本發(fā)明涉及一種含氯水溶性鉑配合物及制備方法。
背景技術(shù)：
：鉑類抗癌藥是腫瘤治療領(lǐng)域具有代表性的一類藥物。其屬于細(xì)胞周期非特異性藥物，對(duì)肉瘤，惡性上皮腫瘤，淋巴瘤以及生殖細(xì)胞腫瘤都具有治療功效。目前世界上廣泛應(yīng)用于臨床治療的具有代表性的鉑類抗癌藥主要有，順鉑，卡鉑和奧沙利鉑。鉑類抗癌藥物的致命缺點(diǎn)是具有極強(qiáng)的毒副作用以及固有的和后續(xù)形成的耐藥性問(wèn)題。另外由于此類藥物是金屬有機(jī)化合物，所有鉑類上市藥物普遍存在水溶性極低的特性，下表是上述三種上市臨床藥物的水溶性數(shù)據(jù)：藥物順鉑卡鉑奧沙利鉑水溶性(mg/ml)1.017.06.0研究表明，腫瘤對(duì)鉑類抗腫瘤藥物形成耐藥性的原因包括腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物進(jìn)入細(xì)胞的阻止作用和向外排斥作用從而降低鉑類藥物在腫瘤細(xì)胞的積蓄(HolzerAK,ManorekGH,HowellSB.MolecularPharmacology(Internet).2006；70(4):1390–4.)，因此如何有效地提高鉑類藥物在腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織的選擇性聚集是開(kāi)發(fā)具有靶向性新一代鉑類抗癌藥物需要解決的關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題之一。用于臨床腫瘤診斷及分期檢查的示蹤劑18F-DG(氟代-2-脫氧-D-葡萄糖)是臨床最常用的顯像劑。其原理是腫瘤細(xì)胞為了維持快速增殖及轉(zhuǎn)移的需要，高表達(dá)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(GLUT)以吸取大量的糖分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。通過(guò)對(duì)患者注射放射性標(biāo)記氟原子取代的18F-DG后，藥物在腫瘤細(xì)胞蓄積，然后通過(guò)全身PET顯像可以實(shí)現(xiàn)惡性腫瘤的診斷，良性及惡性的鑒別，臨床分期，療效評(píng)價(jià)以及檢測(cè)復(fù)發(fā)等。但18F-DG只限于診斷用途其本身沒(méi)有治療效果。此外，由于過(guò)低的水溶性不僅給藥品制劑的穩(wěn)定性和臨床應(yīng)用帶來(lái)了很多的不利影響，比如很難把它們順利地配制成一種方便和具有合適濃度的臨床藥劑。而且，過(guò)低的藥物水溶性還直接影響到藥物在身體內(nèi)的積蓄和代謝，含有金屬原子的鉑類化合物尤其在藥物的排泄 等方面受水溶性的影響更為顯著，積蓄在腎臟組織和血液里的鉑類藥物不能被身體及時(shí)排出形成了鉑類藥物普遍具有很強(qiáng)毒副作用的特點(diǎn)。以下是各種具有新型化學(xué)結(jié)構(gòu)的鉑類抗腫瘤藥物由于水溶性不能得到改善以及由此導(dǎo)致的重篤藥物積蓄型毒副作用而被迫中止臨床試驗(yàn)的藥品案例：(參考文獻(xiàn)：Statusofplatinumdrugsintheclinicandinclinicaltrials,DaltonTransactions,2010,39,8113-8127.)綜上所述，解決鉑類藥物的腫瘤靶向性和水溶性問(wèn)題是目前世界上鉑類抗癌藥研發(fā)領(lǐng)域?qū)Ｗ⒌淖钪匾n題(Galanski,Markus；Keppler,BernhardKSearchingfortheMagicBullet:AnticancerPlatinumDrugsWhichCanBeAccumulatedorActivatedintheTumorTissue.Anti-CancerAgentsinMedicinalChemistry,(2007)，7,55-73)。中國(guó)專利ZL201210206008.4公開(kāi)了“用于腫瘤治療的含氯水溶性鉑配合物及其制備方法”，該化合物已解決水溶性的問(wèn)題，但對(duì)腫瘤靶向性和抗腫瘤效果還有待提高。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種能夠?qū)δ[瘤靶向性好和抗腫瘤效果提高的含氯水溶性鉑配合物。本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種含氯水溶性鉑配合物的制備方法。本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種含氯水溶性鉑配合物的用途。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：含氯水溶性鉑配合物，是式(I)所示：其中:X和Y是配位體，所述X和Y相同或不同并且各自代表一個(gè)NH3、一個(gè)C1-C8鏈狀烷基伯胺， 一個(gè)C3-C8環(huán)狀烷基伯胺或X和Y一起為反式-(1R，2R)-環(huán)己二胺，反式-(1S，2S)-環(huán)己二胺，順式-(1R，2S)-環(huán)己二胺或順式-(1S，2R)-環(huán)己二胺，消旋反式-1，2-環(huán)己二胺或消旋順式-1，2-環(huán)己二胺；其中C1-C8鏈狀烷基伯胺優(yōu)選異丙胺；C3-C8環(huán)狀烷基伯胺，其中優(yōu)選C3-C6環(huán)狀烷基伯胺；n是1-6，n優(yōu)選2或3。還可以是：X和Y相同或不同并且各自代表一個(gè)芳香胺、一個(gè)至少有一個(gè)C1-C4烷基取代的芳香胺、一個(gè)分子式為R1-NH-R2的仲胺，其中R1和R2相同或者不同分別表示C1-C8鏈狀烷基或R1-NH-R2共同組成C4-C8的環(huán)狀烷基仲胺、一個(gè)具有含氮芳香族雜環(huán)化合物或至少有一個(gè)C1-C4烷基取代的含氮芳香族雜環(huán)化合物、一個(gè)具有含硫芳香族雜環(huán)化合物或含硫非芳香族雜環(huán)化合物或X和Y一起用結(jié)構(gòu)式(VIII)所示：其中D為C0或C1的亞烷基；B為C2-C8的亞烷基；X和Y一起優(yōu)選：反式-(1R，2R)-環(huán)己二胺。