專利名稱：一種制備高純黃芪多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物多糖的制備方法，尤其涉及一種從中藥黃芪中分離制備高純黃芪多糖的方法。
背景技術(shù)：
黃芪(Radix Astragali)別名綿黃芪，英文MilkvetchRoot，為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao的根。黃芪具有補(bǔ)氣固表，托毒排膿，利尿，斂瘡生肌的功效；臨床常用于氣虛乏力、久瀉脫肛、自汗、水腫、子官脫垂、慢性腎炎蛋白尿、糖尿病、瘡口久不愈合等病癥。
近幾十年來，人們發(fā)現(xiàn)從植物中提取的多糖具有非常重要與特殊的生理活性。這些多糖參與了生命科學(xué)中細(xì)胞的各種活動(dòng)，具有多種多樣的生物學(xué)功能，其中黃芪多糖就是這些多糖中研究得比較深入的一種。
黃芪多糖是中藥黃芪的有效成分之一，由中藥黃芪分離得到，現(xiàn)代科學(xué)研究證實(shí)黃芪多糖具有增強(qiáng)免疫功能，保護(hù)心血管系統(tǒng)，雙向調(diào)節(jié)血糖和降血壓等多種藥理作用。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，黃芪多糖可刺激脾細(xì)胞增殖，提高LAK細(xì)胞和NK細(xì)胞活性，糾正環(huán)磷酰胺所致的免疫功能低下；另有實(shí)驗(yàn)證實(shí)它可改善機(jī)體物質(zhì)代謝，糾正垂體后葉引起的大鼠急性心肌缺血，使ST段升高，T波倒置減輕等。提示黃芪多糖極具醫(yī)藥價(jià)值，可廣泛用于糾正癌癥患者化療免疫力低下，防治糖尿病患者的心血管病變及治療胃炎等疾病。在我國這類病人數(shù)量日趨龐大，但目前有效的防治手段不多，因此，黃芪多糖制備及其產(chǎn)品的開發(fā)與應(yīng)用對臨床極為迫切。
雖然涉及黃芪多糖提取分離方法的報(bào)道也有，但其得到的黃芪多糖產(chǎn)品較為粗燥，純度不高，已無法滿足目前日益提高的制劑制備要求，鑒于此，創(chuàng)立一種從中藥黃芪中分離制備高純黃芪多糖的方法應(yīng)是黃芪多糖研究的當(dāng)務(wù)之急。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明要解決的問題是提供一種從中藥黃芪中分離制備高純黃芪多糖的方法。
本發(fā)明的制備高純黃芪多糖的方法，由下述步驟組成(1)將黃芪粉碎至顆粒直徑為200～300μm，與水以質(zhì)量比計(jì)，按1∶6～10的量浸于蒸餾水中，50～75℃進(jìn)行恒溫微波提取，提取條件微波功率250W，時(shí)間11～15分鐘，重復(fù)2～3次；(2)以3000～5000rpm離心(1)所述提取混合液12～16min，取上清液，以活性炭脫色，得黃芪多糖水提物溶液；(3)濃縮黃芪多糖水提物溶液至比重為1.15～1.25；(4)以濃縮后黃芪多糖水提物溶液體積6～8倍的量，向黃芪多糖水提物溶液中加入70％～95％乙醇，攪拌20～36min；
(5)以3000～5000rpm離心(4)所述攪拌混合液12～16min，取沉淀并用蒸餾水溶稀至比重為1.05～1.15的溶液；(6)選取內(nèi)徑和高度比為1∶30～50的層析柱；向柱內(nèi)加入葡聚糖凝膠，加入量為柱體積的65％～85％；(7)凝膠過濾層析步驟(5)的溶液，洗脫液為蒸餾水，流速為0.3～0.6ml/min，以波長為280nm檢測收集液，選擇吸收峰洗脫液收集，即得黃芪多糖的提取液；(8)常規(guī)真空冷凍干燥黃芪多糖的提取液，得高純黃芪多糖。
上述制備高純黃芪多糖的方法中，步驟(1)所述溫度優(yōu)選60～65℃。
上述制備高純黃芪多糖的方法中，步驟(2)或(5)所述離心速度優(yōu)選4000rpm，離心時(shí)間優(yōu)選15min。
上述制備高純黃芪多糖的方法中，步驟(6)所述層析柱的內(nèi)徑和高度比優(yōu)選1∶35～45。
上述制備高純黃芪多糖的方法中，步驟(6)所述向柱內(nèi)加入的具有分子篩作用的葡聚糖凝膠量優(yōu)選為柱體積的70％～80％。
