本申請(qǐng)要求2014年2月28日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)61/945,922的優(yōu)先權(quán)，該申請(qǐng)的說(shuō)明書通過(guò)引用方式以其全文并入本文。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及TC-PTP的新型抑制劑及其在活化用于在疾病的免疫療法治療中的應(yīng)用的抗原呈遞細(xì)胞，如樹(shù)突細(xì)胞中的用途。

背景技術(shù)：

免疫療法或細(xì)胞療法的一個(gè)重要方面利用經(jīng)修飾的抗原呈遞細(xì)胞(APC)引發(fā)患者中的免疫應(yīng)答。樹(shù)突細(xì)胞(DC)(最有力的APC)對(duì)于此應(yīng)答的誘導(dǎo)和維持是必需的，并且對(duì)于針對(duì)治療動(dòng)物和人傳染病以及不同人癌癥的有效免疫療法的開(kāi)發(fā)是中心要素。例如，在腫瘤組織中，DC可以吞沒(méi)凋亡或壞死腫瘤細(xì)胞，處理并且呈現(xiàn)腫瘤抗原以誘導(dǎo)腫瘤特異性T細(xì)胞應(yīng)答和免疫。然而，盡管此種有力的防御屏障，腫瘤進(jìn)展，轉(zhuǎn)移并且最終可以殺死宿主。腫瘤微環(huán)境中分泌的免疫抑制因子促成免疫監(jiān)視的脫逃。此類因子可以深刻影響DC功能。強(qiáng)烈的證據(jù)顯示，癌癥中的DC缺陷是由于髓樣細(xì)胞的異常分化和成熟，這對(duì)T細(xì)胞活化和抗腫瘤應(yīng)答具有不利的影響。因此，基于DC的免疫療法的效力受到免疫抑制腫瘤微環(huán)境危害。癌癥患者展現(xiàn)成熟的和功能性的DC的顯著減少，以及未成熟的DC(iDC)或未成熟的髓樣細(xì)胞(iMC，來(lái)自骨髓的DC祖先)的積累，這已經(jīng)與腫瘤衍生的抑制因子的升高的血漿水平聯(lián)系起來(lái)。從癌癥患者衍生的DC不表達(dá)共刺激分子CD80和CD86或表達(dá)低水平的共刺激分子CD80和CD86。因此，DC免疫療法的主要障礙是iDC或iMC誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受性或無(wú)反應(yīng)性，這一致地影響有效的抗腫瘤應(yīng)答的形成，而有利于腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。

已經(jīng)將對(duì)于免疫應(yīng)答的活化必需的關(guān)鍵途徑之一(細(xì)胞因子活化的janus激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)物和轉(zhuǎn)錄活化劑(JAK-STAT)途徑)的調(diào)節(jié)異常鑒定為造成癌癥中的異常DC分化和功能的關(guān)鍵因素之一。此途徑控制DC分化、成熟、活化和T_H1細(xì)胞分化的DC依賴性誘導(dǎo)。Jak酪氨酸激酶家族中有四種成員：Jak1、Jak2、Jak3、和Tyk2[1,2]。Jak激酶與細(xì)胞因子受體組成性有關(guān)，并且通過(guò)細(xì)胞因子對(duì)其細(xì)胞表面受體的結(jié)合而活化。一旦活化，Jak激酶磷酸化受體上的特定酪氨酸殘基，提供STAT的結(jié)合位點(diǎn)。STAT(由7種成員組成：Stat1、Stat2、Stat3、Stat4、Stat5a、Stat5b、和Stat6)是一組潛伏性胞質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子，其以無(wú)活性形式存在于細(xì)胞質(zhì)中。它們通過(guò)結(jié)合細(xì)胞因子受體上的磷酸化位點(diǎn)而活化，并且隨后在特定的酪氨酸殘基上被Jak磷酸化。當(dāng)磷酸化時(shí)，它們從受體解離，二聚化，并且進(jìn)入細(xì)胞核以誘導(dǎo)靶基因的表達(dá)。除了細(xì)胞因子和趨化因子受體外，JAK-STAT信號(hào)傳導(dǎo)也可以通過(guò)受體酪氨酸激酶，如表皮生長(zhǎng)因子受體、血小板衍生的生長(zhǎng)因子受體等直接啟動(dòng)。導(dǎo)致DC的最佳加強(qiáng)和Th-1細(xì)胞分化的下游活化的正是這些不同刺激物(正和負(fù))的組合；以及免疫原的識(shí)別。

目前，通過(guò)從外周血體外分化單核細(xì)胞及其隨后的成熟和活化產(chǎn)生用于免疫療法治療的DC是通過(guò)使用各種細(xì)胞因子混合劑。GM-CSF和IL-4之間的協(xié)同相互作用在DC分化期間誘導(dǎo)JAK-STAT途徑活化。IL-4主要經(jīng)由STAT6活化介導(dǎo)其效應(yīng)，并且GM-CSF活化STAT1和STAT5。STAT6在未成熟的DC中組成性活化，并且隨細(xì)胞分化為功能性成熟的DC而減少，而STAT1信號(hào)傳導(dǎo)在成熟的DC中較為強(qiáng)力，與共刺激分子表達(dá)的上調(diào)和IL-12生成相關(guān)聯(lián)。STAT5是成熟期間的DC分化需要的。DC分化的早期階段，以及共同淋巴樣祖先(CLP)和共同髓樣祖先(CMP)定型為DC譜系需要的一種其它的STAT是STAT3。DC分化與STAT3活化反相關(guān)，因此成熟的DC顯示了低水平的STAT3活化。然而，STAT3超活化響應(yīng)多種多樣的刺激物導(dǎo)致對(duì)DC成熟/活化的抑制。大多數(shù)腫瘤衍生的因子利用此途徑通過(guò)誘導(dǎo)STAT3超活化促進(jìn)異常DC分化。活化的STAT3通過(guò)增加組織蛋白酶S活性降低胞內(nèi)主要組織相容性復(fù)合物II(MHCII)α/β二聚體，和DC中的H2-DM水平。另外，STAT3超活化還抑制LPS誘導(dǎo)的白介素(IL)-12p40基因表達(dá)，并且影響對(duì)IL-12p40啟動(dòng)子的NF-kB募集，導(dǎo)致功能受損的和未成熟的具有高免疫抑制潛力的髓樣細(xì)胞的積累。這些報(bào)告顯示，STAT3活化必須緊密控制以維持抑制性和活化性信號(hào)之間的平衡。