含氯水溶性鉑配合物(I)的制備方法，包括如下步驟：將式(II)化合物與調(diào)節(jié)了pH為7-9的式(III)化合物的水溶液進(jìn)行反應(yīng)，或?qū)⑹?II)化合物與式(III)化合物在有無(wú)機(jī)堿的存在下的水中進(jìn)行反應(yīng)，即制成含氯水溶性鉑配合物(I)；所述(II)的結(jié)構(gòu)式為：式(II)中：X和Y是配位體，所述X和Y相同或不同并且各自代表一個(gè)NH3、一個(gè)C1-C8鏈狀烷基伯胺、一個(gè)C3-C8環(huán)狀烷基伯胺或X和Y一起為反式-(1R，2R)-環(huán)己二胺，反式-(1S，2S)-環(huán)己二胺，順式-(1R，2S)-環(huán)己二胺或順式-(1S，2R)-環(huán)己二胺，消旋反式-1，2-環(huán)己二胺或消旋順式-1，2-環(huán)己二胺；其中C1-C8鏈狀烷基伯胺優(yōu)選異丙胺；C3-C8環(huán)狀烷基伯胺優(yōu)選C3-C6環(huán)狀烷基伯胺；還可以是：X和Y相同或不同并且各自代表一個(gè)芳香胺、一個(gè)至少有一個(gè)C1-C4烷基取代的芳香胺、一個(gè)分子式為R1-NH-R2的仲胺，其中R1和R2相同或者不同分別表示C1-C8鏈狀烷基或R1-NH-R2共同組成C4-C8的環(huán)狀烷基仲胺、一個(gè)具有含氮芳香族雜環(huán)化合物或至少有一個(gè)C1-C4烷基取代的含氮芳香族雜環(huán)化合物、一個(gè)具有含硫芳香族雜環(huán)化合物或含硫非芳香族雜環(huán)化合物或X和Y一起用結(jié)構(gòu)式(VIII)所示：其中D為C0或C1的亞烷基；B為C2-C8的亞烷基；本發(fā)明的X和Y所表示的最佳的例子包括但不限于：X和Y各為NH3，異丙胺，環(huán)丙胺，環(huán)丁胺，環(huán)戊胺，環(huán)己胺；或者X和Y其中之一為NH3，另一個(gè)為異丙胺，環(huán)丙胺，環(huán)丁胺，環(huán)戊胺，環(huán)己胺，2-甲基吡啶；1，2-乙二胺，1，3-丙二胺，2-甲基四亞甲基二胺，1，2-環(huán)丁二胺，1，2-環(huán)戊二胺，1，2-環(huán)己二胺，1，2-環(huán)庚二胺，1，2-環(huán)辛二胺，1-氨基-2-氨甲基環(huán)己烷，1，1-二氨甲基環(huán)己烷，5，5-二氨甲基-1，3-二噁烷，2-氨甲基-吡咯烷和2-氨甲基吡啶；當(dāng)上述配體化合物中含有手性中心時(shí)，可以是其中任一光學(xué)異構(gòu)體或者消旋體混合物；A1和A2相同或者不同，各自代表羥基，硝基，高氯酸根，或者A1和A2共同代表硫酸根或碳酸根；(III)的結(jié)構(gòu)式為：式(III)中：M代表氫原子或者元素周期表第IA族的金屬原子；或者兩個(gè)M共同代表一個(gè)第IIA族的金屬原子；M優(yōu)選氫原子、鈉原子或兩個(gè)M共同代表一個(gè)鋇原子；n是1-6；優(yōu)選2、3或4；最好是2或3；所述無(wú)機(jī)堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、氫氧化鋰、氫氧化鋇或氫氧化銫；較好的是：X和Y一起為反式-(1R，2R)-環(huán)己二胺，反式-(1S，2S)-環(huán)己二胺，順式-(1R，2S)-環(huán)己二胺，順式-(1S，2R)-環(huán)己二胺，消旋反式-1，2-環(huán)己二胺或消旋順式-1，2-環(huán)己二胺。最好是：反式-(1R，2R)-環(huán)己二胺。最好是X和Y一起為反式-(1R，2R)-環(huán)己二胺。上述含氯水溶性鉑配合物與藥學(xué)上可接受的輔料制成的制劑。上述含氯水溶性鉑配合物在制備防治腫瘤藥物的應(yīng)用。上述制劑在制備防治腫瘤藥物的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：試驗(yàn)證明本發(fā)明的含氯水溶性鉑配合物與臨床藥物以及中國(guó)專利ZL201210206008.4公開(kāi)了“用于腫瘤治療的含氯水溶性鉑配合物及其制備方法”相比具有優(yōu)越的腫瘤選擇性藥物積蓄作用，能夠通過(guò)對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向性傳遞克服腫瘤對(duì)藥物的排斥作用而形成的耐藥性。另外，本發(fā)明的配合物與臨床藥物相比具有更高的水溶性，易于臨床制劑化。第三，本發(fā)明所提供的含氯水溶性鉑配合物在細(xì)胞毒性方面與臨床藥物奧沙利鉑相比具有優(yōu)越性。綜上所 述，本發(fā)明所提供的含氯水溶性鉑配合物，不僅能夠解決現(xiàn)存鉑類藥物因?yàn)槿狈λ苄远嬖诘闹苿┓€(wěn)定性差的問(wèn)題以及臨床使用不方便的缺陷，而且能夠提高藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向性，解決現(xiàn)有臨床藥物在腫瘤治療效果，耐藥性以及毒副作用方面存在的不足。本發(fā)明將2-脫氧-D-葡萄糖與具有治療效果的金屬鉑配合物相結(jié)合，在充分利用2-脫氧-D-葡萄糖靶向腫瘤細(xì)胞的基礎(chǔ)上，開(kāi)發(fā)具有治療功能的靶向抗腫瘤藥物。附圖說(shuō)明圖1為實(shí)施例1制備的配合物抗腫瘤藥效-1。圖2為實(shí)施例1制備的配合物抗腫瘤藥效-2。圖3為實(shí)施例2制備的配合物抗腫瘤藥效-1。圖4為實(shí)施例2制備的配合物抗腫瘤藥效-2。圖5為實(shí)施例5制備的配合物抗腫瘤藥效-1。圖6為實(shí)施例5制備的配合物抗腫瘤藥效-2。圖7為實(shí)施例6制備的配合物抗腫瘤藥效-1。圖8為實(shí)施例6制備的配合物抗腫瘤藥效-2。具體實(shí)施方式本發(fā)明的實(shí)施例是為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。作為本發(fā)明所提供的由式(I)所表示的用于腫瘤治療的水溶性鉑配合物，其優(yōu)選化合物的代表性舉例亦可以由下述表1列出，但本發(fā)明所涵蓋含氯水溶性鉑配合物不限于以下的舉例。其中，脫氧葡萄糖1-位取代可以是α或者β或者兩者的混合物；n，和X、Y見(jiàn)表1：表1：表1中的配體1，2-環(huán)己二胺可以是反式-(1R，2R)-環(huán)己二胺，反式-(1S，2S)-環(huán)己二胺，順式-(R，S)-環(huán)己二胺或順式-(S，R)-環(huán)己二胺，消旋反式-1，2-環(huán)己二胺，消旋順式-1，2-環(huán)己二胺之中的任意一種。本發(fā)明中含氯水溶性鉑配合物的具體制備可以通過(guò)下述方法和反應(yīng)式來(lái)完成。方法A：方法B：在方法A中，當(dāng)(III)中M是氫原子時(shí)，反應(yīng)可以通過(guò)使用適當(dāng)?shù)臒o(wú)機(jī)堿，例如氫氧化鈉，氫氧化鉀，碳酸鈉，碳酸氫鈉，碳酸鉀，氫氧化鋰以及氫氧化銫等來(lái)調(diào)節(jié)反應(yīng)水溶液的pH維持在7-9之間來(lái)完成式(I)所示配合物的制備；當(dāng)M為所述金屬原子時(shí)，例如鈉原子、鉀原子、鋇原子或銫原子，反應(yīng)可在水溶液中順利進(jìn)行，必要時(shí)使用少量的上述無(wú)機(jī)堿的水溶液維持反應(yīng)溶液的pH在7-9之間即可完成式(I)所示配合物的合成。在方法B中，當(dāng)M是氫原子時(shí)，反應(yīng)可以通過(guò)使用等當(dāng)量的氫氧化鋇作為無(wú)機(jī)堿，在水溶液中完成與式(II)所示的金屬鉑硫酸鹽化合物的縮合反應(yīng)來(lái)制備式(I)所示的配合物。由方法B制備本發(fā)明配合物時(shí)，亦可以使用事先制得的鋇鹽，即兩個(gè)M共同代表一個(gè)鋇原子，與式(II)所示的金屬鉑硫酸鹽配合物在水溶液中進(jìn)行反應(yīng)來(lái)完成配合物的制備過(guò)程。