專利名稱：硫酸軟骨素的制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物技術領域，具體涉及一種硫酸軟骨素的制備方法。
背景技術：
硫酸軟骨素，英文名chondroitin sulfate，是以動物(豬、牛、馬、羊、雞、鯊魚等) 的軟骨為原料的一種高分子酸性粘多糖，其分子結構為β -D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖通過β 1 — 3糖苷鍵形成的重復二糖單位所組成的多糖鏈。它是一種白色或微黃色粉末，吸水性強，易溶于水而成粘稠液體，不溶于酒精、丙酮、乙醚和氯仿等有機溶劑，其鹽類對熱較穩(wěn)定。目前，硫酸軟骨素通常采用堿-酶解提取法，主要包括以下步驟
1)堿提酶解原料軟骨加水浸沒，用氫氧化鈉調(diào)ΡΗ8.5，升溫至55-60°C，保溫4-6小時， 然后加入1的堿性蛋白酶，保持pH8. 5，保溫55-60°C攪拌6_8小時，升溫至沸騰15分鐘左右，過濾，得濾液；
2)酒精沉淀濾液中加入3%重量的氯化鈉，降溫至室溫，按體積的2.5倍加入95%酒精，靜止8小時，取沉淀；
3)氧化按沉淀水的重量比為1:10的比例混合水，同時加入3%重量的氯化鈉，調(diào) ρΗΙΟ-12，加入重量雙氧水氧化8小時，過濾，取濾液；
4)酒精沉淀干燥濾液調(diào)pH6，加入體積的2.5倍量酒精第二次沉淀，沉淀再用95%酒精脫水兩次，干燥粉碎得到硫酸軟骨素成品。由于硫酸軟骨素溶液比較粘稠，在醇沉時傳統(tǒng)的做法是將酒精加入到硫酸軟骨素溶液中使硫酸軟骨素結晶析出沉淀下來，這樣產(chǎn)生的硫酸軟骨素沉淀結晶體容易結塊而且粘稠，結晶體中包含的有機溶劑在脫水干燥過程中由于顆粒形狀較大且堅硬致密，不容易揮發(fā)，致使產(chǎn)品的溶劑殘留偏高，>洲，影響產(chǎn)品質(zhì)量，滿足不了客戶要求。其次由于沉淀結塊粘稠，使得脫水、烘干、粉碎等操作變得困難，浪費能耗。本申請人以前提交的一個發(fā)明專利申請，公開了一種反向沉淀生產(chǎn)硫酸軟骨素的方法，經(jīng)沉淀得到的硫酸軟骨素質(zhì)地酥松， 容易脫水、烘干，不需要粉碎，且產(chǎn)品的色澤好，質(zhì)量穩(wěn)定，硫酸軟骨素的含量在98%以上， 有機溶劑殘留低于0. 2%，但該方法沉淀時間長，影響了產(chǎn)品的生產(chǎn)效率。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種硫酸軟骨素的制備方法，采用該制備方法不僅獲得的硫酸軟骨素沉淀質(zhì)地疏松、顆粒細小、容易脫水和烘干，產(chǎn)品不需要粉碎，能耗低，產(chǎn)品中有機溶劑殘留極低，產(chǎn)品質(zhì)量好，而且生產(chǎn)周期短、生產(chǎn)效率高。本發(fā)明的技術解決方案是該制備方法包括下列步驟
