專利名稱：抗菌劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于預防和治療人類和動物如牛的傳染性疾病的抗菌劑。根據(jù)本發(fā)明，提供了抵抗格蘭氏陰性和格蘭氏陽性細菌的抗菌劑。
背景技術(shù)：
在人類和動物如牛、鳥類和魚類的由致病細菌如金黃色葡萄球菌，溶血性鏈球菌、炭疽芽孢桿菌和破傷風梭菌引起的傳染性疾病中，通常使用抗菌素或合成抗菌劑，包括青霉素、四環(huán)素、大環(huán)內(nèi)酯、頭孢菌素和頭孢烯。
通常，這些傳統(tǒng)抗菌素或合成抗菌劑的長期或大量使用對上述致病細菌產(chǎn)生抗藥性。特別是抗甲氧西林的金黃色葡萄球菌(MR-SA)，它因毒性強而引起高死亡率，已成為大的社會問題，因為它對許多藥物產(chǎn)生抗藥性并造成治療困難。
本發(fā)明人進行了廣泛的研究，以期解決上述問題，并發(fā)現(xiàn)某些迄今已知具有除草活性的酮腈(Ketonitrile)衍生物(見日本專利申請公開(Kokai)No.5-148,213,6-179,646和7-109,249)以及甚至一些迄今已公認不具有除草活性的酮腈衍生物具有抗菌活性，且特別是對格蘭氏陽性細菌如葡萄球菌和鏈球菌以及格蘭氏陰性細菌具有高抗菌活性，從而完成了本發(fā)明。發(fā)明公開本發(fā)明涉及一種抗菌劑，含有下式(1)所示酮腈衍生物或其鹽作活性成分 (其中R1為氫原子或低級烷基，各R2、R3、R4和R5相同或互不相同，為氫原子，鹵素原子，硝基，低級烷基，低級烷氧基，或取代的或未取代的苯氧基，X為取代的或未取代的芳烴基團或取代或未取代的雜環(huán)基團，Y為取代或未取代的芳烴基團，取代或未取代的雜環(huán)基團，由取代或未取代的芳烴基團或由取代或未取代的雜環(huán)基團取代的羰基，或N，N-二取代的氨基甲?；?。實施本發(fā)明的最佳方式在式(1)中，由R1所示的低級烷基的實例包括甲基，乙基，丙基和異丙基。優(yōu)選R1為氫原子或甲基。
在式(1)中，各R2-R5的實例包括氫原子；鹵原子，如氯，溴，氟和碘；硝基；低級烷基，如甲基，乙基，丙基和丁基；以及低級烷氧基，如甲氧基，乙氧基和丙氧基；苯氧基如2-氯-4-三氟甲基苯氧基。
在式(1)中，X所示未取代的芳烴基團的實例包括苯基和萘基。X所示未取代的雜環(huán)基團的實例包括含一個或多個雜原子氧、硫或氮的5元或6元環(huán)構(gòu)成的基團；或由這些基團和苯環(huán)縮合形成的基團，例如芳族雜環(huán)基團，如吡啶基，喹啉基，異喹啉基，嘧啶基，噁唑基，苯并噁唑基，呋喃基，苯并呋喃基，噻唑基，苯并噻唑基，噻吩基和苯并噻吩基；以及非芳族雜環(huán)基團，如哌啶基，吡咯烷基，嗎啉基，四氫呋喃基和四氫噻吩基。尤其優(yōu)選芳族雜環(huán)基團。
當基團X為取代的芳烴基團或取代的雜環(huán)基團時，取代基的實例包括鹵素原子如氯，氟，溴和碘；鹵代烷基如三氟甲基；硝基，氰基，烷基，烷硫基和烷氧羰基。取代基數(shù)目可為一個或多個。從所得化合物顯示增強的抗菌活性來看，尤其優(yōu)選該取代基或這些取代基為選自鹵素原子和鹵代烷基的一種或均質(zhì)或非均質(zhì)的兩種。
在式(1)中，Y所示未取代的芳烴基團包括苯基和萘基。也由Y所示的未取代雜環(huán)基團包括由各含一個或多個雜原子氧、硫或氮的5元或6元環(huán)構(gòu)成的基團；或由這些基團與苯環(huán)縮合所形成的基團，例如對基團X所提到的上述雜環(huán)基團。尤其優(yōu)選芳族雜環(huán)基團。
當基團Y為取代的芳烴基團，取代的雜環(huán)基團或被取代的芳烴基團或取代的雜環(huán)基團之一取代的羰基時，取代基的實例包括鹵素原子如氯，氟，溴和碘；鹵代烷基如三氟甲基；烷基，烷氧基，烷硫基和烷氧羰基。
N，N-二取代的氨基甲?；膶嵗ㄈ〈蛭慈〈耐榛〈蛭慈〈逆溝┗?，取代或未取代的烷氧基，取代或未取代的芳族基團或由取代或未取代的雜環(huán)基團取代的氨基甲酰基。另外，鍵于氨基甲?；系膬蓚€取代基可結(jié)合形成一個可含有雜原子的環(huán)(該環(huán)的實例包括吡咯烷，哌啶和嗎啉)。也可使用可與苯環(huán)稠合或可用烷基取代的1-氮雜環(huán)烷基羰基或類似基團。
式(1)化合物分成下式(2)、(3)和(4)所示的3類。在本發(fā)明中，可使用屬于任一這些化合物類的化合物。 (式中R1，R2，R3，R4，R5，X和Y具有上面所定義的相同含意)。
在式(2)中，基團X優(yōu)選是未取代或取代的苯基，取代或未取代的吡啶基，取代或未取代的苯并噁唑基，或取代或未取代的苯并噻唑基。特別優(yōu)選可用鹵素原子，鹵代烷基或氰基取代的苯基；可用鹵素原子，鹵代烷基或氰基取代的吡啶基；可用鹵素原子，鹵代烷基或氰基取代的苯并噁唑基；或可用鹵素原子，鹵代烷基或氰基取代的苯并噻唑基。
在(2)中，Y優(yōu)選為取代或未取代的苯基，取代或未取代的嘧啶基，取代或未取代的噻吩基，取代或未取代的萘基，或N，N-二取代的氨基甲?；Ｌ貏e優(yōu)選被鹵素原子，鹵代烷基，烷基或烷氧基取代的苯基；被鹵素原子，鹵代烷基，烷基或烷氧基取代的嘧啶基；被鹵素原子，鹵代烷基，烷基或烷氧基取代的噻吩基；或被鹵素原子，鹵代烷基，烷基或烷氧基取代的萘基；被低級烷基，芳基或芳烷基取代的N，N-二取代氨基甲?；换蚩膳c苯環(huán)稠合或可用烷基取代的1-氮雜環(huán)烷基羰基。
在式(2)中，X和Y優(yōu)選是取代或未取代的芳族雜環(huán)基團，其中X的優(yōu)選實例包括取代或未取代的苯基，取代或未取代的吡啶基，取代或未取代的苯并噁唑基，或取代或未取代的苯并噻唑基，Y的優(yōu)選實例包括取代或未取代的苯基，取代或未取代的嘧啶基，取代或未取代的噻吩基，取代或未取代的萘基，或N，N-二取代的氨基甲?；?。更優(yōu)選X為可由鹵素原子，鹵代烷基或氰基取代的苯基；可由鹵素原子，鹵代烷基或氰基取代的吡啶基；可由鹵素原子，鹵代烷基或氰基取代的苯并噁唑基；或可由鹵素原子，鹵代烷基或氰基取代的苯并噻唑基；而Y為可由鹵素原子，鹵代烷基，烷基或烷氧基取代的苯基；可由鹵素原子，鹵代烷基，烷基或烷氧基取代的嘧啶基；可由鹵素原子，鹵代烷基，烷基或烷氧基取代的噻吩基；可由鹵素原子，鹵代烷基，烷基或烷氧基取代的萘基；可由低級烷基，芳基或芳烷基取代的N，N-二取代氨基甲?；?；或可與苯環(huán)稠合成可用烷基取代的1-氮雜環(huán)烷基羰基。
在式(2)中，X和Y的更優(yōu)選組合如下X為取代或未取代的吡啶基，Y為取代或未取代的苯基，取代或未取代的嘧啶基，或N，N-二取代的氨基甲?；?；X為取代或未取代的苯基，Y為取代或未取代的嘧啶基或N，N-二取代的氨基甲?；?；X為取代或未取代的苯并噁唑基或取代或未取代的苯并噻唑基，Y為取代或未取代的苯基。
在式(2)所示的酮腈衍生物中，尤其優(yōu)選4-[4-(3-氯-5-三氟甲基-2-吡啶基氧基)苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈(pentanonitrile)(化合物號4)，因其抗菌活性突出。
在式(3)中，X優(yōu)選為取代或未取代的芳烴基團或取代或未取代的雜環(huán)基團。特別優(yōu)選X為取代或未取代的苯基，或取代或未取代的吡啶基。具體而言，優(yōu)選已用鹵素原子或鹵代烷基取代的苯基和已用鹵素原子或鹵代烷基取代的吡啶基。
在式(3)中，Y優(yōu)選為取代或未取代的苯基，取代或未取代的萘基，取代或未取代的吡啶基，或N，N-二取代的氨基甲?；?。更優(yōu)選可用鹵素原子，鹵代烷基或烷氧基取代的苯基和N，N-二取代的氨基甲?；?。特別優(yōu)選用鹵素原子或鹵代烷基取代的苯基。
在式(3)中，X和Y的優(yōu)選組合如下X為取代的苯基或取代的吡啶基，Y為取代或未取代的苯基，取代或未取代的吡啶基，或N，N-二取代的氨基甲?；?。尤其優(yōu)選其中X為鹵素原子或鹵代烷基取代的苯基或鹵素原子或鹵代烷基取代的吡啶基，而Y為由鹵素原子，鹵代烷基或烷氧基取代的苯基的組合。
在式(3)所示酮腈衍生物中，因其突出的抗菌活性而優(yōu)選如下化合物2-(3-溴苯基)-4-[2-氯-5-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]-3-氧代戊腈，4-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈，和4-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-5-甲基苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈。
在式(4)中，X優(yōu)選為取代或未取代的芳烴基團或取代或未取代的雜環(huán)基團。特別優(yōu)選X為取代或未取代的苯基或取代或未取代的吡啶基。尤其優(yōu)選被鹵素原子或鹵代烷基取代的苯基和鹵素原子或鹵代烷基取代的吡啶基。具體而言，優(yōu)選被鹵素原子或鹵代烷基取代的苯基。
在式(4)中，Y優(yōu)選為取代或未取代的苯基，取代或未取代的萘基或取代或未取代的吡啶基。更優(yōu)選被鹵素原子，鹵代烷基或烷氧基取代的苯基。特別優(yōu)選被鹵素原子或鹵代烷基取代的苯基。
