專利名稱：：精細(xì)粒度的真菌提取物幾丁質(zhì)-葡聚糖的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及具有4青細(xì)的可控粒度(顆粒尺寸)、特別是具有相^細(xì)粒度的4分末形式的幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物，其尤其可以用于化妝品領(lǐng)域中，本發(fā)明特別涉及幾丁質(zhì)/P-葡聚糖共聚物在預(yù)防或減少皮膚老化4正兆中的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及多孔材料形式的這種聚合物，特別是其在組織工禾呈學(xué)中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：已知某些多糖能夠發(fā)揮相對于表皮上層的水合作用，或者甚至使得可以預(yù)防或減少皮膚老化的某些征兆。具體而言，基于p-葡聚糖、裂褶多糖(施佐菲蘭，schizophyllan)、木葡聚辟唐(xyloglucan)、透明質(zhì)酸、半乳甘露聚^f唐和幾丁質(zhì)的成分通常用于化妝護(hù)理產(chǎn)品中。這些多糖不同于a-羥酸型成分(其通過4吏表皮脫落而發(fā)揮作用)，其促進(jìn)細(xì)胞迅速再生，但是可能損傷表皮下層。大多數(shù)抗老化成分，于皮l夫細(xì)l包或月交原的再生起作用。目前，月交原再生的才幾理在與化妝產(chǎn)品方面的立法的相容性上存在著問題，對于化妝產(chǎn)品，經(jīng)皮滲透是不能要求保護(hù)的。治療皮膚老化的征兆超越了皺紋和細(xì)胞再生的概念，而今4艮難找到以全面且確實有效的方式解決該問題的可用的活性劑。6在具有"抗老化"功效的多糖中，源于酵母菌、真菌、谷物或植物的P-葡聚糖是一類由通過P-型鍵接彼此連接的D-葡萄糖單元組成的純多糖，所連接的碳根據(jù)提取它們的物種而不同，具有或多或少的支鏈結(jié)詳勾源于酵母菌西良酒酵母(Sacc/^raw^cescere"Ww'ae)的p葡聚沖唐為卩(1,3)(1,6);源于真菌裂命習(xí)菌(5"c/^o//^〃wwicommw"e)的裂褶多糖主《連為p(1，3)(在p(l，6)位分支有短鏈)；源于谷物如燕麥、大麥或小麥的|3-葡聚糖為卩(1，4);源于植物的木葡聚并唐主鏈為p(1，4)(在p(l,6)位分支有短鏈)。p-葡聚糖在含水介質(zhì)中的溶解性耳又決于其結(jié)構(gòu)、大分子l連的長度以及4連的三維構(gòu)造。在化妝品工業(yè)中p-葡聚;f唐由于其新生(再生恢復(fù)，revitalize)和抗炎作用、UV輻射防護(hù)作用、纟爰和、免疫刺^L、抗老4匕、抗皺紋和抗粉刺作用等(根據(jù)所考慮的分子不同，發(fā)揮的功效不同)而被認(rèn)為是有益的，這些作用可以導(dǎo)致皮膚老化或粉刺的癥狀改善。在化妝品中所需的P-葡聚糖一般是水溶性的，使得它們能夠被并入到乳液的水相中，這限制了對于能夠用于化妝品中的分子的選擇。實際上，不溶性的p-葡聚糖具有非常有利的化妝和皮膚科特性，但是因為它們是堅硬、刺激性等的顆粒形式而不能被并入到化妝制劑中。很少有能夠用于化妝品中的水溶性p-葡聚糖以富含p-葡聚糖的提取物或溶液形式4是供。此外，幾丁質(zhì)水溶性衍生物(主要是羧甲基幾丁質(zhì)和殼聚糖)的化妝應(yīng)用是已知的，例如用于護(hù)理霜中，作為成膜劑、<呆濕劑、改善成脂肪團(tuán)的皮膚外觀的制劑，例如，或者還用于微球的制備。然而，用于化妝應(yīng)用的幾丁質(zhì)、及其書于生物在工業(yè)上是乂人甲殼類動物-奸、蟹-的殼中獲得的，曱殼類動物是造成過敏反應(yīng)的主要起因之一。而且，對包含幾丁質(zhì)衍生物的霜劑過每文的病例已經(jīng)公開(CleenewerckMB，MartinP,LaurentD.Allergiccontactdermatitisduetoamoisturizingbodycreamwithchitin.ContactDermatitis31,196,1994;PereiraF,PereiraC,LacerdaMH.Contactdermatitisduetoacreamcontainingchitinandacarbitol.ContactDermatitis38,290，1998)。就本發(fā)明發(fā)明人所知，由曱殼類動物的殼開始或由微藻(microscopicalgae)開始而獲得的幾丁質(zhì)(由N-乙?；?D-葡糖胺單元構(gòu)成的聚合物)，還未知能夠預(yù)防或減少皮"夫老化的歲文應(yīng)。殼聚糖是衍生于幾丁質(zhì)的聚合物，帶有陽離子電荷，由D-葡糖胺ZN-乙?；?D-葡糖胺單元構(gòu)成，其衍生物(琥珀酰胺)及其鹽(例如，乳酸鹽、抗壞血酸鹽、羥乙酸鹽、琥珀酸鹽)，都因為其顯著的成膜性、水合性、抗菌性和抗老化特性、改進(jìn)脂肪團(tuán)外觀的特性、以及改進(jìn)制劑觸感的特性，而用于化妝品工業(yè)中。本發(fā)明發(fā)明人已經(jīng)證實，從真菌中分離和純化由兩種類型的鏈幾丁質(zhì)[聚(N-乙?；?D-葡糖胺)]和P-葡聚糖[聚(D-葡萄糖)]構(gòu)成的共聚物是可能的。某些真菌如黑曲霉(As^e《z7/Rsm'gw)(子嚢菌類)菌絲體的細(xì)胞壁由三維網(wǎng)絡(luò)中相互共^f介連接的兩種多糖構(gòu)成，稱之為"幾丁質(zhì)-葡聚糖"?，F(xiàn)在，這種幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物能夠借助于連續(xù)步驟的工藝、以高純度和可獲利的方式而有利地生產(chǎn)，如專利EP1483299B1(US2005/130273Al或WO03/068824Al)所描述的。所獲得的精纟田白色無味的粉末中，幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物含量大于90%。這種粉末不溶于任何溶劑，無論是含水溶劑還是有機(jī)溶劑，經(jīng)推理這損害了其在化妝品工業(yè)中的應(yīng)用。各種應(yīng)用描述于專利申i青FR0507066和FR0651415中。基于含幾丁質(zhì)和p-葡聚^唐的真菌l是取物的組合物的醫(yī)學(xué)應(yīng)用，尤其是作為傷口愈合活性劑，先前已經(jīng)進(jìn)行了描述。然而，這些各種應(yīng)用(例如，以^:料(dressing)形式)經(jīng)推理并不適用于化妝制劑。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的主要目的是解決以適用于化妝應(yīng)用(并且尤其是在皮膚化妝或皮月夫病學(xué)中)，和/或適用于醫(yī)學(xué)或藥學(xué)應(yīng)用，和/或適合用作人或動物的食品補(bǔ)充劑的形式提供幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物所構(gòu)成的新的4支術(shù)問題。本發(fā)明的一個目的還是解決以懸浮液、乳液或分散體形式，尤其是能夠用于化妝品領(lǐng)域、特別是皮膚化妝或皮膚病學(xué)領(lǐng)域的形式提供幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物所構(gòu)成的新的技術(shù)問題。本發(fā)明的一個目的特別是才是供一種用于身體和/或面部護(hù)理，如水合(吸t]C，hydrating)、緊致(firming)、防護(hù)、抗皺(具體通過輪廓測量術(shù)(profilometry)進(jìn)行的皮膚外形評價而進(jìn)行描述)或抗老4匕護(hù)理的皮"夫^1妝組合物。本發(fā)明的一個目的還是通過提供一種表現(xiàn)為無害性、皮膚和眼睛耐受性、以及非常好的〗氐變應(yīng)原性(hypoallergenicity),同時又質(zhì)來解決以上4是及的^支術(shù)問題。本發(fā)明的一個目的還是優(yōu)化食品補(bǔ)充組合物而使之能夠易于口服給藥，并提高生物利用率和幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物對健康的功效。本發(fā)明的一個目的還是提供一種幾丁質(zhì)-葡聚壽唐粉末，該幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末使得能夠根據(jù)所設(shè)想的用途例如皮膚化妝和皮膚病學(xué)組合物、食品補(bǔ)充組合物、功能性食物組合物、用于飲料處理的工藝助劑(technologicalaid)或用于醫(yī)療器才才的《且合物如傷愈產(chǎn)品，而調(diào)節(jié)和〗尤4b其物理〗t學(xué)性質(zhì)和生物'I"生質(zhì)。本發(fā)明的一個目的還是4是供一種非動物來源并具有優(yōu)良純度的天然物質(zhì)，其顯著特征在于通過可確保重復(fù)性和可溯性的生產(chǎn)工藝而獲得。本發(fā)明的一個目的還是提供一種多糖類天然物質(zhì)，其作為粉末和在懸浮液中是穩(wěn)、定的，易于配制，與所有最常用的成分相容，而JU吏得可以制備穩(wěn)定的化妝制劑，其特4正是才及佳地適用于其應(yīng)用(例如與均勻度極佳的織物)，且其感官質(zhì)量(sensoryquality)(粘度、質(zhì)地、觸感)都是優(yōu)異的。本發(fā)明的一個目的是提供一種化妝活性劑，用于預(yù)防或降低皮膚老化效應(yīng)，以持久方式水合皮膚，賦予皮膚彈性和/或緊致皮膚，貝武予皮月夫均勻和平滑的夕卜7見，降4氐皮月夫多鱗狀態(tài)(squamousstate)，保護(hù)皮膚免受外界侵襲如干燥和/或重金屬污染，以及使皮膚恢復(fù)其屏障功能。本發(fā)明的一個目的還是提供一種具有保水能力和相當(dāng)強(qiáng)的粘度改性能力的化妝成分。本發(fā)明的一個目的還是提供一種能夠用于例如組織工程學(xué)或細(xì)胞培養(yǎng)中、或者能夠用作化妝品或制藥工業(yè)原料的多孔材料。為了解決以上提及的技術(shù)問題，本發(fā)明發(fā)明人從人們已知曉的P-葡聚并唐型物質(zhì)在化妝品工業(yè)中的作用開始。然而，在獲得的4分末(例如才艮據(jù)PCT專利申請WO03068824描述的方法)為不溶于水相或有才幾相的范圍內(nèi)，任何基于幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物的組合物經(jīng)推理則不可能是可利用的。然而本發(fā)明發(fā)明人已經(jīng)意想不到地發(fā)現(xiàn)，通過使用具有極細(xì)且可控粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物粉末，可以解決以上提及的技術(shù)問題。這種解決方案完全是意想不到的，因為本領(lǐng)域的技術(shù)人員認(rèn)為這種共聚物的精細(xì)研磨顆粒也是不可溶的，并且所述共聚物將與不溶性(3-葡聚糖形式相同，即為堅硬且對皮膚產(chǎn)生刺激作用的顆粒形式。首先，本發(fā)明發(fā)明人意想不到地可以制備幾丁質(zhì)-葡聚糖的穩(wěn)定分散體和幾丁質(zhì)-葡聚糖的穩(wěn)定懸浮液(尤其是在水中而無添加劑)，其次，能夠制備特別包含高濃度幾丁質(zhì)-葡聚糖的穩(wěn)定乳液。對于術(shù)語"幾丁質(zhì)-葡聚糖"，本發(fā)明發(fā)明人意指根據(jù)本發(fā)明的幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物。具體而言，本發(fā)明涉及一種主要包含幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物的真菌源多糖，所述多糖具有精細(xì)的粒度。本發(fā)明還涉及包含至少一種4青細(xì)研磨的幾丁質(zhì)-葡聚斗唐共聚物的真菌提取物的精細(xì)研磨粉末。有利地，具有精細(xì)粒度的顆粒由以重量計至少70%粒度小于50(H鼓米(pm)、優(yōu)選小于355孩t米(pm)的顆4立構(gòu)成。同樣優(yōu)選以重量計至少50%、優(yōu)選60%的顆粒的粒度小于250樣吏米(|um)、并優(yōu)選小于150孩i米(pm)。短語"小于X微米的粒度"意指所具有的粒度使得它們能夠通過篩孔尺寸為X孩i米的篩網(wǎng)的顆粒。一個實施方式使得可以獲得以重量計至少50%的顆粒，其粒度小于65目(約149pm)、優(yōu)選小于100目(約230pm)。根據(jù)需要，通過選擇(尤其是在篩分(screening)或分級(classification)后)具有特定粒度的部分(fraction),有利地控制粒度。在實施例中根據(jù)其通性提到的部分也以引用方式包含于本文中，尤其是關(guān)于共聚物的類型，其可以是本發(fā)明中描述的那些中的任何之一。有利地，幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物所包含的幾丁質(zhì)N-乙?；?D畫葡糖胺單元與P-葡聚糖的D-葡萄糖單元的比率為在95:5和15:85(m/m)之間。有利地，真菌來源的多糖包含以相對于真菌來源提取物總質(zhì)量的質(zhì)量計大于70%、優(yōu)選大于85%的幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物。有利地，D-葡萄糖單元之間的鍵接主要是J3(l,3)型。優(yōu)選真菌提取物源于子嚢菌類真菌(尤其是黑曲霉)、和/或擔(dān)子菌類真菌(尤其是香菇(冬菇)和/或雙孢蘑菇)的菌絲體。有利地，幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物幾丁質(zhì)部分的至少85。/。是N-乙?；?D-葡糖胺單元，而至多15。/。是D-葡糖胺單元。具有微米粒度的真菌提取物優(yōu)選是幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物的水解產(chǎn)物。有利地，幾丁質(zhì)與P-葡聚糖的比率為在90:10和30:70(m/m)之間。本發(fā)明還涉及包含才艮據(jù)以上限定的4青細(xì)粒度的多糖或真菌揭:取物的組合物，尤其是懸浮液、乳液或分散體形式的組合物。有利地，該組合物是化妝組合物，特別是皮力夫化妝或皮力夫病學(xué)組合物。優(yōu)選地，按總組合物的重量計，具有精細(xì)粒度的多糖或真菌才是耳又物使用濃度為0.01%10%，且優(yōu)選0.05%5%。妝或皮月夫病學(xué)護(hù)理中的應(yīng)用，其特4正在于該護(hù)理選自身體或面部護(hù)理、尤其是以持久和顯著方式改進(jìn)皮膚水合作用、尤其是長期內(nèi)提高皮膚的保水能力、改進(jìn)皮膚屏障功能、發(fā)揮抗老化效應(yīng)、改善皮膚外觀、改善皮膚均勻性(尤其是通過使其更平滑、更均勻、更柔軟、更健康)、改進(jìn)皮膚緊致性和彈性、以及促進(jìn)表皮對真皮的附著所構(gòu)成的組中。短語"具有抗老化功效的產(chǎn)品"意指使得能夠尤其是通過改進(jìn)皮膚的保護(hù)和/或皮膚的防護(hù)活性、減少外來侵襲如輻射、空氣干燥、寒冷、污染(尤其是重金屬造成的污染)或釋放自由基的侵襲、尤其是由UV輻射造成的4曼襲的影響，以及通過減少皮力夫皺紋而延i爰皮月夫老化的產(chǎn)品或組合物。本發(fā)明還涉及以上限定的組合物，其用于在減小鈹故深度、或者延《爰或預(yù)防皺紋出現(xiàn)。化妝組合物有利地包含0.1%2%具有精細(xì)粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物。本發(fā)明還涉及以上限定的組合物作為食品補(bǔ)充劑組合物的應(yīng)用，其優(yōu)選用于獲得選自抗氧化作用、降血液膽固醇或降血脂作用、對免疫系統(tǒng)的刺激作用、降血糖作用(尤其在糖尿病的情況下)構(gòu)成的組中的作用，以及在于預(yù)防和/或治療和/或4氐抗選自血脂異常癥、動月永粥才羊石更4匕、月巴胖癥、月巴胖才目關(guān)的疾病、心血管疾病、4戈i射綜合征、糖尿病和高尿酸血癥構(gòu)成的組的病理學(xué)的作用。優(yōu)選在這種食物補(bǔ)充組合物中，具有精細(xì)粒度的真菌l是耳又物共聚物用作活性成分。本發(fā)明還涉及包含如上所限定的至少一種真菌源共聚物或拔—取物作為活性成分的藥物組合物。本發(fā)明尤其涉及由根據(jù)本發(fā)明的真菌源多糖或提取物獲得的多孔材4牛在組織工程學(xué)中的應(yīng)用，因此也涉及由^^艮據(jù)本發(fā)明的真菌源多糖或提取物獲得的多孔材料。這種多孔材料具體而言可以通過凍干法獲得。