hù)基外，R6保護(hù)基還包括常用作核酸堿保護(hù)基的那些基團(tuán)，如芐基、含1-5個(gè)碳原子的低級烷基(例如，丁基等)，(C1-C5烷氧基)-(C1-C5烷基)基團(tuán)(例如，甲氧基乙基等)，等等。此外還包括嘧啶堿，如尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、5-碘代尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-(2-溴乙烯基)尿嘧啶等。這些化合物可任意地帶有保護(hù)基。嘧啶堿的實(shí)例包括由下面通式(Ⅶ)表示的化合物
其中Y3代表OR7，Y4代表Y3或NHR7，R7代表氫或保護(hù)基，R9代表氫，烷基如甲基、乙基、丁基等，芐基，乙烯基如2-溴乙烯基、2-碘乙烯基等，以及鹵素如氟、氯、溴、碘。
在由通式(Ⅱ)或(Ⅲ)表示的化合物與核酸堿如由通式(Ⅵ)或(Ⅶ)表示的化合物的反應(yīng)中，通式(Ⅱ)或(Ⅲ)化合物與通式(Ⅵ)或(Ⅶ)化合物間的定量比較好的是每1當(dāng)量前者約0.5至10當(dāng)量后者，優(yōu)選的是每1當(dāng)量前者約1至5當(dāng)量后者。該反應(yīng)在有或沒有堿性催化劑存在下，在溶劑中，在0℃至溶劑的回流溫度下，優(yōu)選接近室溫至約170℃下進(jìn)行。
堿性催化劑的實(shí)例包括堿金屬氫氧化物如氫氧化鈉、氫氧化鉀等，堿金屬鹽如碳酸鈉、碳酸鋰、碳酸鉀等，堿金屬氫化物如氫化鋰、氫化鈉等，等等。每當(dāng)量通式(Ⅵ)或(Ⅶ)化合物所使用的上述堿性催化劑的量為0至2當(dāng)量，優(yōu)選約0.1至2當(dāng)量，更優(yōu)選0.3至1.2當(dāng)量。
非質(zhì)子傳遞溶劑是優(yōu)選的溶劑，極性的非質(zhì)子傳遞溶劑更為優(yōu)選。這種更優(yōu)選的極性非質(zhì)子傳遞溶劑的實(shí)例包括N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜(DMSO)、1，3-二甲基-2-咪唑啉酮(DMI)、六甲基磷三酰胺(HMPA)等。
當(dāng)由通式(Ⅱ)或(Ⅲ)表示的化合物與核酸堿衍生物反應(yīng)所形成的式(Ⅴ)化合物具有保護(hù)基時(shí)，可以通過采用合適的保護(hù)基除去劑或合適的保護(hù)基除去方法除去這類保護(hù)基。這些保護(hù)基除去劑及保護(hù)基除去方法應(yīng)根據(jù)保護(hù)基的種類而適當(dāng)?shù)刈兓?。例如，可采用堿如氫氧化鈉、甲醇鈉、氨等，酸如鹽酸、硫酸等，含氟試劑如氟化四丁銨等，或采用象氫解之類的方法。
當(dāng)要將羥基(l為一定數(shù)目)從式(Ⅴ)(其中l(wèi)為1)化合物中除去時(shí)，通常是通過還原將羥基除去。例如，將羥基轉(zhuǎn)化成可還原消去的基團(tuán)，如硫代羰基衍生物，然后使用還原劑如三丁基氫化錫等除去上述硫代羰基衍生物。
在由通式(Ⅱ)表示的化合物中，以下面通式(Ⅱa)表示的化合物可以按照下面反應(yīng)圖解(1)進(jìn)行制備，例如
反應(yīng)圖解(1)其中R代表烷基或通式(Ⅱ)的R3。將文獻(xiàn)[F.Feist，Chem，Ber.26，750(1893)]中公開的化合物(Ⅷ)轉(zhuǎn)化為酯，然后用金屬氫化物如氫化鋁鋰、二異丁基氫化鋁、硼氫化鈉、硼氫化鋰、乙硼烷等將酯還原，得到由(Ⅹ)表示的醇。然后，將化合物(Ⅹ)的羥基保護(hù)起來，得到由通式(Ⅺ)表示的化合物。將其雙鍵通過在高碘酸鈉存在下的臭氧氧化、四氧化鋨氧化等進(jìn)行氧化，得到由通式(Ⅻ)表示的酮。然后，用金屬氫化物如氫化鋁鋰、三叔丁氧基氫化鋁鋰、硼氫化鈉、氰基硼氫鈉、三仲丁基硼氫鋰、硼氫化鋰等或金屬氫化物如二異丁基氫化鋁、乙硼烷等作還原劑，在選自烴類溶劑如戊烷、己烷、庚烷、石油醚、苯、甲苯、乙苯等，鹵代烴溶劑如二氯甲烷、氯仿等，醚溶劑如乙醚、四氫呋喃等，醇溶劑如甲醇、乙醇等水，及其混合物的溶劑中，在-100℃至50℃的反應(yīng)溫度，優(yōu)選約-80℃至約30℃下，將通式(Ⅻ)的酮還原，得到由通式(ⅩⅢ)表示的化合物。接著將如此得到的化合物(ⅩⅢ)的仲羥基轉(zhuǎn)化為離去基團(tuán)，從而得到由通式(Ⅱa)表示的化合物。
在由通式(Ⅱ)表示的化合物中，以下面通式(Ⅱb)或(Ⅱc)表示的化合物可以按照，例如下面反應(yīng)圖解(2)進(jìn)行制備
反應(yīng)圖解(2)其中R代表通式(Ⅱ)的R3。因此，將公開于文獻(xiàn)[Y.Ichikawa等人，J.Chem.Soc.，Chem.Commun.，1919(1989)]中的環(huán)丁酮(ⅩⅣ)與重氮甲烷、三甲基甲硅烷基重氮甲烷等反應(yīng)，使環(huán)丁酮的環(huán)擴(kuò)大，從而使(ⅩⅣ)轉(zhuǎn)化為環(huán)戊酮衍生物(ⅩⅤ)和(ⅩⅥ)。將化合物(ⅩⅤ)和(ⅩⅥ)分別還原，之后將它們的仲羥基轉(zhuǎn)化為離去基團(tuán)，分別得到由通式(Ⅱb)和(Ⅱc)表示的化合物。
在由通式(Ⅱ)表示的化合物中，由下面通式(Ⅱd)表示的化合物可以按照，例如下面反應(yīng)圖解(3)進(jìn)行制備