在式(4)中，X和Y的優(yōu)選組合如下X為取代的苯基或取代的吡啶基，Y為取代或未取代的苯基，或取代或未取代的吡啶基。尤其優(yōu)選其中X為被鹵素原子或鹵代烷基取代的苯基；或被鹵素原子或鹵代烷基取代的吡啶基；Y為未取代苯基或被鹵素原子，鹵代烷基或烷氧基取代的苯基的組合。
在式(4)所示的酮腈衍生物中，因其抗菌活性突出而優(yōu)選下列化合物4-[2-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-4-甲基苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈，4-[2-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-5-甲基苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈，4-[2-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-4-甲基苯氧基]-2-(3-溴苯基)-3-氧代戊腈和4-[2-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-5-甲基苯氧基]-2-(3-溴苯基)-3-氧代戊腈。
用于本發(fā)明的式(1)的酮腈衍生物可以為鹽形式。這些鹽包括例如與無機酸如鹽酸，硫酸，硝酸，氫溴酸或磷酸形成的無機鹽；與有機酸如乙酸，富馬酸，馬來酸，乳酸，酒石酸，檸檬酸，蘋果酸，草酸，甲磺酸，苯磺酸和對甲苯磺酸形成的有機鹽；與酸性氨基酸如天冬氨酸和谷氨酸形成的鹽；與金屬如鈉，鉀，鈣，鎂，鋅和銀形成的金屬鹽；與有機堿如二甲胺，三乙胺，二乙醇胺和芐基胺形成的鹽；以及與堿性氨基酸如賴氨酸和精氨酸(alginine)形成的鹽。在本發(fā)明中，以其水合物為代表的酮腈衍生物(1)的溶合物也可使用。
用于本發(fā)明的酮腈化合物(1)例如可按下列方法(a)-(e)中任一種制備(a)使式(5)所示化合物和式(6)所示化合物在有或無溶劑存在下反應(yīng)得到酮腈衍生物 (其中M為氫原子或堿金屬，Z為鹵素原子，R1，R2，R3，R4，R5，X和Y具有上面定義的相同含意)。
(b)使式(7)所示化合物和式(8)所示化合物在有或無溶劑存在下反應(yīng)得到酮腈衍生物 (其中R6為烷氧基或鹵素原子，和R1、R2、R3，R4，R5，X和Y具有上面定義的相同含意)。
(c)使式(9)所示化合物與式(10)所示化合物在有或無溶劑存在下反應(yīng)得到酮腈衍生物(1)。 (其中R1、R2、R3，R4，R5，M，X，Y和Z具有上面定義的相同含意)。
(d)使式(11)所示化合物與式(12)所示化合物在有或無溶劑存在下反應(yīng)得到酮腈衍生物(1)。 (其中R1、R2、R3，R4，R5，X，Y，Z和M具有上面定義的相同含意)。
(e)使式(13)所示化合物與式(14)所示化合物在有或無溶劑存在下反應(yīng)得到其中Y為N，N-二取代的氨基甲酰基的式(1)所示酮 (其中Y’和Y”各自表示氫原子，取代或未取代的烷基，鏈烯基，烷氧基，烷硫基，烷氧羰基，氰基，取代或未取代的芳族基團，取代或未取代的雜環(huán)基團，其中Y’和Y”可連在一起形成飽和或不飽和環(huán)，該環(huán)可含有一個雜原子，R1，R2，R3，R4，R5，X，Y和Z具有上面所定義的相同含意)。
用于上述方法(a)-(e)中的溶劑并無特別限制，并且可使用任何已知溶劑。通常使用的溶劑的典型實例包括醇類如甲醇和乙醇；醚類如二乙醚，二甲氧基乙烷，四氫呋喃和二噁烷；芳烴類如苯和甲苯；含氯溶劑如二氯甲烷，氯仿和四氯化碳；N，N-二甲基甲酰胺，二甲亞砜和Sulorane。
優(yōu)選如果需要，在反應(yīng)體系中存在鹵化氫清除劑，以除去以副產(chǎn)物出現(xiàn)的鹵化氫。對鹵化氫清除劑并無特別限制，并可使用常規(guī)的那些。鹵化氫清除劑的典型和優(yōu)選實例包括三烷基胺如三乙胺，三甲胺和三丙胺；吡啶，醇鈉(sodium alcoholato)，醇鉀，DBU，碳酸鈉，碳酸鉀，氫氧化鈉，氫氧化鉀和氫化鈉。
在方法(a)-(e)中的反應(yīng)優(yōu)選在-30℃至200℃的溫度下，優(yōu)選5-150℃下進行。反應(yīng)時間為0.5-45小時，優(yōu)選3-24小時。
用已知方法將酮腈衍生物(1)與反應(yīng)混合物分離并純化，對此并無特別限制。在通常情況下，優(yōu)選進行下列程序首先將反應(yīng)混合物與水混合，然后溶于有機溶劑中，再除去溶劑。殘余物由重結(jié)晶或柱色譜法提純。
一般來說，用于本發(fā)明的酮腈衍生物在室溫和大氣壓下是淺黃色或黃棕色粘稠物或固體物。
本發(fā)明的抗菌劑可制成各種劑形，并以各種給藥方法按照待給藥主體的種類，即哺乳動物，包括人類，家禽，魚類等，使用。
當人類為主體時，本發(fā)明的藥物經(jīng)口或非腸道給藥。此時，藥物可任意配成口服制劑如片劑，粉劑，粒劑，膠囊，液體，糖漿，酏劑和油基或水狀懸浮液；注射液；局部應(yīng)用制劑如液體，懸浮液，乳液，軟膏，凝膠，霜劑，洗劑和噴霧劑；以及栓劑。
若該藥物配成固體制劑，則可使用藥物上可接受的藥物載體，如填料，增量劑，粘合劑，崩解劑，增溶劑，潤濕劑，賦形劑和潤滑劑。
若該藥物配成注射液，則注射制品可含有增溶劑，防腐劑，增強劑和溶液助劑。此外，在置入容器后，注射制劑可凍干得到固體產(chǎn)品。它們在使用時可返回到注射液。盡管在單一容器內(nèi)可含有單一劑量，但多個劑量也可含于單一容器內(nèi)。
當配制液體制劑時，它們可含有懸浮劑，乳化劑或類似物。
為了對人類以外的哺乳動物、家禽或魚類給予本發(fā)明的抗菌劑，該藥物可直接口服或與飼料或飲用水混合或溶于其中。另外，該藥物可通過注射，經(jīng)直腸，乳房注射或藥浴(在魚類情況下)經(jīng)非腸道投藥。對于這些目的，該藥物可按需要適當?shù)刂瞥衫绶蹌?，粒劑，可溶性粉劑，糖漿，液體，注射液，栓劑和乳房注射液。
本發(fā)明的抗菌劑劑量對成人來說為50mg-1g，優(yōu)選100mg-600mg/天。當該藥物施予人類以外的哺乳動物、家禽或魚類時，劑量因給藥目的(治療或預防處理)，待治療主體的種類和大小，引起感染的細菌種類和感染的嚴重性而不同。通常，藥物的給藥量為1-200mg/天，優(yōu)選5-100mg/天/kg體重，每天一次給藥或分2-4次給藥。對于人類，動物和其他物種，劑量可根據(jù)疾病狀況，年齡和體重而改變。
本發(fā)明的抗菌劑對屬于葡萄球菌屬，鏈球菌屬，利斯特氏小菌屬，芽孢桿菌屬，梭菌屬，棒桿菌屬，丹毒絲菌屬，博德特氏菌屬，和巴斯德氏菌屬的細菌具有增強的抗菌活性。
因此，本發(fā)明的抗菌劑可有效地用于各種由上述細菌引起的疾病，包括例如毛囊炎，癤，癰，丹毒，淋巴管炎/淋巴結(jié)炎，膿腫，汗腺炎，肛門膿腫，乳腺炎，與創(chuàng)傷，燒傷或手術(shù)創(chuàng)傷有關(guān)的淺表繼發(fā)性感染，支氣管炎，肺炎，腎炎，膀胱炎，尿道炎，子宮內(nèi)感染，中耳炎， 炎，心內(nèi)膜炎，膿毒癥，炭疽和破傷風。本發(fā)明的抗菌劑也可有效地應(yīng)用于非人類動物的各種傳染疾病，包括例如家禽的葡萄球菌和梭菌感染，豬的鏈球菌感染，豬丹毒，豬的棒桿菌感染和梭菌感染，奶牛的乳腺炎，牛梭菌感染，狗和貓的膀胱炎和子宮膿腫，魚的鏈球菌感染和腸球菌感染，以及魚的pseudoluberculosis。
實施例下面用實施例來說明本發(fā)明，這些實施例不應(yīng)看作限制本發(fā)明。制備實施例14-[4-(3-氯-5-三氟甲基-2-吡啶氧基)苯氧基]-2-(2，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈(化合物號2)的制備將在N，N-二甲基甲酰胺(50ml)中的2-(2，4-二氯苯基)-4-(4-羥基苯氧基)-3-氧代戊腈的鉀鹽(3.2g)和2，3-二氯-5-三氟甲基吡啶(1.8g)在50℃下加熱4小時。然后減壓蒸除N，N-二甲基甲酰胺。殘余物與水混合，然后用氯仿萃取。萃取液濃縮。分離殘余物并用柱色譜法純化。結(jié)果得到白色固體狀標題化合物(產(chǎn)率60％)。制備實施例24-[4-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]-2-甲基苯基amidecarbonile-3-氧代戊腈(化合物號36)的制備將在二甲基甲酰胺(50ml)中的3，4-二氯三氟甲苯(2g)，4-[4-(4-羥基苯氧基)苯氧基]-2-甲基苯基amidecarbonile-3-氧代戊腈(3g)和碳酸鉀(3g)在160℃下加熱6小時。過濾反應(yīng)混合物并除去濾液。分離殘余物并用柱色譜法純化。結(jié)果得到淺黃色粘稠狀標題化合物(4.00g，產(chǎn)率83.2％)。制備實施例34-[4-(3-氯-5-三氟甲基吡啶氧基)苯氧基]-2-二芐基amidecarbonile-3-氧代戊腈(化合物號38)的制備將在苯(20ml)中的2-[4-(2-氯-5-三氟甲基-2-吡啶氧基)苯氧基]丙酰氯(3.00g)滴加到N，N-二芐基-2-氰基乙酰胺(1.20g)，DBU(1.44g)和苯(30ml)的混合溶液中。所得混合物在90℃下回流5小時。取出反應(yīng)混合物并用氯仿進行萃取。濃縮萃取液。分離殘余物并用柱色譜法提純，結(jié)果得到淺黃色粘稠狀標題化合物(2.08g，產(chǎn)率53.1％)。制備實施例4以類似于制備實施例1-3中所述的方式，制備標記為化合物號1-47的化合物。