本發(fā)明還涉及至少一種如上限定的真菌源的多糖或4是耳又物，作為組合物、尤其是化妝組合物、優(yōu)選皮膚病學(xué)或皮膚化妝組合物的貝武形劑的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及用于制備具有精細(xì)粒度的真菌提取物的方法，其包括a)從真菌生物質(zhì)(biomass)中提取和純化幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物，這種真菌提取物的所述共聚物在水中或有機(jī)溶劑中是不可溶的，b)乂人干燥或;容劑化的幾丁質(zhì)-葡聚糖開始，對顆沖立進(jìn)行過濾、干燥、研磨以及分級，這些步驟同時或單獨進(jìn)行而與它們的次序無關(guān)，使得可以獲得微米顆粒，其中以重量計至少70%、優(yōu)選75%、更優(yōu)選80%的顆粒具有小于500孩i米(pm)、優(yōu)選小于355樣i米(fim)的粒度。優(yōu)選地，用于制備具有精細(xì)粒度的真菌提取物的方法中的步驟b)使得能夠獲得以所獲得的總顆粒重量計至少50%、優(yōu)選60%、且更優(yōu)選70%的粒度小于250孩￡米、優(yōu)選小于125^im的顆粒。因此在步驟b)中可以同時進(jìn)行過濾、干燥和研磨步驟，然后進(jìn)行單獨的分級步驟。具體實施方式根據(jù)本發(fā)明的組合物使得可以獲得具有愉悅的柔軟觸感、尤其是在化妝品領(lǐng)域中特別有利的制劑。具體而言，所獲得的乳液或懸浮液的穩(wěn)定性、質(zhì)地、顏色、觸感、粘度和流變才及佳地適用于生產(chǎn)面部或身體護(hù)理霜，包4舌嬰兒的護(hù)理霜。最后，幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物優(yōu)良的皮膚耐受性(人體體外和體內(nèi))和眼睛耐受性(體夕卜)以及低每文感測—驗(人體體內(nèi)，根據(jù)Maibach-Marzulli禾呈序)已經(jīng);得到i正實。本發(fā)明發(fā)明人提出的溶液全部是更加有利的，因為來源于真菌源，尤其但非排他地子嚢菌類的純化的幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物可以作為工業(yè)副產(chǎn)品大量獲得。特別優(yōu)選^f吏用黑曲霉的菌絲體作為真菌源。根據(jù)本發(fā)明，從子嚢菌類真菌菌絲體提取的幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物，盡管是水不溶性的，但是能夠容易地進(jìn)行配制，尤其是以化妝組合物形式配制。本發(fā)明發(fā)明人已經(jīng)意想不到地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)來源于真菌源的幾丁質(zhì)-葡聚糖化合物是具有精細(xì)粒度的粉末形式時，其完全適用于制備使得可以解決以上提及的技術(shù)問題的組合物。才艮才居PCT專矛J申i青WO03/068824或法國專矛J申ifrFR0507066中描述的方法而有利地獲得的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末，以可獲得精細(xì)的可控粒度的方式、尤其是通過過濾、研磨、干燥和/或顆粒分級方法進(jìn)行制備。當(dāng)需要精細(xì)粒度時，選擇用于獲得以重量計至少70%、優(yōu)選75%、更優(yōu)選80%的顆粒具有小于500孩t米(pm)、優(yōu)選小于355微米(,)粒度的顆粒的方法。有利地，顆粒由以重量計至少50%、優(yōu)選60%、更優(yōu)選70%粒度小于25(H鼓米(fim)、優(yōu)選小于150孩i米(pm)的顆粒組成。優(yōu)選用于制備幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末的方法以這樣的方式實施，使得主要獲得粒度小于250^im的顆粒。有利地，根據(jù)本發(fā)明的顆?；旧嫌闪６刃∮?25itim或者甚至小于90|iim的顆粒組成，而尤其是在分級之后獲得從而獲得專交窄分布?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域^支術(shù)人員已知的任何一種技術(shù)實施制備該4分末的方法。選才^f吏4尋可以盡可能好地并且以明確方式控制沖立度的4支術(shù)，是有利的。術(shù)語"粒度"意指幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末大致為球形的形狀、粒度和粒度分布。表征了粉末化成分的該參數(shù)，首先影響了其能夠進(jìn)行配制的方式，即其能夠被引入到固體或液體組合物如食品基質(zhì)、化妝霜、飲食或化妝液體、或醫(yī)療或藥物設(shè)備中的方式。根據(jù)所獲得的粒度，尤其是根據(jù)所需的外觀或最終形狀，所獲得的組合物將或多或少是均勻的。顆粒的粒度和粒度分布通過傳統(tǒng)纟支術(shù)如光彩f射(例如，來自MalvernInstruments的Mastersizer2000;敫光書亍射系纟充)、4s4苗電子顯微隨后進(jìn)行圖像分析、或者在連續(xù)篩網(wǎng)上篩分隨后進(jìn)行重量測定而進(jìn)行表征。有利地，本發(fā)明發(fā)明人已經(jīng)意想不到地證實，通過調(diào)節(jié)粒度分布而獲得小于125pm的粒度，可以獲得包含幾丁質(zhì)-葡聚糖聚合物的均勻霜劑。這^f吏得尤其是在乳液形成后甚至以高濃度(例如2%)引入該共聚物，而實現(xiàn)完全均勻的質(zhì)地成為可能，其感觀質(zhì)量(粘度、質(zhì)地、觸感)都很優(yōu)良。顆粒中具有最小粒度的部分因此有利地被使用。當(dāng)粒度4交大時，該成分就不再沖是供這些感觀質(zhì)量，當(dāng)霜劑鋪展時產(chǎn)品形成明顯的顆^立(grain),和/或制劑隨時間變4b而不3t、定，這在局部組合物的情況下、尤其是在護(hù)理霜中是不期望的。有利地，具有精細(xì)可控粒度的粉末能夠用于制備"功能性"食品如餅干、軟糖、糖果產(chǎn)品、食療棒(dieteticbar)、面包、々欠品、黃油、人造黃油等。有利地，具有精細(xì)粒度的粉末能夠以含水分散體形式使用，可以是醫(yī)療i殳備3口傷愈和/或止血系統(tǒng)的組合物部分。意想不到i也，具有精細(xì)粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的致孔寸支術(shù)(porogenictechnique),能夠以具有良好才幾械穩(wěn)、定性和大于80%、優(yōu)選大于90%孔隙率的內(nèi)聚性多孔材料形式進(jìn)4亍使用。多孔材料能夠起始于僅含幾丁質(zhì)-葡聚糖的軟膏形式的濃縮含水分散體、或起始于幾丁質(zhì)-葡聚糖與其他不溶性可分散化合物的混合物的分散體、或起始于幾丁質(zhì)-葡聚糖在溶解有聚合物或另一種物質(zhì)的水相中的分散體而進(jìn)行制備。所獲得物質(zhì)的孔隙率測定和機(jī)械性能取決于制劑參數(shù)，尤其是幾丁質(zhì)-葡聚糖的粒度、混合物的組成、起始分散體的濃度，以及分散體實施參數(shù)。為了制備皮膚化妝和皮膚病學(xué)產(chǎn)品，具有精細(xì)粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖，粒度優(yōu)選小于125pm,有利地對水相和油相中存在的組分均具有良好的親和性，這能夠促進(jìn)并入工藝。具有精細(xì)粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末能夠根據(jù)各種方法進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)，取決于所需要的粒度，從干粉形式的幾丁質(zhì)-葡聚糖開始，或從含水或有機(jī)介質(zhì)中溶解的幾丁質(zhì)-葡聚糖開始，否則從并入到更復(fù)雜介質(zhì)如水包油或油包水乳液中的幾丁質(zhì)-葡聚糖開始。對于"制備具有精細(xì)粒度粉末的方法"，本發(fā)明發(fā)明人通過"用于制備具有精細(xì)粒度的粉末的方法"，意指適用于固體、溶劑化固體和溶劑化復(fù)雜介質(zhì)如乳液、膠狀懸浮液等的任何過濾、干燥、研磨、均質(zhì)化、粒度減小和顆粒分級的固-液和固-固過程。在以溶劑化幾丁質(zhì)-葡聚糖開始時，可以使用各種工業(yè)分離方法，例如采用錐形干燥器和Ntitsche過濾器、纟反式過濾器、帶式過濾器、流化床干燥器和噴霧i殳備，以實現(xiàn)幾丁質(zhì)-葡聚糖完全或部分干火喿。這些方法可以直4妄施用于:;容劑^幾丁質(zhì)-葡聚#唐，或者在對溶劑化幾丁質(zhì)-葡聚糖研磨后施用。為獲得具有4青細(xì)可控粒度的4分末，可向完全或部分干燥的產(chǎn)品、或溶劑化產(chǎn)品，施用各種工業(yè)破碎方法(fragmentationprocess)，例如厄刀式研磨、4垂式研磨、4昆式研磨、切刀研磨、刀片研磨、盤式研磨和反向噴氣研磨方法，以及石爭裂法(disintegratingprocess)，例如超聲波法和樣史斗分4b法。能夠4吏用用于分離粉末的各種工業(yè)方法以減小粒度分布寬度或選出特定的粒度，例如采用動態(tài)和靜態(tài)篩分和分級i殳備。因此，本發(fā)明涉及用于獲得水不可溶性或在有機(jī)溶劑中不可溶的、且具有精細(xì)粒度的真菌源幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末的方法，用于制備在水溶液或有機(jī)溶液中穩(wěn)定的幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物，尤其是用于制備懸浮液或乳液。用于獲得具有精細(xì)粒度的粉末的步驟在乳液、懸浮液或分散體制備之前或之后實施。該懸浮液或分散體或乳液包含通常用于化妝品領(lǐng)域中的物質(zhì)，有利地^使得可以配制化妝組合物?；瘖y組合物相對于總組合物的重量通常包含以重量計0.01%10%的^^艮據(jù)本發(fā)明的組合物，具體而言是以重量計0.01%~10%的懸浮液或乳液形式的根據(jù)本發(fā)明的組合物。通過"幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物的衍生物"，本發(fā)明發(fā)明人意指根據(jù)物理、化學(xué)和酶促方法，通過物理或化學(xué)改造，起始于幾丁質(zhì)-葡聚糖而獲得的所有化合物。本發(fā)明特別涉及包含含p-葡聚糖鏈的聚合物的真菌源多糖，所述p-葡聚糖鏈主要包含經(jīng)由(1,3)位鍵接的D-葡萄糖單元連接，優(yōu)選相對于(3-葡聚糖總質(zhì)量百分?jǐn)?shù)包含以質(zhì)量計至少80。/。的p-葡聚糖鏈，其中D-葡萄糖鍵接處于(1,3)位置，尤其是用于化妝制劑的生產(chǎn)。幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物根據(jù)KitoZymeS.A.在2005年7月4日提交的PCT專利申請WO03/068824和法國專利申請F(tuán)R0507066描述的方法能夠有利地獲得。該方法具體描述在申請F(tuán)R0507066的第18頁14^亍以及以下列等等。黑曲霉優(yōu)選用作該方法中的真菌源。D畫葡萄糖單元4建4妻和a(1,6)隱幾丁質(zhì)和|3-葡聚#唐鏈之間的比例決定于真菌和菌4朱。例如，本發(fā)明發(fā)明人已經(jīng)i正明，黑曲霉菌絲體包含的幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物中幾丁質(zhì)與P-葡聚糖的質(zhì)量比為在30:70和60:40之間，D-葡萄糖單元鍵>接主要是P(1,3)型。共聚物一般是白色粉末形式。無論溫度和pH如何，都基本不溶于水和有才幾溶劑中。這種共聚物是吸濕性的，一4殳能夠在水中吸收約IO倍其質(zhì)量(的水)。該幾丁質(zhì)-葡聚^f唐粉末例如能夠通過工業(yè)度的產(chǎn)品。本發(fā)明涉及一種有利地進(jìn)行純化的真菌源、優(yōu)選子嚢菌類真菌如黑曲霉的菌絲體的^是耳又物。純化的揭JF又物的水解產(chǎn)物，即^f氐分子量的幾丁質(zhì)和P-葡聚糖共聚物，也是本發(fā)明的一部分。本發(fā)明也涵蓋，在術(shù)語"幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物"或"幾丁質(zhì)-葡聚糖"范圍內(nèi)的，起始于幾丁質(zhì)-葡聚糖，根據(jù)物理、化學(xué)和酶促方法，通過物理或化學(xué)改造而獲得的所有化合物，所要達(dá)到的程度是，幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物的性質(zhì)仍保持為適用于所設(shè)想的應(yīng)用，且共聚物在本發(fā)明的粒度范圍內(nèi)仍不溶于水和有機(jī)溶劑，但是能夠以分散體、乳液或懸浮:液的形式配制。尤其是黑曲霉(其為食品和制藥工業(yè)檸檬酸工業(yè)化生產(chǎn)的副產(chǎn)品)的可用性和質(zhì)量，〗吏其成為用于4t妝品工業(yè)中的原物質(zhì)之選。其他包含幾丁質(zhì)和p-葡聚糖多糖的真菌源也可以使用，例如擔(dān)子菌類，尤其是真菌香菇(冬菇)和雙孢蘑菇。對于"真菌源多糖"，本發(fā)明發(fā)明人意指真菌細(xì)胞壁的純化提取物，其主要包含共聚物形式的幾丁質(zhì)和P-葡聚糖多糖及其衍生物。純化的才是耳又物相對于^是耳又物總質(zhì)量優(yōu)選包含以質(zhì)量計大于70%的幾丁質(zhì)-葡聚糖含量，優(yōu)選大于80%,優(yōu)選大于85%且更優(yōu)選大于卯％。對于"幾丁質(zhì)-葡聚糖"，本發(fā)明發(fā)明人意指從真菌細(xì)胞壁提取的純共聚物,.其包含N-乙?；?D-葡糖胺單元連接，且可選地包含少部分的通過a-構(gòu)象中的(1,6)-型鍵:接(幾丁質(zhì)連4妄)而;f皮》匕連接的D-葡糖胺單元,以及少部分的通過(3(1，3)、p(l，3)(l,6)或p(1,3)(1,4)型、優(yōu)選卩(1,3)型鍵接(P-葡聚糖連接)而彼此連接的D-葡糖胺單元。人們普遍認(rèn)為，真菌細(xì)胞壁多糖能夠根據(jù)其在堿性介質(zhì)中的溶解性而分成兩類，而細(xì)胞壁骨架是不可溶的。人們也已經(jīng)知道，不溶部分依賴于物種由各種比例的幾丁質(zhì)和P-葡聚糖聚合物構(gòu)成，p-葡聚并唐單元通過各種結(jié)構(gòu)的4建*接而連4妄，而幾丁質(zhì)和|3-葡聚斗唐連接之間的4建才妄是穩(wěn)、定的，例如由Siestma&Wessels有關(guān)釀酒酵母(接合菌)、粗糙鏈孢霉(子嚢菌)、構(gòu)巢曲霉(As^^^〃mmWw/aw)(子嚢菌)和灰蓋鬼傘(Copn'm^cz'weww5)(擔(dān)子菌)[SiestmaJH&WesselsJG.(1981)Solubilityof(1，3)國beta畫D誦(l,6)畫beta-D-glucaninfungalwalls:importanceofpresumedlinkagebetweenglucanandchitin.(1981)J.Gen.Microbiol.125:209]所示。人們已知，黑曲霉不;容性部分的幾丁質(zhì)和P-葡聚糖連接是;f皮此共1"介連4妄的，例如StaggCM和FeatherMS[Biochim.Biophys.(1973)Acta320:64]所^是及的。用于確定幾丁質(zhì)和P-葡聚3f唐連"t妄之間的共1^介連^妄性質(zhì)的方法，例:^，已經(jīng)由Fontaine等有關(guān)煙曲審[FontaineT,SimenelC,DubreucqG,AdamO，DelepierreM,LemoineJ，VorgiasCE，DiaquinM&Latg6JP.(2000)Molecularorganizationofthealkali-insolublefractionofy^e/^/〃"s/wmzga^scellwall，J.Bio.Chem.275:27594]和Kollar等有關(guān)酵母釀酒酵母[KollarR,PetrakovasE，AshwellG,RobbinsP&CabibE.(1995)Architectureoftheyeastcellwall,thelinkagebetweenchitinandbeta(l,3)glucan，J.Biol.Chem.270:1170]進(jìn)行了描述。根據(jù)本發(fā)明的真菌提取物能夠從各類真菌的菌絲體細(xì)胞壁獲得，包括接合菌類、擔(dān)子菌類、子嚢菌類(黑曲霉是其中的部分)和半知菌類，和/或其混合物。所述真菌源應(yīng)該進(jìn)4亍選擇/人而4吏得可以進(jìn)行如上和此后定義的多糖的提取。存在包含p-葡聚糖(但是這些單元特別地溶于水)，或者不含或包含很少幾丁質(zhì)結(jié)構(gòu)鏈的真菌源，因此這就使得不可能獲得本發(fā)明的多糖。本發(fā)明涵蓋了4吏得可能獲得本申請中定義的幾丁質(zhì)-葡聚糖聚合物的所有真菌。幾丁質(zhì)與P-葡聚糖的比率為95:55:95,優(yōu)選70:3010:90(m/m)。幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物的幾丁質(zhì)部分^尤選包含至少85。/o的N-乙酰基-D-葡糖胺單元和至多15%的D-葡糖胺單元，優(yōu)選至少90%的N-乙酰基-D-葡糖胺單元和至多10%的D-葡糖胺單元。本發(fā)明尤其涉及包含溶劑和至少一種才艮據(jù)本發(fā)明的具有精細(xì)粒度的共聚物的懸浮液或分散體。這種懸浮液或分散體根據(jù)常用方法進(jìn)行制備。該乳、液釆用7JC或油作為連續(xù)相^4居常用方法進(jìn)4于制備。有利地，首先制備乳液，然后加入幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物。這使得能夠特別地在用于在工業(yè)上制備其所通常應(yīng)用的工業(yè)的溫度條件下制備乳液，而無需壽義受共聚物降解的風(fēng)險。才艮據(jù)本發(fā)明的化合物特別地以化妝或藥物組合物的形式、優(yōu)選局部形式進(jìn)行制備。因此，對于這些組合物，賦形劑例如包含至少一種選自防腐劑、抗氧化劑、穩(wěn)、定劑、調(diào)節(jié)劑、4呆濕劑、潤月夫劑、乳化劑、表面活性劑、增稠劑、消光劑(mattingagent)、形成紋理劑(質(zhì)構(gòu)劑，texturingagent)、才是供光澤的試劑、成膜劑、增溶劑、顏料、染料、香味劑和遮光劑構(gòu)成的組中的化合物。這些賦形劑優(yōu)22選選自氨基酸及其衍生物、聚合甘油、酯、纖維素聚合物和衍生物、羊毛脂衍生物、磷酯、蔗糖基穩(wěn)定劑、天然和合成蠟、植物油、甘油三酯、未皂化化合物、硅及其衍生物、蛋白水解產(chǎn)物、脂溶性/水溶性酯、甜菜^5咸、氧化胺、甘氨酸和對羥基苯甲酸酯組成的組。作為能夠用于本發(fā)明組合物中的油，例如，可以^提及的有動物源的烴基油(hydrocarbon-basedoil),如全氪4b角鯊烯(異三十:院，perhydrosqualene);4直物源的烴基油，如含410碳原子的脂肪酸的液態(tài)甘油三酸酯，例如庚酸或辛酸的甘油三酸酯，或者可替換地例如葵花籽油、玉米油、豆油、鰻髓油(marrowoil)、葡萄籽油、芝麻油、4秦子油、杏々二油、澳大利亞堅果油、阿^立伯油(araraoil)、蓖麻油、鱘梨油、羊脂酸/羊蠟酸甘油三酸酯、荷荷芭油(希蒙得木油，jojobaoil)、牛油果油；合成酯和醚，尤其是脂肪酸的酯和醚，羥基化酯，多羥基酯；以及季戊四醇酯；線性或分支的無才幾或合成源的烴，如揮發(fā)性或不揮發(fā)性的石蠟油，及其衍生物，液體礦脂；脂肪醇；部分烴基和/或硅基的氟化油(fluorooil);硅油如具有線性或環(huán)狀硅鏈的揮發(fā)性或不揮發(fā)性的聚曱基硅氧烷(PDMS)，其在室溫下是液態(tài)或軟膏狀，尤其是環(huán)聚二曱基硅氧烷(環(huán)甲硅油)；苯基硅；及其混合物。各種賦形劑在配制實施例中進(jìn)行舉例說明。其他可以存在于油相中的脂肪物質(zhì)例如為包含830個石友原子的脂肪酸，如石更脂酸、月桂酸、棕櫚酸和油酸；蠟，如羊毛脂、蟲奪蠟、石蠟或微晶蠟、合成蠟；珪酮樹脂；以及硅酮彈性體。有利地，以上提及的組合物以選自含水或油溶液、霜劑或水凝膠或油凝膠(尤其是在罐或管中)，特別是洗浴凝II交、香波；乳狀液；乳液，樣l乳液或纟內(nèi)米乳液，尤其是水包油或油包水乳液、或復(fù)合乳液、或石圭基乳液；洗劑，尤其是在^皮璃或塑泮牛并瓦中或在量瓶或氣溶月交中的洗劑；安咅瓦劑；液體皂；皮月夫病學(xué)清潔4奉(cleansingbar);油膏；泡沫；無水產(chǎn)品，優(yōu)選液體、庫欠膏或固體，例如條狀形式，特別是唇膏形式構(gòu)成的組中的形式進(jìn)行配制。本發(fā)明還涉及口服給予人類或動物，優(yōu)選哺乳動物的組合物，使得可獲得選自抗氧性、降血液膽固醇或降血脂效應(yīng)、對免疫系統(tǒng)的刺激效應(yīng)、降血糖效應(yīng)(尤其是糖尿病的情況下)構(gòu)成的組的功效，以及預(yù)防和/或治療和/或纟氏抗選自血脂異常癥、動脈粥樣^更化、月巴胖癥、月巴胖才目關(guān)的疾病、心血管疾病、^i射綜合;f正、斗唐尿病,口高尿酸血癥組成的組的病理學(xué)的功效?？刂茙锥≠|(zhì)-葡聚糖粉末的粒度，尤其是獲得具有精細(xì)粒度的粉末，有利地使產(chǎn)品可具有更好的生物利用度。本發(fā)明還涉及如上所限定的包含至少一種多糖或真菌源提取物作為活性成分的藥用或食品補(bǔ)充組合物。本發(fā)明還涉及處理、預(yù)防或抵抗病理學(xué)(尤其是以上所才是及的)的方法，其包4舌將有效量的包含至少一種以上和此后描述中限定的多糖的組合物口服給予需要該多糖的個體。本發(fā)明還涉及在人體或動物、4尤選哺乳動物中用于減少體重或預(yù)防或4氐抗體重增加的方法。這種方法尤其涉及美容護(hù)理(estheticcareX本發(fā)明還涉及化妝護(hù)理方法，尤其是針對身體或面部的化妝護(hù)理，這種護(hù)理有利地選自以上纟是及的護(hù)理類型。因此，本發(fā)明涉及本發(fā)明的產(chǎn)品在制造特別需要用于以上描述的方法之一的組合物中或發(fā)揮以上或此后描述的功效之一中的用途。本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員易于通過傳統(tǒng)方法確定將使用的本發(fā)明產(chǎn)品的有效量。在化妝或制藥工業(yè)中，以總組合物的重量計，根據(jù)本發(fā)明0.01%10%有效量的真菌源多糖有利地被使用。優(yōu)選使用以總組合物重量計0.05%~5%,更優(yōu)選0.1%2%。當(dāng)局部施用時，每天1次或兩次施用是有利的。相對于以食物補(bǔ)充劑的形式給予的組合物的總重量，所利用的才艮據(jù)本發(fā)明的產(chǎn)品的有效量一般為以重量計0.001%100%。如果產(chǎn)品以凝膠膠嚢、粒劑或片劑形式給予，它們能夠以純的或以其他任何濃度4吏用，并伴隨其他活性組分或賦形劑。如果它們,皮并入到食品中，則產(chǎn)品的濃度小于15%,優(yōu)選小于10%。根據(jù)個體的體重，每天每個體給予130g根據(jù)本發(fā)明的產(chǎn)品是有利的。本發(fā)明還涵蓋a)通過4吏用具有4青細(xì)可控粒度的顆粒形式的真菌提取物而獲得的內(nèi)聚性多孔固體材料，和b)包含合成的或天然源(動物或植物)的聚合物基質(zhì)的內(nèi)聚性多孔復(fù)合固體材料，其中分布具有精細(xì)可控粒度的顆4立形式的真菌纟是耳又物顆粒。較概括地，本發(fā)明的內(nèi)聚性多孔材料通過采用具有精細(xì)可控粒度的顆粒形式的幾丁質(zhì)聚合物或幾丁質(zhì)-葡聚糖聚合物而獲得。以及較具體地，本發(fā)明涵蓋內(nèi)聚性多孔復(fù)合材料，其基質(zhì)是殼聚并唐且其中分布具有4青細(xì)可控粒度的顆粒形式的幾丁質(zhì)和/或幾丁質(zhì)-葡聚糖顆粒。對于本發(fā)明的目的，"復(fù)合"材沖牛是至少兩種材一+的組裝體(assembly)。對于本發(fā)明的目的，"內(nèi)聚性"材料是特征為即使在外力和應(yīng)力(壓縮、拉伸、拉長等)作用下仍具有保持穩(wěn)定和整體形式的能力的材料，這與脆性材料相反。因此，內(nèi)聚性材料能夠進(jìn)行塑造而給出適用于其用途(例如，如具有特定解剖形狀的移植物)的形狀和大小。對于本發(fā)明的目的，"多孔"材料是特征為存在尺寸、數(shù)目、形態(tài)、互聯(lián)性、各向同性/各向異性的程度等可調(diào)節(jié)且可控制的孔隙的材料。現(xiàn)有技術(shù)公開了許多與制備天然聚合物如殼聚糖或合成聚合物如聚氨酯、PLA(聚乳酸)、PGA(聚乙醇酸)、PLGA(乳酸和乙醇酸的共聚物)等的多孔材沖牛有關(guān)的文獻(xiàn)?，F(xiàn)有4支術(shù)也/>開了一些與制備富含包含幾丁質(zhì)或殼聚糖-葡聚糖的真菌提取物的組合物有關(guān)的文獻(xiàn)。然而，還沒有與乂人這些真菌提取物制備內(nèi)聚性多孔固體材詳牛有關(guān)的文獻(xiàn)。例如，專利RU2086247^厶開了以制備阻燃系統(tǒng)為目的，起始于低級真菌(黑曲霉)的菌絲體而獲得的包含殼聚糖-葡聚糖復(fù)合物的組合物。制備方法包括直接采用生物質(zhì)進(jìn)行沖洗和石咸處理的步驟，接著進(jìn)行凍干步驟。然而，該文獻(xiàn)并未提到以多孔材料形式獲得的產(chǎn)品。多糖曱殼素(sacchachitin)是富含乂人真菌松杉靈芝(Gawfife/7wa實體才是取的幾丁質(zhì)的組合物，其對傷口愈合的作用已經(jīng)由SHSu等(Developmentoffungalmyceliaasskinsubstitutes:effectsonwoundhealingandfibroblasts,Biomaterials20，61-68,1999;Fungalmyceliaasthesourceofchitinandpolysaccharidesandtheirapplicationsasskinsubstitutes,Biomaterials18，1169-1174,1997)和Hung等(CytotoxicityandimmunogenicityofSacchachitinandmechanismofactiononskinwoundhealing,JBiomedMaterRes56,93-100,2001)進(jìn)行描述。JP2006273912/>開了一種由p-葡聚糖和殼聚糖構(gòu)成的4莫制材料(moldedmaterial)。其并未7>開這些才才泮+是多孑L的。而且，它們并不包含其組合物中的幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物。26現(xiàn)有4支術(shù)因此并未7>開<壬^f可有關(guān)乂人真菌才是耳又物如幾丁質(zhì)或幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物獲得的具有精細(xì)可控粒度的顆粒形式的內(nèi)聚性多孔材并十的文獻(xiàn)。包含殼聚糖和第二化合物的多孔材料已經(jīng)廣泛地進(jìn)行描述。在第二化合物的許多實例中，可以才是及的有合成聚合物如PGA(Biomaterials,24(2003),1047-1057),或聚丙晞酸(MacromolecularBioscience,3(10)，2003,540-545)，天然聚合物如明月交(PolymerInternational,49(12),2000，1596-1599，CN1097980),膠原(WO0016817,KR2002017552,CN1406632,CN1387922,RU2254145),纖維素或絲(JP2000027027)，氧4匕纖維素(US2006172000)，無才;M匕合物如羥基石粦灰石(JournalofBiomaterialScience,Polymeredition,13(9),2002，1021-1032)。US2003190346涵蓋用于制備由殼聚糖和幾丁質(zhì)水凝力交構(gòu)成的復(fù)合海綿的方法，本發(fā)明的具體形式未被預(yù)見。CN1485097涵蓋起始于殼聚并唐/幾丁質(zhì)來制備海綿的方法。該文獻(xiàn)并未明確指出是否其是復(fù)合材料還是由殼聚糖或幾丁質(zhì)構(gòu)成的材料。該文獻(xiàn)的摘要公開了用于制備海綿的第一步驟在于溶解起始原料，其表明其涉及制備主要含殼聚糖的海綿，因為眾所周知幾丁質(zhì)是不溶性的，除非在非常特殊的條件(二曱基乙酰胺-LiCl系統(tǒng))下。沒有文獻(xiàn)公開包含殼聚糖和幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物的復(fù)合材料。實際上，本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知，無論溶劑是什么，幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物都是不溶的。人們也已熟知，用于制備復(fù)合材料尤其是生物可降解復(fù)合材料的方法包括，在以制備固體材料為目的移至去除溶劑的相之前，首先溶解并均勻混合溶解的化合物。因此，在制備固體(尤其是多孔的)幾丁質(zhì)或幾丁質(zhì)-葡聚糖材料或在制備由聚合物基質(zhì)如可生物降解的材料作為第一化合物和幾丁質(zhì)或幾丁質(zhì)-葡聚糖材料作為第二化合物構(gòu)成的固體(尤其是多孔的)復(fù)合材料中遇到的技術(shù)問題，是如何在第一步以使其與包含殼聚糖的溶液混合為目的溶解幾丁質(zhì)或幾丁質(zhì)-葡聚糖。本發(fā)明通過提出使用能夠與作為基質(zhì)的可生物降解聚合物的溶液混合的懸浮液、分散體或乳液形式的具有精細(xì)可控粒度的幾丁質(zhì)和/或幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物而提供了解決該問題的技術(shù)方案。類似地，本發(fā)明通過^^用包含具有精細(xì)可控粒度的幾丁質(zhì)和/或幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物的懸浮液、分散體或乳液而提供了制備多孔幾丁質(zhì)和/或幾丁質(zhì)-葡聚#唐固體的4支術(shù)方案。本發(fā)明的內(nèi)聚性多孔材料涵蓋a),人真菌纟是耳又物，優(yōu)選具有精細(xì)可控粒度的顆粒形式的幾丁質(zhì)聚合物和/或幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物，更優(yōu)選具有精細(xì)可控粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物而制備的內(nèi)聚性多孔材料；b)包含一種聚合物作為基質(zhì)，也稱為分散劑和真菌提取物，優(yōu)選具有4青細(xì)可控粒度的顆粒形式的幾丁質(zhì)聚合物或幾丁質(zhì)-葡聚斗唐聚合物作為第二4匕合物，也稱為受分散劑(dispersedagent)的內(nèi)聚性多孔復(fù)合材料。具體而言，本發(fā)明還涉及包含至少一種真菌提取物，優(yōu)選粒度小于500樣t米(nm)顆粒形式的至少一種幾丁質(zhì)聚合物和/或一種幾丁質(zhì)-葡聚4唐共聚物的多孔材料。有利地，多孔材料包含以上限定的真菌提取物。28本發(fā)明還涉及用于制備多孔材料的方法，其特征在于包含以下步驟在溶劑中分散，或乳化，或懸浮粒度小于500微米()am)的顆沖立形式的至少一種真菌纟是耳又物，然后除去該溶劑而獲得包含該真菌提取物的多孔材料。用于多孔材料'"'的幾丁質(zhì)聚合物和/或幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物顆粒的粒度小于250pm,更優(yōu)選小于90nm，甚至更加優(yōu)選小于63pm。優(yōu)選使用具有該精細(xì)可控粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物顆粒。本發(fā)明還涉及包含基質(zhì)和受分散劑的多孔復(fù)合材料，所述基質(zhì)也稱為分散劑，是至少一種類型的聚合物，而受分散劑是至少一種真菌提取物，優(yōu)選為粒度小于500微米(|um)的顆粒形式的幾丁質(zhì)聚合物或幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物。有利地，多孔材^牛包含如上限定的真菌才是耳又物。多^復(fù)^"材料》，包含粒度小于250pm,更優(yōu)選小于90jum，甚至更加優(yōu)選小于63|um的本發(fā)明的幾丁質(zhì)或幾丁質(zhì)-葡聚糖顆粒。優(yōu)選使用具有該精細(xì)可控粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物顆粒。本發(fā)明涵蓋用于制備包含基質(zhì)和分散于基質(zhì)中的制劑的多孔復(fù)合材料的方法，其特征在于其包括(i)溶解能夠形成多孔復(fù)合材料基質(zhì)的聚合物的步驟，(ii)在聚合物的溶液中，分散、或乳化、或懸浮粒度小于500微米(|Lim)的顆粒形式的至少一種真菌纟是取物的步驟，(iii)從包含真菌提取物的聚合物溶液中除去該溶劑的步驟，(iv)獲得包含形成基質(zhì)的多孔聚合物和形成受分散劑的真菌提取物的復(fù)合材料。多孔材料或多孔復(fù)合材料能夠形成一層或多層復(fù)合材料。多孔復(fù)合材料'b，的聚合物基質(zhì)可以是天然、動物或植物源(細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)聚合物)的。具體而言，天然源的聚合物(也稱為生物聚合物)可以選自糖胺聚糖(GAG),特別是透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸鹽(酯)、-琉酸軟骨素或肝素、骨膠原、海藻酸鹽、葡聚糖、殼聚糖及其混合物構(gòu)成的組。