上述反應(yīng)的溶劑最好使用去離子水溶液，反應(yīng)溫度一般在室溫或者根據(jù)需要加熱到60-90℃進(jìn)行反應(yīng)。方法A和B中式(II)所表示的化合物可以通過(guò)相應(yīng)的順-二氯化鉑與X和Y的配合物，例如：順-二氯-(1，2-二氨基環(huán)己烷)合鉑與2當(dāng)量的硝酸銀或1當(dāng)量的硫酸銀反應(yīng)而制備。該反應(yīng)最好在水溶液中進(jìn)行，使用的水最好是去離子水。反應(yīng)溫度在室溫比較合適。如此所得到的化合物(II)與事先制備好的化合物(III)用蒸餾水或者去離子水作溶劑進(jìn)行反應(yīng)。每當(dāng)量的化合物(III)選用0.5–4當(dāng)量的化合物(II)，優(yōu)選條件是1至2當(dāng)量。反應(yīng)條件是在pH在7-9的條件下完成，該條件可以通過(guò)使用適當(dāng)?shù)膲A來(lái)維持反應(yīng)介質(zhì)而達(dá)到。該堿的種類最好是無(wú)機(jī)堿，例如氫氧化鈉，氫氧化鉀，氫氧化鋇，碳酸鈉，碳酸鉀，碳酸氫鈉。最好是使用這些堿的大約1N的水溶液。反應(yīng)可以在一個(gè)比較寬的溫度范圍內(nèi)來(lái)進(jìn)行，例如選擇在0-100℃的溫度范圍來(lái)進(jìn)行上述反應(yīng)。最好是從室溫到90℃，并同時(shí)伴隨攪拌為好。根據(jù)不同的目標(biāo)產(chǎn)物反應(yīng)需要的時(shí)間變化范圍也很寬。根據(jù)不同反應(yīng)物的性質(zhì)，一般需要1小時(shí)到30天來(lái)完成。更多的情況下需要10小時(shí)至15天的時(shí)間。很多方法可以被用來(lái)提純上述反應(yīng)中得到的生成物(I)。例如反應(yīng)完成后的混合物可以 先通過(guò)過(guò)濾除去可能生成的沉淀物，然后通過(guò)減壓蒸餾濃縮，然后加入有機(jī)溶劑，使所要的目標(biāo)(I)沉淀析出。一般選擇能夠與水互溶的有機(jī)溶劑，例如一種醇(例如甲醇，乙醇，丙醇，丁醇，異丙醇等)，或者與水有一定互溶的一種醚(例如二乙醚，甲基叔丁基醚，四氫呋喃，乙二醇二乙醚，乙二醇二甲醚等)，最后將得到的沉淀收集起來(lái)，例如通過(guò)過(guò)濾，就可以得到所需要的式(I)所表示的配合物。提純和精制上述反應(yīng)中得到的生成物(I)也可以用色譜等的方法。例如用離子交換樹脂，或者用制備液相色譜。液相色譜分離精制一般使用甲醇和水作為移動(dòng)相來(lái)進(jìn)行。本發(fā)明化合物(III)可以由下述的反應(yīng)式所給出的方法C進(jìn)行制備：方法C：方法C所示的制備方法是將鹵代醇先與乙?；撗跗咸烟窃诼芬姿顾岽嬖谙逻M(jìn)行縮合，然后進(jìn)行與丙二酸酯衍生物的取代反應(yīng)經(jīng)過(guò)脫保護(hù)反應(yīng)最后獲得化合物(III)的制備路線。上述制備路線中涉及的脫氧葡萄糖的乙?；梢园凑瘴墨I(xiàn)報(bào)道的方法實(shí)施，例如在吡啶中采用乙酸酐作為乙酰化試劑在室溫或者在60℃加熱1-24小時(shí)即可完成。路易斯酸存在下的糖苷合成反應(yīng)的條件是針對(duì)脫氧葡萄糖化合物使用0.1-50當(dāng)量的含氟丙二酸衍生物，或者相反針對(duì)含氟丙二酸衍生物使用0.1-50當(dāng)量的脫氧葡萄糖原料。使用的路易斯酸可以是BF3，SnCl4，F(xiàn)eCl3，AlCl3，鹽酸，對(duì)甲苯磺酸，樟腦磺酸等，路易斯酸的量相對(duì)于脫氧葡萄糖原料可以是0.1-10當(dāng)量。所使用的溶劑可以是四氫呋喃，二氯甲烷，甲苯，乙二醇二甲醚，乙二醇二乙醚等也可以使用兩種反應(yīng)物中的任意一種當(dāng)作溶劑來(lái)進(jìn)行該反應(yīng)。反應(yīng)的溫度可以從零℃到100℃，一般可以在60-80℃加熱完成該反應(yīng)。反應(yīng)所需要的時(shí)間根據(jù)反應(yīng)物的不同而不同，一般1小時(shí)至7天可以完成。得到的反應(yīng)產(chǎn)物可以通過(guò)一系列的提純條件來(lái)進(jìn)行精制，一般可以使用硅膠層析分離法，或者液相色譜柱分離法。糖苷化合物與丙二酸酯的2-位取代反應(yīng)可 以按照文獻(xiàn)已知的一般方法(例如：JournaloftheAmericanChemicalSociety,131(8),2786-2787；2009)使用氫化鈉，碳酸鉀，碳酸氫鉀，碳酸鈉，碳酸氫鈉等在DMF，甲苯或者四氫呋喃等溶劑中來(lái)完成。所得到的丙二酸酯的二位氯取代反應(yīng)，可以使用代表性的氯取代反應(yīng)試劑NCS來(lái)進(jìn)行。反應(yīng)一般在THF或者DMF或者乙醚溶劑中將丙二酸酯用等當(dāng)量或者過(guò)量的堿處理后，加入上述氯取代反應(yīng)試劑來(lái)完成。所使用的堿可以是氫化鈉，碳酸鉀，碳酸鈉，碳酸銫，碳酸氫鈉等，氯取代試劑的當(dāng)量為丙二酸酯的1-3倍，反應(yīng)溫度一般在零℃至60℃，最好在室溫條件下攪拌完成。最后的脫保護(hù)反應(yīng)可以使用無(wú)機(jī)堿在甲醇-水，或者THF-水溶劑中來(lái)進(jìn)行，有機(jī)溶劑與水的比例一般為1:1-4:1。所使用的無(wú)機(jī)堿可以是氫氧化鈉，氫氧化鉀，氫氧化鋇，氫氧化鋰等。反應(yīng)溫度一般為室溫至60℃，反應(yīng)時(shí)間一般為1-24小時(shí)。脫保護(hù)生成的化合物的提純可以使用硅膠層析法或者離子交換樹脂過(guò)濾法，或者使用液相色譜法來(lái)完成，如果用蒸餾法直接除去反應(yīng)溶劑，所得到的生成物將會(huì)是相應(yīng)的金屬羧酸鹽。主要實(shí)驗(yàn)儀器：核磁共振譜儀：BRUKERAVANCEIII，400MHz；分析液相色譜儀：北京創(chuàng)新通恒LC3000型高效液相色譜儀，SPD-10ATvp雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器，7725i手動(dòng)進(jìn)樣器，CLASS-VP色譜工作站；分析色譜柱：DaisoGel,C18,4.6×250cm,5μmKNAUER德國(guó)；半制備液相色譜儀：創(chuàng)新通恒LC3000半制備液相色譜，SPI001；半制備色譜柱：DaisoGel250×20mmID,C18,10μm；質(zhì)譜儀：Agilent6310IonTrapLC/MS；冷凍干燥機(jī)：FD-1c-50凍干機(jī)(北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)。實(shí)施例1：(1)1-O-(3,4,6-三乙酰基-D-2-脫氧葡萄糖苷)-2-溴-乙烷(V-1)的制備：在室溫條件下，將D-2-脫氧葡萄糖1.6g溶解于吡啶與乙酸酐(7ml∶7ml)中，攪拌過(guò)夜，用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)終點(diǎn)。