包括在制備實施例1-3中所得到的化合物的化合物號1-47的化學結(jié)構(gòu)由下式表示。 對這些化合物所得到的分析數(shù)據(jù)示于表1-10中，其中取代基R1，R2，R3，R4，R5，X和Y也列入表中。在各表中，IR光譜數(shù)據(jù)是基于醚鍵和氰基的特征吸收值，而質(zhì)譜數(shù)據(jù)是分子離子峰(M+)和碎片峰。在表1-10中指示R2-R5取代位置的數(shù)字如上式的苯環(huán)所示，而且正如所看到的，這些數(shù)值并不對應(yīng)在化合物的命名中的數(shù)字。
表1
表2
表3
表4
表5
表6
表7
表8
表9 *化合物41，42和43是其中R2的氯原子在2位或3位的化合物的混合物。
表10 制備實施例5(1)將2-(3-羥基苯氧基)丙酸甲酯(8g)和3，4-二氯芐基氰(8.4g)溶于乙醇(100ml)中。往所產(chǎn)生的溶液中滴加由乙醇(15ml)和金屬鈉(3.1g)制備的乙醇鈉。加入完成后，回流混合物3小時，蒸發(fā)除去乙醇?；旌衔锢鋮s至室溫，加入水(100g)。使用鹽酸將混合物pH調(diào)為酸性，然后用乙酸乙酯進行萃取。有機層依次用水和飽和NaCl溶液洗滌，并用無水硫酸鎂干燥。減壓蒸除乙酸乙酯。柱色譜純化得到6.8g2-(3，4-二氯苯基)-4-(3-羥基苯氧基)-3-氧代戊腈(48％)。
(2)將由此得到的2-(3，4-二氯苯基)-4-(3-羥基苯氧基)-3-氧代戊腈(2g)溶于二甲基甲酰胺(DMF，30ml)中。往所產(chǎn)生的混合物中加入碳酸鉀(1.6g)和2，3-二氯-5-三氟甲基吡啶(1.3g)，然后于120℃下攪拌混合物2小時。隨后冷卻溶液至室溫。往冷卻的溶液中加入乙醚(150ml)。依次用稀HCl，水和飽和NaCl溶液洗滌混合物，并用無水硫酸鎂干燥。減壓蒸除乙醚。柱色譜純化得到1g4-[3-(3-氯-5-三氟甲基-2-吡啶氧基)苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈(32％)(化合物號101)。制備實施例6通過使用在制備實施例5(1)中得到的2-(3，4-二氯苯基)-4-(3-羥基苯氧基)-3-氧代戊腈和2-氯-5-三氟甲基吡啶，重復制備實施例5的程序。結(jié)果得到1g2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代-4-[3-(5-三氟甲基-2-吡啶氧基)苯氧基]戊腈(化合物號102)(32％)。制備實施例7(1)將氫化鈉(油狀，60％)(2.6g)置入燒瓶中。使用己烷將燒瓶內(nèi)容物反復潷析以除去油組分。將二甲基甲酰胺(DMF，50ml)加入到燒瓶中以懸浮氫化鈉。往懸浮液中逐漸加入3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯酚(16.9g)。所產(chǎn)生的混合物與2-氯丙酸甲酯(8.6g)混合，然后與碘化鉀(0.5g)混合。在80℃加熱攪拌混合物2小時。然后冷至室溫。加入乙醚(250ml)。依次用HCl，水和飽和NaCl溶液洗滌混合物，乙醚層用無水硫酸鎂干燥。減壓蒸除乙醚。柱色譜純化得到20.6g2-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]丙酸甲酯(93％)。
(2)將由此得到的2-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]丙酸甲酯和3，4-二氯芐基氰(1.5g)溶于乙醇(10ml)中。往所得溶液中滴加由乙醇(5ml)和金屬鈉(0.3g)制備的乙醇鈉?；亓髟撊芤?小時，然后室溫攪拌一夜。加入乙醚(150ml)。混合物用稀HCl，水和飽和NaCl溶液依次洗滌，并用無水硫酸鎂干燥。減壓蒸除乙醚。柱色譜純化得到0.9g4-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈(33％)(化合物號103)。制備實施例8通過使用在制備實施例7(1)中制備的2-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]丙酸甲酯(2g)和3-溴芐基氰(1.3g)，重復制備實施例7的程序。結(jié)果得到0.6g(20％)2-(3-溴苯基)-4-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]-3-氧代戊腈(化合物號104)。制備實施例9將在四氫呋喃(THF)中的苯基乙腈(0.7g)在室溫下滴加到溶于THF(10ml)中的二異丙基氨化鋰(2M，庚烷/THF/乙苯溶液)中。往所得混合物中滴加在THF中的2-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]丙酸甲酯(2g)，室溫攪拌混合物6小時。加入乙醚(150ml)。依次用稀HCl，水和飽和NaCl溶液洗滌混合物，并用無水硫酸鎂干燥。減壓蒸除乙醚。柱色譜法純化得到0.8g(31％)4-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]-3-氧代-2-苯基戊腈(化合物號105)。制備實施例10通過使用3-三氟甲基芐氰(1g)和2-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]丙酸甲酯(2g)，重復制備實施例9的程序。結(jié)果得到0.8g(31％)4-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]-3-氧代-2-(3-三氟甲基苯基)戊腈(化合物號106)。制備實施例11通過使用4-甲氧基芐氰(0.9g)和2-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]丙酸甲酯(2g)重復制備實施例9的程序。結(jié)果得到0.8g(29％)4-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]-2-(4-甲氧苯基)-3-氧代戊腈(化合物號107)。制備實施例12通過使用2，4-二氯芐氰(1.1g)和2-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]丙酸甲酯(2g)重復制備實施例7的程序。結(jié)果得到0.6g(21％)4-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]-2-(2，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈(化合物號108)。制備實施例13通過使用3-(3-溴-2-氟苯氧基)苯酚(5.5g)和2-氯丙酸甲酯(3.3g)，制備2-[3-(4-溴-2-氟苯氧基)苯氧基]丙酸甲酯(6.9g)(96％)。通過使用由此得到的2-[3-(4-溴-2-氟苯氧基)苯氧基]丙酸甲酯(1g)和3，4-二氯芐氰(0.7g)，重復制備實施例7的程序。結(jié)果得到0.2g(17％)4-[3-(4-溴-2-氟苯氧基)苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈(化合物號109)。制備實施例14通過使用2-[3-(4-溴-2-氟苯氧基)苯氧基]丙酸甲酯(2g)和3-氯芐氰(1g)，重復制備實施例7的程序。結(jié)果得到0.6g(23％)4-[3-(4-溴-2-氟苯氧基)苯氧基]-2-(3-氯苯基)-3-氧代戊腈(化合物號110)。制備實施例15通過使用2-[3-(4-溴-2-氟苯氧基)苯氧基]丙酸甲酯(2g)和3-溴芐氰(1g)，重復制備實施例7的程序。結(jié)果得到0.6g(21％)4-[3-(4-溴-2-氟苯氧基)苯氧基]-2-(3-溴苯基)-3-氧代戊腈(化合物號111)。制備實施例16通過使用5-甲基間苯二酚(11g)和3，4-二氯三氟甲苯(17g)制備3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-5-甲基苯酚(2.3g，9％)。然后，通過使用該產(chǎn)物和2-氯丙酸甲酯合成出2.3g2-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]丙酸甲酯(79％)。此外，通過使用該物質(zhì)和3，4-二氯芐氰(1.1g)得到0.2g(5％)4-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-5-甲基苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈(化合物號112)。