PTP是通過(guò)使磷酸酪氨酸底物脫磷酸化控制多個(gè)細(xì)胞調(diào)節(jié)過(guò)程的跨膜或胞內(nèi)酶家族。人基因組中有107個(gè)PTP，并且?guī)追菥C述已經(jīng)詳細(xì)描述了此基因家族的成員。TC-PTP(PTPN2)主要以主要定位于細(xì)胞核的約45kD胞內(nèi)蛋白質(zhì)找到，并且屬于磷酸酪氨酸特異性PTP的I類亞家族。雖然TC-PTP是遍在表達(dá)的，但在所有造血細(xì)胞中觀察到最高的表達(dá)[1,3,4]。體外分析顯示，TC-PTP通過(guò)抑制JAK-STAT途徑負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)。目前，已經(jīng)將JAK1、JAK3、STAT1、STAT3、和STAT5a/b鑒定為細(xì)胞因子，如IL-2、IL-6、IL-4和IFN-γ下游的推定的TC-PTP靶標(biāo)[1,2,5]。因此，已經(jīng)將TC-PTP鑒定為DC活化的重要負(fù)調(diào)節(jié)物，提示了此酶的抑制劑在活化用于疾病的免疫療法治療的這些細(xì)胞中可以是有益的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，提供了結(jié)構(gòu)式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體：

其中：

X選自CH和N；

R¹選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SO_xC_1-3烷基、和-CN；(b)-(C＝O)R⁴；(c)–CN；(d)-(C＝O)OR⁴；(e)-(C＝O)NHR⁴；(f)-(C＝O)NR⁵R⁶；和(g)芳基或雜芳基，其中所述芳基和雜芳基基團(tuán)自身可以任選用1-3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自(i)鹵素、(ii)任選用1-3個(gè)鹵素取代的-(C＝O)O_1-3烷基，(iii)–COOH，(iv)任選用1-3個(gè)鹵素取代的C_1-3烷基，(v)任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基，(vi)-SO_xMe，(vii)-CN，和(viii)-SO₂NH₂；

R²和R³獨(dú)立選自下組：(a)鹵素；(b)二氟甲基膦酸；

R⁴選自下組：(a)H；(b)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SO_xC_1-3烷基、和-CN；(d)芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基基團(tuán)自身可以任選用1-3個(gè)鹵素、C_1-3烷基或C_1-3鹵代烷基取代；

R⁵和R⁶獨(dú)立選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SO_xC_1-3烷基、和-CN；(b)芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基基團(tuán)自身可以任選用1-3個(gè)鹵素、C_1-3烷基或C_1-3鹵代烷基取代；

R⁵和R⁶以及與它們附著的氮原子一起可以連接以形成5至7元環(huán)，其可以用1-3個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立選自：(i)鹵素，(ii)-(C＝O)OC_1-3烷基，(iii)-(C＝O)OH，(iv)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(v)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(vi)–OH，(vii)C_1-3羥基烷基，(viii)芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基基團(tuán)自身可以用1-3個(gè)鹵素、C_1-3烷基或C_1-3鹵代烷基取代；并且

x是0至2的整數(shù)。

化合物可以是結(jié)構(gòu)式Ia的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體：

其中：

R¹選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、和-CN；(b)-(C＝O)R⁴；(c)–CN；(d)-(C＝O)OR⁴；(e)-(C＝O)NHR⁴；和(f)-(C＝O)NR⁵R⁶；

R⁴選自下組：(a)H；和(b)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素取代；

R⁵和R⁶獨(dú)立選自下組：C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、和-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代；并且

R⁵和R⁶以及與它們附著的氮原子一起可以連接以形成5至7元環(huán)，其可以用1-3個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立選自：(i)鹵素，(ii)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iv)–OH，和(vii)C_1-3羥基烷基。

化合物可以是結(jié)構(gòu)式Ib的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體：

其中：

R¹選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、和-CN；(b)-(C＝O)R⁴；(c)-CN；(d)-(C＝O)OR⁴；(e)-(C＝O)NHR⁴；和(f)-(C＝O)NR⁵R⁶；

R⁴選自下組：(a)H；和(b)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素取代；

R⁵和R⁶獨(dú)立選自下組：C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH，和任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基；并且

R⁵和R⁶以及與它們附著的氮原子一起可以連接以形成5至7元環(huán)，其可以用1-3個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立選自：(i)鹵素，(ii)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iv)-OH，和(vii)C_1.3羥基烷基。

化合物可以是式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，選自以下化合物：

化合物可以是式Ia的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，選自以下化合物：

化合物可以是選自以下化合物的式的化合物或其藥學(xué)可接受鹽：

化合物可以是式Ib的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，其中所述化合物是：

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了藥物組合物，所述藥物組合物包含本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受鹽和藥學(xué)可接受載體。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受鹽用于制備藥物的用途，所述藥物用于抑制TC-PTP并活化抗原呈遞細(xì)胞以治療患者中的疾病或疾患。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了治療有效量的本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受鹽用于預(yù)防或治療需要治療的患者中的TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患的用途。

TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是免疫抑制疾病，并且免疫抑制疾病可以是艾滋。TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是癌癥，并且癌癥可以是前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，多發(fā)性骨髓瘤，腦癌，膠質(zhì)瘤，肺癌，唾液腺癌，胃癌，胸腺上皮癌，甲狀腺癌，白血病，黑色瘤，淋巴瘤，胃癌，胰腺癌，腎癌，膀胱癌，結(jié)腸癌和肝癌。TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是傳染病，并且傳染病可以是病毒性感染，細(xì)菌性感染，真菌性感染，寄生物感染，或其組合。病毒性感染可以是巨細(xì)胞病毒感染，埃巴病毒感染，乙肝病毒感染，丙肝病毒感染，皰疹病毒感染，人免疫缺陷病毒感染，人T淋巴細(xì)胞病毒感染，淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染，呼吸道合胞病毒感染病毒，鼻病毒感染，或其組合。細(xì)菌性感染可以是棒狀桿菌(Corynebacterium)感染，腸球菌(Enterococcus)感染，埃希氏菌(Escherichia)感染，嗜血桿菌(Haemophilius)感染，螺桿菌(Helicobacter)感染，軍團(tuán)菌(Legionella)感染，鉤端螺旋體(Leptospira)感染，利斯特氏菌(Listeria)感染，分枝桿菌(Mycobacterium)感染，奈瑟氏球菌(Neisseria)感染，卟啉單胞菌(Porphyromonas)感染，假單胞菌(Pseudomonus)感染，沙門氏菌(Salmonella)感染，葡萄球菌(Staphylococcus)感染，衣原體(Chlamydia)感染或其組合。真菌性感染可以是曲霉(Aspergillus)感染，芽生菌(Blastomyces)感染，念珠菌(Candida)感染，癬(Ringworm)感染，木珂蜜絲(Murcormyces)感染，或其組合。寄生性感染可以是血吸蟲(Schistosoma)感染，利什曼原蟲(Leishmania)感染，瘧原蟲(Plasmodium)感染，賈第蟲(Giardia)感染，錐蟲(Trypanosoma)感染和絳蟲(Taenia)感染。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，用于治療需要治療的患者中的TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患。

TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是免疫抑制疾病，并且免疫抑制疾病可以是艾滋。TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是癌癥，并且癌癥可以是前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，多發(fā)性骨髓瘤，腦癌，膠質(zhì)瘤，肺癌，唾液腺癌，胃癌，胸腺上皮癌，甲狀腺癌，白血病，黑色瘤，淋巴瘤，胃癌，胰腺癌，腎癌，膀胱癌，結(jié)腸癌和肝癌。TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是傳染病，并且傳染病可以是病毒性感染，細(xì)菌性感染，真菌性感染，寄生物感染，或其組合。病毒性感染可以是巨細(xì)胞病毒感染，埃巴病毒感染，乙肝病毒感染，丙肝病毒感染，皰疹病毒感染，人免疫缺陷病毒感染，人T淋巴細(xì)胞病毒感染，淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染，呼吸道合胞病毒感染病毒，鼻病毒感染，或其組合。細(xì)菌性感染可以是棒狀桿菌感染，腸球菌感染，埃希氏菌感染，嗜血桿菌感染，螺桿菌感染，軍團(tuán)菌感染，鉤端螺旋體感染，利斯特氏菌感染，分枝桿菌感染，奈瑟氏球菌感染，卟啉單胞菌感染，假單胞菌感染，沙門氏菌感染，葡萄球菌感染，衣原體感染或其組合。真菌性感染可以是曲霉感染，芽生菌感染，念珠菌感染，癬感染，木珂蜜絲感染，或其組合。寄生性感染可以是血吸蟲感染，利什曼原蟲感染，瘧原蟲感染，賈第蟲感染，錐蟲感染和絳蟲感染。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了刺激分離的抗原呈遞細(xì)胞的離體方法，所述方法包括：

用有效量的本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體處理分離的抗原呈遞細(xì)胞，

其中在所述化合物的所述處理之前、期間或之后將所述分離的抗原呈遞細(xì)胞與疾病特異性抗原溫育足以獲得分離的活化的抗原呈遞細(xì)胞的時(shí)間。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了刺激分離的抗原呈遞細(xì)胞的離體方法，所述方法包括：

用有效量的式II的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體處理分離的抗原呈遞細(xì)胞：

其中X’選自CH和N；

R¹’選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SOxC_1-3烷基、和-CN，(b)-C(＝O)H，(c)-C(＝O)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(d)–CN，(e)-HC＝NOH，(f)-(CH₃)C＝NOH，(g)-HC＝NOC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(h)-(CH₃)C＝NOC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(i)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(j)-C(＝O)NHR^6’，(k)-CH＝CH-苯基，其中-CH＝CH-任選用1-2個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自：鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，(I)-CH₂CH₂-苯基，其中-CH₂CH₂-任選用1-4個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自：鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，(m)苯基，(n)-HET-苯基，其中HET是含有1-3個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子的5或6元雜芳香環(huán)，(o)-C＝C-苯基，和(p)-CH₂-苯基，其中-CH₂-苯基的-CH₂-基團(tuán)任選用1-2個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，其中苯基和HET在所有出現(xiàn)中任選用1-3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自：(i)鹵素，(ii)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-C(＝O)OH，(iv)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(v)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(vi)-SO_xMe，和(vii)-SO₂NH₂；

R^6’選自下組：H、任選用1-3個(gè)鹵素取代的C_1-3烷基、苯基和-CH₂-苯基，其中這兩次出現(xiàn)中的苯基任選用1-3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自：(i)鹵素，(ii)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-C(＝O)OH，(iv)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，和(v)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代；

R^2’和R^4’獨(dú)立選自H、鹵素、-CH₃、-CF₃、-OCH₃和-OCF₃；

R^3’是鹵素，其中所述鹵素在與-CF₂PO(OR^5’)₂基團(tuán)鄰位的位置處與式II的稠合芳香環(huán)鍵合，

每個(gè)R5’基團(tuán)獨(dú)立選自下組：H和C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，并且

x是0、1、或2；

其中在用所述式II的化合物的所述處理之前、期間或之后將所述分離的抗原呈遞細(xì)胞與疾病特異性抗原溫育足以獲得分離的活化的抗原呈遞細(xì)胞的時(shí)間。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，刺激分離的抗原呈遞細(xì)胞的離體方法，所述方法包括：

用有效量的下列至少一項(xiàng)處理分離的抗原呈遞細(xì)胞：

-有效量的本發(fā)明的化合物；

-有效量的式II的化合物或其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體：

其中X’選自CH和N；

R^1’選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SOxC_1-3烷基、和-CN，(b)-C(＝O)H，(c)-C(＝O)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(d)-CN，(e)-HC＝NOH，(f)-(CH₃)C＝NOH，(g)-HC＝NOC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(h)-(CH₃)C＝NOC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(i)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(j)-C(＝O)NHR^6’，(k)-CH＝CH-苯基，其中-CH＝CH-任選用1-2個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，(I)-CH₂CH₂-苯基，其中-CH₂CH₂-任選用1-4個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，(m)苯基，(n)-HET-苯基，其中HET是含有1-3個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子的5或6元雜芳香環(huán)，(o)-C＝C-苯基，和(p)-CH₂-苯基，其中-CH₂-苯基的-CH₂-基團(tuán)任選用1-2個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，其中苯基和HET在所有出現(xiàn)中任選用1-3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自(i)鹵素，(ii)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-C(＝O)OH，(iv)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(v)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(vi)–SOxMe，和(vii)-SO₂NH₂；