反應(yīng)圖解(3)其中R代表烷基或通式(Ⅱ)的R3。通式(ⅩⅨ)化合物可以由公開于文獻(xiàn)[N.Narasaka等人，J.Am.Chem.Soc.，111，5340(1989)]中的化合物直接衍生得到，將通式(ⅩⅨ)化合物還原得到由通式(ⅩⅩ)表示的醇。然后，將化合物(ⅩⅩ)的羥基保護(hù)起來，得到由通式(ⅩⅪ)表示的化合物。通過使用如乙硼烷、9-BBN、二仲異戊基硼烷等使ⅩⅪ的雙鍵部分經(jīng)過硼氫化氧化反應(yīng)，得到由通式(ⅩⅫ)表示的醇。將該化合物的仲羥基轉(zhuǎn)化為離去基團(tuán)，從而得到由通式(Ⅱd)表示的化合物。
在由通式(Ⅲ)表示的化合物中，以下面通式(Ⅲa)表示的化合物可以按照，例如下面反應(yīng)圖解(4)進(jìn)行制備
反應(yīng)圖解(4)其中R代表通式(Ⅱ)的R3或R4。因此，用過酸如間氯過苯甲酸等使由通式(ⅩⅪ)表示的化合物環(huán)氧化，便可得到上述那些(Ⅲa)化合物。
下列試驗(yàn)實(shí)施例表明，本發(fā)明化合物具有強(qiáng)抗病毒活性。
試驗(yàn)例1用下面的方法試驗(yàn)抗單純皰疹病毒1-(HSV-1)(它為DNA病毒)的抗病毒活性。
(方法1)將Vero細(xì)胞(取自非洲綠猴的腎細(xì)胞)放在補(bǔ)加了10%胎牛血清的MEM介質(zhì)中培養(yǎng)。將100ul細(xì)胞懸浮液(200，000個(gè)細(xì)胞/ml)播散到96井式皿(COSTAR)中，培養(yǎng)24小時(shí)以便使培養(yǎng)物融合。吸出培養(yǎng)介質(zhì)，并用HSV-1病毒感染細(xì)胞1小時(shí)。將病毒液吸出后，細(xì)胞放在含有試驗(yàn)樣品的新鮮介質(zhì)中培養(yǎng)約72小時(shí)。殘存細(xì)胞用中性紅溶液染色，并測定在546nm處的吸光度A546的吸光度，以評價(jià)細(xì)胞病理效應(yīng)(CPE)。
CPE抑制率(%)按下式計(jì)算CPE抑制率(%)＝100×
計(jì)算出CPE50%抑制率所需的試樣濃度，為IC50(ug/ml)。
將結(jié)果總結(jié)在表1中。
試驗(yàn)例2用下面的方法研究抗人免疫缺陷病毒(HIV)(屬于RNA病毒)的抗病毒活性將在0.5mlRPMI1640培養(yǎng)介質(zhì)中的MT-4細(xì)胞(0.5×105)接種到48-井式皿中，并將50ul試驗(yàn)化合物加到各個(gè)濃縮物中。細(xì)胞在充有5%(v/v)二氧化碳培養(yǎng)器中在37℃下培養(yǎng)2小時(shí)。然后，將HIV(2.5×105至5×105PFU/ml)的50ulHTLV-Ⅲ8菌株接種到細(xì)胞上。4天后，將二部分細(xì)胞放在載玻片上并用丙酮使其固定。用間接免疫熒光測定法測定HIV抗原-陽性MT-4細(xì)胞的百分率。用AIDS病人的血清作為一次抗體，用FITC標(biāo)記的抗人IgG作為二次抗體。
將結(jié)果總結(jié)在表1中。
表1化合物 IC50(ug/ml)(實(shí)施例編號) HSV-1 HIV13 5516 4.518 45.921 2.77試驗(yàn)例3用下面的方法試驗(yàn)抗乙型肝炎病毒(HBV)(為DNA病毒)的抗病毒活性。
該試驗(yàn)使用細(xì)胞系HB611，它是通過轉(zhuǎn)染確立的，并繼續(xù)產(chǎn)生HBV類粒子[Proc.Natl.Acad，Sci.USA，84，444-449，1987]。在37℃，5%CO2-95%空氣氣氛下，將HB611細(xì)胞保持在Dulbecco的改性的伊格爾(Eagle)介質(zhì)(Gibco)中，該介質(zhì)中加有10%胎牛血清(Gibco)、100ug/ml的鏈霉素、100IUml的芐基青霉素(Gibco)以及200ug/ml的慶大霉素(Gibco)。
用1.0ml介質(zhì)將此細(xì)胞以3×104個(gè)細(xì)胞/井的濃度接種在24-井式皿(Corning)中。培養(yǎng)2天后，用含有試驗(yàn)化合物的相同介質(zhì)代替上述介質(zhì)。將細(xì)胞再培養(yǎng)15天，在此期間，每三天更換一次含有藥物的介質(zhì)。然后收集細(xì)胞并制備細(xì)胞的DNA[病毒學(xué)，169，213-216，1989]，將其用限制酶HindⅢ(Takara Shuzo Co.，Ltd.)消化。按照Southern[J.Mol，Biol.，98，503-517，1975]的方法，將等分試樣(2-3ug)在1.5%瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳，接著使其吸到尼龍膜Hybond-N+上。使濾出物與任意已接觸抗原的32P標(biāo)記的HBV DNA探子雜交，在65℃下用2X含0.1%SDS的標(biāo)準(zhǔn)的含鹽檸檬酸洗滌兩次，共計(jì)30分鐘。然后對其進(jìn)行自體放射照相。
結(jié)果示于表2表2 抗乙型肝炎病毒的活性化合物 濃度 病毒DNA合成的 細(xì)胞毒性(ug/ml) 抑制效應(yīng)實(shí)施例5 100 +++ -10 +++ -1 + -0.1 - -用光密度分析儀(Shimadzu，Chromatoscana S 930)對自體放射照相的結(jié)果進(jìn)行分析。
為了定量地評價(jià)化合物的抑制活性，使用光密度分析儀測定譜帶面積S、D1、D2(S、D1和D2表示由復(fù)制的中間體衍生出來的細(xì)胞內(nèi)游離的HBV DNA)和Ⅰ(表示染色體整合的HBV DNA)，并按下式計(jì)算抑制百分率抑制率(%)＝
×100%抗HBV活性ID50可以表示為50%抑制病毒DNA合成所需的藥物濃度，可以通過抑制率(%)對藥物濃度作圖而得到ID50。
