專利名稱：一種從提取苦豆子總堿后的剩余藥渣中提取多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及提取方法，具體地講，涉及從植物中提取多糖的方法。
背景技術(shù)：
苦豆子(Sophora alopecuroides L.)系豆科槐屬植物，是一種多年生草本植物。 苦豆子全株味苦性寒，藥用根、莖、全草及種子，具有清熱解毒、祛風(fēng)燥濕、止痛殺蟲(chóng)等作用。 隨著現(xiàn)代藥理藥效學(xué)研究的不斷深入，苦豆子的藥用價(jià)值被醫(yī)藥界所公認(rèn)?？喽棺邮侵匾乃幱弥参镔Y源和飼用植物資源，早在1914年國(guó)外就從苦豆子籽實(shí)中提出“苦參總堿”。世界性研究苦豆子始于20世紀(jì)30年代初，前蘇聯(lián)學(xué)者用提出的“苦參總堿”入藥后，發(fā)現(xiàn)具有清熱解毒，抗菌消炎等作用，又分離出槐定堿、槐胺堿。此后，波蘭、美國(guó)學(xué)者相繼研究報(bào)導(dǎo)了苦豆子植物體內(nèi)的多種化學(xué)成份。1930年被正式列入《美國(guó)藥典》，在世界上廣泛引起重視并用于醫(yī)藥界，隨后美國(guó)抗癌研究中心發(fā)現(xiàn)苦參堿中槐果堿在臨床上有抗癌效果。國(guó)內(nèi)研究始于1971年，為了開(kāi)發(fā)資源，1975年研制的苦豆子生物堿制劑“苦豆子片”治療腹瀉新藥，被正式載入1977年版《中國(guó)藥典》，現(xiàn)改名為“克瀉靈片”。1983年開(kāi)發(fā)出“苦參堿制劑婦炎栓”，用于治療婦科疾病。1984年國(guó)內(nèi)建成了第一條苦豆子生物堿工業(yè)生產(chǎn)線，生產(chǎn)苦豆總堿、苦參素、苦參堿、槐定堿等，開(kāi)始了苦豆子生物堿系列產(chǎn)品的批量生產(chǎn)?？喽棺拥幕瘜W(xué)成分主要是蛋白質(zhì)、糖類、有機(jī)酸、黃酮類、色素和生物堿?？喽棺由飰A屬于喹諾里西啶生物堿，由三價(jià)氮原子形成的稠合的二個(gè)哌啶環(huán)，又稱雙稠哌啶，仍屬于哌啶或吡啶的衍生物。按其結(jié)構(gòu)可分為3個(gè)類型即羽扇豆堿，二環(huán)型；金雀花堿，三環(huán)型；鷹爪豆堿，四環(huán)型。目前從苦豆子中提取分離及鑒定的生物堿有苦參堿、槐果堿、槐胺堿、新槐胺堿、 槐定堿、苦參堿-N-氧化物、槐果堿-N-氧化物、槐定堿-N-氧化物、3-d-羥筌槐定堿、13， 14-脫氫槐定堿、N-羥定槐定堿、N-羥筌-13，14-脫氫槐定堿、苦豆堿、N-甲基苦豆堿、烯丙基苦豆堿、金雀花堿、N-甲村金雀花堿、鷹啶葉堿、三巴豆筌基四胺及具有羽扁豆結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的兩種新生物堿，共21種生物堿?？喽棺又饕飰A組成和含量受多種因素影響，如苦豆堿在葉內(nèi)含量較高而根中沒(méi)有，槐果堿和槐定堿則分布于各組織中?？喽棺由锟倝A在青綠期葉中含量為2. 790%, 花蕾中為3. 760%，莖中為4. 765%，全株5. 218%;霜后期葉為2. 705%，莖中為3. 179%，種子中7. 446%，主要集中在種子里。就地區(qū)而言，寧夏產(chǎn)區(qū)生物總堿含量最高5. 218%。另外生長(zhǎng)在堿性土壤中的苦豆子中不含賴氨酸、甘氨酸、脯氨酸，而色氨酸等含量較高。氨基酸含量直接影響植物體內(nèi)生物堿的合成，這是生物堿組成和含量因產(chǎn)地不同而存在差異的主要原因。(2)藥理作用苦豆子味極苦、性寒有毒，具有清熱解毒，抗菌消炎、止痛殺蟲(chóng)等作用。民間用根治療喉痛、咳嗽、痢疾及濕疹等。目前用于藥物開(kāi)發(fā)的主要有8種生物堿苦參堿，氧化苦參堿，槐果堿，氧化槐果堿一，槐胺堿槐定堿，萊曼堿，苦豆堿?？喽棺由飰A的藥理作用①對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用，體現(xiàn)在鎮(zhèn)靜催眠、鎮(zhèn)痛及降溫；②對(duì)心血管系統(tǒng)的作用，體現(xiàn)在抗心律失常、正性肌力作用，降壓和降低心率作用，對(duì)心肌缺血和梗塞的保護(hù)作用，降血脂作用； ③抗病毒、抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用，苦參總堿能抑制多種病毒繁殖.