(1)堿提酶解首先，軟骨原料加水浸沒，用堿調(diào)PH至8-9，升溫至55-60°C，保溫4_6小時；然后，按軟骨原料重量1-3%加入2709堿性蛋白酶，保持pH8-9，保溫55_60°C攪拌6_8 小時，升溫至沸騰12-18分鐘，過濾得到硫酸軟骨素溶液；(2)酒精沉淀將步驟(1)得到的硫酸軟骨素溶液降至室溫，在攪拌狀態(tài)下，向溶液中加入氯化鈉，使溶液含氯化鈉重量濃度為1_4%，再加入溶液體積2-3倍的重量濃度為90%以上的酒精，靜止6小時以上，過濾得到硫酸軟骨素沉淀；
(3)氧化將步驟(2)得到的硫酸軟骨素沉淀加入水中溶解，同時向水中加入氯化鈉， 使溶液含氯化鈉重量濃度為1_4%、含硫酸軟骨素重量濃度為3-5%，調(diào)pH至10-12，加入溶液重量的1-3%雙氧水或過錳酸鉀氧化6小時以上，過濾得濾液；
(4)沉淀干燥調(diào)節(jié)步驟(3)得到的硫酸軟骨素濾液pH至5-6，加入濾液體積4-6倍的、 重量濃度為90%以上的酒精，進行第二次沉淀，棄去上層酒精，得到硫酸軟骨素沉淀；
(5)乳化脫水將步驟(4)的硫酸軟骨素沉淀倒入裝有乳化機的脫水罐中，開啟乳化機，將硫酸軟骨素沉淀體積的3-5倍的重量濃度為90%以上的酒精緩慢泵入脫水罐，加料完畢后繼續(xù)乳化0. 5-1. 5小時，靜止沉淀2-3小時；抽濾棄去酒精，收集沉淀，干燥，即得硫酸軟骨素成品。其中，步驟(5)的乳濁液含酒精的重量濃度始終保持在85%、或85%以上。本發(fā)明取得的效果是1、本發(fā)明將經(jīng)過氧化、酒精第二次沉淀得到的硫酸軟骨素沉淀物直接加入乳化機中，再緩慢向乳化機中加入酒精進行乳化，乳化結束后僅需靜止沉淀2-3小時，即可進行脫水烘干，乳化作用使粘稠的硫酸軟骨素沉淀在脫水過程中不容易結塊，質(zhì)地疏松；2、生產(chǎn)周期短，效率高，得到的硫酸軟骨素質(zhì)地酥松、顆粒細小，容易脫水、 烘干，不需要粉碎，節(jié)約能源、生產(chǎn)成本低；3、產(chǎn)品的色澤好，質(zhì)量穩(wěn)定，硫酸軟骨素的含量在98%以上；3、產(chǎn)品的有機溶劑殘留極少，低于0.
具體實施例方式下面結合具體實施例進一步說明本發(fā)明的技術解決方案，這些實施例不能理解為是對技術解決方案的限制。實施例1 依以下步驟制備硫酸軟骨素
(1)堿提酶解首先，軟骨原料IOOKg加水浸沒，用堿調(diào)PH至8，升溫至55°C，保溫6小時；然后，加入lKg2709堿性蛋白酶，保持pH8，保溫55°C攪拌8小時，升溫至沸騰12分鐘， 過濾得到硫酸軟骨素溶液500L ；
(2)酒精沉淀將步驟(1)得到的硫酸軟骨素溶液降至室溫，在攪拌狀態(tài)下，向溶液中加入5Kg氯化鈉，使溶液含氯化鈉重量濃度為1%，再加入溶液體積2倍的重量濃度為90%以上的酒精1000L，靜止6小時以上，過濾得到硫酸軟骨素沉淀；
(3)氧化將步驟(2)得到的硫酸軟骨素沉淀加入200L水中溶解，同時向水中加入2Kg 氯化鈉，使溶液含氯化鈉重量濃度為1%、含硫酸軟骨素重量濃度為3%，調(diào)pH至10，加入溶液重量的1%雙氧水2Kg氧化6小時以上，過濾得濾液；
(4)沉淀干燥調(diào)節(jié)步驟(3)得到的硫酸軟骨素濾液pH至5，加入濾液體積4倍的、重量濃度為90%以上的酒精，進行第二次沉淀，棄去上層酒精，得到硫酸軟骨素沉淀；