將結(jié)果示于表3
表3化合物 ID50(ug/ml)實(shí)施例5 0.24由通式(Ⅰ)所表示的本發(fā)明化合物具有抗病毒活性。因此，預(yù)期它們在人體免疫抑制時(shí)能有效地用于抗唇皰疹、生殖器皰疹、帶狀皰疹、單純性皰疹病毒Ⅰ和Ⅱ(HSV-Ⅰ，Ⅱ)的感染、水痘帶狀皰疹病毒(VZV)、巨細(xì)胞病毒(CMV)和EB病毒，預(yù)期它們也能有效地用于抗許多其他的病毒性疾病，如B型和C型肝炎病毒引起的病毒性肝炎、呼吸器官的病毒性疾病、消化器官的病毒性疾病、愛滋病(AIDS)、ATL等等。此外，預(yù)期它們可用作制癌劑。
在使用以上述方法得到的本發(fā)明化合物中，這些化合物可以口服、靜脈內(nèi)及皮下給藥。盡管其劑量隨服藥病人的癥狀、年齡及服用方法而變化，但通常為1至500mg/kg/天。本發(fā)明的化合物可以醫(yī)藥制劑的形式給藥，該制劑是通過將化合物與合適的載體混合而制備的。所采用的劑型可以是片劑、粒劑、細(xì)粒劑、粉劑、膠囊劑、針劑、乳劑、栓劑等等。制劑中所含活性組分的量為約0.01%至約99%。
下面，通過下列實(shí)施例的方式更集中地說明本發(fā)明化合物的制備。
實(shí)施例1(2S，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊酮和(3S，4S)-3，4-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊酮的制備將重氮甲烷(約2g)的乙醚(200ml)溶液加到按文獻(xiàn)[Y.Ichikawa等人，J.Chem.Soc.Chem.Commun.，1919(1989)]公開的方法合成的(2S，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)丁酮(12.14g，20mmols)中，并將得到的混合物在室溫下攪拌一星期。減壓下從反應(yīng)混合物中蒸餾出溶劑之后，殘余物用硅膠柱色譜(乙醚∶正己烷＝1∶10，v/v)提純，得到(2S，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊酮(2.07g，產(chǎn)率17%)NMR(200MHzFT，TMS，CDCl3)δ0.98(9H，s)，1.02(9H，s)，1.79(1H，m)，2.05-2.50(4H，m)，2.65(1H，m)，3.52-3.68(2H，m)，3.80(1H，dd，J＝4.3，10.3Hz)，4.04(1H，dd，J＝3.6，10.5Hz)，7.25-7.47(12H，m)，7.55-7.68(8H，m)，和(3S，4S)-3，4-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊酮(2.63g，產(chǎn)率21%)NMR(200MHzFT，TMS，CDCl3)δ1.01(18H，s)，2.12-2.51(6H，m)，3.51-3.73(4H，m)，7.26-7.48(12H，m)，7.55-7.65(8H，m)，
實(shí)施例2(1S，2S，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊醇和(1R，2S，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊醇的制備在氬氣氛中-78℃下，將1M二異丁基氫化鋁的甲苯(2.7ml，2.7mmoles)溶液緩慢地加到(2S，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊酮(1.40g，2.25mmoles)的甲苯(23ml)溶液中，并將所得的混合物在該溫度下攪拌15分鐘。然后，將0.2M磷酸鹽緩沖液(PH7)加到反應(yīng)混合物中，并攪拌一段時(shí)間。此后，加入過量的二氯甲烷，并過濾出無機(jī)物。用二氯甲烷萃取濾液，并用無水硫酸鈉干燥萃取液，然后蒸餾出溶劑。殘余物用硅膠柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶10，v/v)提純，得到(1S，2S，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊酮(1.120g，產(chǎn)率80%)NMR(200MHzFT，TMS，CDCl3)δ0.96(9H，s)，1.05(9H，s)，1.34-2.18(6H，m)，2.90(1H，brs)，3.35-3.52(2H，m)，3.75(1H，dd，J＝7.5，10.5Hz)，3.97(1H，dd，J＝4.4，10.4Hz)，4.46(1H，diff，q)，7.25-7.46(12H，m)，7.52-7.71(8H，m)，
和(1R，2S，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊醇(148mg，產(chǎn)率11%)NMR(200MHzFT，TMS，CDCl3)δ0.98(9H，s)，1.05(9H，s)，1.50-2.00(6H，m)，2.79(1H，brs)，3.51(2H，d，J＝5.2Hz)，3.56(1H，dd，J＝8.5，10.0Hz)，3.86(1H，dd，J＝4.9，10.0Hz)，4.12(1H，diff.q，J＝6.1Hz)，7.26-7.48(12H，m)，7.55-7.77(8H，m).