反應(yīng)完成后，加入100ml乙酸乙酯，用體積濃度為5％的鹽酸水溶液(2×25ml)洗滌，將水相用乙酸乙酯(2×25ml)萃取，合并有機(jī)相。將有機(jī)相依次用飽和氯化銨水溶液(1×100ml)，蒸餾水(1×100ml)，飽和碳酸氫鈉水溶液(1×100ml)，飽和氯化鈉水溶液(1×100ml)洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑蒸干，得到微黃色3,4,6-三乙?；?D-2-脫氧葡萄糖粗產(chǎn)品。將得到的粗產(chǎn)品于室溫下溶于20ml干燥的DCM中，加入2-溴乙醇(2.4g)，冷卻到0℃，用氮?dú)庵脫Q燒瓶?jī)?nèi)空氣，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下慢慢滴加三氟化硼的乙醚溶液(98％，1ml)。將反應(yīng)液在0℃攪拌15分鐘，然后慢慢升溫到室溫并攪拌60分鐘，用TLC檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)完成后，旋蒸除去溶劑，加入100ml乙酸乙酯，用體積濃度為5％的鹽酸水溶液(2×25ml)洗滌，將有機(jī)相依次用飽和氯化銨水溶液(1×100ml)，蒸餾水(1×100ml)，飽和碳酸氫鈉水溶液(1×100ml)，飽和氯化鈉水溶液(1×100ml)洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑蒸干。經(jīng)硅膠柱色譜純化(石油醚∶乙酸乙酯，體 積比，3∶1)，得到無(wú)色油狀目的產(chǎn)物1.9g。核磁共振譜(400MHz，CDCl3)，ppm：5.28-5.35(m,1H),4.97-5.02(m,2H),4.24-4.31(m,1H),4.06-4.11(m,2H),3.91-3.97(m,1H),3.78-3.84(m,1H),3.50(t,J＝6.0Hz,2H),2.29(dd,J＝13.0Hz,5.3Hz,1H),2.09(s,3H),2.05(s,3H),2.01(s,3H),1.80-1.87(m,1H).質(zhì)譜：MS，m/z：397.15,399.23[M+H]+(2)1-O-(3,4,6-三乙?；?D-2-脫氧葡萄糖苷)-丙烷-3,3-二甲酸二乙酯(VI-1)的制備：將上一步反應(yīng)得到的產(chǎn)品1-O-(3,4,6-三乙酰基-D-2-脫氧葡萄糖苷)-2-溴-乙烷(1.8g)溶解于5ml干燥的N，N-二甲基甲酰胺中，向反應(yīng)液中加入碳酸鉀(3g)，丙二酸二乙酯(1.6g)，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)終點(diǎn)，待反應(yīng)完成后，向反應(yīng)液中加入100ml乙酸乙酯，然后用飽和氯化銨水溶液(1×50ml)洗滌，將水相用乙酸乙酯萃取(2×25ml)，合并有機(jī)相。將有機(jī)相依次用飽和氯化銨水溶液(1×100ml)，蒸餾水(1×100ml)，飽和氯化鈉溶液(1×100ml)洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑蒸干，得到的淡黃色油狀物用硅膠柱色譜純化(石油醚∶乙酸乙酯，體積比，3∶1)，得到無(wú)色透明油狀目的產(chǎn)物2.6g。核磁共振譜(400MHz，CDCl3)，ppm：5.21-5.28(m,1H),4.98(t,J＝9.8Hz,1H),4.90(d,J＝3.2Hz,1H),4.14-4.32(m,5H),3.92-4.04(m,2H),3.68-3.74(m,1H),3.52(t,J＝7.3Hz,1H),3.39-3.49(m,1H),2.16-2.24(m,3H),2.08(s,3H),2.03(s,3H),2.00(s,3H),1.76-1.83(m,1H),1.27(t,J＝7.1Hz,6H).質(zhì)譜：MS，m/z：477.28[M+H]+(3)1-O-(3,4,6-三乙酰基-D-2-脫氧葡萄糖苷)-丙烷-3-氯-3,3-二甲酸二乙酯(VII-1)的制備將1-O-(3,4,6-三乙?；?D-2-脫氧葡萄糖苷)-丙烷-3,3-二甲酸二乙酯2.5g溶解在20mL干燥的四氫呋喃中，冷卻到0℃。用氮?dú)庵脫Q燒瓶?jī)?nèi)空氣，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下緩慢加入235mg氫化鈉固體(60％)。反應(yīng)液升溫至室溫，攪拌1小時(shí)。加入770mgN-氯代丁二酰亞胺,反應(yīng)液室溫反應(yīng)2小時(shí)，旋蒸除去溶劑。向反應(yīng)液中加入100ml乙酸乙酯，然后用飽和氯化銨水溶液(1×50ml)洗滌，將水相用乙酸乙酯萃取(2×25ml)，合并有機(jī)相。將有機(jī)相依次用飽和氯化銨水溶液(1×100ml)，蒸餾水(1×100ml)，飽和氯化鈉水溶液(1×100ml)洗滌，然后用 無(wú)水硫酸鈉干燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑蒸干，得到的淡黃色油狀物用硅膠柱色譜純化(石油醚∶乙酸乙酯，3∶1)，得到無(wú)色透明油狀目的產(chǎn)物2.4g。核磁共振譜(400MHz，CDCl3)，ppm：5.12-5.19(m,1H),4.50(t,J＝9.9Hz,1H),4.88(d,J＝3.3Hz,1H),4.25-4.39(m,5H),3.94-4.08(m,3H),3.56-3.62(m,1H),2.55-2.67(m,2H),2.21(dd,J＝13.0Hz,5.2Hz,1H),2.09(s,3H),2.06(s,3H),2.01(s,3H),1.73-1.80(m,1H),1.28-1.33(m,6H).質(zhì)譜：MS，m/z：511.19[M+H]+(4)1-O-(D-2-脫氧葡萄糖苷)-丙烷-3-氯-3,3-二甲酸(III-1)的制備1)將1-O-(3,4,6-三乙?；?D-2-脫氧葡萄糖苷)-丙烷-3-氯-3,3-二甲酸二乙酯(2.3g，)溶解于5mL甲醇中。將氫氧化鈉(1.5g)溶解于10mL水中，室溫下加入到反應(yīng)液中，然后升溫至90℃反應(yīng)約12小時(shí)。用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)終點(diǎn)。2)待反應(yīng)完成后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去甲醇，使用強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹脂處理產(chǎn)品。將過(guò)濾得到的水溶液用冷凍干燥機(jī)干燥后得到無(wú)色粘稠狀液體1.6g，粗產(chǎn)品直接用于下步反應(yīng)。