制備實施例17通過使用5-甲氧基間苯二酚(10g)和3，4-二氯三氟甲苯(16g)合成3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-5-甲氧基苯酚(5.2g，23％)。然后通過使用該產(chǎn)品和2-氯丙酸甲酯合成出5.9g2-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-5-甲氧基苯氧基]丙酸甲酯(86％)。此外，通過使用該物質(zhì)(2g)和3，4-二氯芐氰(0.9g)得到0.4g(14％)4-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-5-甲氧基苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈(化合物號113)。制備實施例18通過使用4-氯間苯二酚(15g)和3，4-二氯三氟甲苯(19g)合成出3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-4-氯苯酚(11g，33％)。隨后通過使用該產(chǎn)品和2-氯丙酸甲酯合成出13g2-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-4-氯苯氧基]丙酸甲酯(93％)。此外，通過使用該物質(zhì)(2g)和1-萘基乙腈(0.8g)得到0.5g(19％)4-[5-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-2-氯苯氧基]-2-(1-萘基)-3-氧代戊腈(化合物號114)。制備實施例19將吡啶(0.79g)滴加入2-[5-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-2-硝基苯氧基]丙酰氯(2.12g)，2-吡啶基乙腈(0.65g)和無水甲苯(20ml)的混合物中。所得混合物于室溫下攪拌一天。然后濃縮，用10％HCl水溶液調(diào)為酸性。用乙酸乙酯進行萃取。濃縮萃取液。
殘余物用乙醚-乙酸乙酯重結(jié)晶。結(jié)果得到1.06g(41.9％)4-[5-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-2-硝基苯氧基]-3-氧代-2-(2-吡啶基)戊腈(化合物號115)。制備實施例20將無水THF(30ml)中的2，4-二氯苯基乙腈(0.93g)冷卻至-78℃。往該溶液中加入1.6M正丁基鋰-己烷溶液(3.5ml)。隨后將THF中的2-[5-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-2-硝基苯氧基]丙酰氯(2.12g)滴加到產(chǎn)生的混合物中。攪拌混合物30分鐘。加入10％HCl水溶液使混合物呈酸性。用乙酸乙酯萃取。有機層用無水硫酸鎂干燥并濃縮。
濃縮殘余物用硅膠色譜法純化。結(jié)果得到0.75g(26.3％)4-[5-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-2-硝基苯氧基]-2-(2，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈(化合物號116)。制備實施例21往金屬鈉(0.35g)溶于乙醇(50ml)所得的溶液中加入2-[5-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-2-硝基]丙酸乙酯(2.16g)和2，3-二氯苯基乙腈(0.93g)，混合物加熱回流4小時。濃縮反應(yīng)混合物，殘余物與10％HCl水溶液混合。用氯仿萃取，濃縮萃取液。殘余物用硅膠柱色譜法純化。結(jié)果得到1.86g(65.0％)4-[5-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-2-硝基苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈(化合物號117)。制備實施例22將3-[5-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-2-氯苯氧基]丙酸甲酯(2g)和3-溴芐氰(1g)溶于乙醇中。往所得混合物中滴加入通過使用乙醇和金屬鈉(0.3g)制備的乙醇鈉?；亓骰旌衔?小時，然后冷卻至室溫。加入乙醚。用稀HCl，水和飽和NaCl溶液依次洗滌混合物，然后用無水硫酸鎂干燥。濾除硫酸鎂，減壓蒸除乙醚。所得粗產(chǎn)物用柱色譜法純化，得到0.8g(28％)2-(3-溴苯基)-4-[5-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-2-氯苯氧基]-3-氧代戊腈(化合物號155)。制備實施例23往N-甲基哌嗪(0.5g)，三乙胺(0.87g)和二甲氧基乙烷(30ml)的溶液中滴加4-[5-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-2-硝基苯氧基]-2-氰基-3-氧代戊酰氯(2.45g)在二甲氧基乙烷(20ml)中的溶液。所得混合物在室溫下攪拌6小時，取出反應(yīng)混合物，用氯仿萃取。濃縮萃取液。殘余物用硅膠色譜法純化。結(jié)果得到2.11g(76.2％)4-[5-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-2-硝基苯氧基]-2-(4-甲基-1-哌嗪基羰基)-3-氧代戊腈(化合物號118)。制備實施例24以類似于制備實施例5-23的方式制備化物號118-217。
包括在制備實施例5-23中制備的化合物在內(nèi)的化合物號101-217的化學結(jié)構(gòu)由下式表示。 對這些化合物所得到的分析數(shù)據(jù)示于表11-34，其中取代基R1，R2，R3，R4，R5，X和Y也列入表中。在表中，IR光譜數(shù)據(jù)是基于醚鍵和氰基的特征吸收值，質(zhì)譜數(shù)據(jù)是分子離子峰(M+)和碎片峰。在表11-34中表示取代基R2-R5的取代位置的數(shù)字示于上式的苯環(huán)中，且正如所看到的，這些數(shù)字并不對應(yīng)化合物命名中的數(shù)字。
表11
表12
表13
表14
表15
表16
表17
表18
表19
表20
表21
表22
表23
表24
表25
表26
表27
表28
表29
表30
表31
表32
表33
表34 制備實施例25將4-甲基兒茶酚(12.4g)溶于六甲基磷酰胺中。往所得混合物中加入氫化鈉(油狀物，70％)(3.4g)，銅粉(3.0g)和3，4-二氯三氟甲苯(21.5g)，在160℃下攪拌4小時。過濾除去溶液中的銅粉，濾液中加入乙醚。用水洗滌乙醚層，之后減壓蒸除乙醚。殘余粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜法純化，得到2.6g2-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-4-甲基苯酚和2-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-5-甲基苯酚的混合物。將混合物溶于二甲基甲酰胺中。往該溶液中加入氫化鈉(0.34g)和2-氯丙酸甲酯(1.1g)并在80℃下攪拌2小時?；旌衔锢鋮s之后，加入乙醚，醚層用水洗滌。減壓蒸除乙醚，所得粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜純化，得到2.2g2-(2-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-4-甲基苯氧基]丙酸甲酯和2-[2-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-5-甲基苯氧基]丙酸甲酯的混合物。將該混合物溶于乙醇中，與1.1g3，4-二氯芐氰混合。加入由金屬鈉(0.4g)制備的乙醇鈉并在回流下加熱3小時。反應(yīng)混合物冷卻之后加入乙醚。醚層用水洗滌并減壓蒸除乙醚。所得粗產(chǎn)物用硅膠柱色譜法純化。結(jié)果得到0.5g4-[2-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-4-甲基苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈和4-[2-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-5-甲基苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈的混合物(化合物號308)。制備實施例26以類似于制備實施例25的方法制備化合物號301-310。