增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)功能和免疫促進(jìn)作用；④抗腫瘤作用，對(duì)肝癌細(xì)胞抑制作用明顯，對(duì)宮頸癌、淋巴肉瘤、肺癌也有抑制作用；⑤對(duì)平滑肌的作用，總堿和一些單體生物堿均能對(duì)抗由炎癥介質(zhì)誘導(dǎo)的離體回腸收縮，對(duì)支氣管平滑肌具有松弛作用，對(duì)整體模型也有作用⑥目前臨床應(yīng)用苦豆子浸膏片、 苦豆堿治療急性菌痢，槐果堿片治療支氣管哮喘，苦參堿治療婦科炎癥、苦參素注射液治療慢性乙型病毒性肝炎均取得很好的療效，槐定堿和苦豆子總堿注射液用于治療腫瘤的研究也已開(kāi)發(fā)成功。臨床研究用苦參素注射液(為從苦豆子中提取的生物堿溶液，98%為氧化苦參堿)肌注，治療慢性乙型肝炎65例，HbeAg.HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率為40. 6 % (實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，1999， 10 844)；用苦豆子散劑，撒布于宮頸糜爛處，以無(wú)菌棉球填塞防其脫落，治療宮頸糜爛75 例，痊愈70例，有效3例(中國(guó)民間療法，2000，10 33)；用苦豆子堿注射液肌注，同時(shí)用2% 苦豆子總堿乳膏外搽患處，治療銀屑病120例，痊愈28例，基本痊愈20例，顯效32例，有效 24例(中華皮膚科雜志，1999，2 79)。目前，多數(shù)對(duì)苦豆子的提取時(shí)提取苦豆子中的生物堿成分，《苦豆子膠的研究》(黃啟華于海泥沙逸仙植物學(xué)報(bào)1984.26( :195-201)報(bào)道了“新疆產(chǎn)的苦豆子，經(jīng)熱水泡漲后手工剝離，獲得內(nèi)胚乳(占種子的12.8%)。經(jīng)80°C烘干、磨碎、過(guò)100目篩，即得苦豆子膠”且該文章3段倒數(shù)2行文字記載“苦豆子膠雖然取自不同的產(chǎn)地的種子，但其主要成分均為半乳糖和甘露糖”，進(jìn)一步將“苦豆子膠水解…計(jì)算出苦豆子膠中的總糖含量為 56. 0%",即該文獻(xiàn)通過(guò)粗略的方法獲取苦豆子膠，再將苦豆子膠水解得到的糖含量較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，提供的一種從提取苦豆子總堿后的剩余藥渣中提取多糖的方法，該方法采用從提取苦豆子總堿后的剩余藥渣作為原料，所提取的多糖的成分純度高，提取方法簡(jiǎn)單有效，避免浪費(fèi)，且合理利用了資源。本發(fā)明提供的一種從提取苦豆子總堿后的剩余藥渣中提取多糖的方法，包括以下步驟(1)粉碎取苦豆子原藥材，粉碎，過(guò)10-60目篩；(2)醇提取步驟(1)過(guò)篩后的苦豆子，將其裝入滲漉柱內(nèi)，用濃度為30% -100% 的乙醇浸泡18-24h ；再以濃度為30% -100%的乙醇為溶劑，以流速10-15ml/min，滲漉提取，得到苦豆子中所含生物堿成分；至滲漉提取液與碘化鉍鉀反應(yīng)無(wú)顏色變化時(shí)停止?jié)B漉， 取苦豆子提取苦豆子生物總堿后的藥渣，晾干備用；(3)水提向步驟O)晾干后的固體產(chǎn)物中加入體積為該固體產(chǎn)物6-15倍量的水，于60-110°C，回流l-5h得水提物；(4)醇沉將步驟C3)得到的水提物于35-90°C減壓濃縮成密度為1. 02-1. 1的液體，加入乙醇至乙醇終濃度為40% -90%醇沉，4°C冰箱放置10-48h，以2000-5000r/min速