質(zhì)譜：MS，m/z：329.10[M+H]+(5)順-【反式-(1R，2R)-二氨基環(huán)己烷】鉑(II)【1-O-(D-2-脫氧葡萄糖苷)-丙烷-3-氯-3，3-二甲酸酯】(I-1)的制備：1)將1-O-(D-2-脫氧葡萄糖苷)-丙烷-3-氯-3,3-二甲酸粗產(chǎn)品(1.3g)溶解于15mL水中，加入八水合氫氧化鋇(約1.3g溶解于5ml水中)調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH到7，室溫?cái)嚢?0分鐘。2)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下將環(huán)己二胺硫酸鉑(2.1g)溶解于2ml水中，加入到1)的反應(yīng)液中，用氫氧化鋇溶液調(diào)節(jié)pH到7，室溫避光攪拌過(guò)夜。3)待反應(yīng)完成后，使用離心機(jī)除去沉淀，收集上清液，使用冷凍干燥機(jī)凍干，用半制備高壓液相色譜分離得到1.6g最終產(chǎn)品，白色固體。核磁共振譜(400MHz，D2O)，ppm：5.73(br,1H),5.66(br,1H),5.14(br,1H),4.96(br,1H),4.92(s,1H),3.50-3.90(m,7H),3.00-3.30(m,2H),2.32(br,2H),1.95-2.05(m,1H),1.93(br,2H),1.50-1.62(m,1H),1.46(br,2H),1.18(br,2H),1.03(br,2H).質(zhì)譜：MS，m/z：637.10,636.08,635.17[M+H]+實(shí)施例2：二氨基鉑(II)【1-O-(D-2-脫氧葡萄糖苷)-丙烷-3-氯-3，3-二甲酸酯】(I-2)的制備：1)將110mg的1-O-(D-2-脫氧葡萄糖苷)-丙烷-3-氯-3,3-二甲酸粗產(chǎn)品溶于5ml的去離子水，加入八水合氫氧化鋇(約98mg溶解到5ml水中)調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH到8，室溫?cái)嚢?0分鐘。2)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下將二氨基硫酸鉑(115mg)溶解于2ml水中，加入到1)中反應(yīng)液中，用氫氧化鋇溶液調(diào)節(jié)pH到8，室溫避光攪拌過(guò)夜。3)待反應(yīng)完成后，使用離心機(jī)除去沉淀，收集上清液，用半制備HPLC精制分離并使用冷凍干燥機(jī)凍干，得到100mg最終產(chǎn)品，白色固體。核磁共振譜(400MHz，D2O)，ppm：4.92(s,1H),3.80-3.90(m,1H),3.60-3.80(m,2H),3.40-3.60(m,2H),2.61(s,2H),2.20-2.40(m,2H),2.00-2.10(m,1H),1.55-1.66(m,1H).質(zhì)譜：MS，m/z：568.09,567.16,569.07,[M+H]+實(shí)施例3：二異丙胺基鉑(II)【1-O-(D-2-脫氧葡萄糖苷)-丙烷-3-氯-3，3-二甲酸酯】(I-3)的制備：1)將100mg的1-O-(D-2-脫氧葡萄糖苷)-丙烷-3-氯-3,3-二甲酸粗產(chǎn)品溶于5ml的去離子水，加入八水合氫氧化鋇(約100mg溶解到5ml水中)調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH到8，室溫?cái)嚢?0分鐘。2)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下將二異丙胺基硫酸鉑(130mg)溶解于2ml水中，加入到1)中反應(yīng)液中，用氫氧化鋇溶液調(diào)節(jié)pH到8，室溫避光攪拌過(guò)夜。3)待反應(yīng)完成后，使用離心機(jī)除去沉淀，收集上清液，用半制備HPLC精制分離并使用冷凍干燥機(jī)凍干，得到154mg最終產(chǎn)品，白色固體。核磁共振譜(400MHz，D2O)，ppm：4.91(d,J＝4.0Hz,1H),4.82(br,4H),4.06(t,J＝8.0Hz,1H),3.80-3.90(m,1H),3.62-3.80(m,3H),3.40-3.58(m,2H),2.80-2.95(m,2H),2.30-2.50(m,2H),2.06(dd,J＝4.0,12.0Hz,1H),1.60(dt,J＝4.0,12.0Hz,1H),1.23(s,6H),1.22(s,6H).質(zhì)譜：MS，m/z：638.16,637.15,639.15,[M+H]+實(shí)施例4：(1)1-O-(3,4,6-三乙?；?D-2-脫氧葡萄糖苷)-3-溴-丙烷的制備：在室溫條件下，將D-2-脫氧葡萄糖苷1.6g溶解于吡啶與乙酸酐(7ml∶7ml)中，攪拌過(guò)夜，用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)終點(diǎn)。反應(yīng)完成后，加入100ml乙酸乙酯，用體積濃度為5％的鹽酸水溶液(2×25ml)洗滌，將水相用乙酸乙酯(2×25ml)萃取，合并有機(jī)相。將有機(jī)相依次用飽和氯化銨水溶液(1×100ml)，蒸餾水(1×100ml)，飽和碳酸氫鈉水溶液(1×100ml)，飽和氯化鈉水溶液(1×100ml)洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑蒸干，得到微黃色3,4,6-三乙?；?D-2-脫氧葡萄糖粗產(chǎn)品。將得到的粗產(chǎn)品于室溫下溶于20ml干燥的DCM中，加入3-溴丙醇(2.5g)，冷卻到0℃，用氮?dú)庵脫Q燒瓶?jī)?nèi)空氣，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下慢慢滴加三氟化硼的乙醚溶液(98％，1ml)。將反應(yīng)液在0℃攪拌15分鐘，然后慢慢升溫到室溫并攪拌2小時(shí)，用TLC檢測(cè)確認(rèn)反應(yīng)完成后，旋蒸除去溶劑，加入100ml乙酸乙酯，用體積濃度為5％的鹽酸水溶液(2×25ml)洗滌，將有機(jī)相依次用飽和氯化銨水溶液(1×100ml)，蒸餾水(1×100ml)，飽和碳酸氫鈉水溶液(1×100ml)，飽和氯化鈉水溶液(1×100ml)洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑蒸干。經(jīng)硅膠柱色譜純化(石油醚∶乙酸乙酯，3∶1)，得到無(wú)色油狀目的產(chǎn)物2.1g。核磁共振譜(400MHz，CDCl3)，ppm：5.24-5.31(m,1H),4.95-5.02(m,2H),4.29(dd,J＝12.2Hz,4.6Hz,1H),4.07(dd,J＝12.2Hz,1.9Hz,1H),3.95-3.98(m,1H),3.80-3.85(m,1H),3.47-3.54(m,3H),2.23(dd,J＝12.9Hz,5.2Hz,1H),2.10-2.16(m,2H),2.09(s,3H),2.04(s,3H),2.00(s,3H),1.79-1.86(m,1H).(2)1-O-(3,4,6-三乙酰基-D-2-脫氧葡萄糖苷)-丁烷-4,4-二甲酸二乙酯(VI-4)的制備：將1-O-(3,4,6-三乙?