也可以選擇選自聚氨酯、聚丙烯酸酯等，或者生物可降解的合成聚合物構(gòu)成的組，尤其是選自合成的生物可降解的聚酯如基于乳酸、乙醇酸、s-己內(nèi)酯和^"二氧環(huán)己酮的均聚物和共聚物，或者4壬何其他天然聚酯，如聚羥基4連烷酸酯族的那些材津牛，例如基于羥丁酸酯、羥戊酸酯、聚原酸酯等的均聚物和共聚物，或者書f生于其組合或天然聚合物和合成聚合物組合的聚合物基質(zhì)構(gòu)成的組的合成聚合物。優(yōu)選基質(zhì)是生物可降解的聚合物。優(yōu)選生物可降解的聚合物基質(zhì)是具有任何分子質(zhì)量和任何程度乙酰化的殼聚糖。幾丁質(zhì)或幾丁質(zhì)-葡聚糖聚合物與殼聚糖聚合物(或生物可降解聚合物)的質(zhì)量比為5:9595:5，優(yōu)選為20:8080:20。優(yōu)選的組合物所具有的質(zhì)量比為40:6060:40,優(yōu)選45:5555:45,且更優(yōu)選約50:50。本發(fā)明的內(nèi)聚性多孔材料具有任何形狀、任何幾何結(jié)構(gòu)和任何尺寸，優(yōu)選為多孔膜、三維多孔載體(如平面載體、多孔泡沫)的形式、多孔樣i載體或王朱粒形式、多孔纖維形式、多孔管等形式。內(nèi)聚性多孔材料具有至少0.005g/cm3的密度。內(nèi)聚性多孔復(fù)合材料的楊氏模量(其表示抗壓強(qiáng)度)為至少0.05Mpa。該多孔材料的機(jī)械性能能夠進(jìn)行進(jìn)行調(diào)節(jié)，特別是根據(jù)受分散劑顆粒的粒度、基質(zhì)與受分散劑的質(zhì)量比和制備方法，尤其是才艮據(jù)起始?xì)ぞ厶侨芤旱臐舛冗M(jìn)行調(diào)節(jié)。意想不到地，已經(jīng)注意到殼聚糖與幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物的質(zhì)量比為約50:50，具有最佳的抗壓強(qiáng)度。本發(fā)明的材料涵蓋了各種孔徑和總孔隙率、各種形態(tài)(圓形、細(xì)長形、纖絲形等)、各種程度的互聯(lián)，或孔隙各向同性或各向異性的程度、孔隙壁的各種粗^造程度等，作為幾丁質(zhì)或幾丁質(zhì)-葡聚糖顆粒懸浮液濃度、選自精細(xì)可控粒度的粒度、這些顆粒與聚合物基質(zhì)的重量比和制備這些材料的方法的函數(shù)。本發(fā)明的內(nèi)聚性多孔材料具有的優(yōu)點是提供的幾丁質(zhì)和幾丁質(zhì)-葡聚糖材料能夠容易地處理和調(diào)節(jié)并且能夠在需要這些化合物的有益功效的化妝或藥物應(yīng)用中臨時或永久(以繃帶、墊料、移植物、貼片等形式)地進(jìn)行《合予，或者與其4也活性劑組合(例如浸漬、吸附、吸收、嵌孔等)。類似地，本發(fā)明的多孔復(fù)合材料具有的優(yōu)點是結(jié)合生物可降解聚合物基質(zhì)和具有^"細(xì)可控粒度的幾丁質(zhì)和/或幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物的有益作用。而且，幾丁質(zhì)和/或幾丁質(zhì)-葡聚糖的精細(xì)顆粒能夠固定在聚合物基質(zhì)的孔結(jié)構(gòu)中，賦予其粗糙結(jié)構(gòu)，而獲得較高比表面的特征。這些特征能夠構(gòu)成一種優(yōu)勢，用來將這種材料應(yīng)用到諸如細(xì)胞培養(yǎng)或組織重建的應(yīng)用領(lǐng)域中，對于這些領(lǐng)域細(xì)胞粘附的風(fēng)險專交高。用于制備內(nèi)聚性多孔材料'a，和內(nèi)聚性多孔復(fù)合材料'b，的方法包括的第一步為，以制備材津牛'a，為目的在水中或者以制備物質(zhì)'b，為目的在聚合物基質(zhì)的溶液中，懸浮、乳化或分散具有精細(xì)可控粒度的幾丁質(zhì)和/或幾丁質(zhì)-葡聚斗唐顆4立。在第二步中，才艮據(jù)本領(lǐng)域中技術(shù)人員已知的熱解技術(shù)對混合物進(jìn)行干燥或除去溶劑。在熱解技術(shù)中，凍干、在超臨界流體(超臨界C02)中起泡沫、熔鹽提取、浸漬-沉淀、靜電紡絲和固體自由成形都適用于實施這個步驟。優(yōu)選干燥步驟是凍干法。根據(jù)本發(fā)明對于制備，該方法包括的第一步(i)在于，根據(jù)質(zhì)量比05:9530:70、優(yōu)選05:9520:80，在水中懸浮具有精細(xì)可控粒度的本發(fā)明幾丁質(zhì)聚合物和/或幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物，接著均質(zhì)化至少30min,以制備膏劑為目的。在第二步(ii)中，通過任^T冷凍方法，尤其是通過將該膏劑放置于-18。C的制冷機(jī)中，冷凍該膏劑。在第三步(iii)中，冷凍的混合物進(jìn)行凍干而獲得內(nèi)聚性多孔材料。根據(jù)本發(fā)明的用于制備內(nèi)聚性多孔復(fù)合材料的一個具體實施方式，該方法包含的第一步(i)為將生物可降解聚合物基質(zhì)溶解于溶劑中，根據(jù)實-驗條件4吏其能夠完全溶解。優(yōu)選殼聚糖以1%10%的比例溶解在濃度為0.5%5%，優(yōu)選0.5%2%的稀酸溶液中。在能夠用于這個步驟的酸中，無機(jī)酸如例如鹽酸、氫氟酸、磷酸等，或有^/L酸如例如乙酸、曱酸、乳酸、乙醇酸、葡萄#唐酸、一寧4象酸、琥珀酸、谷氨酸等都是適合的。在第二步(ii)中，具有精細(xì)可控粒度的幾丁質(zhì)和/或幾丁質(zhì)-葡聚糖顆粒分散于包含聚合物基質(zhì)的溶液中，均質(zhì)化至少一分鐘，然后傾倒于才艮據(jù)尺寸、幾何結(jié)構(gòu)和將要制備的多孔復(fù)合材料的性質(zhì)而選擇的制模中?；|(zhì)聚合物與受分散劑的質(zhì)量比為10:9090:10。在第三步(iii)中，混合物通過任何冷凍^支術(shù)進(jìn)^f亍冷凍。在最后步-驟(iv)中，冷凍的混合物進(jìn)行凍干。所獲得的復(fù)合材料是多孔的?？紫兜拿芏?、尺寸和形態(tài)，以及該物質(zhì)的機(jī)械性能，尤其是抗壓強(qiáng)度性能，根據(jù)本發(fā)明的這種實施方式，能夠作為聚合物基質(zhì)的濃度、聚合物基質(zhì)與受分散劑的質(zhì)量比、基質(zhì)溶劑的性質(zhì)、制模的類型、該制模的填充體積以及冷凍條件的函數(shù)進(jìn)行調(diào)節(jié)。在附圖中圖1示出用于記錄幾丁質(zhì)-葡聚并唐共聚物固相^友13核,茲共寺展(13C-NMR)譜圖的條4牛。圖2示出幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物固相"C-NMR譜圖。圖3示出才艮據(jù)本發(fā)明的幾丁質(zhì)-葡聚糖顆粒(批次L26),尤其是灃立度為100200|im的部分(部分100-200)、泮立度〈100pm的部分(部分<100)、4立度為5001000pm的部分(部分5001000)和沖立度為250500jum的部分(部分250-500)的四個掃描電子顯孩i照片。圖4示出根據(jù)本發(fā)明的顆粒(批次L32)通過噴霧工藝進(jìn)行干燥后的掃描電子顯《鼓照片(;故大倍凄tx750)。圖5示出個體16周后獲得的光學(xué)4侖廓測量圖，顯示作為皮月夫上距離的函數(shù)的皺紋高度(Rz)(左前臂幾丁質(zhì)-葡聚糖基霜劑T1.5;右前臂無效對照霜劑TO)。該圖表明樣史4侖廓(microcontour)被顯著降低(采用幾丁質(zhì)-葡聚糖的平均值Rz7.0|am而采用無效對照劑9.6pm)并且皮膚更加繃緊。圖6示出多孔幾丁質(zhì)-葡聚糖物質(zhì)的兩幅掃描電子顯樣i照片。圖7示出縱截面上幾丁質(zhì)-葡聚糖和殼聚糖(幾丁質(zhì)-葡聚糖/殼聚糖10:90,m/m)的混合多孔材料的掃描電子顯微照片。圖8AC示出三種樣品獲得的幾丁質(zhì)-葡聚糖和殼聚糖的復(fù)合多孔材料的掃描電子顯孩t照片(圖8A:殼聚糖/幾丁質(zhì)-葡聚糖比例(m/m)25/75,圖8B:殼聚糖/幾丁質(zhì)-葡聚糖比例(m/m)50/50，圖8C:殼聚糖/幾丁質(zhì)-葡聚糖比例(m/m)75/25)。對于每一樣品，33幾丁質(zhì)-葡聚糖顆粒的粒度都小于63|Lim。左邊的照片示出縱截面，而右邊的照片示出沖黃截面。圖9A和9B示出采用粒度大于250|iim的幾丁質(zhì)-葡聚糖顆粒獲得的四種樣品所獲得的幾丁質(zhì)-葡聚糖和殼聚糖的復(fù)合多孔材料的掃描電子顯樣i照片。圖9A左側(cè)照片殼聚#唐/幾丁質(zhì)-葡聚并唐比例(m/m)25/75而粒度為250500,。圖9A右側(cè)照片殼聚糖/幾丁質(zhì)-葡聚糖比例(m/m)25/75而粒度為5001000拜。圖9B左側(cè)照片殼聚糖/幾丁質(zhì)-葡聚糖比例(m/m)50/50而粒度為250~500,。圖9B右側(cè)照片殼聚糖/幾丁質(zhì)-葡聚糖比例(m/m)50/50而粒度為5001000拜?；陂喿x了參照4又4叉以舉例i兌明的方式給出而不以任何方式限制本發(fā)明范圍的實施例的解釋性描述，本發(fā)明的其他目的、特征和優(yōu)點對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員將顯而易見。實施例是本發(fā)明的組成部分，而基于其全文所作的描述(包括實施例)，相對于任何現(xiàn)有技術(shù)似乎為新的任何特征，根據(jù)本發(fā)明功能和一^:性，都是本發(fā)明的組成部分。因此，每一實施例都具有一個普遍性的范圍。而且，在這些實施例中，除非另外指明，所有百分凄t都以重量百分?jǐn)?shù)給出；除非另外指明，溫度都以攝氏度表示；除非另外指明，壓力都為大氣壓。實施例獲得以下獲耳又的幾丁質(zhì)-葡聚斗唐共聚物的方法在專利申請WO03/068824和FR05.07066中進(jìn)行了描述。實施例'A，系列關(guān)于幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物及其具有各種可控粒度的顆粒的制備實施例A1:從黑曲霉菌絲體制備幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物將一團(tuán)50kg(干重)的濕黑曲霉菌絲體懸浮于0.5N的鹽酸溶液中，然后過濾。然后將固體物質(zhì)懸浮于1N的氫氧化鈉溶液中，然后過濾。固體物質(zhì)用水沖洗4次，然后采用壓濾才幾過濾并用錐形干燥器干燥。隨后將其懸浮于乙醇中，然后過濾，干燥。獲得約15kg的幾丁質(zhì)-葡聚糖(水匕次L25)。根據(jù)這種方法獲得的8批次的幾丁質(zhì)-葡聚糖的分子特性和組成在表1中癥合出。幾丁質(zhì)/葡聚糖質(zhì)量比是才艮據(jù)以下簡單描述的方法由圖1所示的條件下記錄的固相碳13核磁共振(NMR)譜圖計算得到的。幾丁質(zhì)-葡聚糖化合物(批次L28)的譜圖如圖2所示。(3-葡聚糖的比例是由以下四個共l展帶的面積確定的104ppm(幾丁質(zhì)和(3-葡聚#唐的碳1),23ppm(幾丁質(zhì)的CH3碳)，55ppm(幾丁質(zhì)的碳2)和61ppm(幾丁質(zhì)和p-葡聚外唐的石友6),以純幾丁質(zhì)作為參照。例如，可以根據(jù)式l進(jìn)行計算，其中I，是碳信號的面積，而其中[]cg是指所分析的幾丁質(zhì)-葡聚糖比值，[]c是參照幾丁質(zhì)的值。Cl是幾丁質(zhì)和p-葡聚糖的碳l,C2是幾丁質(zhì)的碳2。所4苗述的。D匪葡4唐胺單元的比例通過用氬氧化鈉在鹽酸過量的懸浮液中進(jìn)行電位滴定而進(jìn)行測定。幾丁質(zhì)-葡聚糖(批次L26)的微生物質(zhì)量和搜索病原體的結(jié)果在表2中鄉(xiāng)會出。幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末(批次L25)的粒度分布在表3中給出。表Al.l-各批次幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物的分子特性和組成<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>*7L7"資-萄果」凝^辦四個^岸潛果的^^庫媒i/為、^f^,f^厚合爭岸f沐法^^€教產(chǎn)^艱(5.J/7pm;表AL2-幾丁質(zhì)-葡聚糖批次(L26)的孩i生物質(zhì)量<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>因此由上表可以理解，才艮據(jù)本發(fā)明的共聚物具有高純度。表AL3-幾丁質(zhì)-葡聚糖批次(L25)的粒度分布<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>由該表可理解，根據(jù)實施例1的方法獲得的顆粒的粒度分布非常廣。實施例A2:遞J2^f,新備具省—吝^^t凌的兒T^~-蓊覆潛為、啟為了以可控的可變方式減小粒度，將根據(jù)實施例1獲得的15kg幾丁質(zhì)-葡聚糖(批次L25)在裝有各種幾4可形狀并具有20100目篩網(wǎng)尺寸的過濾器的錘式粉碎機(jī)(Fitzmill型號D,Fitzpatrick)中進(jìn)行研磨(表l中標(biāo)號A、B、C、D)。由此獲得四批次的幾丁質(zhì)畫葡聚糖粉末，其粒度分布通過在校準(zhǔn)的篩網(wǎng)上進(jìn)行篩分和重量分析進(jìn)4亍測定，如表1中所示。表A2.1:采用各種類型的篩網(wǎng)通過研磨獲得的幾丁質(zhì)-葡聚糖批次的粒度分布幾丁質(zhì)-葡^t批次^p磨篩網(wǎng)分布Om)%(m/m)L25D100目500-100019%250-50025%200-2501%100-20028%<10027%L25A65目500-100025%250-50041%100-25025%<1007%L25C40目250-50044%200-25014%100-20029%<10011%L25B20目500-100025%250-50040%200-25010%100-20017%<1007%由該表可以理解，小粒度的顆粒，例如小于200pm,通過采用精細(xì)篩網(wǎng)(例如100或65目)研磨幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末可容易地獲得。采用各種篩網(wǎng)研磨的各批次幾丁質(zhì)-葡聚糖，通過在校準(zhǔn)的篩網(wǎng)上篩分，進(jìn)4亍部分的組合，4分末在鉑金屬4b之后通過掃描電子顯微術(shù)進(jìn)行觀察(圖4)。在對每種樣品中約100個顆粒進(jìn)行分析后計算顆粒的長度和寬度(表A2.2)。表A2.2:通過SEM觀察研磨的幾丁質(zhì)-葡聚糖(批次L25)部分的尺寸38<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>由該表可以理解，正如圖4中掃描電子顯微觀察所示，錘式粉碎4支術(shù)產(chǎn)生卵形的非J求形顆4立。批次L25的100200ium部分是用于制備實施例C.l的試一驗霜劑(才示號T1.5)的產(chǎn)品。實施例A3:制備通過噴霧溶劑化的幾丁質(zhì)-葡聚糖而獲得的具有4青細(xì)可控粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖4分末為了獲得具有精細(xì)粒度的為球形顆粒的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末，采用混合機(jī)在3.75升水中制備包含0.15kg幾丁質(zhì)-葡聚糖(批次L25)的膏劑。該膏劑在200。C的溫度下噴霧干燥。獲得0.15kg粉末，其累積粒度分布在表A3.1中給出。圖5中的照片示出通過掃描電子顯樣i術(shù)觀察到的顆沖立。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>從該結(jié)果可理解，溶劑化幾丁質(zhì)-葡聚糖噴霧技術(shù)使得可以主要是其中73%的顆粒具有小于125pm的直徑的精細(xì)均勻粒度。實施例A4:制備通過在Niitsche過濾器中干燥溶劑化的幾丁質(zhì)-葡聚糖而獲得的具有精細(xì)可控粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末為了獲得精細(xì)的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末，將乙醇中溶劑化的包含50kg幾丁質(zhì)-葡聚糖的膏劑在溫度為60。C的Niitsche過濾器中干燥12h。獲得50kg幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末(批次L16),累積粒度分布在表A4.1中給出。由此獲得的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末的堆積(或填充)密度，才艮才居歐洲藥典(EuropeanPharmacopeia)2.9.15的方法測定，為0.71g/cm3。