4率離心，取沉淀，得粗糖提取物，粗糖提取物經(jīng)水復(fù)溶后，再加入乙醇至濃度為70% -90% 放置10-48h，以2000-5000r/min速率離心，取沉淀，冷凍干燥得棕褐色粗糖粉末；(5)酶解、脫色及除蛋白取上述粗糖粉末按比例添加淀粉酶，于85-95°C保溫20-40min ；加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為1 % _3 %的活性炭于40-70 V回流30-50min脫色、以 2000-5000r/min速率離心；取上清液采用kvage法脫蛋白，重復(fù)3_5次，取水層濃縮、醇沉、離心、冷凍干燥，得到灰白色粉末；(6)柱層脫色分離將上述灰白色粉末和載體按重量比為1 10-100的比例上樣，采用濃度為0. 01 % -2 %的醋酸銨溶液或氯化鈉溶液洗脫液梯度洗脫，將洗脫液濃縮， 透析M-4 !，醇沉，過(guò)夜，以2000-5000r/min速率離心，取沉淀冷凍干燥，得到白色苦豆子多糖粉末。(7)柱層純化分離將上述白色苦豆子多糖粉末和載體按重量比為1 10-100的比例上樣，采用濃度為0. 01% -2%的醋酸銨溶液或氯化鈉溶液洗脫液梯度洗脫，將洗脫液濃縮，透析M-4 !，醇沉，過(guò)夜，以2000-5000r/min速率離心，取沉淀冷凍干燥，得到苦豆子多糖。本發(fā)明提供的優(yōu)選的從苦豆子提取苦豆子總堿后剩余藥渣中提取多糖的方法， 所述柱層脫色分離的載體為選自納米氧化鋁大孔樹(shù)脂、纖維素DEAE-52以及NKA、NKA-II, 八8-8、5-83-5、!1103、03011 、0201、001\7型樹(shù)脂中的一種；柱層純化分離的載體為選自葡聚糖凝膠G-200、G-150、G-75、交聯(lián)瓊脂糖凝膠和快流速瓊脂糖凝膠中的一種。本發(fā)明提供的優(yōu)選的從苦豆子提取苦豆子總堿后剩余藥渣中提取多糖的方法，所述樹(shù)脂通過(guò)以下步驟預(yù)處理a、將納米氧化鋁大孔樹(shù)脂先用蒸餾水浸泡過(guò)夜，傾去上層水液及其中的輕質(zhì)小分子，然后在100°c條件下烘烤池，放干燥器中冷卻過(guò)夜；使用前將此樹(shù)脂浸入0. 2mol/L的氯化鈉或醋酸銨中l(wèi)_2h，待用；b、將DEAE-52等樹(shù)脂用蒸餾水充分淋洗，然后再用濃度為85% -95%的乙醇溶液浸泡24h濾出樹(shù)脂，并用濃度為85-95%的乙醇溶液反復(fù)沖洗樹(shù)脂至洗出液無(wú)色，然后用濃度為5% HCl溶液浸泡2-4h，并用蒸餾水洗至中性；最后用濃度為2% NaOH溶液浸泡2_4h， 并用蒸餾水洗至中性。洗脫液為濃度分別為0. 02mol/L、0. 3mol/L、0. 5mol/L醋酸銨溶液或濃度分別為 0. 01mol/L、0. Imol/L、0. 2mol/L、0. 5mol/L 氯化鈉溶液。本發(fā)明中苦豆子多糖粗品經(jīng)酶解、脫色可有效除去其中的淀粉及色素，再通過(guò) Sevage法去除苦豆子多糖經(jīng)過(guò)醇沉后存在的蛋白質(zhì)，Sevage法的主要優(yōu)點(diǎn)是條件溫和，不會(huì)引起多糖的變性。其次，本發(fā)明采用洗脫液梯度洗脫，使得苦豆子多糖的純度明顯提高，產(chǎn)率增加； 純化的技術(shù)除了以上提供的幾種樹(shù)脂材料外，采用由天津神能科技有限公司提供的納米氧化鋁大孔樹(shù)脂，目前，該種樹(shù)脂為新研發(fā)產(chǎn)品，其應(yīng)用尚處于試驗(yàn)階段，該樹(shù)脂通過(guò)將硫酸和偏鋁酸鈉混合加熱后經(jīng)干燥得到，該樹(shù)脂比普通的氧化鋁樹(shù)脂孔徑較大，吸附能力較強(qiáng)， 該公司將此樹(shù)脂運(yùn)用于石油化工領(lǐng)域，但沒(méi)有應(yīng)用到醫(yī)藥領(lǐng)域，本發(fā)明將此樹(shù)脂用于對(duì)苦豆子多糖進(jìn)行純化；通過(guò)去比表面積大吸附力強(qiáng)的特點(diǎn)、使得苦豆子多糖的純度明顯提高， 處理所得上清液最后經(jīng)減壓濃縮、醇沉、離心、冷凍干燥等過(guò)程可得苦豆子多糖精品；得到的苦豆子多糖精品通過(guò)藥劑學(xué)方法，可制成醫(yī)藥學(xué)上的各種劑型。一般豆類中的淀粉含量較高，本發(fā)明采用在常溫下采用濃度為30% -100%的乙醇浸泡，避免了淀粉在溫度較高情況下糊化影響有效成分的提取。另外，苦豆子中的生物堿成分含量較高，通常情況下，含量較高的生物堿多采用稀酸或乙醇提取，但鑒于本發(fā)明要提取的為苦豆子多糖，采用稀酸可能會(huì)影響多糖的結(jié)構(gòu)，且可能引入雜質(zhì)。