；?D-2-脫氧葡萄糖苷)-3-溴-丙烷(2.0g)溶解于15ml干燥的N，N-二甲基甲酰胺中，向反應(yīng)液中加入碳酸鉀(2.6g)，丙二酸二乙酯(1.55g)，在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)終點(diǎn)，待反應(yīng)完成后，向反應(yīng)液中加入100ml乙酸乙酯，用飽和氯化銨水溶液(1×50ml)洗滌，將水相用乙酸乙酯萃取(2×25ml)，合并有機(jī)相。將有機(jī)相依次用飽和氯化銨水溶液(1×100ml)，蒸餾水(1×100ml)，飽和氯化鈉溶液(1×100ml)洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑蒸干，得到的淡黃色油狀物用硅膠柱色譜純化(石油醚∶乙酸乙酯，3∶1)，得到無(wú)色透明油狀目的產(chǎn)物2.3g。核磁共振譜(400MHz，CD3Cl3)，ppm：5.27-5.33(m,1H),4.93-5.01(m,2H),4.18-4.31(m,6H),4.04(dd,J＝12.2Hz,1.8Hz,1H),3.93-3.96(m,1H),3.63-3.69(m,1H),3.34-3.43(m,2H),2.24(dd,J＝12.7Hz,5.2Hz,1H),2.08(s,3H),2.04(s,3H),2.01(s,3H),1.94-1.98(m,1H),1.78-1.86(m,1H),1.60-1.68(m,2H),1.28(t,J＝7.1Hz,6H).(3)1-O-(3,4,6-三乙?；?D-葡萄糖苷)-丁烷-4-氯-4,4-二甲酸二乙酯(VII-4)的制備將1-O-(3,4,6-三乙?；?D-2-脫氧葡萄糖苷)-丁烷-4,4-二甲酸二乙酯2.5g溶解在20mL干燥的四氫呋喃中，冷卻到0℃。用氮?dú)庵脫Q燒瓶?jī)?nèi)空氣，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下緩慢加入255mg氫化鈉固體(60％)。反應(yīng)液升溫至室溫，攪拌1小時(shí)。加入790mgN-氯代丁二酰亞胺,反應(yīng)液室溫反應(yīng)2小時(shí)，旋蒸除去溶劑。向反應(yīng)液中加入100ml乙酸乙酯，然后用飽和氯化銨水溶液(1×50ml)洗滌，將水相用乙酸乙酯萃取(2×25ml)，合并有機(jī)相。將有機(jī)相依次用飽和氯化銨水溶液(1×100ml)，蒸餾水(1×100ml)，飽和氯化鈉水溶液(1×100ml)洗滌，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑蒸干，得到的淡黃色油狀物用硅膠柱色譜純化(石油醚∶乙酸乙酯，3∶1)，得到無(wú)色透明油狀目的產(chǎn)物2.6g。核磁共振譜(400MHz，CDCl3)，ppm：5.27-5.33(m,1H),4.93-5.01(m,2H),4.18-4.31(m,6H),4.04(dd,J＝12.2Hz,1.8Hz,1H),3.93-3.96(m,1H),3.63-3.69(m,1H),3.34-3.43(m,1H),2.24(dd,J＝12.7Hz,5.2Hz,1H),2.08(s,3H),2.04(s,3H),2.01(s,3H),1.94-1.98(m,1H),1.78-1.86(m,1H),1.60-1.68(m,2H),1.28(t,J＝7.1Hz,6H).質(zhì)譜：MS，m/z：853.18[M+H]+(4)1-O-(D-2-脫氧葡萄糖苷)-丁烷-4-氯-4,4-二甲酸(III-4)的制備將1-O-(3,4,6-三乙?；?D-2-脫氧葡萄糖苷)-丁烷-4-氯-4,4-二甲酸二乙酯(2.0g，)溶解于5mL甲醇中。將氫氧化鈉(1.4g)溶解于10mL水中，室溫下加入到反應(yīng)液中，然后升溫至60℃反應(yīng)24小時(shí)。用HPLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)終點(diǎn)。待反應(yīng)完成后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去甲醇，使用強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹脂處理產(chǎn)品。將過(guò)濾得到的水溶液用冷凍干燥機(jī)干燥后經(jīng)半制備液相色譜分離得到無(wú)色粘稠狀液體1.4g。質(zhì)譜：MS，m/z：343.09[M+H]+(5)順-【反式-(1R，2R)-二氨基環(huán)己烷】鉑(II)【1-O-(D-2-脫氧葡萄糖苷)-丁烷-4-氯-4，4-二甲酸酯】(I-4)的制備：4)將1-O-(D-2-脫氧葡萄糖苷)-丁烷-4-氯-4,4-二甲酸(1.3g)溶解于15mL水中，加入八水合氫氧化鋇(約1.3g溶解于5ml水中)調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH到7，室溫?cái)嚢?0分鐘。5)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下將環(huán)己二胺硫酸鉑(1.7g)溶解于2ml水中，加入到1)的反應(yīng)液中，用氫氧化鋇溶液調(diào)節(jié)pH到7，室溫避光攪拌過(guò)夜。6)待反應(yīng)完成后，使用離心機(jī)除去沉淀，收集上清液，使用冷凍干燥機(jī)凍干，用半制備高壓液相色譜分離得到1.5g最終產(chǎn)品，白色固體。核磁共振譜(400MHz，D2O)，ppm：5.82(br,1H),5.64(br,1H),5.13(br,1H),4.90-5.10(m,2H),3.80-4.00(m,1H),3.50-3.80(m,5H),3.20-3.40(m,2H),2.70-2.90(m,1H),2.20-2.40(m,2H),2.10(dd,J＝4.0,12.0Hz,1H),1.93(br,2H),1.40-1.70(m,5H),0.90-1.30(m,4H).質(zhì)譜：MS，m/z：649.14，650.15，651.17[M+H]+實(shí)施例5：二氨基鉑(II)【1-O-(D-2-脫氧葡萄糖苷)-丁烷-4-氯-4，4-二甲酸酯】(I-5)的制備：1)將100mg的1-O-(D-2-脫氧葡萄糖苷)-丁烷-4-氯-4,4-二甲酸粗產(chǎn)品溶于5ml的去離子水，加入八水合氫氧化鋇(約98mg溶解到5ml水中)調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH到8，室溫?cái)嚢?0分鐘。2)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下將二胺硫酸鉑(120mg)溶解于2ml水中，加入到1)中反應(yīng)液中，用氫氧化鋇溶液調(diào)節(jié)pH到8，室溫避光攪拌過(guò)夜。3)待反應(yīng)完成后，使用離心機(jī)除去沉淀，收集上清液，用半制備HPLC精制分離并使用冷凍干燥機(jī)凍干，得到110mg最終產(chǎn)品，白色固體。