(5)乳化脫水將步驟(4)的硫酸軟骨素沉淀倒入裝有乳化機的脫水罐中，開啟乳化機，將硫酸軟骨素沉淀體積的3倍的重量濃度為90%以上的酒精緩慢泵入脫水罐，使乳濁液的酒精重量濃度達到85%，加料完畢后繼續(xù)乳化0. 5小時，靜止沉淀2小時；抽濾棄去酒精， 收集沉淀，干燥，即得硫酸軟骨素成品。
實施例2 依以下步驟制備硫酸軟骨素
(1)堿提酶解首先，軟骨原料IOOKg加水浸沒，用堿調(diào)PH至8.5，升溫至58°C，保溫5 小時；然后，加入Ig2709堿性蛋白酶，保持pH8. 5，保溫58°C攪拌7小時，升溫至沸騰15分鐘，過濾得到硫酸軟骨素溶液500L ；
(2)酒精沉淀將步驟(1)得到的硫酸軟骨素溶液降至室溫，在攪拌狀態(tài)下，向溶液中加入13Kg氯化鈉，使溶液含氯化鈉重量濃度為2. 5%，再加入溶液體積2. 5倍的重量濃度為 90%以上的酒精1250L，靜止6小時以上，過濾得到硫酸軟骨素沉淀；
(3)氧化將步驟(2)得到的硫酸軟骨素沉淀加入200L水中溶解，同時向水中加入5Kg 氯化鈉，使溶液含氯化鈉重量濃度為2. 5%、含硫酸軟骨素重量濃度為4%，調(diào)pH至11，加入溶液重量的1過錳酸鉀4Kg氧化6小時以上，過濾得濾液；
(4)沉淀干燥調(diào)節(jié)步驟(3)得到的硫酸軟骨素濾液pH至5.5，加入濾液體積5倍的、 重量濃度為90%以上的酒精，進行第二次沉淀，棄去上層酒精，得到硫酸軟骨素沉淀；
(5)乳化脫水將步驟(4)的硫酸軟骨素沉淀倒入裝有乳化機的脫水罐中，開啟乳化機，將硫酸軟骨素沉淀體積的4倍的重量濃度為90%以上的酒精緩慢泵入脫水罐，使乳濁液的酒精重量濃度達到85%，加料完畢后繼續(xù)乳化1小時，靜止沉淀2. 5小時；抽濾棄去酒精， 收集沉淀，干燥，即得硫酸軟骨素成品。實施例3 依以下步驟制備硫酸軟骨素
(1)堿提酶解首先，軟骨原料IOOKg加水浸沒，用堿調(diào)pH至9，升溫至60°C，保溫4小時；然后，加入:3Kg2709堿性蛋白酶，保持pH9，保溫60°C攪拌6小時，升溫至沸騰18分鐘， 過濾得到硫酸軟骨素溶液500L ；
(2)酒精沉淀將步驟(1)得到的硫酸軟骨素溶液降至室溫，在攪拌狀態(tài)下，向溶液中加入22Kg氯化鈉，使溶液含氯化鈉重量濃度為4%，再加入溶液體積3倍的重量濃度為90% 以上的酒精1500L，靜止6小時以上，過濾得到硫酸軟骨素沉淀；
(3)氧化將步驟(2)得到的硫酸軟骨素沉淀加入200L水中溶解，同時向水中加入9Kg 氯化鈉，使溶液含氯化鈉重量濃度為4%、含硫酸軟骨素重量濃度為5%，調(diào)pH至12，加入溶液重量的3%雙氧水9Kg氧化6小時以上，過濾得濾液；
(4)沉淀干燥調(diào)節(jié)步驟(3)得到的硫酸軟骨素濾液pH至6，加入濾液體積6倍的、重量濃度為90%以上的酒精，進行第二次沉淀，棄去上層酒精，得到硫酸軟骨素沉淀；
(5)乳化脫水將步驟(4)的硫酸軟骨素沉淀倒入裝有乳化機的脫水罐中，開啟乳化機，將硫酸軟骨素沉淀體積的5倍的重量濃度為90%以上的酒精緩慢泵入脫水罐，使乳濁液的酒精重量濃度達到85%，加料完畢后繼續(xù)乳化1. 5小時，靜止沉淀3小時；抽濾棄去酒精， 收集沉淀，干燥，即得硫酸軟骨素成品。