包括在制備實施例25中得到的化合物在內(nèi)的化合物號301-310的化學結(jié)構(gòu)由下式表示。 對這些化合物所得到的分析數(shù)據(jù)示于表35和36中，其中取代基R1，R2，R3，R4，R5，X和Y也列入表中。在表中，IR光譜數(shù)據(jù)是基于醚鍵和氰基的特征吸收值，而質(zhì)譜數(shù)據(jù)是分子離子峰(M+)和碎片峰。在表35和36中表示R2-R5取代位置的數(shù)字示于上式的苯環(huán)中，而且正如所看到的，這些數(shù)值并不對應(yīng)在化合物的命名中的數(shù)字。
表35 *化合物號303和304表示其中R2的氯原子在4-或5-位的化合物的混合物。
化合物號305表示其中R2的叔丁基在4-或5-位的化合物的混合物。
表36 *化合物號308和309表示其中R2的甲基在4-或5-位的化合物的混合物。
化合物號310表示其中R2的叔丁基在4-或5-位的化合物的混合物。實施例1(用于人類的膠囊)將下列組分裝入膠囊中以制備膠囊制劑。
表37組分 (用量，mg)酮腈衍生物(化合物號4) 100玉米淀粉 23CMC-Ca 22.5羥甲基纖維素 3硬脂酸鎂 1.5總計 150.0實施例2(用于飼料的粉狀添加劑)將下列組分混合以制備用于飼料的粉末添加劑。
表38組分 (用量，g)酮腈衍生物(化合物號4) 5-20輕質(zhì)硅酸酐 0.5玉米淀粉94.5-79.5總計100.0實施例3(急性毒性試驗)使用雄性小鼠(Slcddy，5周齡)試驗本發(fā)明酮腈衍生物(化合物號4)的急性毒性(LD50)。每5只小鼠一組，一次強行口服給予懸浮在0.5％CMC水溶液中的化合物，以使最終劑量為707；1,000；1,414；和2,000mg/kg。觀察小鼠14天。結(jié)果在口服給藥條件下測得LD50值大于2,000mg/kg。因而證實該化合物完全無毒。實施例4將適量樣品溶于二甲亞砜(DMSO)中，所得溶液用同樣量的無菌蒸餾水稀釋制得1,000μg/ml的本體樣品。將Mueller-Hinton肉湯(DIFCO的產(chǎn)品)分配到96孔微板的各孔中。然后將本體樣品加到一排的第一孔中，并用無菌蒸餾水連續(xù)稀釋(每次10倍)。單獨地，將已在上述肉湯中于37℃培養(yǎng)一夜的用于試驗的細菌細胞懸浮液(金黃色葡萄球菌209-P)接種到各孔中，以使最終接種量達106CFU/ml。最終的樣品濃度為100,10和1μg/ml。
由抑制濃度(下文縮寫為IC)來評價抗菌活性，在該濃度下，在37℃下培養(yǎng)18小時的細菌的繁殖得到抑制。通過培養(yǎng)基的濁度來確定抑制作用。表示法“IC≤100”，“≤10”和“≤1”分別表示在連續(xù)以兩倍稀釋樣品時得到的MIC當量值為100-10μg/ml，10-1μg/ml和不大于1μg/ml。結(jié)果示于表39中。在表39中，表示法“≤100”，“≤10”和“≤1”分別表示化合物在其濃度不大于100μg/ml，10μg/ml和1μg/ml下抑制細菌繁殖。(在以后實施例中，相應(yīng)地應(yīng)用同樣的規(guī)則)。
表39對金黃色葡萄球菌209-P的抗菌活性樣品號 樣品號 樣品號 樣品號 樣品號(IC)(IC) (IC) (IC) (IC)1 12 22 33 44(≤10) (≤100)(≤10) (≤10) (≤1)2 13 23 34 45(≤100) (≤100)(≤100)(≤10) (≤10)3 14 24 35 46(≤10) (≤100)(≤100)(≤10) (≤10)4 15 25 37 47(≤1) (≤10) (≤100)(≤100)(≤10)5 16 26 38 308(≤10) (≤100)(≤100)(≤10) (≤1)6 17 27 39 309(≤100) (≤100)(≤10) (≤100)(≤10)7 18 29 40(≤100) (≤100)(≤100)(≤100)8 19 30 41(≤100) (≤100)(≤100)(≤1)10 20 31 42(≤10) (≤100)(≤100)(≤1)11 21 32 43(≤100) (≤100)(≤100)(≤10)從表39可明顯看出，所有試驗樣品均有效地以不大于100μg/ml的濃度抑制細菌生長。此外，相當數(shù) 量的樣品在不大于10μg/ml或不大于1μg/ml的濃度下抑制細菌生長。實施例5以類似于實施例4所述方式測定本發(fā)明化合物的抗菌活性。用于試驗的細菌是金黃色葡萄球菌TI-1。結(jié)果示于表40。
表40對金黃色葡萄球菌TI-1的抗菌活性樣品號 樣品號 樣品號 樣品號 樣品號(IC) (IC) (IC)(IC)(IC)11222 33 46(≤10) (≤10)(≤10) (≤10) (≤1)21324 34 47(≤10) (≤100) (≤100)(≤10) (≤1)31425 35 308(≤10) (≤100) (≤100)(≤100) (≤1)41526 36 309(≤1)(≤10)(≤100)(≤10) (≤1)51627 37(≤10) (≤10)(≤10) (≤100)61728 41(≤100) (≤100) (≤100)(≤1)71829 42(≤10) (≤10)(≤100)(≤1)8 1930 43(≤10) (≤100) (≤100)(≤10)10 2031 44(≤10) (≤10)(≤100)(≤1)11 2132 45(≤100) (≤10)(≤100)(≤1)從表40可明顯看出，所有試驗樣品在不大于100μg/ml濃度下均有效地抑制細菌生長。此外，相當數(shù)量的樣品在不大于10μg/ml或1μg/ml的濃度下抑制細菌生長。實施例6以類似于實施例4所述的方式測定本發(fā)明化合物的抗菌活性。用于試驗的細菌是巴斯德氏菌Kobe-6(來源豬；多殺巴斯德氏菌)。結(jié)果示于表41 。
表41對多殺巴斯德氏菌(Kobe-6)的抗菌活性樣品號 樣品號 樣品號 樣品號(IC) (IC) (IC) (IC)115 41 47(≤100) (≤100) (≤10) (≤100)216 42 308(≤100) (≤100) (≤10) (≤10)317 43 309(≤100) (≤100) (≤10) (≤10)420 44(≤100) (≤100) (≤10)522 45(≤100) (≤100) (≤10)10 27 46(≤100) (≤100) (≤100)從表41可明顯看出，所有試驗樣品在不大于100μg/ml濃度下均有效抑制格蘭氏陰性細菌-多殺巴斯德氏菌的生長。實施例7以類似于實施例4所述的方式測定本發(fā)明化合物的抗菌活性。用于試驗的細菌是支氣管炎博德特氏菌(SM2-4)。結(jié)果示于表42中。
表42對支氣管炎博德特氏菌(SM2-4)的抗菌活性樣品號 樣品號 樣品號 樣品號(IC) (IC) (IC) (IC)2 9 14 16(≤100) (≤100) (≤100) (≤100)414243 44(≤100) (≤100) (≤100) (≤100)454647 308(≤100) (≤100) (≤100) (≤100)從表42可明顯看出，所有試驗樣品在不大于100μg/ml濃度下均有效抑制格蘭氏陰性細菌-支氣管炎博德特氏菌的生長。實施例8將適量樣品溶于二甲亞砜(DMSO)中，之后用相同量無菌蒸餾水稀釋所得溶液，制備出1,000μg/ml的本體樣品。單獨地，制備已在Mueller-Hinton肉湯(DIFCO的產(chǎn)品)中培養(yǎng)的用于試驗的細菌液體(從人分離出的抗甲氧西林的金黃色葡萄球菌(MRSA))并接種到含有樣品的Muller-Hinton瓊脂(DIFCO的產(chǎn)品)中，以使最終接種量達106CFU/ml。樣品最終濃度為100,10和1μg/ml。
在37℃培養(yǎng)18小時后，以類似于實施例4所述方式按IC評價抗菌活性。結(jié)果示于表43。
表43各種化合物對由人類分離的抗甲氧西林的金黃色葡萄球菌(MRSA)的抗菌活性菌株化合物號41 4243 44 4546 47308 309900056 ≤1 ≤10 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤10 ≤1 ≤1900048 ≤1 ≤1 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤10 ≤1 ≤1891187 ≤1 ≤1 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤10 ≤1 ≤1891185 ≤1 ≤1 ≤1 ≤1 ≤10 ≤10 ≤10 ≤1 ≤1891192 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤10 ≤10 ≤10 ≤1 ≤1891179 ≤1 ≤1 ≤1 ≤1 ≤10 ≤10 ≤10 ≤1 ≤10從表43可明顯看出，所有試驗樣品均在不大于10μg/ml的濃度下呈現(xiàn)對MRSA的抑制活性。實施例9通過使用本發(fā)明的酮腈衍生物(化合物號4)作樣品，按JapanChemotherapy Association認可的標準程序[“Chemotherapy”，29，76-79，1981，標題為“Revised Measurement of Minimum InhibitoryConcentration(MIC)”]由瓊脂板稀釋方法確定來自牛的金黃色葡萄球菌和巴斯德氏菌的最小抑制濃度(MIC)。將樣品溶于二甲亞砜并用相同量的無菌蒸餾水稀釋以制備1000μg/ml的本體樣品液。使用無菌蒸餾水將該本體液稀釋成一系列2倍稀釋液。