R^6’選自下組：H、任選用1-3個(gè)鹵素取代的C_1-3烷基、苯基、和-CH₂-苯基，其中苯基在這兩次出現(xiàn)中任選用1-3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自(i)鹵素,(ii)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-C(＝O)OH，(iv)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，和(v)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代；

R^2’和R^4’獨(dú)立選自H、鹵素、-CH₃、-CF₃、-OCH₃和-OCF₃；

R^3’是鹵素，其中所述鹵素在與-CF₂PO(OR^5’)₂基團(tuán)鄰位的位置處與式II的稠合芳香環(huán)鍵合，

每個(gè)R5’基團(tuán)獨(dú)立選自下組：H和C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，并且

x是0、1、或2；和

其組合；

其中在與權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述和式II的至少一種所述化合物的所述接觸之前、期間或之后將所述抗原呈遞細(xì)胞與疾病特異性抗原溫育足以獲得分離的活化的抗原呈遞細(xì)胞的時(shí)間。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了用于改善或治療有此需要的患者中的疾病的方法，所述方法包括：

對(duì)所述患者施用通過(guò)本發(fā)明的方法獲得的分離的活化的抗原呈遞細(xì)胞，其中所述疾病引起疾病特異性抗原在所述患者中的表達(dá)。

分離的抗原呈遞細(xì)胞或分離的活化的抗原呈遞細(xì)胞可以是樹(shù)突細(xì)胞。分離的抗原呈遞細(xì)胞或分離的活化的抗原呈遞細(xì)胞可以來(lái)自相同的患者。

處理分離的抗原呈遞細(xì)胞包括成熟混合劑。

處理分離的抗原呈遞細(xì)胞進(jìn)一步包括成熟混合劑。

成熟混合劑包括LPS、MPLA、INFγ、CD40L、IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE-2、或其組合。

成熟混合劑可以是以下混合劑的至少一種：

a)LPS和INFγ；

b)MPLA和INFγ；

c)CD40L和INFγ；

d)IL-1β、IL-6和TNF-α；和

e)IL-1β、IL-6、TNF-α和PGE-2。

疾病可以是免疫抑制疾病，并且免疫抑制疾病可以是艾滋。疾病可以是癌癥，并且癌癥可以是前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，多發(fā)性骨髓瘤，腦癌，膠質(zhì)瘤，肺癌，唾液腺癌，胃癌，胸腺上皮癌，甲狀腺癌，白血病，黑色瘤，淋巴瘤，胃癌，胰腺癌，腎癌，膀胱癌，結(jié)腸癌和肝癌。疾病可以是傳染病，并且傳染病可以是病毒性感染，細(xì)菌性感染，真菌性感染，寄生物感染，或其組合。病毒性感染可以是巨細(xì)胞病毒感染，埃巴病毒感染，乙肝病毒感染，丙肝病毒感染，皰疹病毒感染，人免疫缺陷病毒感染，人T淋巴細(xì)胞病毒感染，淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染，呼吸道合胞病毒感染病毒，鼻病毒感染，或其組合。細(xì)菌性感染可以是棒狀桿菌感染，腸球菌感染，埃希氏菌感染，嗜血桿菌感染，螺桿菌感染，軍團(tuán)菌感染，鉤端螺旋體感染，利斯特氏菌感染，分枝桿菌感染，奈瑟氏球菌感染，卟啉單胞菌感染，假單胞菌感染，沙門氏菌感染，葡萄球菌感染，衣原體感染或其組合。真菌性感染可以是曲霉感染，芽生菌感染，念珠菌感染，癬感染，木珂蜜絲感染，或其組合。寄生性感染可以是血吸蟲感染，利什曼原蟲感染，瘧原蟲感染，賈第蟲感染，錐蟲感染和絳蟲感染。

可以將分離的活化的抗原呈遞細(xì)胞施用到患者的血流中，患者的淋巴結(jié)中，患者腫瘤中，患者的組織中，以及其組合。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了在需要治療的患者中預(yù)防或治療TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患的方法，所述方法包括對(duì)所述患者施用治療有效量的本發(fā)明的化合物，或其藥學(xué)可接受鹽。

TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是免疫抑制疾病，并且免疫抑制疾病可以是艾滋。TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是癌癥，并且癌癥可以是前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，多發(fā)性骨髓瘤，腦癌，膠質(zhì)瘤，肺癌，唾液腺癌，胃癌，胸腺上皮癌，甲狀腺癌，白血病，黑色瘤，淋巴瘤，胃癌，胰腺癌，腎癌，膀胱癌，結(jié)腸癌和肝癌。TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患可以是傳染病，并且傳染病可以是病毒性感染，細(xì)菌性感染，真菌性感染，寄生物感染，或其組合。病毒性感染可以是巨細(xì)胞病毒感染，埃巴病毒感染，乙肝病毒感染，丙肝病毒感染，皰疹病毒感染，人免疫缺陷病毒感染，人T淋巴細(xì)胞病毒感染，淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染，呼吸道合胞病毒感染病毒，鼻病毒感染，或其組合。細(xì)菌性感染可以是棒狀桿菌感染，腸球菌感染，埃希氏菌感染，嗜血桿菌感染，螺桿菌感染，軍團(tuán)菌感染，鉤端螺旋體感染，利斯特氏菌感染，分枝桿菌感染，奈瑟氏球菌感染，卟啉單胞菌感染，假單胞菌感染，沙門氏菌感染，葡萄球菌感染，衣原體感染或其組合。真菌性感染可以是曲霉感染，芽生菌感染，念珠菌感染，癬感染，木珂蜜絲感染，或其組合。寄生性感染可以是血吸蟲感染，利什曼原蟲感染，瘧原蟲感染，賈第蟲感染，錐蟲感染和絳蟲感染。