采用30% -100% 的乙醇浸泡，及流速6-lOml/min條件下，可以最大程度提取生物堿，當(dāng)流速大于lOml/min 時(shí)，由于流速過(guò)快，苦豆子中的生物堿不能及時(shí)釋放，當(dāng)流速小于6ml/min時(shí)，由于流速過(guò)慢，生物堿已被溶解導(dǎo)致釋放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，不能最大程度提取生物堿。采用濃度40% -100%的乙醇醇沉，使得上清液中有效成分最大限度的得到保留， 且存在的生物堿得到有效去除。醇沉后靜置10-4 ，使絕大部分沉淀析出，若靜置時(shí)間小于 10h，則將導(dǎo)致部分苦豆子淀粉雜質(zhì)不能有效去除。由于苦豆子本身屬豆科類，淀粉含量較高，獲得的浸膏的粘稠性較大，將浸膏濃縮在密度為1.02-1. 10范圍，避免了發(fā)生有效成分絮凝現(xiàn)象，且濃度越大，生產(chǎn)成本越低；另外加入淀粉酶，使得淀粉通過(guò)酶的進(jìn)一步催化水解獲取多糖；采用柱層脫色分離進(jìn)一步精制獲取多糖。本發(fā)明從提取過(guò)苦參素和苦參堿的苦豆子藥渣中進(jìn)行多糖提取；純化的技術(shù)除了之前提供的幾種樹(shù)脂材料外，加入納米大孔氧化鋁樹(shù)脂，這種樹(shù)脂現(xiàn)今在多糖純化領(lǐng)域未曾應(yīng)用，其主要特點(diǎn)為吸附力強(qiáng)、比表面積大。苦豆子多糖具有機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能及增強(qiáng)化療藥物抗腫瘤作用的功效，該提取方法，采用提取苦豆子總堿后的剩余殘?jiān)鼮樵?，降低了提取苦豆子多糖的成本。?jīng)本工藝所得苦豆子多糖純度(苯酚硫酸法)可以達(dá)到95%以上，而且產(chǎn)率高，成本低，反應(yīng)條件易于控制。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的一種從苦豆子中提取多糖的方法具有以下優(yōu)點(diǎn)1、分離、純化技術(shù)可靠，操作步驟簡(jiǎn)單；2、所得的苦豆子多糖純度高、安全性好，含量達(dá)95%以上；3、所得的苦豆子多糖可經(jīng)藥劑學(xué)方法制成各種劑型，方便病人使用；4、條件易于控制，適用于大規(guī)模生產(chǎn)；5、具有生物利用度高，臨床使用方便、安全有效、不良反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn)；


圖1是本發(fā)明提供的一種從苦豆子中提取多糖的方法-試驗(yàn)2混合四種單糖對(duì)照品衍生物色譜圖；圖2是本發(fā)明提供的一種從苦豆子中提取多糖的方法-試驗(yàn)3苦豆子多糖水解衍生物色譜圖；圖3是本發(fā)明提供的一種從苦豆子中提取多糖的方法-苦豆子多糖分子量測(cè)定色譜圖；圖中1 =D-甘露糖、2 =D-鼠李糖、3 =D-葡萄糖、4 =D-半乳糖。
具體實(shí)施方式
以下通過(guò)具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明提供的一種從苦豆子中提取多糖的方法做進(jìn)一步更詳細(xì)的說(shuō)明。相關(guān)試騎i式I 1前〒錯(cuò)麵好臓·1. 1餼譜條件的確定流動(dòng)相的選擇根據(jù)OHpak SB-804色譜柱條件，可采用三次蒸餾水、磷酸鹽緩沖溶液或醋酸鹽緩沖溶液做流動(dòng)相，但緩沖液濃度控制在0. 1 0. 3mol/L之間，PH值控制在 3. 0 8. 0之間；選用三次蒸餾水和0. 2mol/LpH5. 0磷酸鹽緩沖液和醋酸鹽緩沖液為流動(dòng)相，以右旋糖酐作為分離試樣在柱中進(jìn)行分離檢測(cè)；3種流動(dòng)相對(duì)苦豆子多糖的分離效果都很好，出于保護(hù)色譜柱的考慮，選用三次蒸餾水作流動(dòng)相；流速的選擇根據(jù)色譜柱條件，流速應(yīng)當(dāng)不超過(guò)1.5ml/min，采用0.6、0.8、1.0、 1. 