實(shí)施例3(1S，2S，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊基甲磺酸的制備在0℃下，將甲磺酰氯(0.20ml，2.6mmols)加到(1S，2S，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊醇(1.08g，1.73mmoles)和三乙胺(0.44ml，3.2mmoles)的二氯甲烷(9ml)溶液中。該混合物在0℃下攪拌15分鐘后，將0.2M磷酸鹽緩沖液(PH7.0)加到反應(yīng)混合物中，并用乙醚萃取該混合物。用無水硫酸鈉干燥乙醚萃取液，然后蒸出溶劑。殘余物用硅膠柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶9，v/v)提純，得到(1S，2S，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊基甲磺酸酯(1.169g，產(chǎn)率96%)。
NMR(200MHzFT，TMS，CDCl3)δ0.97(9H，s)，1.04(9H，s)，1.56(1H，m)，1.78-2.22(5H，m)，2.92(3H，s)，3.42(2H，d，J＝4.5Hz)，3.77(2H，d，J＝6.6Hz)，5.29(1H，m)，7.23-7.47(12H，m)，7.53-7.70(8H，m).
實(shí)施例49-[(1R，2R，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊基]-腺嘌呤的制備在氬氣氛下，將60%氫化鈉(40mg，1.0mmole)加到腺嘌呤(135mg，1.0mmole)的DMF(7ml)懸浮液中?；旌衔飻嚢枰恍r(shí)后，將(1S，2S，3S)-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊基甲磺酸酯(350mg，0.5mmole)加到反應(yīng)混合物中，并將所得的混合物在140℃下攪拌1.5小時(shí)。待混合物冷卻后，將0.2M磷酸鹽緩沖液(PH7)加到其中，并用乙酸乙酯萃取該產(chǎn)物。用水洗滌萃取液，并用飽和的氯化鈉水溶液洗滌，然后用無水硫酸鈉干燥，接著蒸餾除去溶劑。殘余物用硅膠柱色譜(二氯甲烷∶甲醇＝30∶1，v/v)提純，得到9-[(1R，2R，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊基]-腺嘌呤(140mg，產(chǎn)率38%)。
NMR(200MHzFT，TMS，CDCl3)δ0.93(9H，s)，1.04(9H，s)，1.86-2.00(2H，m)，2.02-2.38(3H，m)，2.53(1H，m)，3.59(2H，d，J＝4.3Hz)，3.65(1H，dd，J＝5.5，10.0Hz)，3.73(1H，dd，J＝5.5，10.0Hz)，4.89(1H，diff.q)，5.66(2H，brs)，7.44-7.55(4H，m)，7.19-7.44(12H，m)，7.59-7.69(4H，m)，7.64(1H，s)，8.30(1H，s).
實(shí)施例59-[(1R，2R，3S)-2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-腺嘌呤的制備將4N-鹽酸/二噁烷(0.17ml，0.68mmole)加到9-[(1R，2R，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊基]-腺嘌呤(129mg，0.17mmol)的甲醇(1ml)溶液中。將該混合物在室溫下攪拌過夜，然后，在減壓下從反應(yīng)混合物中蒸餾除去溶劑，此后，將水加到殘余物中，并從中除去可溶于乙醚的物質(zhì)，殘余的溶液用0.1N氫氧化鈉溶液中和，并通過蒸餾從中除去溶劑。殘余物用Diaion HP-20柱色譜(甲醇濃度梯度)提純，得到9-[(1R，2R，3S)-2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-腺嘌呤(43mg，產(chǎn)率94%)。
NMR(200MHzFT，TMS，CD3OD)δ1.74-2.02(2H，m)，2.02-2.31(3H，m)，2.40(1H，m)，3.57(2H，d，J＝5.3Hz)，3.69(2H，d，J＝6.0Hz)，4.78(1H，明顯的q，J＝8.6Hz)，8.20(1H，s)，8.26(1H，s)，實(shí)施例62-氨基-9-[(1R，2R，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊基]-6-(2-甲氧基乙氧基)嘌呤的制備在氬氣氛下，將氫化鋰(8.4mg，1.06mmoles)加到2-氨基-6-(2-甲氧基乙氧基)嘌呤(221mg，1.06mmoles)的DMF(7ml)懸浮液中。將該混合物攪拌一小時(shí)后，加入(1S，2S，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊基甲磺酸酯(370mg，0.53mmole)，并將所得的混合物在140℃下攪拌一小時(shí)。待混合物冷卻后，加入0.2M磷酸鹽緩沖液(PH7)，并用乙酸乙酯萃取形成的產(chǎn)物。將該萃取溶液用水洗滌，用飽和的氯化鈉水溶液洗滌，并用無水硫酸鈉干燥，然后蒸餾除去溶劑。殘余物用硅膠柱色譜(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1，v/v)提純，得到2-氨基-9-[(1R，2R，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊基]-6-(2-甲氧基乙氧基)嘌呤(124mg，產(chǎn)率29%)。
NMR(200MHzFT，TMS，CDCl3)δ
0.97(9H，s)，1.04(9H，s)，1.76-1.95(2H，m)，1.97-2.20(2H，m)，2.20-2.48(2H，m)，3.43(3H，s)，3.54(2H，d，J＝3.7Hz)，3.62(1H，dd，J＝5.2，10.2Hz)，3.71(1H，dd，J＝4.8，10.2Hz)，3.81(2H，t，J＝5.1Hz)，4.60(2H，brs)，4.65(2H，t，J＝5.1Hz)，4.81(1H，明顯的q，J＝8.5Hz)，7.21-7.42(12H，m)，7.46(1H，s)，7.49-7.58(4H，m)，7.59-7.69(4H，m).
實(shí)施例79-[(1R，2R，3S)-2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-鳥嘌呤的制備將4N鹽酸/二噁烷(0.13ml，0.52mmole)加到2-氨基-9-[(1R，2R，3S)-2，3-雙(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)-1-環(huán)戊基]-6-(2-甲氧基乙氧基)嘌呤(105mg，0.129mmole)的甲醇(1ml)溶液中。將該混合物在室溫下攪拌過夜后，在減壓下從反應(yīng)混合物中蒸除溶劑，加入水，從中除去可溶于醚的物質(zhì)，并蒸餾除去溶劑。向殘余物中加入2N鹽酸水溶液(3ml)后，將該混合物在100℃下加熱一小時(shí)，用1N氫氧化鈉水溶液中和反應(yīng)混合物后，該混合物經(jīng)Diaion HP-20柱色譜(甲醇濃度梯度)處理，得到9-[(1R，2R，3S)-2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-鳥嘌呤(29mg，產(chǎn)率81%)。
NMR(200NHzFT，TMS，CD3OD)δ1.72-1.90(2H，m)，1.90-2.37(4H，m)，3.52(2H，dd，J＝5.5，11.2Hz)，3.59(2H，dd，J＝4.6，11.2Hz)，3.66(2H，d，J＝6.0Hz)，4.59(1H，明顯的q，J＝8.6Hz)，7.83(1H，s).