核磁共振譜(400MHz，D2O)，ppm：4.95(d,J＝4.0Hz,1H),3.85-3.98(m,1H),3.70-3.82(m,1H),3.45-3.72(m,5H),2.33-2.45(m,2H),2.20-2.33(m,2H),2.09(dd,J＝4.0,16.0Hz,1H),1.50-1.69(m,3H).質(zhì)譜：MS，m/z：565.10，566.05,567.08[M+H]+實(shí)施例6：二異丙胺基鉑(II)【1-O-(D-2-脫氧葡萄糖苷)-丁烷-4-氯-4，4-二甲酸酯】(I-6)的制備：1)將100mg的1-O-D-脫氧葡萄糖苷-丁烷-4-氟-4，4-二甲酸粗產(chǎn)品溶于5ml的去離子水，加入八水合氫氧化鋇(約100mg溶解到5ml水中)調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH到8，室溫?cái)嚢?0分鐘。2)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下將二胺硫酸鉑(130mg)溶解于2ml水中，加入到1)中反應(yīng)液中，用氫氧化鋇溶液調(diào)節(jié)pH到8，室溫避光攪拌過(guò)夜。3)待反應(yīng)完成后，使用離心機(jī)除去沉淀，收集上清液，用半制備HPLC精制分離并使用冷凍干燥機(jī)凍干，得到130mg最終產(chǎn)品，白色固體。核磁共振譜(400MHz，D2O)，ppm：4.95(d,J＝4.0Hz,1H),4.81(br,4H),3.80-3.90(m,1H),3.60-3.80(m,3H),3.45-3.60(m,3H),2.80-2.95(m,2H),2.30-2.53(m,2H),2.08(dd,J＝4.0,16.0Hz,1H),1.50-1.70(m,3H),1.23(s,6H),1.21(s,6H).質(zhì)譜：MS，m/z：549.13，650.18，651.20[M+H]+實(shí)驗(yàn)例1:為了比較本發(fā)明鉑配合物與上市藥物順鉑，卡鉑以及奧沙利鉑在水溶性方面的不同，在下述試驗(yàn)中，分別針對(duì)本發(fā)明代表性的鉑配合物以及三種上市藥物進(jìn)行了室溫下100g水中各種藥物的飽和溶液溶質(zhì)質(zhì)量測(cè)定，表2列舉了本發(fā)明含氯水溶性鉑配合物在水中的溶解度以及與鉑類抗腫瘤臨床藥物順鉑，卡鉑以及奧沙利鉑的差別。表2：實(shí)驗(yàn)例2:在下述試驗(yàn)中，使用8-9周齡的雌性CDF1種鼠，動(dòng)物體重平均為20-25克。用L1210腫瘤細(xì)胞(105細(xì)胞每只老鼠)在腹膜內(nèi)進(jìn)行接種。針對(duì)制作的腫瘤動(dòng)物模型，使用本發(fā)明含氯水溶性鉑配合物實(shí)施治療，并與臨床使用的鉑類抗腫瘤藥物進(jìn)行比較，驗(yàn)證本發(fā)明的配合物對(duì)腫瘤動(dòng)物的治療效果以及本發(fā)明含氯水溶性鉑配合物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的毒副作用。對(duì)于本發(fā)明 的配合物使用5％V/V甘露糖醇水溶液，對(duì)于順鉑則使用5％V/V甘露糖醇生理鹽水溶液制備相應(yīng)的注射液。在腫瘤細(xì)胞移植后第1，4天經(jīng)由腹腔內(nèi)注射藥物，每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)目為6。上述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，腫瘤細(xì)胞L1210–小鼠白血病細(xì)胞購(gòu)自上海安妍商貿(mào)有限公司。動(dòng)物壽命延長(zhǎng)(ILS)的計(jì)算方法如下：ILS％＝[(St/Su)–1]X100其中，St＝接受治療的動(dòng)物存活日的加權(quán)中間數(shù)；Su＝未接受治療的動(dòng)物存活日的加權(quán)中間數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于表-3中：表3：注*第1天到第7天的體重變化實(shí)驗(yàn)例3：本發(fā)明水溶性鉑配合物有效成分對(duì)癌細(xì)胞的增殖抑制作用本發(fā)明的含氯水溶性鉑配合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制和殺傷作用是通過(guò)本發(fā)明藥物與腫瘤細(xì)胞DNA形成鏈內(nèi)和鏈間交聯(lián)，從而抑制腫瘤細(xì)胞DNA的合成及復(fù)制而實(shí)現(xiàn)的。以下實(shí)驗(yàn)針對(duì)本發(fā)明含氯水溶性鉑配合物有效成分對(duì)不同種類的人腫瘤細(xì)胞的增殖抑制效果進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。(1)試驗(yàn)方法：細(xì)胞培養(yǎng)液：使用含有10％牛胎仔血清(fetalbovineserum)，1mM丙酮酸鈉，2mML-谷氨酰胺，50U/ml盤尼西林，50μg/ml鏈霉素(streptomycin)的細(xì)胞培養(yǎng)液。主要實(shí)驗(yàn)儀器：MCO-15A型二氧化碳培養(yǎng)箱(日本SANYO公司)、倒置相差顯微鏡(Olympus，日本)、全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國(guó)BioTEKELX808)、低溫冰箱(日本MDF-V5410)、超凈工作臺(tái)(蘇州醫(yī)療器械廠)、微量移液器(法國(guó)GILSON)、自動(dòng)純水蒸餾器(上海1810B)。實(shí)驗(yàn)試劑：MTS:CellTiter96AqueousMTSReagentPowder,Promega公司PMS:Phenazinemethosulfate(PMS),Sigma-Aldrich公司DPBS:Sigma-Aldrich公司腫瘤細(xì)胞：以下活性測(cè)試實(shí)驗(yàn)中所使用的人腫瘤細(xì)胞：du145–人前列腺癌；MCF-7–人乳腺癌；SKOV3–人卵巢癌；HT-29–人結(jié)腸癌；A549–人非小細(xì)胞肺癌(腺癌)；H460-人非小細(xì)胞肺癌(大細(xì)胞癌)，以及動(dòng)物腫瘤細(xì)胞：L1210–小鼠白血病細(xì)胞均購(gòu)自上海安妍商貿(mào)有限公司。細(xì)胞毒性測(cè)試：細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)采用MTS測(cè)試方法。收集對(duì)數(shù)期腫瘤細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，每孔加入100μl，鋪板使待測(cè)細(xì)胞調(diào)密度至1000-10000/孔，(邊緣孔用無(wú)菌PBS填充)。在5％CO2，37℃孵育，至細(xì)胞單層鋪滿孔底(96孔平底板)，加入不同濃度梯度的藥物，每孔100μl，設(shè)5個(gè)復(fù)孔。