權利要求
1.硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于包括下列步驟(1)堿提酶解首先，軟骨原料加水浸沒，用堿調(diào)PH至8-9，升溫至55-60°C，保溫4_6小時；然后，按軟骨原料重量1%_3%加入2709堿性蛋白酶，保持pH8-9，保溫55_60°C攪拌6_8 小時，升溫至沸騰12-18分鐘，過濾得到硫酸軟骨素溶液；(2)酒精沉淀將步驟(1)得到的硫酸軟骨素溶液降至室溫，在攪拌狀態(tài)下，向溶液中加入氯化鈉，使溶液含氯化鈉重量濃度為1_4%，再加入溶液體積2-3倍的重量濃度為90%以上的酒精，靜止6小時以上，過濾得到硫酸軟骨素沉淀；(3)氧化將步驟(2)得到的硫酸軟骨素沉淀加入水中溶解，同時向水中加入氯化鈉， 使溶液含氯化鈉重量濃度為1_4%、含硫酸軟骨素重量濃度為3-5%，調(diào)pH至10-12，加入溶液重量的1-3%雙氧水或過錳酸鉀氧化6小時以上，過濾得濾液；(4)沉淀干燥調(diào)節(jié)步驟(3)得到的硫酸軟骨素濾液pH至5-6，加入濾液體積4-6倍的、 重量濃度為90%以上的酒精，進行第二次沉淀，棄去上層酒精，得到硫酸軟骨素沉淀；(5)乳化脫水將步驟(4)的硫酸軟骨素沉淀倒入裝有乳化機的脫水罐中，開啟乳化機，將硫酸軟骨素沉淀體積的3-5倍的重量濃度為90%以上的酒精緩慢泵入脫水罐，加料完畢后繼續(xù)乳化0. 5-1. 5小時，靜止沉淀2-3小時；抽濾棄去酒精，收集沉淀，干燥，即得硫酸軟骨素成品。
2.如權利要求1所述的硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于其中步驟(5)的乳濁液含酒精的重量濃度始終保持在85%、或85%以上。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種硫酸軟骨素的制備方法，軟骨加水浸沒，堿調(diào)pH8-9，55-60℃保溫4-6小時；加入2709堿性蛋白酶，攪拌6-8小時，升溫至沸騰，過濾得硫酸軟骨素溶液；向硫酸軟骨素溶液中加入氯化鈉，再加入溶液體積2-3倍的酒精，靜止6小時，過濾得硫酸軟骨素沉淀；將硫酸軟骨素沉淀加入水中溶解，同時向水中加入氯化鈉，調(diào)pH10-12，加入溶液重量1-3%雙氧水氧化6小時，過濾得濾液；調(diào)節(jié)硫酸軟骨素濾液pH5-6，加入濾液體積4-6倍的酒精二次沉淀，得硫酸軟骨素沉淀；將二次硫酸軟骨素沉淀倒入裝有乳化機的脫水罐中，將硫酸軟骨素沉淀體積3-5倍的酒精泵入脫水罐，抽濾，收集沉淀，干燥，得硫酸軟骨素成品。本發(fā)明獲得的硫酸軟骨素質(zhì)地疏松、顆粒細小、容易脫水和烘干，能耗低，有機溶劑殘留極低，生產(chǎn)周期短。
文檔編號C08B37/08GK102190740SQ20111008702
公開日2011年9月21日 申請日期2011年4月8日 優(yōu)先權日2011年4月8日
發(fā)明者劉榜惠 申請人:淮安麥德森制藥有限公司