表A4.1:干燥后的幾丁質(zhì)-葡聚糖批次(批次L16)的粒度分布<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>從該結(jié)果可以理解，采用在乙醇中溶劑化的幾丁質(zhì)-葡聚糖通過Ntitsche過濾器干燥幾丁質(zhì)-葡聚3f唐的4支術(shù)，-使得可以主要獲得其中60%的顆粒具有小于125nm的直徑的4青細(xì)的均勻粒度。獲得的粉末通過篩分進(jìn)行分級(或分離，fractionate)以致從中選出粒度小于90pm的顆粒。這部分用于制備實施例1420的制劑。粒度小于90pm的這部分，通過掃描電子顯微術(shù)觀察，表現(xiàn)出經(jīng)圖<象分才斤而測定的43±18jam的平均尺寸。4立度小于90pm的部分的堆積密度，才艮據(jù)歐洲藥典2.9.15的方法測定，為0.61g/cm3。實施例A5:通過研磨和篩分制備粒度小于125um的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末為了獲得粒度小于125pm的粉末，在盤式粉碎機(jī)中研磨干燥的幾丁質(zhì)-葡聚糖批次[L07073CG],然后在引入到工業(yè)篩分設(shè)備中的篩網(wǎng)尺寸等于125|am(或120目)的校準(zhǔn)篩網(wǎng)上進(jìn)行篩分。每一研磨循環(huán)后獲得的粒度分布在表A5.1中給出。表A5.1:研磨前幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末的粒度分布直徑研磨前的累積第一研磨循環(huán)后的第二研磨循環(huán)后的比例(％,m/m)累^、比例(％，m/m)累積、比例(％,m/m)小于1000pm100%100%100%小于250pm27%97%100%小于180nm14%87%94%小于125nm3%52%73%小于90|xm0%34%53%小于50拜0%14%27%通過這些表可以理解研磨和篩分步驟對于增加顆粒獲耳又產(chǎn)量的重要性和功效。第一次研磨后獲得比例高得多的粒度小于125pm的粉末。在第二次研磨后這個比例進(jìn)一步增加。這個實施例表明高比例(大于50。/。m/m)的顆粒具有小于90pm的粒度，甚至大比例(超過25%m/m)的顆粒具有小于50pm的粒度。實施例B系列旨在用于耐受性研究的幾丁質(zhì)-葡聚糖基簡單霜劑的制備實施例和幾丁質(zhì)-葡聚糖耐受性研究的結(jié)果這些實施例的目的具體地是表明顆粒(無論其粒度如4可)形式的幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物的無害性。這些簡單組合物局限為以耐受性研究為目的、用于將幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物涂散在皮膚上的載體(support)。實施例Bl:旨在用于耐受性研究的幾丁質(zhì)-葡聚糖基簡單霜劑的制備基于幾丁質(zhì)-葡聚糖(批次L31)制備乳液型霜劑，將幾丁質(zhì)-葡聚糖51入到水相中，將獲得的膏劑采用切碎機(jī)(Ultraturax，10000rpm)均質(zhì)化約lh:簡單乳液包含02.5%各種濃度(表Bl.l)的幾丁質(zhì)-41葡聚糖?？瞻讓φ罩苿?對照co)在相同條件下進(jìn)行制備，不含幾丁質(zhì)-葡聚糖。表B1.1:基于幾丁質(zhì)-葡聚糖濃度為X。/。的(標(biāo)號CX)筒單化妝霜劑的組成<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>由J:匕，制備出C0、C0.5、Cl.O、C1.5、C2.0和C2.5。實施例B2:基于幾丁質(zhì)-葡聚糖的各種濃度的簡單霜劑的皮膚耐受性和水合能力(hvdratingcapacity)的研究方案一系列的四種水包油乳液型霜劑，包含0.5%2%的幾丁質(zhì)-葡聚糖濃度，其組成在實施例Bl中給出，通過將其施用到13位志愿者的前臂上進(jìn)行試-驗，這些志愿者平均年齡46歲(從32-61歲)，他們的皮膚在該部位是4文感的。這些霜劑與無幾丁質(zhì)-葡聚糖的無效對照霜劑(標(biāo)號CO)進(jìn)行比4交。產(chǎn)品在每一前臂上限定的區(qū)域(6.25cm2的三個區(qū)域)每天施用兩次。每2周進(jìn)行三種類型的生物度量學(xué)測試，共進(jìn)4于6周，以研究這些產(chǎn)品的耐受性和有歲支性。初始臨床^r測顯示，在4壬4可個體中都;殳有異常。在最后一次施用產(chǎn)品之后，間隔至少10小時，在上午進(jìn)行評價。生物度量學(xué)(biometrological)測試-過有象角質(zhì)儀(corneometry)、通過測量才艮才居CIE才示準(zhǔn)L*a*b*(MinoltaChromaMeterCR200)"^H古的反射比色法(reflectancecolorimetry)纟會出的參數(shù)a^來尋找任何可能的紅斑、刺激征兆。通過測定以g/m2/hr計的經(jīng)表皮水分流失(TEWL,transepidermalwaterloss)(Tewameter,C+KElectronic)尋找屏障功能的任何損害。對于正常皮月夫，TEWL為57g/m2/hr，而只于于干火喿皮月夫，則為1520g/m2/hr。測定阻塞(occlusion)下的角質(zhì)層的水分滲透動力學(xué)。"水分累積速率"(RWA)每過30秒周期(RWA30)通過在T30s和T0s時的值之差與在TOs時的值的比值進(jìn)行評價。該值越高，角質(zhì)層就越干燥，水分就越易于;參透，佳J尋其可以滲漏而不會將其吸收，這與TEWL是等價的。統(tǒng)i十在每一;平<介時間，通過Friedman非參IM企馬全隨后是Dunn才企驗進(jìn)行產(chǎn)品間的比4交。對于每一產(chǎn)品，才艮據(jù)相同的方法隨時間進(jìn)4亍比4交。對于每一參lt,通過Friedman非參凄t配對^r-瞼隨后是Dunn才全驗找尋不同時間獲得的值之間的顯著差異。結(jié)果a*、TEWL和RWA30的值，在5種霜劑于0、2、4和6周施用后至少10h進(jìn)4亍測定，列于表B2.1中。高達(dá)所研究幾丁質(zhì)-葡聚糖的最大濃度，其為2.0%,在6周的周期內(nèi)沒有觀察到紅斑、刺激或皮膚屏障受損的征兆，如由沒有增加的&*和TEWL值所證實的。另一方面，也i正實了，在阻塞下的角質(zhì)表面的水分累積速率(RWA30),在施用幾丁質(zhì)-葡聚糖基霜劑后顯著降低，這表明皮膚在表面具有更好的保水能力。對于濃度1.5%和2.0%,乂人施用的第二周開始，對于濃度0.5%和1.0%，乂人第四周開始，？見察到這種效應(yīng)。43表B2.1-反射比色法(a"、經(jīng)皮月夫的水分流失(TEWL)和水々滲透動力學(xué)(RWA30，每30秒周期的水分累積速率)的結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>帶有不同上標(biāo)數(shù)字的值，在同時間測定的系列中，相互之間顯著不同(p〈0.02)。實施例B3:通過體外在角質(zhì)層上進(jìn)行角膜磨鑲術(shù)(corneoxenometrv)研究對基于幾丁質(zhì)-葡聚糖的各種濃度的簡單霜劑的耐受性方案從15個健康的志愿者的前臂獲取氰基丙烯酸酯表面活組織切片，以對角質(zhì)層取樣。包含0%2%的各種濃度的幾丁質(zhì)-葡聚糖的霜劑是實施例5(0.5%2.5%)中的那些。它們用水稀釋至50:50(v/v),使得能夠保證產(chǎn)品與角質(zhì)層之間的緊密接觸。將溶液沉積到角質(zhì)層樣品上2h。在該4妄觸過程結(jié)束時，樣品用水徹底漂洗。干燥后，用堿性品紅和甲苯胺藍(lán)的醇溶液對它們?nèi)旧玪min。用水漂洗并干燥后，每樣品的顏色通過反射比色法L"口ChromaC"莫式測定。L氺和C^的差l直對應(yīng)于溫和度(mildness)的色度學(xué)指凄t(CIM)。CIM大于40表示產(chǎn)品^"皮力夫是非常溫和的。結(jié)果5種霜劑計算的CIM值列于表3.1中。無論所施用的制劑中幾丁質(zhì)-葡聚糖濃度如何，這些值都大于70，并且它們反映出6種產(chǎn)品的優(yōu)異耐受性。表B3.1:角質(zhì)層與包含幾丁質(zhì)-葡聚糖基霜劑的2倍稀釋的溶液接觸2h后的溫和度色度學(xué)指數(shù)(CIM=L*-C*)N=15標(biāo)號COC0.5C1.0C1.5C2.0平均CIM78.679.374.078.477.6標(biāo)準(zhǔn)偏差6.74.38.35.47.1中值CIM75.080.875.080.078.1實施例B4.'幾丁質(zhì)-葡聚糖刺激性和敏化潛力(sensitizingpotential)的臨床;平^介對具有正常皮力夫的50名志愿者(37±2歲)，才艮據(jù)Maibach-Marzulli方案，進(jìn)行6周的幾丁質(zhì)-葡聚糖的每文化潛力和低變應(yīng)原性(hypoallergenicity)的臨床評價。通過將幾丁質(zhì)-葡聚糖(L25)分散于水中制備濃度為10%的膏劑。該膏劑通過FinnChambe,封閉貼(occlusionpatch)施用到皮膚上。7見察紅斑、浮腫、干燥和起泡外觀的可能征兆，以1更辨別出產(chǎn)品的刺激潛勢(誘導(dǎo)相，inductionphase)禾口壽文葉匕;昝力(；敫發(fā)^目，challengephase)。從所有的觀察結(jié)果考慮，可以認(rèn)為幾丁質(zhì)-葡聚糖是非刺激性的和非過敏性的。因此，其能夠適用于權(quán)利要求"低變應(yīng)原性的"。實施例B5z對志愿者進(jìn)行幾丁質(zhì)-葡聚糖原發(fā)性皮膚刺激的體內(nèi)研究45通過施用10%含7^膏劑(如實施例B4中)形式的幾丁質(zhì)-葡聚糖(L25)24h(采用FinnChamber⑧封閉貼將其施用到皮膚)，評價幾丁質(zhì)-葡聚糖在皮膚上的原發(fā)性刺激(primaryirritation)。對10個個體進(jìn)行該研究。在皮膚病學(xué)控制下，在粘附貼片后30min和24h進(jìn)行觀察，旨在一企測皮膚的紅斑、浮腫和結(jié)構(gòu)改變的征兆。該研究的所有結(jié)果表明，幾丁質(zhì)-葡聚糖(以10%分散于水中)能夠分類為對皮膚無刺激性。實施例B6:幾丁質(zhì)-葡聚糖的眼睛刺激(體外，HET-CAM方法)才艮據(jù)Luepke等[FdChemToxic23,287，1985](作為動物試驗(OJof26/12/1996)的一種替代由官方i人可的)，通過HET-CAM測試在受孕的母雞的卵絨毛膜尿嚢膜(母雞卵測試-絨毛膜尿嚢膜)上對幾丁質(zhì)-葡聚糖(L25)的眼睛刺激進(jìn)行評價。以5%的濃度分散于水中的幾丁質(zhì)-葡聚并唐在力莫表面沉*積而4吏之4妾觸20秒。i式馬全在四個卵上重復(fù)進(jìn)行。5%幾丁質(zhì)-葡聚糖獲得最低分，這就將其歸類于實際上對母雞卯絨毛膜尿嚢膜是非刺激性的。實施例C系列基于具有精細(xì)可控粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖的懸浮液、分散體和乳液的制備實施例Clz幾丁質(zhì)-葡聚糖基日霜，旨在用于研究對老年志愿者的性能表C1.1:對照試驗霜劑(標(biāo)號TO)與基于幾丁質(zhì)-葡聚糖(批次L25)的濃度為1.5%的試驗霜劑(標(biāo)號T1.5)的比較相成分INCI功能濃度(％)A水水溶液適量Fucogel1000PP生物糖膠-l保濕劑甘油甘油冷穩(wěn)定劑2RiceNS觸感1NeocareCG90棕櫚葡萄糖苷乳化劑0.2KeltrolT黃原膠防乳化0.1VeegumHS5。/。溶液水溶液，硅酸鋁鎂防乳化20EuxylK300苯氧乙醇、對羥基笨曱酸甲酯、對幾基苯曱酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯曱酸丁酯防腐劑0.8BInutecSpl菊粉氨基甲酸月桂酯穩(wěn)定劑0.3SabonalC161850/50棕櫚醇增稠劑3.5牛油樹脂牛油樹潤膚劑1.5硬脂酸硬脂酸消光劑2Antiox_cos大豆甘氨酸(soyaglycine)、維生素E、抗壞血酸一宗櫚酸酯、卵-疇脂抗氧化劑0.5荷荷巴油荷荷巴油潤膚劑4琉璃苣油琉璃苣潤膚劑澳洲堅果油澳洲胡杉k潤膚劑NeodermCSO鯨蠟硬脂基辛酸酯改進(jìn)適用性1NeodermCSN異壬酸十六烷酯改進(jìn)適用性1NeodermPTC季戊四醇四辛酸g旨/癸酸酯變形效應(yīng)1.5VelvesilDM二曱基硅氧烷、鯨蠟硬脂基聚二曱基硅氧烷交聯(lián)聚合物觸感4SF1256環(huán)戊硅氧烷、環(huán)己硅氧烷施用時防止皮月夫漂白1C幾丁質(zhì)-葡聚糖(L25部分100-200—幾丁質(zhì)、p-葡聚糖活性劑Xx=o(標(biāo)號TO)或1.5(標(biāo)號T1.5)DCoolWoman341992-N香精香精0.5試驗霜劑(標(biāo)號T1.5)的制備工序相A的成分在80。C下混合，然后在75。C下混合相B的成分。將相B加到相A中，混合物用混合器進(jìn)4亍均質(zhì)化，然后冷卻。最后在40。C下加入成分C和S。47<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>實施例C2:幾丁質(zhì)-葡聚糖粒度對包含各種粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖的幾丁質(zhì)-葡聚糖基化妝霜劑的制備和感覺特性的影響含具有各種粒度的各批次幾丁質(zhì)-葡聚糖的日霜，以濃度為1.5%根據(jù)實施例Cl的相同方案制備1個未研磨、未篩分批次(L25)，以及實施例A2的3個研磨和分級的批次(L25)。所獲得霜劑的配制方便性和特性列于表C2.1中。表C2.1:用具有各種粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖(L25)粉末制備的霜劑特'I"生；感覺a犬況(浮見覺4犬況和觸感)分成15類，分i"直5乂于應(yīng)于最佳感覺印象。配制方便性分成05類，分值1對應(yīng)于配制最方便。<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>由該表易于理解，粒度越精細(xì)，將幾丁質(zhì)-葡聚糖引入化妝霜劑就越容易，感覺印象就越佳。也可以看出，引入精細(xì)研磨的幾丁質(zhì)-葡聚糖，尤其是采用部分5090pm，使得可以賦予霜劑相當(dāng)大的粘度，這對于配方設(shè)計師是非常有利的。實施例C3:幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末的粒度對唇膏的制備和特性的影響采用4種不同粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末和表C3.1中的成分制備唇膏制劑。粒度小于125、90、50和30pm的粉末根據(jù)實施例A5的方法以1.5%的濃度生產(chǎn)。直徑小于30|Lim的粒度部分在使用噴氣粉碎機(jī)進(jìn)行附加微粉化步驟后獲得。表C3.1成份INCI名稱%A蜂蠟白蜂蠟7豆角月旨(carobbutter)辛基十二烷醇、巴西棕櫚樹(巴西棕櫚)蠟14.25椰子油可可椰子26可可脂可可樹14.25杏仁油普通杏樹15舌甘扁杉匕油甜扁沖兆12ZeniglossUPH蓖麻異硬脂酸琥珀酸酯、氫化蓖麻油10B幾丁質(zhì)-葡聚糖；直徑<125nm;<90nm;<50,幾丁質(zhì)，(3葡聚糖1.5天然杏香料H1504辛酸/癸酸甘油三酯，杏0.2香草精H1202辛酸/癸酸甘油三酯，香果蘭0.1沙棘油俄羅斯大果沙棘0.1方案相A的成分在60°C下混合，然后混合物冷卻到45°C。相B的成分與相A混合并將混合物攪拌23min。立即將混合物引入到最后的包裝中，凝固點約40。C。獲得的唇膏的感覺特性列于表C3,2中。表C3.2:作為幾丁質(zhì)-葡聚糖粒度的函數(shù)的唇膏感覺特性幾丁質(zhì)-葡聚4唐顆并立直徑<125|nm<90|xm<50|am<30|nm感覺#見覺^1大況*1123感覺觸感、鳴b唇上的感覺承5555*感覺狀況(#見覺狀況和觸感)分成16類，分值6對應(yīng)于最佳感覺印象。由該實施例可以看出，為了能夠獲4尋專業(yè)品質(zhì)、均勻外7見和唇上具有愉悅觸感的唇膏，有必要4吏用直徑小于30pm的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末。采用直徑大于30pm的4分末，唇膏就會顯得不均勻，并且?guī)锥≠|(zhì)-葡聚糖顆粒就會明顯可見并能夠;陂感受到。49實施例C4.防曬乳液的制備"油包水"型防曬乳液釆用幾丁質(zhì)-葡聚糖(1.5%)和表C4.1中的成分制備。使用根據(jù)實施例A5制備的具有三種不同粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末<125拜，〈90拜和〈50fim。表C4.1<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>表C4.2:作為幾丁質(zhì)-葡聚糖粒度的函數(shù)的防曬乳液特性幾丁質(zhì)-葡聚糖的直徑<125<90nm<50|iun商己制方<更性*感覺#見覺^1犬況*244感覺觸感*444*感覺狀況(視覺狀況和觸感)分成15類，分值5對應(yīng)于最佳感覺印象。