實(shí)施例8(4S，5S)-4，5-雙(甲氧羰基)-1-環(huán)己烯的制備將在文獻(xiàn)[N.Narasaka等人，J.Am.Chem.Soc.，111，5340(1989)]中公開的(4S，5S)-5-甲氧羰基-4-(噁唑烷-2-酮-3-基)-羰基-1-環(huán)己烯(8.50g，33.6mmoles)的甲醇(50ml)溶液，在氬氣氛下，加到1M二甲氧基鎂/甲醇(168ml，168mmoles)中，并將該混合物在0℃下攪拌15分鐘。然后，將飽和的氯化銨水溶液加到反應(yīng)混合物中，并將所得到的混合物用甲苯萃取。將該甲苯萃取溶液用飽和的氯化鈉水溶液洗滌，然后，在減壓下蒸餾出溶劑。殘余物用硅膠柱色譜[乙酸乙酯∶正己烷＝1∶9，v/v)提純，得到(4S，5S)-4，5-雙(甲氧羰基)-1-環(huán)己烯(1.89g，產(chǎn)率30%)。
NMR(20MHzFT，TMS，CDCl3)δ2.07-2.31(2H，m)，2.33-2.55(2H，m)，2.76-2.97(2H，m)，3.70(6H，s)，5.70(2H，d，J＝2.9Hz).
實(shí)施例9(4S，5S)-4，5-雙(羥甲基)-1-環(huán)己烯的制備在氬氣氛中、0℃下，將(4S，5S)-4，5-雙(甲氧羰基)-1-環(huán)己烯(1.86g，9.4mmoles)的醚溶液加到氫化鋁鋰(713mg，18.8mmoles醚)的醚懸浮液(100ml)中，并將所得的混合物在0℃下攪拌2小時(shí)。
向反應(yīng)混合物中加入飽和的硫酸鈉水溶液并分解過量的還原劑之后，加入無水硫酸鈉，并將整個(gè)混合物攪拌一會兒。在過濾除去無機(jī)物質(zhì)并用熱的異丙醇洗滌混合物后，將濾液和洗滌液合并在一起，并在減壓下蒸餾除去溶劑。殘余物用硅膠柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝2∶1，v/v)提純，然后，用乙酸乙酯-己烷混合物重結(jié)晶，得到(4S，5S)-4，5-雙(羥甲基)-1-環(huán)己烯(1.09g，產(chǎn)率82%)。
NMR(200MHzFT，TMS，CDCl3)δ1.63-2.13(6H，m)，3.40(2H，brs)，3.58(2H，brdd，J＝5.5，10.1Hz)，3.73(2H，brd，J＝10.0Hz)，5.66(2H，d，J＝2.5Hz).
將上述化合物取出一部分，并用一般方法[(R)-MTRACl，DMAP/Pyr]將其轉(zhuǎn)化成(R)-MTPA酯，觀測其400MHzNMR。結(jié)果，該物質(zhì)的光學(xué)純度為85-90%ee。
實(shí)施例10(4S，5S)-4，5-雙(苯甲酰氧基甲基)-1-環(huán)己烯的制備將苯甲酰氯(2.0ml，17mmoles)慢慢地加到(4S，5S)-4，5-雙(羥甲基)-1-環(huán)己烯(1.00g，7.0mmoles)的吡啶(7ml)溶液中，同時(shí)，用冰冷卻該體系。得到的混合物在0℃下攪拌1小時(shí)。將二甲氨基丙胺(0.8ml，6.4mmoles)加到反應(yīng)混合物中，并在該溫度下攪拌15分鐘后，加入水，并用乙醚萃取形成的產(chǎn)物。用水，稀鹽酸和飽和的氯化鈉水溶液，依次洗滌醚萃取溶液，然后，用無水硫酸鈉干燥。在減壓下將溶劑蒸餾除去后，將殘余物用硅膠柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶9，v/v)提純，得到(4S，5S)-4，5-雙(苯甲酰氧基甲基)-1-環(huán)己烯(2.5g，產(chǎn)率100%)。
NMR(200MHzFT，TMS，CDCl3)δ1.95-2.40(6H，m)，4.41(4H，brd，J＝3.9Hz)，5.71(2H，s)，7.35-7.46(4H，m)，7.48-7.59(2H，m)，7.96-8.06(4H，m).
實(shí)施例11(3S，4S)-3，4-雙(苯甲酰氧基甲基)-7-噁二環(huán)[4.1.0]庚烷的制備在用冰冷卻下，將間氯過苯甲酸(777mg，4.5mmoles)加到(4S，5S)-4，5-雙(苯甲酰氧基甲基)-1-環(huán)己烯(1.05g，3.0mmoles)的二氯甲烷(6ml)溶液中，該混合物在室溫下攪拌2小時(shí)后，將飽和的亞硫酸氫鈉水溶液加到反應(yīng)混合物中，分解過量的過酸。此后，加入飽和的碳酸氫鈉水溶液，并用乙醚萃取全部混合物。用水、然后用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌醚萃取溶液，并用無水硫酸鈉干燥。在減壓下，將溶劑蒸餾出去后，殘余物用硅膠柱色譜(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3，v/v)提純，得到(3S，4S)-3，4-雙(苯甲酰氧基甲基)-7-噁二環(huán)[4.1.0]庚烷(1.025g，產(chǎn)率93%)。
NMR(200MHzFT，TMS，CDCl3)δ1.76-2.42(6H，m)，3.21-3.33(2H，m)，4.25-4.44(4H，m)，7.33-7.45(4H，m)，7.48-7.59(2H，m)，7.94-8.06(4H，m).