單獨地，預先將表18所示用于試驗的細菌細胞懸浮液在37℃下于Mueller-Hinton肉湯(DIFCO)中培養(yǎng)18-20小時。通過使用Mueller-Hinton肉湯控制它們以使細菌量為106CFU/ml。由此控制的液體接種到含樣品的Muller-Hinton瓊脂板上，然后于37℃培養(yǎng)18小時。不再觀察到細菌生長的濃度設(shè)為MIC。結(jié)果示于表44。
表44化合物號4對來自牛的金黃色葡萄球菌和巴斯德氏菌的抗菌活性測試細菌 來源MIC(ug/m1)金黃色葡萄球菌209P 標準株1.56金黃色葡萄球菌TI-1 牛6.25金黃色葡萄球菌3-2豬3.13金黃色葡萄球菌1SS1 雞3.13溶血巴斯德 氏菌1F-15牛6.25多殺巴斯德 氏菌1F-17牛1.56從表44可明顯看出，MIC值在1.56-6.25μg/ml范圍內(nèi)，表明對所測試的各個細菌具有高抗菌活性。實施例10通過使用本發(fā)明的酮腈衍生物(化合物號4)作樣品，按JapanChemotherapy Association認可的標準程序[“Chemotherapy”，29，76-79，1981，標題為“Revised Measurement of Minimum InhibitoryConcentration(MIC)”]由微液稀釋法確定各細菌株的最小抑制濃度(MIC)。將樣品溶于二甲亞砜中并用相同量的無菌蒸餾水釋釋制備1000μg/ml的本體樣品液。將該本體樣品于37℃在Mueller-Hin-ton肉湯中培養(yǎng)18小時。結(jié)果示于表45中。
表45化合物號4對各種細菌株的抗菌活性測試細菌 MIC(ug/ml)金黃色葡萄球菌SMITH 3.13*金黃色葡萄球菌M5-1 3.13*金黃色葡萄球菌M5-2 3.13表皮葡萄球菌56556 6.25釀膿鏈球菌G-36 6.25緩癥鏈球菌11D 685 12.5Enterococcus faecalis ATCC 194336.25枯草芽孢桿菌ATCC66333.13*抗甲氧西林的金黃色葡萄球菌從表45明顯看出，本發(fā)明衍生物對病理格蘭氏陽性細菌(包括抗甲氧西林的葡萄球菌)具有高活性。尤其本發(fā)明衍生物對抗甲氧西林的金黃色葡萄球菌有效。實施例11(用于人類的膠囊)將下列組分裝入膠囊以制備膠囊制劑。
表46組分(用量，mg)酮腈衍生物(化合物號155) 100玉米淀粉 23CMC-Ca22.5羥甲基纖維素 3硬脂酸鎂 1.5合計 150.0實施例12(用于飼料的粉末添加劑)混合下列組分以制備用于飼料的粉末添加劑。
表47組分 (用量，g)酮腈衍生物(化合物號155) 5-20輕質(zhì)硅酸酐0.5玉米淀粉 94.5-79.5合計 100.0實施例13(急性毒性試驗)使用雄性小鼠(Slcddy，5周齡)來試驗本發(fā)明的酮腈衍生物(化合物號103和155)的急性毒性(LD50)。對每組5只小鼠一次強行經(jīng)口投予懸浮在0.5％CMC水溶液中的化合物，以使最終劑量達到500,1000,1500和2000mg/kg。觀察小鼠14天。結(jié)果測得LD50值高于2000mg/kg。因而證實這些化合物完全無毒。實施例14(吸收試驗)對小鼠使用本發(fā)明的酮腈衍生物(化合物號103和155)通過以100mg/kg體重的量給予衍生物進行吸收試驗。給予化合物1，3，5和24小時后取出血液并分離血清。用HPLC測定血清中化合物濃度。結(jié)果是化合物號155和化合物號101在給藥1小時和3小時后分別達到最大濃度。因此，兩種酮腈衍生物被經(jīng)口給藥快速吸收。實施例15以類似于實施例8所述方式測定表48所示酮腈衍生物的抗菌活性。用于試驗的細菌是金黃色葡萄球菌(209-P)。結(jié)果示于表48。
表48對金黃色葡萄球菌209-P的抗菌活性樣品號樣品號樣品號樣品號樣品號(IC) (IC) (IC) (IC) (IC)102109 137 171211(≤10) (≤10)(≤100) (≤10) (≤10)103110 151 172212(≤1) (≤10)(≤1) (≤100)(≤1)104111 152 175213(≤1) (≤10)(≤1) (≤10) (≤10)105112 155 207214(≤10) (≤1) (≤1) (≤1) (≤10)106116 156 208215(≤10) (≤10)(≤10)(≤10) (≤10)107134 169 209216(≤100)(≤00)(≤100) (≤10) (≤10)108136 170 210217(≤10) (≤100) (≤10)(≤10) (≤10)從表48可明顯看出，所有試驗樣品在不大于100μg/ml濃度下均有效抑制細菌生長。此外，相當數(shù)量的樣品在不大于10μg/ml或1μg/ml的濃度下抑制細菌生長。實施例16以類似于實施例8所述方式測定本發(fā)明化合物的抗菌活性。用于試驗的細菌是金黃色葡萄球菌(TI-1)。結(jié)果示于表49。
表49對金黃色葡萄球菌(TI-1)的抗菌活性樣品號 樣品號 樣品號樣品號 樣品號(IC) (IC)(IC) (IC) (IC)102108134170212(≤1) (≤10) (≤100)(≤10) (≤1)103109137207213(≤1) (≤1) (≤100)(≤1) (≤10)104 110151 208214(≤1) (≤10) (≤1) (≤10) (≤1)105 111152 209215(≤10) (≤10) (≤1) (≤10) (≤1)106 112155 210216(≤10) (≤1) (≤1) (≤10) (≤1)107 116169 211217(≤100) (≤10) (≤100) (≤10) (≤10)108 136170 210217(≤10) (≤100)(≤10)(≤10) (≤10)從表49可明顯看出，所有試驗樣品在不大于100μg/ml濃度下均有效抑制細菌生長。此外，相當數(shù)量的樣品在不大于10μg/ml或1μg/ml的濃度下抑制細菌生長。實施例17以類似于實施例8所述方式測定本發(fā)明化合物的抗菌活性。用于試驗的細菌是巴斯德氏菌Kobe-6(來源豬，多殺巴斯德氏菌)。結(jié)果示于表50。
表50對多殺巴斯德氏菌(Kobe-6)的抗菌活性樣品號樣品號 樣品號樣品號樣品號(IC) (IC)(IC) (IC) (IC)103109134155211(≤10) (≤10) (≤100)(≤100)(≤10)104110135156212(≤10) (≤100)(≤100)(≤100)(≤10)105111137170213(≤100)(≤100)(≤100)(≤100)(≤10)106112151209214(≤100)(≤1) (≤100)(≤10) (≤100)108116152210215(≤100)(≤10) (≤10) (≤100)(≤10)216- - - - (≤100)217- - - - (≤100)
從表50可明顯看出，所有試驗樣品在不大于100ug/ml濃度下均有效抑制格蘭氏陰性細菌-多殺巴斯德氏菌的生長。實施例18以類似于實施例8所述的方式測定本發(fā)明化合物的抗菌活性。用于試驗的細菌是支氣管炎博德特氏菌(S1)和支氣管炎博德特氏菌(SM2-4)。結(jié)果示于表51 。
表51對支氣管炎博德特氏菌(S1)的抗菌活性樣品號 樣品號(IC) (IC)112 212(≤100) (≤100)155 213(≤100) (≤100)對支氣管炎博德特氏菌(SM1-4)的抗菌活性樣品號 樣品號(IC) (IC)112 212(≤100) (≤100)155 213(≤100) (≤100)從表51可明顯看出，試驗樣品在不大于100ug/ml的濃度下有效抑制格蘭氏陰性細菌-支氣管炎博德特氏菌的生長。實施例19以類似于實施例8所述的方式測量表52所示各種酮腈衍生物的抗菌活性。用于試驗的細菌是來自人的抗甲氧西林的金黃色葡萄球菌(MRSA)。結(jié)果示于表52。