配制方便性分成05類，分值5對應(yīng)于配制最方便性。由該實施例可以看出，對于象這種防曬乳液的油包水乳液型制劑，優(yōu)選使用直徑小于90|um的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末以確保視覺狀況與廠商的要求一致。才艮據(jù)其他試一驗，具有直徑小于125|um的顆粒的共聚物適用于油包水乳液。實施侈'JC5-滋潤溶液(tonicsolution)的制備含水滋潤溶液釆用幾丁質(zhì)-葡聚糖(1.5%)和表5.1中的成分制備。使用的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末具有兩種不同的粒度<30|Lim和<10pm。該粉末按照實施例C3進(jìn)行制備。表C5.1成分INCI名稱%AIsoceteth-20Isoceteth-200.4Sensiva-SC50乙基己基甘油0.1NsocareP3C聚甘油-3癸酸酯0.2EuxylK500山梨酸鉀、苯甲酸鈉、咪唑啉基脲0.6MPDIOL曱基丙二醇4水水溶液90.2F腳gel1000PP生物糖膠-13B乳酸至pH5.0~6.0著色劑CI470510.1C幾丁質(zhì)-葡聚4唐<30nm幾丁質(zhì)，|3-葡聚4唐1.551方案相A的成分按序混合。緩慢加入水。用B調(diào)節(jié)pH至56,加入幾丁質(zhì)-葡聚糖并混合幾分鐘。表C5,2:作為幾丁質(zhì)-葡聚糖粒度的函數(shù)的滋潤溶液的特性<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>*配制方<更性和感覺狀況(4見覺狀況和觸感)分成1~5類，分值5《于應(yīng)于最佳感覺印象。配制方便性分成0~5類，分值5對應(yīng)于制劑最方便性。爿t人該實施例看出，為了制備具有可^妾受外觀的滋潤溶液并且為了4吏幾丁質(zhì)-葡聚糖顆粒{呆持在穩(wěn)定的懸浮液內(nèi)，顆粒的直徑必須小于10,。實施例C6:含BDIH-可i人證成分的晚霜的制備"油包水"乳液型晚霜采用幾丁質(zhì)-葡聚糖(1.5%)和表C6.1中的成分制備。這些成分滿足制造藥品、營養(yǎng)品、食品補(bǔ)充劑與身體護(hù)理產(chǎn)品的德國商業(yè)及工業(yè)聯(lián)合會(BDIH)的認(rèn)證要求。該霜劑能夠獲得BDIH標(biāo)識，表明其已經(jīng)凈皮該聯(lián)合會認(rèn)證。使用根據(jù)實施例C3制備的具有三種不同粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末<125,，<90jum和〈50ium。表C6.1<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>表C6.2:作為幾丁質(zhì)-葡聚糖粒度的函數(shù)的晚霜特性<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>*感覺狀況(視覺狀況和觸感)分成1~5類，分值5對應(yīng)于最佳感覺印象。配制方^吏性分成0~5類，分值5對應(yīng)于配制最方4更性。由該實施例可以看出，為了配制油包水乳液型護(hù)理產(chǎn)品，如這種晚霜，優(yōu)選使用直徑小于90^im的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末以確保視覺狀況與廠商的要求一致。實施例C7:"硅包水(water-in-silicon)"乳液型護(hù)理制劑的制備采用濃度1.5%幾丁質(zhì)-葡聚糖和表C7.1a和C7.1b中的成分制備兩種"硅包水"乳液型護(hù)理制劑。表C7.1a:制劑1的成分成分INCI名稱%ABY-11-030環(huán)戊石圭氧》克，PEG/PPG-19/19二曱硅油8DC245環(huán)戊-圭氧步克20B水水溶液適量NaCl氯化鈉2防腐劑適量C幾丁質(zhì)-葡聚糖<125nm幾丁質(zhì)，(3-葡聚并唐1.5DDC9701聚二曱基硅氧烷/乙烯基聚二甲硅氧烷交聯(lián)聚合物，氧化硅2表C7.1b:制劑2的成分成分INCI名稱%ADC5225環(huán)戊珪氧烷，PEG/PPG-18/18二曱珪油8DC245環(huán)戊-圭氧步克20B水水溶液適量NaCl氯化鈉2防腐劑適量C幾丁質(zhì)-葡聚糖〈125nm幾丁質(zhì)，p-葡聚辟唐1.5DDC9701聚二甲基硅氧烷/乙烯基聚二曱硅氧烷交聯(lián)聚合物，氧化硅2方案在50-60°C的溫度下混合相A的成分。向相A中加入相B的成分，混合物均質(zhì)化。攪拌下加入C，并將混合物均質(zhì)化直至達(dá)到完全結(jié)合。加入D，并將混合物均質(zhì)4b直至達(dá)到完全結(jié)合。實施例C8.*日間護(hù)理產(chǎn)品的配制包含1.5%幾丁質(zhì)-葡聚糖的日間護(hù)理產(chǎn)品，例如能夠根據(jù)CI中描述的配方進(jìn)行制備。實施例C9:身體護(hù)理乳的配制以下描述了不采用幾丁質(zhì)-葡聚糖(a)和采用幾丁質(zhì)-葡聚#唐(b)的兩種身體護(hù)理乳配方。54<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>成分INCI功能%A水水溶液37.55EUXYLK300苯氧乙醇、對羥基苯曱酸曱酯、對羥基苯曱酸丁酯、對羥基苯曱酸乙酯、對羥基苯曱酸丙酯、對羥基苯甲酸異丁酯防腐劑0.9甘油甘油穩(wěn)定劑RICENS二甲基咪唑酮大米淀灃分觸感2VeegumHS5%石圭酸鋁4美穩(wěn)定劑10KeltrolT黃原膠0.15C1216蔗糖月桂酸酯助乳〗匕劑0.2BSF1256環(huán)戊硅氧烷,環(huán)己硅氧烷4軍發(fā)性硅油9乳木果油牛油果樹處理12橄欖油油橄欖處理10NeodermIPP棕櫚酸異丙酯鋪展6NeodermPTC季戊四醇四辛酸酯/癸酸酯濡濕效應(yīng)(dampereffect)1.5SabonalCI61850/50棕櫚醇粘度調(diào)節(jié)劑3NeowaxFL65硬脂酸甘油酯，PEG-100硬脂酸酯助穩(wěn)、定劑2米蠟7K稻硬度0.2InutecSP1菊粉氨基曱酸月桂酯穩(wěn)定劑0.8CGingerychee506340香精0.5幾丁質(zhì)-葡聚糖(L16,部分<90,)幾丁質(zhì)，(3-葡聚糖緊膚劑1.5DCaroblend(0.05%CaroquestMCT)99.95%(PPG-15硬脂基醚)，0.05%(類胡蘿卜素，辛S吏/癸酸甘油三酯)著色劑0.2禾呈序相A的成分在80°C下混合，然后在85°C下混合相B的成分。4奪相B力o入才目A中，并以lOOOOrpm均質(zhì)4匕';昆合物5min，然后冷卻至40°C。在攪拌下向乳液中加入相C和D的成分。實施例C11/身體護(hù)理乳的制備例如，能夠才艮據(jù)以下配方制備包含1.5%幾丁質(zhì)-葡聚糖的身體護(hù)J里孝L。56<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>程序在75°C下混合相A的成分，然后在80°C下混合相B的成分。將相A力口入相B中，并以lOOOOrpm均質(zhì)4匕混合物3分4中，然后冷卻至40。C。攪:4半下向乳液中加入相C和D的成分，然后以lOOOOrpm使混合物均質(zhì)化1分鐘。加入幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末(E),整個混合物攪拌60分鐘(最終量為200g)。實施例C12:手霜的配制包含1.5%幾丁質(zhì)-葡聚糖的手霜例如可以根據(jù)以下所述配方制備。成分INCI功能%A水水溶液適量甘油甘油寒冷條件下的穩(wěn)定性3EuxylK300苯氧乙醇、對羥基苯曱酸乙酯、對羥基苯曱酸曱酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯曱酸丁酯、對羥基苯曱酸異丁酯防腐劑0.8KeltrolT黃原膠抗乳化0.1N60csrsOlive橄欖油水解小麥蛋白，棕櫚醇，油酸甘油酯，-更脂酸甘油酯，氫氧化鈉乳化劑4InutecSP1菊粉氨基曱酸月桂酯助穩(wěn)-定劑0.3二甲,圭油M350二曱硅油防白化(nti-whitening)5B乳木果油牛油果樹植物油3SF1214環(huán)戊硅氧烷，二甲硅油硅樹脂1NeodermPTC季戊四醇癸酸酯/辛酸酯抑制效應(yīng)2NeodermTCC癸酸甘油三酸酯酯/辛酸甘油三酸酯酯中性油3杏仁油普通杏才直物油3SabonalCI61850/50棕櫚醇穩(wěn)定劑3幾丁質(zhì)-葡聚糖(L16，部分<90—幾丁質(zhì)，(3-葡聚糖保護(hù)和再生劑1.5C泛醇再生劑1香精香料香精0.2方案將相A的成分在65°C下進(jìn)行混合，然后將相B的成分在65。C進(jìn)4亍混合。3奪相A力a入相B,以lOOOOrpm一夸混合物進(jìn)4亍均質(zhì)化3分鐘，然后冷卻到40°C。將成分C加入到乳液中，冷卻混合物，然后混合至少30分鐘。實施例C13:抗粉刺洗劑的配制包含1.5%幾丁質(zhì)-葡聚糖的抗粉刺洗劑，例如可根據(jù)以下所述配方進(jìn)4于制備。58成分INCI功能%ANeodermISN異壬酸異壬酯感官知覺Neoderm105新戊酸異癸酯改進(jìn)涂散NeodermABC12-15苯曱酸烷基酯干燥感荷荷巴油荷荷巴葉提取物才直物油1InutecSP1菊粉氨基曱酸月桂酯穩(wěn)-定乳-液0.2茶樹油茶樹精油香精油2PemulenTR2丙烯酸酯/C10-30丙蜂酸烷基酯交聯(lián)聚合物乳化劑0.3B水水溶液46.1EuxylK300苯氧乙醇、對羥基苯曱酸曱酯、對羥基苯曱酸丁酯、對羥基苯曱酸乙酯、S于羥基苯曱酸丙酯、對羥基苯曱酸異丁酯防腐劑0.9CarbopolEDT20202%丙烯酸酯/C10-30丙烯酸烷基酯交聯(lián)聚合物增稠劑20WalocelHM4000'2%羥丙基曱基纖維素增稠劑10幾丁質(zhì)-葡聚糖(LI6,部分<卯—幾丁質(zhì)，p-葡聚灃唐凈化劑1.5CornP04二淀4分磷酸酯保濕劑3程序?qū)⑾郃的成分進(jìn)行混合。將相B的成分進(jìn)行混合。將相A加入相B，以lOOOOrpm將混合物進(jìn)行均質(zhì)化3分鐘(最終量200g)。實施例C14::坑牛皮癬護(hù)-里產(chǎn)品的配制包含1.5%幾丁質(zhì)-葡聚糖的抗牛皮褲護(hù)理產(chǎn)品例如可以根據(jù)以下所述配方進(jìn)4于制備。成分INCI功能%A水水溶液38.2AvicelPC591微晶纖維素，纖維素膠增稠劑，穩(wěn)定劑1幾丁質(zhì)-葡聚糖(L16,部分<90,)幾丁質(zhì)，P-葡聚糖-抗牛皮褲活性劑1.5BNeocareP3C聚甘油-3辛酸酯抗菌溶劑1Centapowder雷公根粉調(diào)節(jié)細(xì)l包增殖0.1香精香料0.2C琉璃苣油琉璃苣(積雪草)4直物油30玫瑰精油麝香玫瑰才直物油20澳洲堅果油澳洲胡沖兆才直物油SabonalC161850/50棕櫚醇穩(wěn)定劑，感官知覺2InutecSP1菊粉氨基甲酸月桂酯穩(wěn)-定乳液1.2考呈序混合相A的成分?；旌舷郈的成分，并將相C升溫到75。C。攪拌下將相C力a入到相A中，并以lOOOOrpm均質(zhì)化混合物593分4f,然后冷卻至40。C?；旌舷郆的成分，然后3奪相B力口入到C/A乳液中?；旌衔锶缓笠詌OOOOrpm均質(zhì)化lmin(最終量為400g)。實施例'D，系列幾丁質(zhì)-葡聚糖基化妝霜的定期施用對皮月夫特性的影響實施例D1.'每日施用基于濃度為1.5%的幾丁質(zhì)-葡聚糖的日霜達(dá)4個月對老年個體皮月夫生物測定參凄t的影響該實施例舉例i兌明了實施例Cl描述的包含1.5%的幾丁質(zhì)-葡聚糖的霜劑(標(biāo)號T1.5)對皮膚各種特性的影響，尤其是在皮膚老化的情況下，霜劑和其對照劑應(yīng)用于老年個體前臂4個月的周期。由于對照霜劑是本身具有強(qiáng)水合性的制劑，該研究明顯地證明了研磨的幾丁質(zhì)-葡聚糖的作用。方案該研究在20位年齡為58±4歲的男性志愿者上進(jìn)行，任意地分別在他們的一只前臂上以每日兩次的頻率施用幾丁質(zhì)-葡聚糖基霜劑(T1.5)和對照霜劑達(dá)4個月。在每一個^M介時間，通過Friedman非參數(shù)4企-瞼隨后是Dunn4企-驗進(jìn)行產(chǎn)品間比4交。對于每一產(chǎn)品，根據(jù)相同的方法隨時間進(jìn)行比較。對于每一參數(shù)，在不同時間獲得的值之間的顯著差異通過Friedman非參數(shù)配對檢驗然后是Dunn才企-驗進(jìn)4亍尋找(p^直)。結(jié)果-1.通過squamometryX"^H^Hjt皮J3^^面結(jié)構(gòu)SquamometryX是從角質(zhì)層表面通過在測力計提供的在110g/cm2壓力下施用透明自粘盤(transparentself-adhesivedisk)約10秒、來進(jìn)4亍取才羊。角質(zhì)層樣品用甲苯胺藍(lán)和石咸性品紅溶液染色。通過反射比色法(Minolta色度儀)測定的色度(^*定義的顏色評價干燥癥的狀態(tài)。"正常"皮膚是光滑和良好水合的，所具有的squamometry指數(shù)。*約57。該值越高，角質(zhì)層越厚，而皮膚就越粗糙和千燥。在研究開始(MO)時，將要接受試驗制劑的兩個部位具有相等的squamometry指數(shù)值。隨后獲得的色度CM直列于表Dl.l中。對于制劑TO,在處理1個月后(Ml)(p<0.05),以及隨后的幾個月(pO.001)都觀察到顯著降低。對于制劑T1.5,改進(jìn)非常顯著且從處理第2個月(M2)以來就存在(p0.001)。在第一和第三個月(M3)(pO.Ol)，以及第一和第四個月(M4)(p〈0連)也是這種情況。兩種制劑的效能之間的比較顯示，T1.5從處理的第一個月末和隨后的幾個月內(nèi)是顯著4交好的(pO.OOl)。表Dl.l-顯示皮月夫鱗片狀態(tài)的Squamometry指數(shù)(色度C*)時間C*C*產(chǎn)品間比較(月)霜劑T1.5對照TOM011.95±2.2611.82±2.27NSMl8.79±2.310.49±2.59p<0.001M27.3±2.69.81±3.56p<0.0001M36.62±2.29.54±3.21p<0.0001M45.8±1.89.22±3.46p<0.0001時間之間的比4支(p)對照TOMlM2M3M4MOp<0.05p<0.001p<0.001p<0.001MlNSNSNSM2NSNSM3NS霜劑T1.5MlM2M3M4MONSp<0.001p<0.001p<0.001MlNSp<0.01p<0.001M2NSNSM3NSNS:值沒有顯著差異；MO表示O月等。2.通過紫外光增強(qiáng)的可視化作用(ULEV)評價膚色的不均勻性ULEV法(Visioscan)是非侵害性方法，其展示皮膚的鱗片狀61態(tài)，尤其是正發(fā)生脫離的精細(xì)鱗片，并表征角質(zhì)層角質(zhì)細(xì)胞(corneocyte)的內(nèi)聚性。測定^直表示為受該方法影響的皮膚表面的百分?jǐn)?shù)。當(dāng)皮膚是光滑的而角質(zhì)層是內(nèi)聚性的，ULEV百分?jǐn)?shù)則低，達(dá)5%~6%的數(shù)值。在研究中的開始時間(thetimeofinclusion)(MO)，以及處理一個月之后(Ml),受脫鱗過程(desquamationprocess)影響的皮膚表面的百分?jǐn)?shù)在兩個處理部位相似，約8-9%。隨后獲得的值列于表D1.2中。對照制劑TOvMv第一個月就提供了顯著改進(jìn)(p<0.001),而研究的剩余時間所述改進(jìn)持續(xù)存在，在第四個月達(dá)到7.4%的值。制劑T1.5也提供了顯著的改進(jìn)，這從第一個月就能看到(p<0.01)，在隨后的幾個月期間變得更強(qiáng)烈(p<0.001)。這能夠通過第一和第四個月之間(p<0.01)以及第二和第四個月之間(p<0.05)的改進(jìn)看出。相乂于于對照霜劑，所處理的兩個部4立之間的比較顯示出制劑T1.5在第二個月(p<0.01)以及在第三個月和第四個月(pO.001)的伊O異寸生。表Dl.2:受脫鱗過程影響的皮膚表面的百分?jǐn)?shù)(通過ULEV"紫外光增強(qiáng)的可浮見化作用"，Visioscan測定)<table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table>NS:^f直沒有顯著差異；M0表示0月等。3.通過光學(xué)輪廓測量術(shù)(opticalprofilometry)評價皮膚的形貌(relief):皮膚的形貌通過光學(xué)4侖廓儀(Hitachi照相4幾)進(jìn)4亍非侵害性觀察，分析4侖廓測量照片以計算皮膚粗糙的平均深度，Rz(|im)。在研究中的開始時間(M0),兩個吾IM立的RzUJ殳有顯著差異。隨后獲得的平均深度值列于表D1.3中。