實(shí)施例129-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(苯甲酰氧基甲基)-2-羥基環(huán)己基]-腺嘌呤的制備在氬氣氛下，將60%氫化鈉(20mmg，0.65mole)加到腺嘌呤(202.5mg，1.34mmoles)的無水DMF(10ml)懸浮液中。將該混合物在室溫下攪拌1小時(shí)后，加入(3S，4S)-3，4-雙(苯甲酰氧基甲基)-7-噁二環(huán)[4.1.0]庚烷(245mg，0.67mmole)，并將得到的混合物放在油浴中加熱，保持在140℃達(dá)3小時(shí)。將0.2M磷酸鹽緩沖溶液(PH7.0)加到反應(yīng)混合物中，并將該混合物攪拌一會兒后，用乙酸乙酯萃取混合物。用無水硫酸鈉干燥萃取溶液后，在減壓下蒸餾出溶劑，并用硅膠柱色譜(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1，v/v)提純殘余物，得到9-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(苯甲酰氧基甲基)-2-羥基環(huán)己基]-腺嘌呤(161mg，產(chǎn)率48%)。
NMR(200MHzFT，TMS，CDCl3)δ1.83-2.35(4H，m)，2.43-2.62(2H，m)，2.73(1H，m)，4.37-4.75(6H，m)，6.09(2H，brs)，7.26-7.64(6H，m)，7.71(1H，s)，7.99-8.11(5H，m)，實(shí)施例139-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(羥甲基)-2-羥基環(huán)己基]-腺嘌呤的制備在冰冷卻下，將甲醇鈉(40mg，0.74mmole)加到9-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(苯甲酰氧基甲基)2-羥基環(huán)己基]-腺嘌呤(185mg，0.37mmole)的由無水甲醇(4ml)和無水THF(4ml)所組成的溶劑混合物的溶液中。將得到的混合物在室溫下攪拌5小時(shí)后，用稀鹽酸中和反應(yīng)混合物，并在減壓下蒸餾出溶劑。殘余物用Diaion HP-20柱色譜(甲醇濃度梯度)提純，得到9-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(羥甲基)-2-羥基環(huán)己基]-腺嘌呤(109mg，產(chǎn)率100%)。
NMR(200MHzFT，TMS，CD3CD)δ
1.70-(1H，m)，1.95-2.14(4H，m)，2.43(1H，m)，3.64-3.86(4H，m)，4.25-4.49(2H，m)，8.816(1H，s)，8.191(1H，s).
實(shí)施例149-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(苯甲酰氧基甲基)-2-(苯氧基硫代羰基氧基)-環(huán)己基]-腺嘌呤。
在氬氣氛下，將9-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(苯甲酰氧基甲基)-2-羥基環(huán)己基]-腺嘌呤(151mg，0.3mmole)溶于乙腈(5ml)，然后，向其中加入4-二甲氨基吡啶(75.1mg，0.62mmole)和苯氧硫代羰基氯(57μl，0.33mmole)。所得的混合物在室溫下攪拌24小時(shí)后，將0.1M碳酸氫鈉水溶液加到反應(yīng)混合物中，并用乙酸乙酯萃取混合物。該萃取溶液先用水洗滌，再用飽和的氯化鈉水溶液洗滌，然后，用無水硫酸鈉干燥，并在減壓下蒸餾出溶劑。殘余物用硅膠柱色譜(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1，v/v)提純，得到9-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(苯甲酰氧基甲基)-2-(苯氧基硫代羰基氧基]-腺嘌呤(109mg，產(chǎn)率56.8%)。
NMR(200MHzFT，TMS，CDCl3)δ2.02-2.32(2H，m)，2.48-2.75(3H，m)，2.98(1H，m)，
4.44-4.69(4H，m)，4.92(1H，m)，5.70(2H，brs)，6.23(1H，m)，6.80-6.92(2H，m)，7.18-7.64(9H，m)，7.85(1H，s)，8.01-8.12(4H，m)，8.33(1H，s)，實(shí)施例159-[(1S，3S，4S)-3，4-雙-(苯甲酰氧基甲基)環(huán)己基]-腺嘌呤的制備在氬氣氛下，將2，2′-偶氮二異丁腈(5.3mg，0.03mmole)和三丁基氫化錫(5.3mg，0.032mmole)加到9-[(1R，2R，4S，5S)-雙(苯甲酰氧基甲基)-2-苯氧基硫代羰基)-環(huán)己基]-腺嘌呤(103mg，0.16mmole)的無水甲苯(4ml)溶液中。在室溫下攪拌20分鐘后，反應(yīng)在75℃下進(jìn)行3小時(shí)。在減壓下從反應(yīng)混合物中蒸餾出溶劑，殘余物用硅膠柱色譜(二氯甲烷∶甲醇＝100∶1，v/v)提純，得到9-[(1S，3S，4S)-3，4-雙(苯甲酰氧基甲基)-環(huán)己基]-腺嘌呤(26.0mg，產(chǎn)率33.2%)。
NMR(200MHzFT，TMS，CDCl3)δ1.80-2.63(8H，m)，4.54(4H，d，J＝6.8Hz)，4.80(1H，m)，
5.84(2H，brs)，7.36-7.50(4H，m)，7.51-7.63(2H，m)，7.94(1H，s)，8.03(4H，d，J＝8.1Hz)，8.33(1H，s).