施用可以是口服施用、靜脈內(nèi)施用、皮下施用、舌下施用、吸入施用或肌肉內(nèi)施用、或其組合。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，提供了藥物組合物，所述藥物組合物包含：

(1)本發(fā)明的第一化合物或其藥學(xué)可接受鹽；

(2)一種或多種選自下組的另外的化合物：

(a)細(xì)胞毒劑；

(b)抗代謝物；

(c)烷化劑；

(d)蒽環(huán)類抗生素；

(e)抗生素；

(f)抗有絲分裂劑；

(g)激素療法；

(h)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑；

(i)基因表達(dá)調(diào)控劑；

(j)凋亡誘導(dǎo)劑；

(k)血管發(fā)生抑制劑；

(l)免疫治療劑；和

(3)藥學(xué)可接受載體。

細(xì)胞毒劑可以是泰素(taxol)、松胞菌素B(cytochalasin B)、短桿菌肽D(gramicidin D)、溴化乙啶(ethidium bromide)、依米丁(emetine)、絲裂霉素(mitomycin)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、長(zhǎng)春新堿(vincristine)、長(zhǎng)春堿(vinblastine)、秋水仙堿(colchicin)、多柔比星(doxorubicin)、柔紅霉素(daunorubicin)、二羥基炭疽菌素二酮(dihydroxy anthracin dione)、米托蒽醌(mitoxantrone)、光輝霉素(mithramycin)、放線菌素D(actinomycin D)、1-去氫睪酮(1-dehydrotestosterone)、糖皮質(zhì)激素(glucocorticoids)、普魯卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛爾(propranolol)、嘌呤霉素(puromycin)、其類似物或同系物、或其組合。

抗代謝物可以是甲氨蝶呤、6-巰嘌呤、6-硫鳥(niǎo)嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氨烯咪胺(decarbazine)或其組合。

烷化劑可以是氮芥(mechlorethamine)、塞替派(thioepa)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、美法侖(melphalan)、卡莫司汀(carmustine)(BSNU)、洛莫司汀(lomustine)(CCNU)、環(huán)磷酰胺(cyclothosphamide)、白消安(busulfan)、二溴甘露醇(dibromomannitol)、鏈脲霉素(streptozotocin)、絲裂霉素C(mitomycin C)，順式-二氯二胺鉑(II)(cis-dichlorodiamine platinum(II))(DDP)順鉑、或者其組合。

蒽環(huán)類抗生素可以是柔紅霉素、多柔比星或其組合。

抗生素可以是更生霉素(dactinomycin)、博萊霉素(bleomycin)、光輝霉素(mithramycin)、氨茴霉素(anthramycin)(AMC)、或其組合。

抗有絲分裂劑可以是長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿或其組合。

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑可以是伊馬替尼(imatinib)、曲妥珠單抗(trastuzumab)或其組合。

基因表達(dá)調(diào)控劑可以是siRNA、shRNA、反義寡核苷酸、HDAC抑制劑、或其組合。

免疫治療劑可以是單克隆抗體、嵌合抗原受體(CAR)-T-細(xì)胞、或其組合。

激素療法可以是促黃體素釋放素(LHRH)拮抗劑。

凋亡誘導(dǎo)劑可以是重組人TNF相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)。

血管發(fā)生抑制劑可以是索拉非尼、舒尼替尼、帕唑帕尼、依維莫司或其組合。

單克隆抗體可以是抗CTLA4、抗PD1或其組合。

第一化合物可以是：

本發(fā)明涉及結(jié)構(gòu)式I的化合物以及其藥學(xué)可接受鹽：

這些化合物是TC-PTP的抑制劑，并且可用于活化抗原呈遞細(xì)胞以治療患者不能引發(fā)足夠的免疫應(yīng)答的疾病。此類化合物可以用于治療癌癥、艾滋和相關(guān)醫(yī)學(xué)疾患、傳染病，并且也可以用于治療其它TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患。

本發(fā)明還涉及使用口服、靜脈內(nèi)、皮下、舌下、吸入或肌肉內(nèi)施用對(duì)需要此類治療的患者直接施用本發(fā)明的化合物。

本發(fā)明還涉及在合適的培養(yǎng)基中用本發(fā)明的化合物離體處理從患者收獲的細(xì)胞以使那些細(xì)胞適合于對(duì)患者注射的方法。

本發(fā)明還涉及與治療有效量的抗原聯(lián)合用本發(fā)明的化合物離體處理抗原呈遞細(xì)胞(如樹(shù)突細(xì)胞)的方法，已知所述抗原可用于在那些細(xì)胞中產(chǎn)生期望的變化。

本發(fā)明還涉及生物劑的用途，所述生物作用劑在此類細(xì)胞的離體成熟期間降低抗原呈遞細(xì)胞(如樹(shù)突細(xì)胞)中的TC-PTP活性量。此類作用劑包括siRNA、CRSPR/CAs9、商品名為泰來(lái)(talens)的試劑、鋅指核酸酶、shRNA、和識(shí)別PTPN2基因序列的反義寡核苷酸。

本發(fā)明還涉及通過(guò)將活化的樹(shù)突細(xì)胞注射到患者中治療或控制癌癥、傳染病，如病毒性感染、細(xì)菌性感染、真菌性感染和寄生性感染，和相關(guān)醫(yī)學(xué)疾患的方法，其中已經(jīng)操作樹(shù)突細(xì)胞以呈遞對(duì)于患者患有的疾病而言特定的抗原。

本發(fā)明涵蓋對(duì)需要此類療法的患者施用活化的樹(shù)突細(xì)胞，通過(guò)將此類細(xì)胞注射到血流中、淋巴結(jié)中、直接注射到腫瘤中，或者直接注射到已經(jīng)受到對(duì)患者治療的疾病影響的另一組織中進(jìn)行。

可以通過(guò)本發(fā)明治療的癌癥類型包括但不限于前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，多發(fā)性骨髓瘤，腦癌，膠質(zhì)瘤，肺癌，唾液腺癌，胃癌，胸腺上皮癌，甲狀腺癌，白血病，黑色瘤，淋巴瘤，胃癌，胰腺癌，腎癌，膀胱癌，結(jié)腸癌和肝癌。