制劑T0在處理的第四個月末Rz值顯著降低(pO.Ol)。制劑T1.5從處理的第二個月直至研究結(jié)束Rz值高度顯著降低(p0.001)。在處理的第一個月和第三個月之間改進(jìn)也顯著(p<0.05)，在處理的第一個月和第四個月之間(p<0.001)以及第二個月和第四個月之間(p<0.05)改進(jìn)也顯著。與對照霜劑相比，發(fā)現(xiàn)制劑T1.5從第一個月(p<0.01)以及在隨后幾個月中(p<0.001)更為有歲支。圖5示出了施用T1.5霜劑和TO霜劑16周之后一個個體的兩前臂上獲得的輪廓測量照片。表D1.3:通過光學(xué)4&廓測量術(shù)測定的皮力夫^l4造度的平均深度<table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>NS:^t沒有顯著差異；MO表示0月等。4.通過測定皮膚中的共振運行時間評價皮膚的張緊性/彈性在皮月夫中的共l展運4亍時間(RRTM，4壬意^f直)通過彈性纖維組織測試#笨頭(Reviscometer)在皮膚上貼附的兩個條帶之間進(jìn)4亍測定。RRTM是皮膚固有張力和張緊性的良好指標(biāo)，因為皮膚張緊性和繃緊性越強(qiáng)，其形成凸起的皺褶就越少，超聲波傳播就越迅速。因此，RRTM越短，構(gòu)成皮膚的部分就越繃緊。RRTM也受到角質(zhì)層狀態(tài)、其內(nèi)聚力的影響；角質(zhì)層越正常，RRTM就越短。研究開始時和實-瞼一個月后，兩個部位之間RRTM值是相似的。隨后獲得的值如表D1.4所示。制劑TO在處理期間對RRTM值并未帶來4壬<可改變。制劑T1.5在三個月(p<0.01)和四個月(p<O.OOl)后i秀導(dǎo)RRTM顯著降^f氐，第一個月與第二個月之間(p<0.01)、第三個月和第四個月之間(p<0.001)也分別顯著降低。與對照制劑相比較，霜劑T1.5在兩個月和三個月后(p<0.01)以及四個月后(p<O.OOl)也顯著地更為有效。表D1.4:共振運行時間測定(RRT1VH壬意單位，彈性纖維組織測試纟笨頭)時間(月)霜劑T1.5對照TO產(chǎn)品間比較MO326士64327±61NSMl329±58329±54NSM2306±68329士60p<0.01M3302±60322±52p<0.01M4291±59322±56p<0.0001時間之間的比較(p)對照TOMlM2M3M4M0NSNSNSNSMlNSNSNSM2NSNSM3NS霜劑T1.5MlM2M3M4MONSNSp<0.01p<0.001Mlp<0.01p<0.001p<0.001M2NSNSM3NSNS:值沒有顯著差異；MO表示O月等。5.通過測定電容評價角質(zhì)層水合作用角質(zhì)層的水合作用通過采用角質(zhì)層含水量測試議(Corneometer)測定電容(任意值)進(jìn)行評價。皮膚的電容與皮膚含水量和角質(zhì)層的角質(zhì)細(xì)胞的水合狀態(tài)成比例。良好的水合皮膚電容為65，非常干燥的皮膚為3040。在研究開始時兩部位上電容值相似。隨后獲得的值如表D1.5中所示。3十照制劑T0在一個月(p〈0.05)和四個月(p<0.001)之后4吏《尋可能顯著增加電容。在兩個月和三個月的中間時間內(nèi)，施65用霜劑沒有觀察到對電容測定值的影響。制劑T1.54吏得在第一個月后(p<0.05),以及在第二個月和第四個月(p<0.001)電容值可顯著增大。在第一個月和第四個月之間也觀察到電容顯著增加(p<0.05)。在一個月之后(p<0.05)霜劑T1.5比對照霜劑顯著更為有效，而在2和4月(p〈0.001)甚至更加顯著有效。表DL5:通過皮膚電容的測定(角質(zhì)層含水量測試議)評價角質(zhì)層的水合作用時間(月)霜劑T1.5對照TO產(chǎn)品間比較M057.7士4.054.8±3.1Ml61.3±3.057.3士13.1p<0.05M262.9±2.757.2士12.9p<0.001M363.5±1.857.2±12.6p<0.001M464.6士1.958.0±12.5p<0.001時間之間的比較(p)對照TO1234M0t><0.05NSb<0.001MlNSM2NSM3霜劑T1.51234MOp<0.05p<0.001p<0.001p<0.001MlNSNSp<0.05M2NSNSM3NSNS:值沒有顯著差異；MO表示O月等。結(jié)論種生物測定參數(shù)都表示出幾丁質(zhì)-葡聚糖基霜劑(T1.5)與包含除了幾丁質(zhì)-葡聚糖之外的相同成分的對照霜劑(TO)相比的優(yōu)越性。老年皮膚更加光滑、鱗片更少、更加水合、更加緊致和干燥特征更弱。結(jié)果表明幾丁質(zhì)-葡聚糖基霜劑發(fā)揮了一系列作用，使得皮膚可重荻其彈性，而由此表現(xiàn)得更加光滑，少起伏形貌，更加容光煥發(fā)，使得可以將其描述成抗老化成分。該結(jié)果可以部分地通過相當(dāng)強(qiáng)的持久水合效果得以解釋，正如通過有象角質(zhì)4義和電容測試所指示的，但是其他更深的持久作用機(jī)理也被涉及，其使得皮膚可恢復(fù)其屏障功能而具有其激發(fā)的代謝和防護(hù)活性。66實施例D2:每日施用基于濃度為1.5%的幾丁質(zhì)-葡聚糖的日霜達(dá)4個月對在老年個體的眼部區(qū)域的皮膚的皺紋和表面局部拓樸學(xué)(surfacetopology)的影響研究該實施例舉例說明了基于濃度為1.5%的幾丁質(zhì)-葡聚糖的霜劑對皮膚各種特性的影響，特別是在皮膚老化的情況下，將測試霜劑和其對照霜劑每日施用到老年個體眼角的區(qū)域，達(dá)4個月的周期。日霜是采用表D2.1中的成分、根據(jù)實施例A5生產(chǎn)的粒度小于125jmi的幾丁質(zhì)-葡聚糖顆粒而制備的水包油型乳液，而對照霜劑不含幾丁質(zhì)-葡聚糖。表D2.1:包含粒度<125jam的幾丁質(zhì)-葡聚糖的日霜(測試)和不含幾丁質(zhì)-葡聚^f唐的霜劑(對照)<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table>方案在21個59±1歲(52~65歲)女性志愿者上實施單盲、個體內(nèi)研究(single-blind,intra-individualstudy),這些志愿者都有深度魚尾紋，她們向眼角區(qū)域的皮膚(魚尾紋)以每天兩次施用幾丁質(zhì)-葡聚糖基霜劑(測試霜劑)和不含幾丁質(zhì)-葡聚糖的霜劑(對照)4個月。在研究開始和隨后在應(yīng)用1、2、3和4個月之后，皮膚形貌(relief)參數(shù)釆用皮膚成像分析儀(SkinImageAnalyser)所分析的SilFlo⑧凝膠中的皮膚印跡的照片進(jìn)行表征。照片以35°角拍才聶以1更可以^使陰影區(qū)i或可一見4匕(或顯<象，visualization)。Quantirides⑧圖像分析軟件給出總的皺紋表面積，所有具有0.03mm2最小表面積的皺紋都被^r測到。由此給出皺紋的數(shù)量和平均深度，尤其是皮膚的微形貌的皺紋。參數(shù)上的變化隨后通過以下比較進(jìn)行計算比較時間t時所有志愿者的參數(shù)平均值與時間零時的參數(shù)平均值(△1)比較時間t時所有志愿者用包含幾丁質(zhì)-葡聚糖的測試霜劑處理的區(qū)域的參數(shù)平均值與采用對照霜劑處理的區(qū)域的參數(shù)平均值(A2)才艮才居以下^式Al(o/o)=Xt-Xt。100△2=()CTt—XTt0)—(Xpt—Xpt0)和△2(%)=^——;2y、100ATt0+^ipt—A附J其中Xt和Xto是采用測試霜劑或?qū)φ账獎┰跁r間t和tO時獲得的參數(shù)X的平均值；Xit和XTt。是釆用測試霜劑(包含幾丁質(zhì)-葡聚糖)在時間t和t0時獲得的參數(shù)X的平均值；Xpt和Xpt。是采用對照霜劑(無幾丁質(zhì)-葡聚糖)在時間t和to時獲得的參數(shù)X的平均值。統(tǒng)計通過Friedman非參數(shù)配對試驗接著采用Dunn檢驗尋找兩種參數(shù)(時間t對時間0，或測試霜劑對對照霜劑)之間的顯著差異。結(jié)果表D2,2:對于包含幾丁質(zhì)-葡聚糖霜劑(測試)和不含兒丁質(zhì)-葡聚糖的霜劑(對照)在時間t時與時間0時比較皮膚形貌(skinrelief)參數(shù)平均值的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>NS:差異不顯著表D2.3:采用包含幾丁質(zhì)-葡聚糖的測試霜劑處理的區(qū)域，與用對照霜劑處理的區(qū)域的參數(shù)平均值變化相比，在時間t時所有志愿者皮跌形貌參數(shù)平均值的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>從該實施例能夠推斷，包含1.5%粒度小于125pm的幾丁質(zhì)、葡聚糖的水包油乳液型霜劑使得能夠使魚尾紋區(qū)域的皮膚表面光滑，明顯減少皺紋的數(shù)量和深度，尤其是^f敖形貌的皺褶。皮膚的形貌通過以下進(jìn)4亍表;f正與時間零(Al)和使用對照霜劑(A2)比較，從使用幾丁質(zhì)-葡聚糖基霜劑3個月以來總起皺表面積顯著降低；與時間零(Al)和使用對照霜劑(A2)比較，使用幾丁質(zhì)-葡聚糖基霜劑4個月以后，微形貌的皺褶深度和數(shù)目顯著降低實施例'D3，有精細(xì)可控粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖的組合物的抗老化效應(yīng)。在幾丁質(zhì)-葡聚糖存在下的重構(gòu)人體表皮和人體成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)模型中原骨膠原I產(chǎn)生的研究所使用的生物模型包含源于正常人體表皮(PF2，第八代)的人體表皮(0.5cm5天)和成纖維細(xì)胞，其放置于24孔板中(每孑L一種重構(gòu)表皮和120000成纖維細(xì)月包)，在DMEM/HAMF12補(bǔ)充的共培養(yǎng)基中培養(yǎng)。采用表D3.1中的成分、粒度小于125(am的幾丁質(zhì)-葡聚糖(批次L25)制備的水包油乳液型簡單制劑，局部施用于表皮(5mg/cm2)。進(jìn)行兩個研究細(xì)胞毒性研究(表皮和成纖維細(xì)胞的細(xì)胞存活力)，和在培養(yǎng)基中對原骨膠原I產(chǎn)生的研究。表D3.成分INCI名稱%A水水溶液適量甘油甘油35%乳酸適量(至pH4.5)適量BNeodermTCC姿酸/辛酸甘油三酸酯5SimulgelEPG丙烯酸鈉/丙烯酰二曱基牛磺酸酯共聚物，聚異丁烯，辛基/癸基葡糖苷2.8C幾丁質(zhì)-葡聚糖<125nm;<90|im;<50|im幾丁質(zhì)，P-葡聚糖1.570細(xì)胞毒性在局部施用測試霜劑之后，與成纖維細(xì)l包共i咅養(yǎng)的表皮用5%C02在37。C下培養(yǎng)48小時。成纖維細(xì)胞和表皮的細(xì)胞存活力通過用MTT(溴化3-(4,5-二甲基噢唑-2-基)-2,5-二苯基四唑)對活細(xì)胞進(jìn)行比色標(biāo)記，以及通過對成纖維細(xì)胞形態(tài)學(xué)進(jìn)行一見覺評價，來進(jìn)行評估。用測試霜劑處理的培養(yǎng)物的細(xì)胞存活力與未處理的培養(yǎng)物(對照)的細(xì)胞存活力進(jìn)行比4交。對每個處理類型中三個培養(yǎng)物進(jìn)4亍。結(jié)果如表D3.2中所示。表D32-局部施用含1.5%幾丁質(zhì)-葡聚糖的霜劑在48小時4妄觸時間后對成纖維細(xì)胞共J備養(yǎng)物中重構(gòu)表皮和成纖維細(xì)胞的存活力的影響局部處理表皮的存活力(％)成纖維細(xì)胞的存活力(％)無(對照)100100包含1.5%幾丁質(zhì)-葡聚4唐的測i式霜劑94100原骨膠原I的產(chǎn)生-表皮/成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)物置于3種不同條件下-局部施用包含1.5%幾丁質(zhì)-葡聚糖的測試霜劑；-未處理(對照)；畫添力口TGF-(3和抗壞血酸的)容液以補(bǔ)充;咅養(yǎng)基并Y吏成纖維細(xì)胞導(dǎo)致的骨膠原產(chǎn)生最大化(參照)。每種條件下3個培養(yǎng)物用5%C02在37°C下溫育48小時。培養(yǎng)基中溶液的原骨a交原I的濃度通過ELISA分析(原骨力交原I型C-肽EIA試劑盒，BioWhittakerMK101)進(jìn)4亍測定。各組的結(jié)果之間的比豐支通過采用Dunnett多重比4交4企-險的方差分析(ANOVA)進(jìn)行計算(表D3.3)。71表D3.3:霜劑局部施用幾丁質(zhì)-葡聚糖基霜劑對表皮/成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)基(n=3)中原骨膠原I型產(chǎn)生的影響與對照組比較為參數(shù)p<table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table>由該實施例可以4尋^口，與未處J里的只t照纟且相比，向成纖纟,細(xì)月包共培養(yǎng)的重構(gòu)表皮局部施用基于濃度為1.5%的粒度小于125(am的幾丁質(zhì)-葡聚糖的霜劑，對于表皮和成纖維細(xì)胞是無毒的，這也非常顯著地促進(jìn)了培養(yǎng)基中原骨膠原I型的產(chǎn)生(其由表皮細(xì)胞和/或成纖維細(xì)胞分泌)?；跐舛葹?.5%的粒度小于125(^m的幾丁質(zhì)-葡聚糖的霜劑因此對皮膚發(fā)揮了抗老化作用，原骨膠原I型是骨月交原的前體，它是真皮細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分。實施例'D4，含具有精細(xì)可控粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖的組合物的抗老化作用。幾丁質(zhì)-葡聚糖對暴露于UVB輻射的人體細(xì)胞活組織中郎才各漢斯細(xì)月包(Langerhanscell)的保護(hù)作用的評4介方案朗格漢斯細(xì)胞是主要位于表皮最深層中的樹突細(xì)胞。它們不含黑色素并且對諸如暴露于UV輻射的外界侵襲非常敏感。在外應(yīng)力的情況下，它們傾向于從表皮遷移到真皮，然后激發(fā)淋巴細(xì)胞的活化。存在于表皮中的健康朗格漢斯細(xì)胞的數(shù)目因此用作應(yīng)力相關(guān)和老化相關(guān)的皮膚損傷的指示。所用^t型是源于活;險組織的皮膚外才直體(4cm2),在6-孔一反上在培養(yǎng)基(DMEM,2mML-谷氨酸,50IU/ml-50ng/ml青霉素-《連霉素)、10%胎牛血清中于37。C(95%空氣和5%(:02)培養(yǎng)。對以下3種處理的效果進(jìn)行比較-無局部施用的？寸照；-局部施用5mg/cm2才艮據(jù)實施例29制備的含1.5%粒度小于125|am的幾丁質(zhì)-葡聚糖的霜劑；-局部施用5mg/crtf具有保護(hù)因子20的防曬霜(參照)。進(jìn)行兩種研究細(xì)胞毒性研究，以及研究幾丁質(zhì)-葡聚糖基霜劑對受到或未受到UVB輻射照射的外植體中朗格漢斯細(xì)胞數(shù)目的影響。細(xì)胞辜性通過處理后24h的外植體細(xì)胞的細(xì)胞存活力(通過如實施例29中的MTT試-驗的方式進(jìn)行可一見化)進(jìn)行表征。結(jié)果列于表D4.1中。表D4.1:在表皮上局部施用含1.5。/。幾丁質(zhì)-葡聚糖的霜劑在48h接觸時間后對皮膚外植體的存活力的影響局部處理表皮的存活力(％)無(^j"照)100包含1.5%幾丁質(zhì)-葡聚糖的霜劑94UVB輻射對外植體中存在的使泉朗格漢斯細(xì)胞數(shù)目的影響執(zhí)行第一次局部施用，夕卜植體培養(yǎng)24h,然后，第二次局部施用后lh，在UVB+組中用UVB輻射(0.75J/cm2)照射外4直體，而在UVB誦組中不進(jìn)行照射。然后對外植體培養(yǎng)16h。每組使用兩個外植體。免疫組織化學(xué)冷凍外植體，將每個外植體的三個部分固定于丙酮/曱醇混合物中，然后用抗-CDla-FITC抗體((AbCysLO-CDla-F05)培養(yǎng)并進(jìn)行Hoechst細(xì)胞核染色lh。通過熒光顯《鼓術(shù)7見察這些部分。對<叉4又具有標(biāo)記熒光和通過樹突的存在而i正實的"正常，，形態(tài)學(xué)的朗格漢斯細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。與未進(jìn)行UVB照射的對照相比的保護(hù)程度根據(jù)以下7>式進(jìn)行計算-.°LC對照w.-LC對照uv十其中-LC處理uv+是暴露于UVB輻射的處理外植體中朗格漢斯細(xì)胞的數(shù)目。-LC對照uv+是暴露于UVB輻射的未處理外植體中朗格漢斯細(xì)月包的凄t目。-LC對照uv-是未暴露于UVB輻射的未處理外植體中朗格漢斯細(xì)月包的凄史目。結(jié)果列于表D4.2中。