2ml/min的流速進(jìn)行樣品分離實(shí)驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，出峰時(shí)間隨著流速的加大而減少，其峰形也有所改變，隨之柱壓也明顯升高，對(duì)多糖的分離效果也有所下降；采用0. 8ml/min的流速，進(jìn)樣量20 μ 1 ；柱溫的選擇根據(jù)色譜柱條件，柱溫選擇30°C。1. 2多糖分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作分別精密稱取右旋糖酐標(biāo)準(zhǔn)品Mw2000000、133800、84400、41100、21400、7100、 4600,2500,180各50. Omg，用三次蒸餾水定容于5ml容量瓶中，配成10. Omg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按照1. 3. 1節(jié)中確定的色譜條件下分別進(jìn)樣，測(cè)得各色譜峰保留時(shí)間。應(yīng)用島津GPC 軟件以不同分子量標(biāo)準(zhǔn)右旋糖酐的保留時(shí)間(RT)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的相對(duì)分子質(zhì)量對(duì)數(shù)值 (1 gMw)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。1. 3苦豆子多糖樣品測(cè)定稱取苦豆子多糖50. Omg,用三次蒸餾水定容于5ml容量瓶中，配成10. Omg/mL的樣品溶液。按制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的色譜條件進(jìn)樣，得到苦豆子多糖的保留時(shí)間和相對(duì)分子質(zhì)量如下表1。表1苦豆子多糖的保留時(shí)間和相對(duì)分子質(zhì)量
多糖樣品保留時(shí)間(min)Μ MnMpM2D17. 3475019304219905235495799250. 032i式駘2梓前衍Φ化HPLC法分析苦百.子多糖中單糖鉬成2. 1方法以三氟乙酸水解苦豆子多糖，加入衍生化試劑1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)生成衍生化產(chǎn)物，采用RP-HPLC法，色譜柱C18色譜柱Q50mmX 4. 6mm, 5 μ m)， 流動(dòng)相乙腈-0. Imol · L-1磷酸鹽緩沖液ρΗ6· 7(17 83)，流速1. OmL · mirT1，檢測(cè)器二極管陣列檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)2Mnm，柱溫35°C ；結(jié)果苦豆子多糖由D-甘露糖、D-鼠李糖、 D-葡萄糖、D-半乳糖等主要4種單糖組成；D-甘露糖、D-鼠李糖、D-葡萄糖、D-半乳糖的比例約450. 76 1 4.45 193. 97 ；結(jié)論該方法可以準(zhǔn)確的測(cè)定出苦豆子多糖中含有的各種單糖。表2苦豆子多糖水解衍生物色譜測(cè)定對(duì)應(yīng)參數(shù)1 254nm，8nm
權(quán)利要求
1.一種從苦豆子提取苦豆子生物總堿后的藥渣中提取多糖的方法，包括以下步驟(1)粉碎取苦豆子原藥材，粉碎，過(guò)10-60目篩；(2)醇提取步驟(1)過(guò)篩后的苦豆子，將其裝入滲漉柱內(nèi)，用濃度為30%-100%的乙醇浸泡18-24h ；再以濃度為30% -100%的乙醇為溶劑，以流速10-15ml/min，滲漉提取，得到苦豆子中所含生物堿成分；至滲漉提取液與碘化鉍鉀反應(yīng)無(wú)顏色變化時(shí)停止?jié)B漉，分離滲漉液與殘?jiān)?；取苦豆子提取苦豆子生物總堿后的藥渣，晾干備用；(3)水提向步驟O)晾干后的固體產(chǎn)物中加入體積為該固體產(chǎn)物6-15倍量的水，于 60-110°C，回流l-5h得水提物；(4)醇沉將步驟C3)得到的水提物于35-90°C減壓濃縮成密度為1.02-1. 