專(zhuān)利名稱(chēng)：百合多糖純化的乙醇濃度梯度工藝方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種百合多糖提取工藝方法，尤其是一種適用于工業(yè)化生產(chǎn)的百 合多糖的純化工藝。
背景技術(shù)：
作為一種中醫(yī)引用兩千多年的中藥，百合有著明確、顯著的療效(參見(jiàn)《神 龍本草經(jīng)》、《別錄》和《圣惠方》中的記載)。'百^中藥功效特點(diǎn)主要表現(xiàn)在"滋 補(bǔ)與保健"上，即養(yǎng)陰清熱、潤(rùn)肺止渴、寧心安神和補(bǔ)中益氣之效。在百合有效 成分中百合多糖極具的功能性和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，它的功能性主要包括良好的增強(qiáng)免疫 調(diào)節(jié)的作用、抗腫瘤性、抗氧化、滋補(bǔ)強(qiáng)壯及抗衰老作用和明顯的降血糖功能， 百合多糖在百合中的百分含量處于百合成分含量的前三位。百合多糖提取可為開(kāi) 發(fā)生產(chǎn)百合多糖滋補(bǔ)與保健產(chǎn)品，以及開(kāi)發(fā)多糖新型藥物提供原料。
現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室用的浸提、乙醇沉淀、脫蛋白的百合多糖提取工藝一般得到的是 百合粗多糖，而要得到較純的百合多糖，目前通常是采用兩種工藝方法 一是在 實(shí)驗(yàn)室里通過(guò)層析柱的方法，該法提取量小，生產(chǎn)效率低，且百合多糖損失量大， 多糖得率不高，難以應(yīng)用在工業(yè)生產(chǎn)中；二是利用正丁醇/氯仿混合液通過(guò)3-5
個(gè)循環(huán)(Svage法)進(jìn)行提純，但該法氯仿用量大，殘留量大，毒性強(qiáng)，污染嚴(yán) 重，成本也高，純化效率低，對(duì)工業(yè)化生產(chǎn)不利。
經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)的檢索發(fā)現(xiàn)，目前國(guó)內(nèi)外沒(méi)有與百合多糖提取相關(guān)專(zhuān)利文 獻(xiàn)報(bào)道，在非專(zhuān)利文獻(xiàn)中，有百合多糖提取工藝相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，如層析柱的方法 (劉成梅，付桂明等，百合多糖的純化與化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定研究，食品科學(xué)，2002， 23 (5): 114)和Svage法(劉成梅，萬(wàn)茵等，百合多糖脫蛋白方法的研究，食 品科學(xué)，2002， 23 (1): 89)，但尚無(wú)百合多糖純化的乙醇濃度梯度工藝方法的 有關(guān)報(bào)道，也無(wú)百合多糖提取產(chǎn)業(yè)化方面的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)百合多糖純化工藝技術(shù)的上述不足，本發(fā)明提供一種適用于工業(yè)化生產(chǎn)的百合多糖的純化工藝，即乙醇濃度梯度純化百合多糖新工藝，它在保證百合多 糖的純度和得率的同時(shí)，減少氯仿的用量，從而降低毒性溶劑的污染，降低生產(chǎn) 成本，提供工業(yè)生產(chǎn)的適用性。本發(fā)明是高效提取高純度的百合多糖的新型工藝。
本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，本發(fā)明在百合多糖濃縮液經(jīng)醇沉、去蛋 白一次后，利用75%-95%濃度梯度的乙醇溶液循環(huán)洗滌2-5次，制得高純度的百 合多糖。釆取多次洗滌的目的是變性并去除蛋白酶，氨基酸雜質(zhì)，同時(shí)低濃度的 乙醇可以帶走大部分小分子量的寡糖，乙醇濃度梯度純化重復(fù)的次數(shù)越多，產(chǎn)物 越純?cè)礁撸嗵菗p失越大。
利用本發(fā)明乙醇濃度梯度純化，可以在得到純度大于70%的百合多糖純品， 百合多糖得率為百合中百合多糖含量的80%,同時(shí)可減少百合多糖中氯仿殘留量 65%以上，工藝流程簡(jiǎn)單高效、經(jīng)濟(jì)和利于環(huán)保。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)施例一
將新鮮百合球莖，自然晾干后在6(TC左右烘至全干，然后打碎過(guò)篩備用。 稱(chēng)取百合粉經(jīng)85%乙醇于8(TC下回流約10h，過(guò)濾。濾渣用用去離子水55。C下浸 提5h，過(guò)濾，得百合多糖浸提液粗品。
百合多糖浸提液經(jīng)減壓濃縮后以四倍體積的90%的乙醇沉淀，過(guò)濾取沉淀加
水溶解后采用Svage法去蛋白一次(Svage法為加入等體積氯仿/正丁醇混合液， 混合液中氯仿/正丁醇的體積比5:2,充分振蕩)，沉淀后取上清液，得到粗制百 合多糖溶液。采用粗百合多糖飽和溶液加蛋白酶進(jìn)一步酶解蛋白，然后用四倍體 積乙醇沉淀。取沉淀分別用75%乙醇、85%和95%的純乙醇洗滌并重復(fù)2次(梯度 乙醇溶液洗滌法)，最后一個(gè)循環(huán)用丙酮，乙醇洗滌，沉淀干燥后得到百合多糖 精提產(chǎn)