實(shí)施例16[(1S，3S，4S)-3，4-雙(羥甲基)-環(huán)己基]-腺嘌呤的制備在冰冷卻下，將甲醇鈉(2.7mg，0.55mmole)加到9-[(1S，3S，4S)-3，4-雙(苯甲酰氧基甲基)-環(huán)己基]-腺嘌呤(25mg，0.05mmole)的無水甲醇(2ml)溶液中。將該混合物在室溫下攪拌過夜后，用稀鹽酸中和反應(yīng)混合物，并在減壓下蒸餾出溶劑。然后，將乙醚和水加到殘余物中，除去乙醚層，并蒸餾出水。接著，將殘余物用Diaion HP-20柱色譜(甲醇濃度梯度)提純，得到9-[(1S，3S，4S)-3，4-雙(羥甲基)-環(huán)己基]-腺嘌呤(9.4mg，產(chǎn)率66.2%)。
NMR(200MHzFT，TMS，DMSO-d6)δ1.58-2.31(8H，m)，3.45-3.65(4H，m)，4.50(1H，m)，4.55(1H，t，J＝5.3Hz)，4.61(1H，t，J＝5.3Hz)，7.17(2H，brs)，8.13(1H，s)，8.25(1H，s).
實(shí)施例172-氨基-9-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(苯甲酰氧基甲基)-2-羥基環(huán)己基]-6-(2-甲氧基乙氧基)嘌呤的制備在氬氣氛下，將氫化鋰(4.8mg，0.6mmole)，加到2-氨基-6-(2-甲氧基乙氧基)-嘌呤(354.4mg，1.69mmoles)的無水DMF(15ml)懸浮液中。將該混合物在室溫下攪拌1小時(shí)后，加入(3S，4S)-3，4-雙(苯甲酰氧基甲基)-7-噁二環(huán)[4.1.0]-庚烷(310.4mg，0.85mmole)，該反應(yīng)在140℃下繼續(xù)進(jìn)行1.5小時(shí)。在將反應(yīng)混合物冷卻的同時(shí)，向其中加入0.2M磷酸鹽緩沖溶液(PH7.0)并將混合物攪拌一會兒。然后，用乙酸乙酯萃取混合物。該萃取溶液用水洗滌，接著用氯化鈉飽和水溶液洗滌，并用無水硫酸鈉干燥。然后，在減壓下蒸餾出溶劑。殘余物用硅膠柱色譜提純，得到2-氨基-9-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(苯甲酰氧基甲基)-2-羥基環(huán)己基]-6-(2-甲氧基乙氧基)-嘌呤(320mg，產(chǎn)率65.6%)。
NMR(200MHzFT，TMS，CDCl3)δ1.80-2.32(4H，m)，2.41-2.65(2H，m)，2.94(1H，m)，3.37(3H，s)，3.74(2H，t，J＝5.0Hz)，4.20(1H，m)，4.38-4.90(7H，m)，5.02(2H，brs)，7.32-7.51(4H，m)，
7.51-7.64(2H，m)，7.99-8.11(5H，m).
實(shí)施例189-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(羥甲基)-2-羥基環(huán)己基]-鳥嘌呤的制備在冰冷卻下，將甲醇鈉(36mg，0.67mmole)加到2-氨基-9-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(苯甲酰氧基甲基)-2-羥基環(huán)己基]-6-(2-甲氧基乙氧基)-嘌呤(190mg，0.33mmole)的無水甲醇(3ml)溶液中。將該混合物在室溫下攪拌5小時(shí)后，用稀鹽酸中和反應(yīng)混合物，并在減壓下蒸餾出溶劑。然后，將乙醚和水加到殘余物中，除去乙醚層，并蒸餾出水。接著，將殘余物連同2N鹽酸水溶液(7ml)一起在100℃下加熱一小時(shí)。該反應(yīng)混合物用1N氫氧化鈉溶液中和，然后用Diaion HP-20柱色譜(甲醇濃度梯度)純化，得到9-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(羥甲基)-2-羥基環(huán)己基]-鳥嘌呤(70mg，產(chǎn)率69%)。
NMR(200MHzFT，TMS，DWSO-d6)δ1.42(1H，m)，1.67-1.97(4H，m)，2.10(1H，m)，3.40-3.59(4H，m)，3.85-4.15(2H，m)，4.57(1H，t，J＝5.2Hz)，4.62(1H，t，J＝5.1Hz)，4.73(1H，d，J＝4.8Hz)，
6.34(2H，brs)，7.79(1H，s)，10.44(1H，brs).
實(shí)施例192-氨基-9-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(苯甲酰氧基甲基)-2-苯氧基硫代羰基氧基)-環(huán)己基]-6-(2-甲氧基乙氧基)嘌呤的制備在氬氣氛中，將4-二甲氨基吡啶(125.2mg，1.02mmoles)和苯氧基硫代羰基氯(100μl，0.55mmoles)加到2-氨基-9-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(苯甲酰氧基甲基)-2-羥基環(huán)己基]-6-(2-甲氧基乙氧基)嘌呤(260mg，0.45mmole)的乙腈(7.5ml)溶液中。該混合物在室溫下反應(yīng)24小時(shí)。
然后，將0.1M碳酸氫鈉水溶液加到反應(yīng)混合物中，并用乙酸乙酯萃取混合物。用水再用飽和氯化鈉水溶液洗滌萃取溶液，用無水硫酸鈉干燥后，蒸餾出溶劑。殘余物用硅膠柱色譜(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1，v/v)提純，得到2-氨基-9-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(苯甲酰氧基甲基)-2-(苯氧基硫代羰基氧基)-環(huán)己基-6-(2-甲氧基乙氧基)-嘌呤(225.9mg，產(chǎn)率70.3%)。
NMR(200MHzFT，TMS，CDCl3)δ1.99-2.23(2H，m)，2.44-2.65(3H，m)，2.93(1H，m)，3.44(3H，s)，3.82(2H，t，J＝5.0Hz)，
4.44-4.86(7H，m)，4.93(2h，brs)，6.27(1H，m)，6.82-7.02(2H，m)，7.18-7.67(9H，m)，7.62(1H，s)，7.96-8.11(4H，m)，實(shí)施例202-氨基-9-[(1S，3S，4S)-3，4-雙(苯甲酰氧基甲基)-環(huán)己基]-6-(2-甲氧基乙氧基)-嘌呤的制備在氬氣氛下，將2-氨基-9-[(1R，2R，4S，5S)-4，5-雙(苯甲酰氧基甲基)-2-(苯氧基硫代羰基氧基)-環(huán)己基]-6-(2-甲氧基乙氧基)-嘌呤(100mg，0.14mmole)溶于無水甲苯(3.1ml)中，然后，將2，2′-偶氮二異丁腈(49.2mg，0.3mmole)和三甲基氫化錫(82μl，0.3mmole)加到溶液中。將該混合物在室溫下攪拌20分鐘后，在75℃下再繼續(xù)反應(yīng)3小時(shí)。在減壓下從反應(yīng)混合物中蒸餾出溶劑，殘余物用硅膠柱色譜(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1，v/v)提純，得到2-氨基-9-[(1S，3S，4S)-3，4-雙(苯甲酰氧基甲基)-環(huán)己基]-6-(2-甲氧基乙氧基)-嘌呤(17.6mg，產(chǎn)率22.4%)。
NMR(200MHzFT，TMS，CDCl3)δ1.74-2.61(8H，m)，3.42(3H，s)，3.81(2H，t，J＝5.0Hz)，4.46-4.73(7H，m)，4.80(2H，brs)，
7.36-7.50(4H，m)，7.52-7.63(2H，m)，7.73(1H，s)，7.98-8.10(4H，m).