1的液體，加入乙醇至乙醇終濃度為40-90%醇沉，4°C冰箱放置10-48h，以2000_5000r/min速率離心， 取沉淀，得苦豆子粗糖提取物，粗糖提取物經(jīng)水復(fù)溶后，再加入乙醇至濃度為70% -90%放置10-48h，以2000-5000r/min速率離心，取沉淀，冷凍干燥得棕褐色苦豆子粗糖粉末；(5)酶解、脫色及除蛋白取上述苦豆子粗糖粉末按比例添加淀粉酶，于85-95°C保溫 20-40min ；加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為的活性炭于40_70°C回流30_50min脫色、以2000_5000r/ min速率離心；取上清液采用kvage法脫蛋白，重復(fù)3_5次，取水層濃縮、醇沉、離心、冷凍干燥，得到灰白色粉末；(6)柱層脫色分離將上述灰白色粉末和載體按重量比為1 10-100的比例上樣，采用濃度為0. 01 % -2 %的醋酸銨溶液或氯化鈉溶液洗脫液梯度洗脫，將洗脫液濃縮，透析 24-48h,醇沉，過(guò)夜，以2000-5000r/min速率離心，取沉淀冷凍干燥，得到白色苦豆子多糖粉末。(7)柱層純化分離將上述白色苦豆子多糖粉末和載體按重量比為1 10-100的比例上樣，采用濃度為0. 01% -2%的醋酸銨溶液或氯化鈉溶液洗脫液梯度洗脫，將洗脫液濃縮，透析M-4 !，醇沉，過(guò)夜，以2000-5000r/min速率離心，取沉淀冷凍干燥，得到苦豆子多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取多糖的方法，其特征在于所述柱層脫色分離的載體為選自納米大孔氧化鋁、纖維素 DEAE-52 以及 NKA、NKA-II、AB-8、S_8、X_5、H103、D301R、D201、 001X7型樹(shù)脂中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取多糖的方法，其特征在于所述樹(shù)脂經(jīng)過(guò)下述步驟預(yù)處理a、將納米氧化鋁大孔樹(shù)脂先用蒸餾水浸泡過(guò)夜，傾去上層水液及其中的輕質(zhì)小分子， 然后在100°C條件下烘烤池，放干燥器中冷卻過(guò)夜；使用前將此樹(shù)脂浸入0. 2mol/L的氯化鈉或醋酸銨溶液中l(wèi)_2h，待用；b、將DEAE-52等樹(shù)脂用蒸餾水充分淋洗，然后再用濃度為85%-95%的乙醇溶液浸泡 24h濾出樹(shù)脂，并用濃度為85% -95%的乙醇溶液反復(fù)沖洗樹(shù)脂至洗出液無(wú)色，然后用濃度為5% HCl溶液浸泡2-4h，并用蒸餾水洗至中性；最后用濃度為2% NaOH溶液浸泡2_4h，并用蒸餾水洗至中性。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取多糖的方法，其特征在于所述洗脫液為濃度分別為 0. 02mol/L、0. 3mol/L、0. 5mol/L 醋酸銨溶液或濃度分別為 0. 01mol/L、0. Imol/L、0. 2mol/ L、0. 5mol/L氯化鈉溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從提取苦豆子總堿后的剩余藥渣中提取多糖的方法，包括以下步驟(1)粉碎；(2)醇提；(3)水提；(4)醇沉；(5)酶解、脫色及除蛋白；(6)柱層脫色分離。該方法可使苦豆子中多糖充分發(fā)揮其機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能及增強(qiáng)化療藥物抗腫瘤作用的功效；經(jīng)本工藝所得苦豆子多糖純度可以達(dá)到95％以上，且產(chǎn)率高，成本低，反應(yīng)條件易于控制。
文檔編號(hào)C08B37/00GK102585022SQ20111000790
公開(kāi)日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2011年1月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月14日
發(fā)明者單小菊, 王文彤, 邸明磊, 鄭奪, 陶遵威 申請(qǐng)人:天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所