在5％CO2，37℃條件下孵育96小時(shí)，倒置顯微鏡下觀察。向2mlMTS(2mg/ml,DPBS配制)溶液中加入100μlPMS(1mg/ml,DPBS配制),混勻，制成MTS工作液。上述細(xì)胞培養(yǎng)板離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖2-3遍后，在檢測(cè)吸光度前，向96孔板中每孔加入100μl培養(yǎng)基，再加入20μlMTS工作液，在37℃，5％CO2條件下孵育2h后，在490nm處檢測(cè)OD值(光密度值)。對(duì)照組：在上述同樣條件下不添加被測(cè)活性成分，最后取得腫瘤細(xì)胞在490nm處檢測(cè)OD值。藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制活性IC50：細(xì)胞抑制率計(jì)算：按下列公式計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率：1)細(xì)胞存活率(％)＝治療組OD值/對(duì)照組OD值×100％2)求出各藥物濃度下的細(xì)胞存活率，用此對(duì)藥物濃度作圖。在所得的曲線上，細(xì)胞存活率為50％時(shí)所對(duì)應(yīng)的濃度就是IC50值。上述每個(gè)藥物濃度的實(shí)驗(yàn)重復(fù)5組，取平均OD值計(jì)算細(xì)胞存活率。(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：圖中各種符號(hào)代表的腫瘤細(xì)胞名稱如下：du145–人前列腺癌；MCF-7–人乳腺癌；SKOV3–人卵巢癌；HT-29–人結(jié)腸癌；A549–人非小細(xì)胞肺癌(腺癌)；H460-人非小細(xì)胞肺癌(大細(xì)胞癌)實(shí)施例1制備的鉑配合物的抗腫瘤藥效見(jiàn)圖1和圖2；實(shí)施例2制備的鉑配合物的抗腫瘤藥效見(jiàn)圖3和圖4；實(shí)施例5制備的鉑配合物的抗腫瘤藥效見(jiàn)圖5和圖6；實(shí)施例6制備的鉑配合物的抗腫瘤藥效見(jiàn)圖7和圖8。為了更清晰地顯示配合物的藥效趨勢(shì)，所有圖中的曲線均省略了平均標(biāo)準(zhǔn)誤差標(biāo)記實(shí)驗(yàn)例4：本發(fā)明含氯水溶性鉑配合物與先行專利化合物(ZL201210206008.4)的抗癌藥效及腫瘤靶向性比較(1)試驗(yàn)方法：使用人乳腺癌MCF-7細(xì)胞，將本發(fā)明實(shí)施例1藥物以及先行公開(kāi)的含有葡萄糖，半乳糖以及甘露糖的相應(yīng)配合物在相同濃度(50μM)和相同時(shí)間條件(24h)下進(jìn)行細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)。按照實(shí)驗(yàn)例3中的方法在取得腫瘤抑制率數(shù)據(jù)的同時(shí)，采用原子吸收光譜測(cè)試的方法，評(píng)價(jià)各個(gè)配合物在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度，以此對(duì)比相應(yīng)藥物在相同條件下針對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向積蓄效果。細(xì)胞培養(yǎng)液：使用含有10％牛胎仔血清(fetalbovineserum)，1mM丙酮酸鈉，2mML-谷氨酰胺，50U/ml盤尼西林，50μg/ml鏈霉素(streptomycin)的細(xì)胞培養(yǎng)液。主要實(shí)驗(yàn)儀器：島津AAS測(cè)試儀(AA-6800)，MCO-15A型二氧化碳培養(yǎng)箱(日本SANYO公司)、倒置相差顯微鏡(Olympus，日本)、全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國(guó)BioTEKELX808)、低溫冰箱(日本MDF-V5410)、超凈工作臺(tái)(蘇州醫(yī)療器械廠)、微量移液器(法國(guó)GILSON)、自動(dòng)純水蒸餾器(上海1810B)。(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：表-4列舉了藥物針對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向性以及不同藥物在同樣濃度條件下抗腫瘤藥效的對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果。表4實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明所提供的含氯水溶性鉑配合物與先行公開(kāi)的結(jié)構(gòu)類似藥物相比，無(wú)論在抗腫瘤藥效和藥物在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的積蓄作用方面都顯示出更優(yōu)越的效果。利用本發(fā)明的配合物，可以制備預(yù)防和治療腫瘤的藥物。這些藥物的制備通常使用一種或者幾種有效劑量的本發(fā)明所提供的金屬鉑配合物，配合藥學(xué)可接受的載體或稀釋劑而完成。這些藥學(xué)上可接受的藥用輔料例如淀粉，葡萄糖、糊精、果糖和麥芽糖，乳糖，明膠，蔗糖，羥基纖維素，羥丙基甲基纖維素，二氧化硅，硬脂酸羥基乙酸淀粉鈉，水，乙醇，氯化鈉等可根據(jù)不同的劑型需要加以選擇。另外，根據(jù)藥物制備上的需要，這些藥用輔料還可以包括少量的酸堿調(diào)節(jié)劑，穩(wěn)定劑等。實(shí)驗(yàn)證明：本發(fā)明提供的鉑配合物具有良好的抗腫瘤活性。本發(fā)明所提供的含氯及D-2-脫氧葡萄糖的鉑配合物在針對(duì)包括腸癌，乳腺癌，前列腺癌，肺癌等的抗腫瘤藥效試驗(yàn)中，其抗腫瘤活性可以與目前被廣泛應(yīng)用的順鉑，卡鉑或奧沙利鉑相媲美，其活性甚至高于這些現(xiàn)存的鉑類抗癌藥物。另外，本發(fā)明所提供的配合物針對(duì)順鉑的抗癌作用能夠形成強(qiáng)烈抗藥性的鼠Leukemia-L1210腫瘤細(xì)胞具有更有效的殺傷作用。這是因?yàn)楸景l(fā)明所提供的含氯水溶性鉑配合物在水溶性方面與現(xiàn)有鉑類抗腫瘤藥品相比，都具有幾十倍至上百倍的提高，這種高水溶性特點(diǎn)在理論上能夠增加和提高藥物在腎臟的排泄，減輕鉑類藥物一般存在的高腎毒副作用，同時(shí)這種高水溶性特性使這些化合物容易制劑化和在臨床上的應(yīng)用更方便。本發(fā)明的配合物，由于具備極高的水溶性其給藥途徑?jīng)]有特別的限制，其劑量不僅取決于病人的年齡，體重以及病情，還取決于腫瘤的種類，性質(zhì)和嚴(yán)重程度。但一般來(lái)說(shuō)，對(duì)于成年病人，最好每天使用的量為10毫克至1克之間。一般為每一至三周一次或幾次用藥。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3