專利名稱：一種具有免疫活性的錦燈籠莖多糖及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于免疫活性多糖，具體涉及一種具有免疫活性的錦燈籠莖多糖及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
錦燈籠學(xué)名為酸漿，別名紅姑娘、紅娘子、掛金燈、苦姑娘、燈籠果。果為漿果，球形，成熟時呈橙黃色；宿存花萼隨果實長大而增大，橘紅色，膨松的包在漿果外面，形似燈籠而得名。錦燈籠為茄科、酸漿屬(Physalis alkekengi L.)多年生草本植物，全國各地均有分布，是常用的藥食兩用植物。錦燈籠全草均可入藥；其果實味甘、酸、寒，可食用。具有清熱解毒、利咽化痰、利尿等功效，用于咽痛、音 、痰熱咳嗽、小便不禾I』，外治天皰瘡、濕疹等。近年來，隨著以錦燈籠為原料開發(fā)的醫(yī)藥和食品的迅速發(fā)展，野生的錦燈籠供應(yīng)已經(jīng)遠遠不能滿足市場的需求，因此大量種植的錦燈籠應(yīng)運而生。目前，被廣泛利用的錦燈籠的有效部位仍然是錦燈籠果實，而其莖因得不到有效利用而廢棄。因此錦燈籠莖多糖的研究，對全面、有效的開發(fā)和利用錦燈籠具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種具有免疫活性的錦燈籠多糖、制備方法和用途。本發(fā)明的具體步驟(1)將錦燈籠的干燥莖剪成2cm長的寸斷，浸泡過夜，料液比為Ig 20ml至 Ig 50ml ；(2)水浸法提取1-4小時，三次浸提，溫度50_100°C ；(3)用乙醇對水浸液提取物進行沉淀，乙醇的終濃度為65-85% ；(4)反復(fù)凍融至無沉淀后，用酶法和kvage法聯(lián)合脫蛋白，干燥得粗多糖；(5)粗多糖用QAE SephadexA-25,以生理鹽水進行洗脫，冷凍干燥后得多糖 Q-WSP ； (6) Q-WSP 經(jīng) HPLC 進一步純化得到 WSP。上述方法獲得的WSP經(jīng)HPLC測定其分子量大約為7000Da，其組分均一。經(jīng)氣相色譜分析得單糖組分為他3、4『3、631、61(；和63認(rèn)，其摩爾比為2.6 1. 0 6. 5 3. 5 2. 4。本發(fā)明所得錦燈籠莖多糖具有免疫增強作用，可用于提高機體免疫功能的食品和保健品。制備方法簡單、可靠。錦燈籠莖來源廣泛，錦燈籠莖多糖的開發(fā)利用將使錦燈籠莖變廢為寶。
具體實施例方式實施例1 一、錦燈籠莖多糖的制備
1將錦燈籠的干燥莖500g用剪子剪成2cm長的寸斷，3000ml水浸泡過夜；2水浸法提取2小時，三次浸提，溫度100°C ；3用乙醇對水浸液提取物進行沉淀，乙醇的終濃度為85% ；4反復(fù)凍融至無沉淀后，用酶法和kvage法聯(lián)合脫蛋白，干燥得粗多糖；5粗多糖用QAE Sephadex A_25柱層析，以生理鹽水進行洗脫，冷凍干燥后得多糖 Q-WSP ； 6Q-WSP經(jīng)HPLC進一步純化得到WSP ；WSP經(jīng)HPLC測定其分子量大約為7000Da，為多糖均一組份。經(jīng)氣相色譜分析得單糖組分為 Rha、Ara、Gal、Glc 和 GalA，其摩爾比為 2. 6 1. 0 6. 5 3. 5 2. 4。二、錦燈籠莖多糖免疫增強活性實驗(一 )動物分組及其免疫方法五周齡雄性ICR小鼠用于動物實驗，每組5只；以雞卵清蛋白(OVA)為抗原，皮下注射。實驗分組如下第一組(Saline)注射生理鹽水，作為空白對照第二組(OVA)注射0VA100 μ g/只，作為陰性對照第三組(QuilA)注射0VA100 μ g/只+QuiIAlO μ g/只，QuiIA (南美皂樹皂苷)為陽性對照第四組(WSP)注射0VA100 μ g/只+錦燈籠莖多糖200 μ g/只以上各組均免疫兩次，間隔14天。