實(shí)施例219-[(1S，3S，4S)-3，4-雙(羥甲基)-環(huán)己基]-鳥嘌呤的制備將無水甲醇(1ml)加到2-氨基-9-[(1S，3S，4S)-3，4-雙(苯甲酰氧基甲基)-環(huán)己基]-6-(2-甲氧基乙氧基)-嘌呤(17.4mg，0.03mmole)中。在冰冷卻混合物的同時(shí)，向其中加入甲醇鈉(1.62mg，0.03mmole)，并在室溫下將全部混合物攪拌過夜。用稀鹽酸中和反應(yīng)混合物，并在減壓下蒸餾出溶劑。然后，將乙醚和水加到混合物中，除去乙醚層，并蒸餾除去水。將殘余物連同2N鹽酸水溶液(1ml)一起在10℃下加熱1小時(shí)。用1N氫氧化鈉溶液中和反應(yīng)混合物后，將該反應(yīng)混合物用Diaion HP-20柱色譜(甲醇濃度梯度)提純，得到9-[(1S，3S，4S)-3，4-雙(羥甲基)-環(huán)己基]-鳥嘌呤(5.7mg，31.3%)。
NMR(200MHzFT，TMS，DMSO-d6)δ1.48-1.98(7H，m)，2.08(1H，m)，3.38-3.65(4H，m)，4.32(1H，m)，4.43-4.72(2H，m)，6.45(2H，brs)，
7.84(1H，s)，10.57(1H，brs).
權(quán)利要求
1.一種制備由下面通式(Ⅰ)表示的新的核酸衍生物的方法，
其中B代表核酸堿衍生物；A1和A2各自獨(dú)立地代表OR1或OCOR1；R1代表氫原子，取代或未取代的烷基，取代或未取代的芳基；l代表0或1；m和n各自代表0至2的整數(shù)；其條件是，當(dāng)l和m為0時(shí)，n為0或2，該方法包括，在溶劑中，使由下列通式(Ⅱ)或(Ⅲ)表示的化合物與核酸堿衍生物反應(yīng)，
其中X代表離去基團(tuán)；A3和A4各自獨(dú)立地代表OR5或OCOR1，R1代表氫原子、取代或未取代的烷基或取代或未取代的芳基；R5代表氫原子，保護(hù)基團(tuán)，取代或未取代的烷基或取代或未取代的芳基，m和n各自代表0至2的整數(shù)；其條件是，當(dāng)m為0時(shí)，n為0或2，得到由下面通式(Ⅴ)表示的化合物
其中B代表核酸堿衍生物，A5、A4、l、m和n如上所定義，當(dāng)通式(Ⅴ)化合物有保護(hù)基團(tuán)或當(dāng)通式(Ⅴ)中的l為1時(shí)，接著任意地消去保護(hù)基團(tuán)或l表示的羥基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中由通式(Ⅱ)表示的化合物與核酸堿衍生物反應(yīng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中由通式(Ⅱ)表示的化合物是用下式表示的化合物
其中m′為0或2，n′為1或2，X、A3和A4如權(quán)利要求1所定義，其條件是，當(dāng)m′為0時(shí)，n′為2，當(dāng)m′為2時(shí)，n′為1，并且核酸堿衍生物為腺嘌呤或鳥嘌呤。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中A3和A4均代表OR3，m′為0，n′為2。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中R3是氫原子或保護(hù)基團(tuán)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5的方法，其中反應(yīng)溫度是在從0℃至溶劑回流溫度的范圍內(nèi)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中由通式(Ⅱ)表示的化合物是用下式表示的化合物
并且核酸堿為腺嘌呤，通式(Ⅰ)化合物為9-[(1R，2R，3S)-2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-腺嘌呤。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中R5為氫原子或保護(hù)基團(tuán)。
9.一種制備9-[(1R，2R，3S)-2，3-雙(羥甲基)-1-環(huán)戊基]-腺嘌呤的方法，該方法包括，在溶劑中及堿性催化劑存在下，使由下面通式表示的化合物
與腺嘌呤反應(yīng)，其中X為離去基團(tuán)，R3為氫原子或保護(hù)基團(tuán)，當(dāng)R3為保護(hù)基團(tuán)時(shí)，接著將保護(hù)基團(tuán)消去。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中反應(yīng)溫度是在從0℃至溶劑回流溫度的范圍內(nèi)。
全文摘要
一種由下面通式(I)表示的新的預(yù)期具有抗病毒活性的核酸衍生物及其生理上可接受的鹽其中B代表核酸堿衍生物；A
文檔編號C07D239/54GK1059524SQ91105789
公開日1992年3月18日 申請日期1991年7月24日 優(yōu)先權(quán)日1990年7月24日
發(fā)明者市川裕一郎, 赤羽宏, 菅原由佳, 鹽沢明, 松原謙一, 長幡武光, 星野洪郎, 關(guān)淳一 申請人:日本化藥株式會社