表52 各種化合物對從人類分離的抗甲氧西林的金黃色葡萄球菌(MRSA)的抗菌活性菌株/樣品 化合物號103104105109110111112155900056≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤1≤1900048≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤1≤1891187≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤1≤1891185≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤1≤1891192≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤1≤1891179≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤1≤1菌株/樣品 化合物號209210211212213214215216217900056≤10 ≤10 ≤10 ≤1≤10 ≤1≤1≤1≤10900048≤10 ≤10 ≤10 ≤1≤10 ≤1≤10 ≤1≤10891187≤10 ≤10 ≤10 ≤1≤1≤1≤10 ≤1≤10891185≤10 ≤10 ≤10 ≤1≤1≤1≤1≤1≤10891192≤10 ≤10 ≤10 ≤1≤1≤10 ≤1≤10 ≤10891179≤10 ≤10 ≤10 ≤1≤10 ≤1≤10 ≤10 ≤10從表52可明顯看出，所有試驗樣品在不大于10ug/ml濃度下均有效抑制MRSA的細菌生長。實施例20以類似于實施例8所述的方式，測量表53-55所示各種酮腈衍生物的抗菌活性。用于試驗的細菌是來自魚的腸球菌和巴斯德氏菌。培養(yǎng)條件是培養(yǎng)基含1.5％NaCl，培養(yǎng)溫度為25℃。結(jié)果示于表53-55。
表53各種化合物對從魚分離的腸球菌和巴斯德氏菌的抗菌活性(1)化合物號414243308 309155 134 135116EnterococcusSeriolicida MS89060≤1 ≤1 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤100 ≤100 ≤10EnterococcusSeriolicida MS89064≤1 ≤1 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤100 ≤100 ≤10EnterococcusSeriolicida MS89066≤1 ≤1 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤100 ≤100 ≤10EnterococcusSeriolicida MS89068≤1 ≤1 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤100 ≤100 ≤10EnterococcusSeriolicida KG86050≤1 ≤1 ≤1 ≤1 ≤1 ≤100 ≤100 ≤10EnterococcusSeriolicida HI ≤1 ≤1 ≤1 ≤1 ≤1≤1 ≤100 ≤100 ≤10EnterococcusSeriolicida SE94-001 ≤1 ≤1 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤100 ≤100 ≤10EnterococcusSeriolicida SE94-002 ≤1 ≤1 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤100 ≤100 ≤10EnterococcusSeriolicida SE94-003 ≤1 ≤1 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤100 ≤100 ≤10EnterococcusSeriolicida SE94-004 ≤1 ≤1 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤100 ≤100 ≤10EnterococcusSeriolicida SE94-005 ≤1 ≤1 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤100 ≤100 ≤10Pasteurellapiscicida KP94-02 ≤10 ≤10 ≤10 ≤100 ≤100 ≤100 ≤100Pasteurellapiscicida KP94-04 ≤10 ≤10 ≤10 ≤100 ≤100 ≤100 ≤100Pasteurellapiscicida KP94-05 ≤10 ≤10 ≤10 ≤100 ≤100 ≤100 ≤100Pasteurellapiscicida KP94-06 ≤10 ≤10 ≤10 ≤100 ≤100 ≤100 ≤100
表54 各種化合物對從魚分離的腸球菌和巴斯德氏菌的抗菌活性(2)化合物號103105106108109110111112209EnterococcusSeriolicida MS89060≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida MS89064≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida MS89066≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida MS89068≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida KG86050≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida HI ≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida SE94-001 ≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida SE94-002 ≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida SE94-003 ≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida SE94-004 ≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida SE94-005 ≤1≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10 ≤10Pasteurellapiscicida KP94-02 ≤10 ≤100 ≤100 ≤100 ≤10 ≤100 ≤100 ≤10 ≤100Pasteurellapiscicida KP94-04 ≤10 ≤100 ≤100 ≤100 ≤10 ≤100 ≤100 ≤10 ≤100Pasteurellapiscicida KP94-05 ≤10 ≤100 ≤100 ≤100 ≤10 ≤100 ≤100 ≤10 ≤100Pasteurellapiscicida KP94-06 ≤10 ≤100 ≤100 ≤100 ≤10 ≤100 ≤100 ≤10 ≤100
表55各種化合物對從魚分離的腸球菌和巴斯德氏菌的抗菌活性(3)化合物號210211212 213 214215 216217EnterococcusSeriolicida MS89060≤10 ≤10 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida MS89064≤10 ≤10 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida MS89066≤10 ≤10 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida MS89068≤10 ≤10 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida KG86050≤10 ≤10 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida HI ≤10 ≤10 ≤1 ≤1 ≤1≤1 ≤1≤10EnterococcusSeriolicida SE94-001 ≤10 ≤10 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida SE94-002 ≤10 ≤10 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida SE94-003 ≤10 ≤10 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida SE94-004 ≤10 ≤10 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤10 ≤10EnterococcusSeriolicida SE94-005 ≤10 ≤10 ≤1 ≤1 ≤10 ≤1 ≤10 ≤10Pasteurellapiscicida KP94-02 ≤100 ≤100 ≤10 ≤10Pasteurellapiscicida KP94-04 ≤100 ≤100 ≤10 ≤10Pasteurellapiscicida KP94-05 ≤100 ≤100 ≤10 ≤10Pasteurellapiscicida KP94-06 ≤100 ≤100 ≤10 ≤10從表53-55可明顯看出，所有試驗樣品在不大于100ug/ml的濃度下均有效抑制各種細菌的生長。