第二次免疫后14天，MTT法檢測動物脾淋巴細胞增值反應(yīng)；用ELISA方法檢測動物抗血清中抗OVA特異性抗體IgG的變化。(二)小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗1實驗方法(1)無菌取小鼠脾臟，并制成單細胞懸液，用RPMI1640培養(yǎng)液將細胞稀釋成 2xl06/ml。(2)于96孔培養(yǎng)板中，每孔加100 μ 1脾細胞懸液，各孔分別加等體積的ConA溶液 (終濃度為5 μ g/ml)或LPS溶液(終濃度為10 μ g/ml)，并設(shè)空白對照組。(3) 37°C>5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)68小時后，各孔分別加10 μ 1 MTT溶液(5mg/ml)， 繼續(xù)培養(yǎng)4小時，離心后，每孔分別吸去上清，加入200μ 1酸性二甲基亞砜(DMSO)溶液，振蕩，于室溫放置15min。(4)用酶標(biāo)儀于570/630nm處測定OD值。按下式計算刺激指數(shù)SI =加有絲分裂原培養(yǎng)物的OD值/不加有絲分裂原培養(yǎng)物的OD值。2實驗結(jié)果(1)錦燈籠莖多糖WSP對ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細胞增殖反應(yīng)的影響見表1.表1錦燈籠莖多糖WSP對ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細胞增殖反應(yīng)的影響
權(quán)利要求
1.一種具有免疫活性的錦燈籠莖多糖的制備方法，其特征是具體步驟如下(1)將錦燈籠的干燥莖剪成2cm長的寸斷，浸泡過夜，料液比為Ig 20ml至 Ig 50ml ；(2)水浸法提取1-4小時，三次浸提，溫度50-100°C；(3)用乙醇對水浸液提取物進行沉淀，乙醇的終濃度為65-85%；(4)反復(fù)凍融至無沉淀后，用酶法和kvage法聯(lián)合脫蛋白，干燥得粗多糖；(5)粗多糖用QAESephadexA-25,以生理鹽水進行洗脫，冷凍干燥后得多糖Q-WSP ；(6)Q-WSP經(jīng)HPLC進一步純化得到WSP。
2.按照權(quán)利要求1所述的制備方法制備的具有免疫活性的錦燈籠莖多糖。
3.按照權(quán)利要求2所述的具有免疫活性的錦燈籠莖多糖在制備提高機體免疫功能的食品和保健品方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于免疫活性多糖，具體涉及一種具有免疫活性的錦燈籠莖多糖及其制備方法，本發(fā)明通過水浸法提取，對水浸液提取物進行沉淀，用酶法和Sevage法聯(lián)合脫蛋白，干燥得粗多糖；以生理鹽水進行洗脫，冷凍干燥后得多糖Q-WSP；經(jīng)HPLC進一步純化得到WSP。上述方法獲得的WSP經(jīng)HPLC測定其分子量大約為7000Da，其組分均一。經(jīng)氣相色譜分析得單糖組分為Rha、Ara、Gal、Glc和GalA。本發(fā)明所得錦燈籠莖多糖具有免疫增強作用，可用于提高機體免疫功能的食品和保健品。制備方法簡單、可靠。錦燈籠莖來源廣泛，錦燈籠莖多糖的開發(fā)利用將使錦燈籠莖變廢為寶。
文檔編號C08B37/00GK102276745SQ201110165019
公開日2011年12月14日 申請日期2011年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月15日
發(fā)明者尚東杰, 王桂云 申請人:東北師范大學(xué)