上述制備高純黃芪多糖的方法中，步驟(6)所述葡聚糖凝膠選用SephadexG-150或SephadexG-200。
其中，步驟(6)所述葡聚糖凝膠最優(yōu)選Sephadex6-150。
上述制備高純黃芪多糖的方法中，步驟(7)所述流速優(yōu)選0.4ml/min。
利用本發(fā)明提出的制備高純黃芪多糖的方法，可以制備出純度達(dá)93％以上的黃芪多糖，根本解決了黃芪多糖分離難，純度低，質(zhì)量不穩(wěn)定的不足，且本發(fā)明的方法設(shè)備及環(huán)境要求低，方法簡便，成本低，靈活實(shí)用，利于推廣、開發(fā)和應(yīng)用。
采用本發(fā)明的分離純化方法制備出的黃芪多糖在臨床應(yīng)用和保健食品開發(fā)上將有很廣闊的前景。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1(1)將黃芪粉碎至顆粒直徑為200～300μm，與水以質(zhì)量比計(jì)，按1∶8的量浸于蒸餾水中，65℃進(jìn)行恒溫微波提取，提取條件微波功率250W，時(shí)間13分鐘，重復(fù)3次；(2)以4000rpm離心(1)所述提取混合液15min，取上清液，以活性炭脫色，得黃芪多糖水提物溶液；(3)濃縮黃芪多糖水提物溶液至比重為1.15～1.20；(4)以濃縮后黃芪多糖水提物溶液體積7倍的量，向黃芪多糖水提物溶液中加入85％乙醇，攪拌26min；(5)以4000rpm離心(4)所述攪拌混合液15min，取沉淀并用蒸餾水溶稀至比重為1.05～1.10的溶液；
(6)選取內(nèi)徑和高度比為1∶40的層析柱；向柱內(nèi)加入SephadexG-150葡聚糖凝膠，加入量為柱體積的75％；(7)凝膠過濾層析步驟(5)的溶液，洗脫液為蒸餾水，流速為0.4ml/min，以波長為280nm檢測收集液，選擇吸收峰洗脫液收集，即得黃芪多糖的提取液；(8)常規(guī)真空冷凍干燥黃芪多糖的提取液，得高純黃芪多糖。
實(shí)施例2(1)將黃芪粉碎至顆粒直徑為200～300μm，與水以質(zhì)量比計(jì)，按1∶6的量浸于蒸餾水中，75℃進(jìn)行恒溫微波提取，提取條件微波功率250W，時(shí)間11分鐘，重復(fù)2次；(2)以3000rpm離心(1)所述提取混合液16min，取上清液，以活性炭脫色，得黃芪多糖水提物溶液；(3)濃縮黃芪多糖水提物溶液至比重為1.15～1.2；(4)以濃縮后黃芪多糖水提物溶液體積6倍的量，向黃芪多糖水提物溶液中加入70％乙醇，攪拌20min；(5)以3000rpm離心(4)所述攪拌混合液16min，取沉淀并用蒸餾水溶稀至比重為1.05～1.1的溶液；(6)選取內(nèi)徑和高度比為1∶30的層析柱；向柱內(nèi)加入SephadexG-200葡聚糖凝膠，加入量為柱體積的65％；(7)凝膠過濾層析步驟(5)的溶液，洗脫液為蒸餾水，流速為0.6ml/min，以波長為280nm檢測收集液，選擇吸收峰洗脫液收集，即得黃芪多糖的提取液；(8)常規(guī)真空冷凍干燥黃芪多糖的提取液，得高純黃芪多糖。
實(shí)施例3(1)將黃芪粉碎至顆粒直徑為200～300μm，與水以質(zhì)量比計(jì)，按1∶10的量浸于蒸餾水中，50℃進(jìn)行恒溫微波提取，提取條件微波功率250W，時(shí)間15分鐘，重復(fù)3次；(2)以5000rpm離心(1)所述提取混合液12min，取上清液，以活性炭脫色，得黃芪多糖水提物溶液；(3)濃縮黃芪多糖水提物溶液至比重為1.2～1.25；(4)以濃縮后黃芪多糖水提物溶液體積6～8倍的量，向黃芪多糖水提物溶液中加入95％乙醇，攪拌36min；(5)以5000rpm離心(4)所述攪拌混合液12min，取沉淀并用蒸餾水溶稀至比重為1.1～1.15的溶液；(6)選取內(nèi)徑和高度比為1∶50的層析柱；向柱內(nèi)加入SephadexG-150葡聚糖凝膠，加入量為柱體積的85％；(7)凝膠過濾層析步驟(5)的溶液，洗脫液為蒸餾水，流速為0.3ml/min，以波長為280nm檢測收集液，選擇吸收峰洗脫液收集，即得黃芪多糖的提取液；(8)常規(guī)真空冷凍干燥黃芪多糖的提取液，得高純黃芪多糖。