可以通過(guò)本發(fā)明治療的傳染病類型包括但不限于那些由以下病毒、細(xì)菌和寄生物引起的傳染?。壕藜?xì)胞病毒、埃巴病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、皰疹病毒、人免疫缺陷病毒、人T淋巴細(xì)胞病毒、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、呼吸道合胞病毒感染病毒，和/或鼻病毒；棒狀桿菌、腸球菌、埃希氏菌、嗜血桿菌、螺桿菌、軍團(tuán)菌、鉤端螺旋體、利斯特氏菌、分枝桿菌、奈瑟氏球菌、卟啉單胞菌、假單胞菌、沙門氏菌、葡萄球菌、或衣原體；或血吸蟲、利什曼原蟲、瘧原蟲、賈第蟲、錐蟲和絳蟲，或真菌感染，如由曲霉，芽生菌，念珠菌，癬，和木珂蜜絲引起的感染。

鑒于如附圖中闡明的選擇的實(shí)施方案的以下詳細(xì)描述，本文的主題的特征和優(yōu)點(diǎn)將變得明顯。應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到，公開(kāi)和要求保護(hù)的主題能夠在各個(gè)方面修改，而都不偏離權(quán)利要求書的范圍。因而，附圖和說(shuō)明書應(yīng)當(dāng)視為本質(zhì)上闡述性的，而不視為限制性，并且主題的全部范圍在權(quán)利要求書中列出。

附圖說(shuō)明

本公開(kāi)的其它特征和優(yōu)點(diǎn)從與附圖結(jié)合考慮的以下詳細(xì)描述看將變得明顯，其中：

圖1顯示了通過(guò)實(shí)施例6或?qū)嵤├?的化合物活化的成熟樹(shù)突細(xì)胞的單次處理后28天的小鼠中的腫瘤體積。

圖2顯示了在存在和缺乏實(shí)施例7的化合物的情況下在分化和成熟后的人DC中的IL-12的誘導(dǎo)。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明涉及結(jié)構(gòu)式I的化合物以及其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體：

其中：

X選自CH和N；

R¹選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SO_xC_1-3烷基、和-CN；(b)-(C＝O)R⁴；(c)–CN；(d)-(C＝O)OR⁴；(e)-(C＝O)NHR⁴；(f)-(C＝O)NR⁵R⁶；和(g)芳基或雜芳基，其中所述芳基和雜芳基基團(tuán)自身可以任選用1-3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自(i)鹵素、(ii)任選用1-3個(gè)鹵素取代的-(C＝O)OC_1-3烷基，(iii)–COOH，(iv)任選用1-3個(gè)鹵素取代的C_1-3烷基，(v)任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基，(vi)-SO_xMe，(vii)-CN，和(viii)-SO₂NH₂；

R²和R³獨(dú)立選自下組：(a)鹵素；(b)二氟甲基膦酸；

R⁴選自下組：(a)H；(b)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SO_xC_1-3烷基、和-CN；(d)芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基基團(tuán)自身可以任選用1-3個(gè)鹵素、C_1-3烷基或C_1-3鹵代烷基取代；

R⁵和R⁶獨(dú)立選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SO_xC_1-3烷基、和-CN；(b)芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基基團(tuán)自身可以任選用1-3個(gè)鹵素、C_1-3烷基或C_1-3鹵代烷基取代；

R⁵和R⁶以及與它們附著的氮原子一起可以連接以形成5至7元環(huán)，其可以用1-3個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立選自：(i)鹵素，(ii)-(C＝O)OC_1-3烷基，(iii)-(C＝O)OH，(iv)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(v)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(vi)–OH，(vii)C_1-3羥基烷基，(viii)芳基或雜芳基，其中所述芳基或雜芳基基團(tuán)自身可以用1-3個(gè)鹵素、C_1-3烷基或C_1-3鹵代烷基取代；并且

x是0至2的整數(shù)。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明可以以結(jié)構(gòu)式Ia和其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體概述：

其中：

R¹選自下組：(a)C_1-3烷基任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、和-CN；(b)-(C＝O)R⁴；(c)–CN；(d)-(C＝O)OR⁴；(e)-(C＝O)NHR⁴；和(f)-(C＝O)NR⁵R⁶；

R⁴選自下組：(a)H；和(b)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素取代；

R⁵和R⁶獨(dú)立選自下組：C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、和-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代；并且

R⁵和R⁶以及與它們附著的氮原子一起可以連接以形成5至7元環(huán)，其可以用1-3個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立選自：(i)鹵素，(ii)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iv)–OH，和(vii)C_1-3羥基烷基。

根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明可以以結(jié)構(gòu)式Ib和其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體概述：

其中：

R¹選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、和-CN；(b)-(C＝O)R⁴；(c)-CN；(d)-(C＝O)OR⁴；(e)-(C＝O)NHR⁴；和(f)-(C＝O)NR⁵R⁶；

R⁴選自下組：(a)H；和(b)C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素取代；

R⁵和R⁶獨(dú)立選自下組：C_1-3烷基，任選用1-5個(gè)鹵素和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH，和任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基；并且

R⁵和R⁶以及與它們附著的氮原子一起可以連接以形成5至7元環(huán)，其可以用1-3個(gè)基團(tuán)取代，所述基團(tuán)獨(dú)立選自：(i)鹵素，(ii)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iv)-OH，和(vii)C_1.3羥基烷基。

本發(fā)明包括所示的化合物，并且還包括(在可能的情況下)化合物的單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和差向異構(gòu)體，和其非對(duì)映異構(gòu)體和/或?qū)τ钞悩?gòu)體的混合物，包括外消旋混合物。雖然本文中公開(kāi)的具體的立體化學(xué)是優(yōu)選的，但是其它立體異構(gòu)體，包括非對(duì)映異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體、差向異構(gòu)體，和這些的混合物也可以用于活化APC。無(wú)活性或活性較小的非對(duì)映異構(gòu)體和對(duì)映異構(gòu)體可用于與酶靶標(biāo)和活化機(jī)制相關(guān)的科學(xué)研究。