表D4,2:與未處王里的^t照和用因子-20防曬霜處J里的參照相比，用幾丁質(zhì)-葡聚糖基霜劑處理并暴露(UVB+)或未暴露(UVB-)于UVB輻射的皮力夫外才直體的表皮中用抗CDla抗體標(biāo)記的朗才各漢斯細(xì)胞(LC)的數(shù)目；保護(hù)程度<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>從該實施例推斷，局部施用基于濃度為1.5%的粒度小于125pm的幾丁質(zhì)-葡聚糖的霜劑，使得可以在暴露于UVB輻射的皮膚外植體的表皮中維持大部分的朗格漢斯細(xì)胞。計算得出對UVB暴露相關(guān)性損傷的保護(hù)程度為51%,因子-20防曬霜的保護(hù)程度為100%。這種抗UVB輻射的<呆護(hù)作用有助于幾丁質(zhì)-葡聚糖化合物的抗老化功效。實施例'E，口服給予粒度小于500um的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末對于表征人體中心血管危險的參數(shù)的影響該實施例旨在證實口月良給予人體粒度小于500um的幾丁質(zhì)-葡聚糖的抗動脈粥樣硬化、抗氧化、降血液膽固醇和降血脂功效所4吏用的才莫型是具有正常體重或體重稍樣支超重、且具有在標(biāo)準(zhǔn)々大食后為1.32.5g/L的膽固醇血癥的人。粒度小于500pm的幾丁質(zhì)-葡聚糖(根據(jù)實施例A5的方法獲得)以4.5g/天的速率，在主食前30min分3次攝取。在4個星期的周期內(nèi)研究功效。對照組接受4.5g/天當(dāng)量的對照。所述對照是內(nèi)用的藥物級的重高嶺土。30位2050歲的男性個體，體重指凄t為1828kg/m2，膽固醇血癥1.32.5g/L，將他們隨機(jī)、單盲地分成兩組(10個對照/20個進(jìn)行處理)。對研究考量的血液參數(shù)進(jìn)行醫(yī)學(xué)咨詢和測試，并且在挑選個體過程中填寫食物問巻調(diào)查。食物消耗、生化和抗氧化參數(shù)和人體測量參數(shù)在研究過程中測定3次(開始時、第二周時和研究結(jié)束時)。血樣使得可以分析表E1中重申的生化和抗氧化參數(shù)。人體測量測定涉及體重監(jiān)控、身高測定、腰圍測定(waistmeasurement)、圍測定、大腿圍和動月永壓測定。定期消耗具有可控粒度的粉末形式的植物多糖，如幾丁質(zhì)-葡聚#唐，對代j射疾病如高月旦固醇血、心血管疾病或廣義地，代j射綜合癥和肥胖癥發(fā)揮預(yù)防功效。表E1:在對人體試—瞼過程中監(jiān)控的生化和抗氧化參凄史75<table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table>應(yīng)該注意到，口服才聶取粒度小于500pm的幾丁質(zhì)-葡聚糖，顯著地改進(jìn)了人體內(nèi)脂質(zhì)和抗氧化劑分布和相關(guān)參數(shù)。這4吏得能夠推斷，定期消耗幾丁質(zhì)-葡聚糖對于預(yù)防動脈硬化癥以及廣義地關(guān)于有關(guān)病理學(xué)是有益的。實施例'F，系列至少包含具有精細(xì)可控粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖的多孔內(nèi)聚性物質(zhì)實施例F1:多孔材料形式的幾丁質(zhì)-葡聚糖的應(yīng)用通過均質(zhì)化lOOg具有精細(xì)粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末(L25,部分〈卯jum)和900g水至少1小時而制備幾丁質(zhì)-葡聚糖膏劑。將該膏劑在-18。C下冷凍，然后凍干。獲得具有良好機(jī)械強(qiáng)度的內(nèi)聚性多孔材料。通過掃描電子顯樣吏術(shù)觀察(圖6)，顯示出非常通氣的、各向同性的原纖結(jié)構(gòu)。實施例F2z內(nèi)聚性多孔復(fù)合材料形式的幾丁質(zhì)-葡聚糖和殼聚糖的應(yīng)用制備2%殼聚糖在1%乙酸中的溶液。將具有精細(xì)粒度的幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末(乙16,部分<90ium)分散于其中，分散體均質(zhì)化2分鐘。將分散體在-18。C下冷凍然后凍干。獲得具有良好機(jī)械強(qiáng)度的內(nèi)聚性多孔材料。通過掃描電鏡顯《效術(shù)觀察(圖7，縱截面)，顯示出非原纖性互聯(lián)多孔結(jié)構(gòu)，孔道呈現(xiàn)出一定方向。實施例F3:具有殼聚糖作為聚合物基質(zhì)以及幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物顆粒作為受分散劑的多孔復(fù)合材料的制備粒度對機(jī)械和形態(tài)學(xué)特性的影響根據(jù)實施例A5的方法制備各種幾丁質(zhì)-葡聚糖粒度。顆粒直徑小于63pm的部分和直徑為125250pm、250500pm以及500~1000pm的部分通過篩分進(jìn)行分離。分子質(zhì)量42K(通過毛細(xì)管測粘法測定分子質(zhì)量)和11%乙?；潭鹊臍ぞ厶侨芙庥谝宜?1%)中乂人而形成濃度等于2%(m/m)77的溶液。將給定重量的具有可控粒度的幾丁質(zhì)-葡聚沖唐加入到纟合定體積的該溶液中。通過f茲力攪拌2-3min使4mL體積的懸浮液均質(zhì)化，隨后傾倒于模(菱形)中并冷凍。然后將樣品放置于凍干器架上從而通過在真空下升華48h而除去溶劑。通過改變殼聚糖和幾丁質(zhì)-葡聚糖的重量比例以及幾丁質(zhì)-葡聚糖粉末的粒度而制備具有各種組成的內(nèi)聚性多孔復(fù)合材料。通過改變模的尺寸來生產(chǎn)具有各種規(guī)格的泡沫形式的復(fù)合材料-實施例六邊形聚苯乙烯稱量船，小規(guī)格4mL溶液；大規(guī)格15mL溶液。所制備的泡沫的配制參數(shù)在以下表F3.1中重申。表F3.1:殼聚糖/幾丁質(zhì)-葡聚糖混合物和內(nèi)聚性多孔復(fù)合材料的性能標(biāo)號殼聚糖/幾丁質(zhì)-葡聚糖的比例(m/m)幾丁質(zhì)-葡聚糖部分密度(g/cm3)楊氏模量(MPa)A225/75<63(^m0.1040.16±0.02B250/50<63IlUti0.0520.47±0.15C275/25<63|am0.0380.14±0.09A325/75125-250nm0.1140.23±0.01B350/50125-250ium0.0600.07±0.01C375/25125-250pm0.0370.15±0.05A525/75500-1000iam0.1140.06±0.02B550/50500-1000nm0.0600.25土0.06C575/25500-1000nm0,0390.31±0.01通過凍干獲得的泡沫形式的復(fù)合材料根據(jù)通過掃描電子顯微術(shù)(SEM)在微結(jié)構(gòu)方面進(jìn)行表征。泡沫的抗壓強(qiáng)度通過楊氏模量表示，在裝酉己低測力計(forcecell)的Instron5566拉伸-壓縮試-瞼機(jī)上通過軸向壓縮試驗進(jìn)行測定。樣品岸義受0.03N的預(yù)加負(fù)荷，以0.2mm/min的速度變形。乂人應(yīng)力/應(yīng)變曲線的初始線性區(qū)域測定楊氏模量。密度通過重量分析(泡沫的體積/質(zhì)量)進(jìn)行測定。結(jié)果報告于表F3.1中。SEM顯樣吏照片3口圖8所示。78由此，/人表F3.1可以理解，泡沫的密度隨著幾丁質(zhì)-葡聚糖比例的增加而增加。令人驚訝的是，可以注意到對于相等的殼聚糖/幾丁質(zhì)-葡聚糖比例(50/50),楊氏4莫量最高，而對于比例75/25和25/75卻顯著較低。由此，約50%幾丁質(zhì)-葡聚糖顆粒的比例構(gòu)成用于改進(jìn)泡沫機(jī)械強(qiáng)度、以及在這一點上的軸向抗壓強(qiáng)度的最佳比例。并且通過圖8可注意到，幾丁質(zhì)-葡聚糖顆粒均勻分布于泡沫的厚度，其密度隨著其初始比例邏輯性地增加。各處發(fā)if見的顆粒都處于孔道中并且經(jīng)常正好固定于孔道壁上。通過SEM對才羊品A5和B5(幾丁質(zhì)-葡聚并唐4立度為5001000)am)以及樣品A4和B4(粒度250500|Lim)獲得的圖<象記錄(圖9)顯示，不再存在結(jié)構(gòu)均勻性。凍干后樣品的下半部中顆粒尺寸及沉積物過大且集中。該實施例證實，以在多孔復(fù)合材料中應(yīng)用幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物為目的，該共聚物應(yīng)該具有精細(xì)的可控粒度。權(quán)利要求1.一種包含至少一種幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物的真菌提取物，所述幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物為微米顆粒形式，其中以重量計至少70％的所述顆粒具有小于500微米(μm)的粒度。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的真菌纟是取物，其特征在于，以重量計至少70%的所述幾丁質(zhì)-葡聚并唐共聚物顆粒具有小于355孩吏米(pm)的粒度。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的真菌提取物，其特征在于所述幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物包含比率為95:515:85(m/m)的所述幾丁質(zhì)的N-乙酰基-D-葡糖胺單元與P-葡聚糖的D-葡萄糖單元。4.根據(jù)權(quán)利要求13中任一項所述的真菌提取物，其特征在于，相對于所述真菌源才是耳又物的總質(zhì)量，所述真菌源的多辟唐包含以質(zhì)量計大于70%的幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物。5.根據(jù)權(quán)利要求14中任一項所述的真菌提取物，其特征在于，其來源于選自由子嚢菌類真菌、黑曲霉類真菌、擔(dān)子菌類真菌、香菇(冬菇)類真菌和雙孢蘑菇(草菇)類真菌及它們的任意混合物構(gòu)成的組中的真菌。6.根據(jù)權(quán)利要求15中任一項所述的真菌提取物，其特征在于，所述真菌提取物是所述幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物的水解產(chǎn)物。7.根據(jù)權(quán)利要求16中任一項所述的真菌提取物，其特征在于，所述孩i:米顆^立由以重量計至少50%的粒度小于250孩克米(卩m)的顆粒構(gòu)成。8.根據(jù)權(quán)利要求16中任一項所述的真菌提取物，其特征在于，所述纟鼓米顆粒具有小于125(im,優(yōu)選在50樣t米(pm)和90微米(|um)之間的粒度。9.根據(jù)權(quán)利要求16中任一項所述的真菌提取物，其特征在于，所述孩吏米顆粒具有小于90樣支米((am)的粒度。10.—種包含根據(jù)權(quán)利要求19中任一項所限定的真菌提取物的組合物。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的組合物，其特征在于，所述組合物是化妝組合物。12.根據(jù)權(quán)利要求10或11所述的組合物，其特征在于，所述多糖或所述真菌提取物以總體組合物的按重量計0.01%~10%的濃度使用。13.—種懸液、乳液或分散體形式的組合物，包含溶劑和至少一種根據(jù)權(quán)利要求19中任一項所限定的真菌提取物。14.一種根據(jù)權(quán)利要求1013中任一項所限定的組合物在實施化妝、皮膚化妝或皮膚病學(xué)護(hù)理中的應(yīng)用，其特征在于，所述護(hù)理選自由用于改善皮膚的水合、提高皮膚的保水能力、改善皮膚的屏障功能、改善皮膚保護(hù)和/或皮膚的防護(hù)活性、發(fā)揮抗老化功效、改善皮膚外觀、改善皮膚的均勻度、改善皮膚的緊致性和皮膚的張緊性、以及改善表皮對真皮的附著的身體或面部護(hù)理構(gòu)成的組。15.根據(jù)權(quán)利要求1013中任一項所限定的組合物在減少皺紋或者延纟爰或預(yù)防鈹鄉(xiāng)丈出現(xiàn)中的應(yīng)用。16.根據(jù)權(quán)利要求1013中任一項所限定的組合物作為食品補(bǔ)充劑組合物的應(yīng)用，優(yōu)選用于獲得選自抗氧化、降低血液膽固醇或降低血脂作用、對免疫系統(tǒng)的刺激作用、尤其是在糖尿病的情況下的降血糖作用構(gòu)成的組中的作用，以及在預(yù)防和/或4氐抗選自血脂異常癥、動月永粥才羊石更4b、月巴胖癥、月巴胖相關(guān)疾病、心血管疾病、代^射綜合;f正、^f唐尿病和高尿酸血癥構(gòu)成的組中的病理學(xué)的〗乍用。17.—種食品補(bǔ)充劑組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求1~9中任一項所限定的至少一種真菌源纟是取物作為活性成分。18.—種藥物組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求19中任一項所限定的至少一種真菌源纟是取物作為活性成分。19.根據(jù)權(quán)利要求19中任一項所限定的真菌源提取物或者根據(jù)權(quán)利要求1013中任一項所限定的組合物作為組合物的賦形劑的應(yīng)用。20.—種用于制備真菌提耳又物的方法，包括a)從真菌生物質(zhì)中提取和純化幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物，這種真菌才是取物中的所述聚合物不溶于水或有沖幾溶劑，b)乂人干燥的或溶解的幾丁質(zhì)-葡聚糖開始，進(jìn)4于過濾、干燥、研磨以及對研磨后獲得的顆粒分級的步驟，這些步驟同時或單獨進(jìn)4亍，并且與它們的次序無關(guān)，4吏;彈可以獲4尋其中以重量計至少70%的顆粒粒度小于500微米((am)的孩丈米顆粒。21.—種多孔材料，包含粒度小于500微米(|Lim)的顆粒形式的至少一種真菌提取物，優(yōu)選至少一種幾丁質(zhì)聚合物和/或一種幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物。22.才艮據(jù)權(quán)利要求21所述的多孔材料，其特征在于，所述多孔材料包含根據(jù)權(quán)利要求1~9中任一項所限定的真菌提取物。23.根據(jù)權(quán)利要求21或22所述的多孔材料，其特征在于，所述真菌提取物具有小于250微米、優(yōu)選小于90微米、更優(yōu)選小于63微米的粒度。24.—種用于制備多孔材料的方法，其特征在于，包括以下步驟在溶劑中分散或乳化或懸浮至少一種粒度小于500孩t米的顆粒形式的真菌才是取物，然后除去這種溶劑并獲得包含所述真菌提取物的多孔材料。25.—種包含基質(zhì)和被分散劑的多孔復(fù)合材料，所述基質(zhì)，也稱為分散劑，是至少一種類型的聚合物，而所述被分散劑是粒度'J、于500微米(pm)的顆粒形式的至少一種真菌提取物，優(yōu)選幾丁質(zhì)聚合物或幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物。26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的多孔復(fù)合材料，其特征在于，所述多孔材料包含根據(jù)權(quán)利要求1~9中任一項所限定的真菌提取物。27.根據(jù)權(quán)利要求25或26所述的多孔復(fù)合材料，其特征在于，所述真菌提取物具有小于250微米、優(yōu)選小于90微米、更優(yōu)選小于63微米的粒度。28.—種用于制備包含基質(zhì)和分散在所述基質(zhì)中的試劑的多孔復(fù)合材料的方法，其特征在于，包括(i)溶解能夠形成所述多孔復(fù)合材料的所述基質(zhì)的聚合物的步驟，(ii)將至少一種粒度小于500微米的顆粒形式的真菌提取物分散、或乳化、或懸浮在所述聚合物的溶液中的步驟，(iii)從包含所述真菌提取物的所述聚合物的溶液中除去所述溶劑的步驟，(iv)獲得包含形成所述基質(zhì)的所述多孔聚合物和形成所述被分散劑的所述真菌提取物的復(fù)合材料。全文摘要本發(fā)明涉及一種微米顆粒形式的幾丁質(zhì)-葡聚糖共聚物。本發(fā)明具體而言提供了一種用于制備化妝組合物、特別是皮膚病學(xué)或皮膚化妝組合物的包含微米顆粒形式的幾丁質(zhì)-葡聚糖的共聚物。具體而言，本發(fā)明涉及一種用于面部或身體護(hù)理，例如使皮膚水合、緊致或光滑、以及發(fā)揮抗老化功效包括抗皺效應(yīng)的化妝組合物。本發(fā)明的目的也是提供一種例如能夠用于組織工程或細(xì)胞培養(yǎng)中或者能夠用作化妝品或制藥工業(yè)中的原料的多孔材料。文檔編號C08B37/08GK101583630SQ200780049901公開日2009年11月18日申請日期2007年11月20日優(yōu)先權(quán)日2006年11月20日發(fā)明者山德里內(nèi)·戈蒂埃,讓-米歇爾·布呂耶爾,韋羅妮克·馬凱申請人:基多塞米股份公司