工業(yè)應(yīng)用性如前所述，本發(fā)明的抗菌劑對格蘭氏陽性和格蘭氏陰性細菌具有優(yōu)異的抗菌活性。尤其值得注意的是本發(fā)明的抗菌劑對包括抗甲氧西林的金黃色葡萄球菌(MRSA)在內(nèi)的病理葡萄球菌有效。因此，本發(fā)明的抗菌劑可用于預防和治療由格蘭氏陰性細菌或格蘭氏陽性細菌引起的人類和包括人類以外的哺乳動物，家禽和魚類在內(nèi)的動物的各種傳染性疾病。
權(quán)利要求
1.一種抗菌劑，含有下式(1)所示酮腈衍生物或其鹽作活性成分 其中R1為氫原子或低級烷基，各R2、R3、R4和R5相同或互不相同，為氫原子，鹵素原子，硝基，低級烷基，低級烷氧基，或取代的或未取代的苯氧基，X為取代的或未取代的芳烴基團或取代或未取代的雜環(huán)基團，Y為取代或未取代的芳烴基團，取代或未取代的雜環(huán)基團，由取代或未取代的芳烴基團或由取代或未取代的雜環(huán)基團取代的羰基，或N，N-二取代的氨基甲?；?。
2.一種抗菌劑，含有下式(2)所示的酮腈衍生物或其鹽作活性成分 其中R1為氫原子或低級烷基，各R2、R3、R4和R5相同或互不相同，為氫原子，鹵素原子，硝基，低級烷基，低級烷氧基，或取代的或未取代的苯氧基，X為取代的或未取代的芳烴基團或取代或未取代的雜環(huán)基團，Y為取代或未取代的芳烴基團，取代或未取代的雜環(huán)基團，由取代或未取代的芳烴基團或由取代或未取代的雜環(huán)基團取代的羰基，或N，N-二取代的氨基甲?；?。
3.一種抗菌劑，含有下式(3)所示的酮腈衍生物或其鹽作活性成分 其中R1為氫原子或低級烷基，各R2、R3、R4和R5相同或互不相同，為氫原子，鹵素原子，硝基，低級烷基，低級烷氧基，或取代的或未取代的苯氧基，X為取代的或未取代的芳烴基團或取代或未取代的雜環(huán)基團，Y為取代或未取代的芳烴基團，取代或未取代的雜環(huán)基團，由取代或未取代的芳烴基團或由取代或未取代的雜環(huán)基團取代的羰基，或N，N-二取代的氨基甲?；?br> 4.一種抗菌劑，含有下式(4)所示的酮腈衍生物或其鹽作活性成分 其中R1為氫原子或低級烷基，各R2、R3、R4和R5相同或互不相同，為氫原子，鹵素原子，硝基，低級烷基，低級烷氧基，或取代的或未取代的苯氧基，X為取代的或未取代的芳烴基團或取代或未取代的雜環(huán)基團，Y為取代或未取代的芳烴基團，取代或未取代的雜環(huán)基團，由取代或未取代的芳烴基團或由取代或未取代的雜環(huán)基團取代的羰基，或N，N-二取代的氨基甲?；?br> 5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項的抗菌劑，其中X和Y各自為取代或未取代的芳烴基團或取代或未取代的芳雜環(huán)基團。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項的抗菌劑，其中X是取代或未取代的苯基，取代或未取代的吡啶基，取代或未取代的苯并噁唑基，或取代或未取代的苯并噻唑基，Y是取代或未取代的苯基，取代或未取代的嘧啶基，取代或未取代的噻吩基，或取代或未取代的萘基，或N，N-二取代的氨基甲酰基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項的抗菌劑，其中X是可被鹵素原子，鹵代烷基或氰基取代的苯基；可被鹵素原子，鹵代烷基或氰基取代的吡啶基；可被鹵素原子，鹵代烷基或氰基取代的苯并噁唑基；或可被鹵素原子，鹵代烷基或氰基取代的苯并噻唑基；Y為可被鹵素原子，鹵代烷基，烷基或烷氧基取代的苯基；可被鹵素原子，鹵代烷基，烷基或烷氧基取代的嘧啶基；可被鹵素原子，鹵代烷基，烷基或烷氧基取代的噻吩基；或可被鹵素原子，鹵代烷基，烷基或烷氧基取代的萘基；被低級烷基，芳基或芳烷基取代的N，N-二取代的氨基甲?；?；或可與苯環(huán)稠合或可用烷基取代的1-氮雜環(huán)烷基羰基。
8.根據(jù)權(quán)利要求2的抗菌劑，其中在式(2)中，X為取代或未取代的吡啶基，Y為取代或未取代的苯基，取代或未取代的嘧啶基，或N，N-二取代的氨基甲?；?br> 9.根據(jù)權(quán)利要求2的抗菌劑，其中在式(2)中，X為取代或未取代的苯基，Y為取代或未取代的嘧啶基，或N，N-二取代的氨基甲?；?。
10.根據(jù)權(quán)利要求2的抗菌劑，其中在式(2)中，X為取代或未取代的苯并噁唑基或取代或未取代的苯并噻唑基，Y為取代或未取代的苯基。
11.一種抗菌劑，含有如下化合物或其任一種的鹽作活性成分4-[4-(3-氯-5-三氟甲基-2-吡啶氧基)苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈，2-(3-溴苯基)-4-[2-氯-5-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]-3-氧代戊腈，4-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈，4-[3-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-5-甲基苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈，4-[2-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-4-甲基苯氧基]-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈，4-[2-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-5-甲基苯氧基)-2-(3，4-二氯苯基)-3-氧代戊腈，4-[2-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-4-甲基苯氧基]-2-(3-溴苯基)-3-氧代戊腈，4-[2-(2-氯-4-三氟甲基苯氧基)-5-甲基苯氧基]-2-(3-溴苯基)-3-氧代戊腈。
12.根據(jù)權(quán)利要求3的抗菌劑，其中在式(3)中，X為取代或未取代的芳烴基團或取代或未取代的芳雜環(huán)基團。
13.根據(jù)權(quán)利要求3的抗菌劑，其中在式(3)中，X為取代或未取代的苯基，或取代或未取代的吡啶基。
14.根據(jù)權(quán)利要求3的抗菌劑，其中在式(3)中，X為已用鹵素原子或鹵代烷基取代的苯基，或已用鹵素原子或鹵代烷基取代的吡啶基。
15.根據(jù)權(quán)利要求3的抗菌劑，其中在式(3)中，Y為取代或未取代的苯基，取代或未取代的萘基，取代或未取代的吡啶基，或N，N-二取代的氨基甲?；?。
16.根據(jù)權(quán)利要求3的抗菌劑，其中在式(3)中，Y為用鹵素原子或鹵代烷基取代的苯基。
17.根據(jù)權(quán)利要求3的抗菌劑，其中在式(3)中，X為取代的苯基或取代的吡啶基，Y為取代或未取代的苯基，取代或未取代的吡啶基，或N，N-二取代的氨基甲?；?。
18.根據(jù)權(quán)利要求3的抗菌劑，其中在式(3)中，X為鹵素原子或鹵代烷基取代的苯基或鹵素原子或鹵代烷基取代的吡啶基，而Y為由鹵素原子，鹵代烷基或烷氧基取代的苯基。
19.根據(jù)權(quán)利要求4的抗菌劑，其中在式(4)中，X為取代或未取代的芳烴基團或取代或未取代的芳雜環(huán)基團。
20.根據(jù)權(quán)利要求4的抗菌劑，其中在式(4)中，X為取代或未取代的苯基或取代或未取代的吡啶基。
21.根據(jù)權(quán)利要求4的抗菌劑，其中在式(4)中，X為被鹵素原子或鹵代烷基取代的苯基；或鹵素原子或鹵代烷基取代的吡啶基。
22.根據(jù)權(quán)利要求4的抗菌劑，其中在式(4)中，X為可被素原子或鹵代烷基取代的苯基。
23.根據(jù)權(quán)利要求4的抗菌劑，其中在式(4)中，Y為取代或未取代的苯基，取代或未取代的萘基或取代或未取代的吡啶基。
24.根據(jù)權(quán)利要求4的抗菌劑，其中在式(4)中，Y為用鹵素原子或鹵代烷基取代的苯基。
25.一種藥物組合物，含有如權(quán)利要求1所述的酮腈衍生物或其鹽以及一種藥物上可接受的載體。
26.一種抗菌藥物組合物，含有如權(quán)利要求1所述的酮腈衍生物或其鹽以及一種藥物上可接受的載體。
27.如權(quán)利要求1所述的酮腈衍生物或其鹽作抗菌劑的用途。
28.根據(jù)權(quán)利要求27的用途，其中抗菌劑用于動物和人類。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種抗菌劑，含有下式(1)所示酮腈衍生物或其鹽作活性成分(見式(I))，(其中R
文檔編號C07D409/12GK1151696SQ9519382
公開日1997年6月11日 申請日期1995年6月28日 優(yōu)先權(quán)日1994年6月29日
發(fā)明者加藤祥三, 山口真男, 長田圣士, 北島敏夫, 板鼻秀信, 古木真貴子, 大室史夫, 大原英治, 石崎雅彥 申請人:第一制藥株式會社