由此例乙醇濃度梯度純化2次制備得到的百合多糖純品，其純度為75%以上， 百合多糖得率為百合中百合多糖含量的86%，同時(shí)減少百合多糖中氯仿殘留量約 80%，具有工藝流程簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)和環(huán)保等工藝優(yōu)點(diǎn)。
實(shí)施例二
將新鮮百合球莖洗凈，沙布袋包裝20公斤，投入200升的提取罐，用去離
4子水95'C下浸提2h，然后轉(zhuǎn)移提取液至濃縮罐。提取罐中加入去離子水，重復(fù)
提取2次，轉(zhuǎn)移提取液至濃縮罐。將3次提取液在濃縮罐中9(TC下抽真空濃縮，
濃縮至30%出料，得百合多糖浸膏粗品。
百合多糖浸膏以四倍體積的95%的乙醇沉淀，過(guò)濾取沉淀加水溶解后采用
Svage法去蛋白一次(Svage法為加入等體積氯仿/正丁醇混合液，混合液中氯仿
/正丁醇的體積比5:2，充分振蕩)，沉淀后取上清液，得到粗制百合多糖溶液。
采用粗百合多糖飽和溶液加蛋白酶進(jìn)一步酶解蛋白，并用四倍體積乙醇沉淀。取
沉淀分別用85%乙醇和95%以上的純,乙醇洗滌并重復(fù)3次(梯度乙醇溶液洗滌法)，
最后一個(gè)循環(huán)用丙酮，乙醇洗滌，沉淀干燥后得到百合多糖精提產(chǎn)品。
由此例乙醇濃度梯度純化3次制備得到的百合多糖純品，其純度為85%以上， 百合多糖得率為百合中百合多糖含量的81%，同時(shí)減少百合多糖中氯仿殘留量約 90%，具有工藝流程簡(jiǎn)單、得率適中和環(huán)保等工藝優(yōu)點(diǎn)。
實(shí)施例三
將百合球莖干片15公斤用沙布袋包裝，投入200升的提取罐，用去離子水
95'C下浸提2h，然后轉(zhuǎn)移提取液至濃縮罐。提取罐中加入去離子水，重復(fù)提取3
次，轉(zhuǎn)移提取液至濃縮罐。將4次提取液在濃縮罐中9(TC下抽真空濃縮，濃縮
至30%出料，得百合多糖浸膏粗品。' '' ，
百合多糖浸膏以四倍體積的95%的乙醇沉淀，過(guò)濾取沉淀加水溶解后采用
Svage法去蛋白一次(Svage法為加入等體積氯仿/正丁醇混合液，混合液中氯仿 /正丁醇的體積比'5:2，充分振蕩)，沉淀后取上清液，得到粗制百合多糖溶液。 采用粗百食多糖飽和溶液加蛋白酶進(jìn)一步酶解蛋白，并用四倍體積乙醇沉淀。取 沉淀分別用80%乙醇和90%以上的純乙醇洗滌并重復(fù)5次(梯度乙醇溶液洗滌法)，
最后一個(gè)循環(huán)用丙酮，乙醇洗滌，沉淀干燥后得到百合多糖精提產(chǎn)品。
由此例乙醇濃度梯度純化2次制備得到的百合多糖純品，其純度為95%，百 合多糖得率為百合中百合多糖含量的68%,同時(shí)減少百合多糖中氯仿殘留量約 96%,具有工藝流程簡(jiǎn)單和環(huán)保等工藝優(yōu)點(diǎn)，但得率較低。
權(quán)利要求
1. 本發(fā)明涉及一種百合多糖提取工藝方法，尤其是一種適用于工業(yè)化生產(chǎn)的百合多糖的純化工藝。其特征在于百合多糖純化的乙醇濃度梯度工藝方法，即在百合多糖濃縮液經(jīng)醇沉、去蛋白一次后，利用75％-95％濃度梯度的乙醇溶液循環(huán)洗滌2-5次，制得純度大于70％的百合多糖純品，同時(shí)百合多糖得率為百合中百合多糖含量的68％以上，同時(shí)由于減少了氯仿的使用次數(shù)和使用量，從而可減少百合多糖中氯仿殘留量80％以上。
2. 如權(quán)利要求1所述的百合多糖純化的乙醇濃度梯度工藝方法，其特征在于所 述的百合多糖濃縮液，可由鮮百合球鱗莖、百合干片為原料的水提濃縮液獲 得，以及多次提取液的合并濃縮液，其提取罐可以是工業(yè)級(jí)的提取罐；
3. 如權(quán)利要求1所述的百合多糖純化的乙醇濃度梯度工藝方法，其特征在于所 述的去蛋白為Svage法，即在多糖濃縮醇沉液中加入等體積氯仿/正丁醇混合 液，混合液中氯仿/正丁醇的體積比5:2，充分振蕩，反復(fù)多次，以去除蛋白 雜質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明提供一種適用于工業(yè)化生產(chǎn)的百合多糖純化工藝，即乙醇濃度梯度純化百合多糖新工藝。它在百合多糖濃縮液經(jīng)醇沉、去蛋白一次后，利用75％-95％濃度梯度的乙醇溶液循環(huán)洗滌2-5次，制得純度大于70％的百合多糖純品，同時(shí)百合多糖得率為百合中百合多糖含量的68％以上，同時(shí)由于減少了氯仿的使用次數(shù)和使用量，從而可減少百合多糖中氯仿殘留量80％以上，工藝流程簡(jiǎn)單高效、經(jīng)濟(jì)和環(huán)保，適合工業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)用。
文檔編號(hào)C08B37/00GK101450972SQ200710171539
公開(kāi)日2009年6月10日 申請(qǐng)日期2007年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月30日
發(fā)明者萬(wàn)錒俊, 李慧麗 申請(qǐng)人:上海漢素信生化科技發(fā)展有限公司