本發(fā)明中涉及的微波提取設(shè)備為WTS03-1型(南京杰全微波設(shè)備有限公司)，或者M(jìn)AS-I型(常壓微波輔助合成/萃取反應(yīng)儀，上海新儀微波化學(xué)科技有限公司)。
本發(fā)明中涉及的“SephadexG-150、SephadexG-200”為pharmacia公司產(chǎn)品。我國代理經(jīng)銷pharmacia產(chǎn)品的公司有“北京拜爾迪生物技術(shù)公司，北京市海淀區(qū)中關(guān)村北二街4號水清木華園1號樓910室(100080)；電話(TEL)010-82642396；傳真(FAX)010-82642395；或北京邦定泰克生物技術(shù)公司，地址北京市海淀區(qū)復(fù)興路48號，郵編100039；電話86-010-68287358；傳真010-68287361?！?br> 權(quán)利要求
1.一種制備高純黃芪多糖的方法，由下述步驟組成(1)將黃芪粉碎至顆粒直徑為200～300μm，與水以質(zhì)量比計(jì)，按1∶6～10的量浸于蒸餾水中，50～75℃進(jìn)行恒溫微波提取，提取條件微波功率250W，時(shí)間11～15分鐘，重復(fù)2～3次；(2)以3000～5000rpm離心(1)所述提取混合液12～16min，取上清液，以活性炭脫色，得黃芪多糖水提物溶液；(3)濃縮黃芪多糖水提物溶液至比重為1.15～1.25；(4)以濃縮后黃芪多糖水提物溶液體積6～8倍的量，向黃芪多糖水提物溶液中加入70％～95％乙醇，攪拌20～36min；(5)以3000～5000rpm離心(4)所述攪拌混合液12～16min，取沉淀并用蒸餾水溶稀至比重為1.05～1.15的溶液；(6)選取內(nèi)徑和高度比為1∶30～50的層析柱；向柱內(nèi)加入葡聚糖凝膠，加入量為柱體積的65％～85％；(7)凝膠過濾層析步驟(5)的溶液，洗脫液為蒸餾水，流速為0.3～0.6ml/min，以波長為280nm檢測收集液，選擇吸收峰洗脫液收集，即得黃芪多糖的提取液；(8)常規(guī)真空冷凍干燥黃芪多糖的提取液，得高純黃芪多糖。
2.如權(quán)利要求1所述制備高純黃芪多糖的方法，其特征是，步驟(1)所述溫度是60～65℃。
3.如權(quán)利要求1所述制備高純黃芪多糖的方法，其特征是，步驟(2)或(5)所述離心速度是4000rpm，離心時(shí)間是15min。
4.如權(quán)利要求1所述制備高純黃芪多糖的方法，其特征是，步驟(6)所述層析柱的內(nèi)徑和高度比為1∶35～45。
5.如權(quán)利要求1所述制備高純黃芪多糖的方法，其特征是，步驟(6)所述向柱內(nèi)加入的具有分子篩作用的葡聚糖凝膠量為柱體積的70％～80％。
6.如權(quán)利要求1所述制備高純黃芪多糖的方法，其特征是，步驟(6)所述葡聚糖凝膠選用SephadexG-150或SephadexG-200。
7.如權(quán)利要求6所述制備高純黃芪多糖的方法，其特征是，步驟(6)所述葡聚糖凝膠選用SephadexG-150。
8.如權(quán)利要求1所述制備高純黃芪多糖的方法，其特征是，步驟(7)所述流速為0.4ml/min。
全文摘要
本發(fā)明公開一種制備高純黃芪多糖的方法，由下述步驟組成將黃芪粉碎浸于蒸餾水中，50～75℃進(jìn)行恒溫微波提?。浑x心，取上清液，以活性炭脫色，得黃芪多糖水提物溶液，然后濃縮并加入乙醇攪拌；離心，沉淀用蒸餾水溶?。荒z過濾層析，以波長為280nm檢測收集液，選擇吸收峰洗脫液收集，真空冷凍干燥，得高純黃芪多糖。利用本發(fā)明制備的黃芪多糖，純度達(dá)90％以上，且本發(fā)明的方法設(shè)備及環(huán)境要求低，方法篩便，成本低，靈活實(shí)用，利于推廣、開發(fā)和應(yīng)用。
文檔編號C08B37/00GK101020721SQ200710013890
公開日2007年8月22日 申請日期2007年3月29日 優(yōu)先權(quán)日2007年3月29日
發(fā)明者張尚立, 常宏文, 馬劍峰 申請人:山東大學(xué)