可以在藥物組合物中使用本文中公開(kāi)的化合物，所述藥物組合物包含(a)化合物或其藥學(xué)可接受鹽，和(b)藥學(xué)可接受載體?；衔锟梢杂糜诎环N或多種其它活性藥用成分的藥物組合物?；衔镆部梢栽谒幬锝M合物中使用，其中式I的化合物或其藥學(xué)可接受鹽是唯一的活性成分。

根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的化合物是TC-PTP的抑制劑，并且可用于活化抗原呈遞細(xì)胞以治療患者不能引發(fā)足夠的免疫應(yīng)答的疾病。此類化合物可以用于治療癌癥、病毒性感染、細(xì)菌性感染、真菌性感染和寄生性感染，并且也可以用于治療其它TC-PTP介導(dǎo)的疾病或疾患。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，可以使用口服、靜脈內(nèi)、皮下、舌下、吸入或肌肉內(nèi)施用直接對(duì)需要此類治療的患者給予本發(fā)明的化合物。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明還涉及在合適的培養(yǎng)基中用本發(fā)明的化合物離體處理從患者收獲的細(xì)胞以使那些細(xì)胞適合于對(duì)患者注射的方法。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明還涉及與治療有效量的抗原聯(lián)合用本發(fā)明的化合物離體處理抗原呈遞細(xì)胞(如樹(shù)突細(xì)胞)的方法，已知所述抗原可用于在那些細(xì)胞中產(chǎn)生期望的變化。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明還涉及與合適的成熟混合劑聯(lián)合用本發(fā)明的化合物離體處理抗原呈遞細(xì)胞(如樹(shù)突細(xì)胞)的方法，所述成熟混合劑可以由以下作用劑中的一種或多種組成，但是不限于此：

a)LPS和INFγ；

b)MPLA和INFγ；

c)CD40L和INFγ；

d)IL-1β、IL-6和TNF-α；和

e)IL-1β、IL-6、TNF-α和PGE-2。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明還涉及通過(guò)將活化的樹(shù)突細(xì)胞注射到患者中治療或控制癌癥和傳染病，如病毒性感染、細(xì)菌性感染、真菌性感染和寄生性感染，和相關(guān)醫(yī)學(xué)疾患的方法，其中已經(jīng)操作樹(shù)突細(xì)胞以呈遞對(duì)于患者患有的疾病而言特定的抗原。

根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，認(rèn)為對(duì)于在治療癌癥中具有效用的活化的DC，在成熟過(guò)程期間必須將它暴露于腫瘤特異性抗原，然后，它吸收并呈遞在細(xì)胞表面上。類似地，認(rèn)為如果將活化的DC暴露于傳染源特異性抗原，那么DC可以在治療相關(guān)的傳染病中具有效用。(Moll,2004)。

根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明涉及對(duì)需要此類療法的患者施用活化的樹(shù)突細(xì)胞，通過(guò)將此類細(xì)胞注射到血流中、淋巴結(jié)中、直接注射到腫瘤中，或者直接注射到已經(jīng)受到對(duì)患者治療的疾病影響的另一組織中進(jìn)行。

可以通過(guò)本發(fā)明的化合物治療的癌癥類型包括但不限于前列腺癌、乳腺癌、腦癌、膠質(zhì)瘤、肺癌、唾液癌、胃癌、胸腺上皮癌、甲狀腺癌、卵巢癌、多發(fā)性骨髓瘤、白血病、黑素瘤、淋巴瘤、胃癌、腎癌、胰腺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌和肝癌。

可以通過(guò)本發(fā)明治療的病毒性感染的類型包括但不限于由巨細(xì)胞病毒、埃巴病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、皰疹病毒、人免疫缺陷病毒、人T淋巴細(xì)胞病毒、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、呼吸道合胞病毒感染病毒，和/或鼻病毒引起的感染。

可以通過(guò)本發(fā)明治療的細(xì)菌性感染的類型包括但不限于由棒狀桿菌、腸球菌、埃希氏菌、嗜血桿菌、螺桿菌、軍團(tuán)菌、鉤端螺旋體、利斯特氏菌、分枝桿菌、奈瑟氏球菌、卟啉單胞菌、假單胞菌、沙門氏菌、葡萄球菌、和衣原體引起的感染。

可以通過(guò)本發(fā)明治療的寄生性感染的類型包括但不限于由血吸蟲、利什曼原蟲、瘧原蟲、賈第蟲、錐蟲和絳蟲引起的感染。

可以通過(guò)本發(fā)明治療的真菌性感染的類型包括但不限于由曲霉，芽生菌，念珠菌，癬，和木珂蜜絲引起的感染。

根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明還包括用式I、式Ia、和/或式Ib的化合物或其藥學(xué)可接受鹽體外處理原代細(xì)胞，以及與合適的抗原一起溫育以產(chǎn)生適合于治療性處理需要免疫療法的患者的活化的細(xì)胞。

縮寫

有機(jī)化學(xué)、藥物化學(xué)、藥理學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中通常使用的縮寫和術(shù)語(yǔ)是是這些領(lǐng)域的從業(yè)人員公知的，并且在本文中使用。下文提供了代表性的縮寫和定義：

Ac是乙?；鵞CH₃C(O)-]，Ac₂O是乙酸酐；APC是抗原呈遞細(xì)胞；9-BBN是9-硼雙環(huán)[3.3.1]壬烷；Bn是芐基；BOC是叔丁基氧基羰基；DIAD是偶氮二甲酸二異丙酯(diisopropylazodicarboxylate)；DIBAL是二異丁基氫化鋁；DMF是N,N-二甲基甲酰胺；DMSO是二甲亞砜；EDAC(或EDC)是1-乙基-3-[3-(二甲基氨基)丙基]-碳二亞胺HCl；Et₃N是三乙胺；Et是乙基；EtOAc是乙酸乙酯；EtOH是乙醇；3-F-Ph是3-氟苯基，HCl是氫氯酸；HOBt是1-羥基苯并三唑；HPLC是高效液相層析；LCMS是具有質(zhì)譜檢測(cè)的HPLC；LG是離去基團(tuán)；M是摩爾；mmol是毫摩爾；Me是甲基；MeOH是甲醇；MsCl是甲磺酰氯；N是正常的；NaHMDS是六甲基二硅疊氮化鈉(sodium hexamethyldisiliazide)；NaOAc是乙酸鈉；NaOtBu是叔丁醇鈉；NMO是N-甲基嗎啉N氧化物；NMP是N甲基吡咯烷酮；Pd(dba)₂是三(二苯亞甲基丙酮)二鈀；PdCl2(Ph₃P)₂是二氯二-(三苯基磷烯)鈀(dichlorobis-(triphenylphosphene)palladium)；PG表示未規(guī)定的保護(hù)基團(tuán)；Ph是苯基；PhMe是甲苯；PPh₃是三苯基膦；PMB是對(duì)甲氧基芐基；RT是室溫；TBAF是四丁基氟化銨；TBS是叔丁基二甲基甲硅烷基；tBu是叔丁基；Tf是三氟鹽(triflate)；TFA是三氟乙酸；THF是四氫呋喃；TLC是薄層層析；TMS是三甲基甲硅烷基；TPAP是過(guò)釕酸四內(nèi)胺(tetrapropylammonium perruthenate)。

定義

“烷基”以及具有前綴“烷”的其它基團(tuán)，如烷氧基和烷?；庵缚梢允蔷€性或支鏈的碳鏈，及其組合，除非碳鏈另有定義。烷基基團(tuán)的例子包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲和叔丁基、戊基、己基，庚基，辛基，壬基，等等。在規(guī)定的碳原子數(shù)允許例如C_3-10的情況下，術(shù)語(yǔ)烷基還包括環(huán)烷基基團(tuán)，和直鏈或支鏈烷基鏈與環(huán)烷基結(jié)構(gòu)組合的組合。在未規(guī)定碳原子數(shù)量時(shí)，意指C_1-6。

“環(huán)烷基”是烷基的子集，并且是指具有規(guī)定數(shù)目的碳原子的飽和碳環(huán)狀環(huán)。環(huán)烷基的實(shí)例包括環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)庚基，環(huán)辛基，等等。環(huán)烷基通常是單環(huán)，除非另有說(shuō)明。環(huán)烷基是飽和的，除非另有定義。

術(shù)語(yǔ)“烷氧基”指規(guī)定的碳原子數(shù)(例如，C_1-6烷氧基)，或此范圍內(nèi)的任何數(shù)目[即，甲氧基(MeO-)，乙氧基，異丙氧基等等]的直鏈或支鏈烷氧化物。

術(shù)語(yǔ)“烷基硫代”指規(guī)定的碳原子數(shù)(例如，C_1-6烷基硫代)，或此范圍內(nèi)的任何數(shù)目[即，甲基硫代(MeS-)，乙基硫基，異丙基硫基等]的直鏈或支鏈烷基硫化物。

術(shù)語(yǔ)“烷基氨基”指規(guī)定的碳原子數(shù)(例如，C_1-6烷基氨基)，或此范圍內(nèi)的任何數(shù)目[即，甲基氨基、乙基氨基、異丙基氨基、叔丁基氨基等]的直鏈或支鏈烷基胺。

術(shù)語(yǔ)“烷基磺酰基”指規(guī)定的碳原子數(shù)(例如，C_1-6烷基磺?；?，或此范圍內(nèi)的任何數(shù)目[即，甲基磺?；?MeSO₂·)、乙基磺?；惐酋；萞的直鏈或支鏈烷基砜。

術(shù)語(yǔ)“烷基亞磺?；敝敢?guī)定的碳原子數(shù)(例如，C_1-6烷基亞磺?；?，或此范圍內(nèi)的任何數(shù)目[即，甲基亞磺?；?MeSO-)、乙基亞磺?；惐鶃喕酋；萞的直鏈或支鏈烷基硫化物。

術(shù)語(yǔ)“烷基氧基羰基”指規(guī)定的碳原子數(shù)(例如，C_1-6烷基氧基羰基)，或此范圍內(nèi)的任何數(shù)目[即，甲基氧基羰基(MeOCO^-)、乙基氧基羰基、或丁基氧基羰基]的本發(fā)明的羧酸衍生物的直鏈或支鏈酯。

“芳基”指含有碳環(huán)原子的單或多環(huán)芳香族環(huán)系統(tǒng)。優(yōu)選的芳基是單環(huán)或雙環(huán)6-10元芳香族環(huán)系統(tǒng)。苯基和萘基是優(yōu)選的芳基。最優(yōu)選的芳基是苯基。

“雜環(huán)基”指含有至少一個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子，進(jìn)一步包括硫的氧化形式，即SO和SO₂的飽和或不飽和非芳香族環(huán)或環(huán)系統(tǒng)。雜環(huán)的實(shí)例包括四氫呋喃(THF)、二氫呋喃、1,4-二噁烷、嗎啉、1,4-二噻烷、哌嗪、哌啶、1,3-二氧戊環(huán)、咪唑烷(imidazolidine)、咪唑啉、吡咯啉、吡咯烷(pyrrolidine)、四氫吡喃、二氫吡喃、氧硫雜環(huán)戊烷(oxathiolane)、二硫戊環(huán)(dithiolane)、1,3-二噁烷、1,3-二噻烷、氧硫雜環(huán)己烷(oxathiane)、硫代嗎啉、2-氧代哌啶-1-基、2-氧代吡咯烷-1-基、2-氧代氮雜環(huán)丁烷-1-基(2-oxoazetidin-1-yl)、1,2,4-噁二嗪-5(6H)-酮-3-基(1,2,4-oxadiazin-5(6H)-one-3-yl)，等等。

“雜芳基”是指含有至少一個(gè)選自O(shè)，S和N的環(huán)雜原子的芳香族或部分芳香族雜環(huán)。因此，雜芳基包含與不是芳香族的其它種類的環(huán)如芳基、環(huán)烷基和雜環(huán)基稠合的雜芳基。雜芳基基團(tuán)的實(shí)例包括：吡咯基、異噁唑基(isoxazolyl)、異噻唑基(isothiazolyl)、吡唑基(pyrazolyl)、吡啶基(pyridyl)、噁唑基(oxazolyl)，噁二唑基(oxadiazolyl)(特別是，1,3,4-噁二唑-2-基(1,3,4-oxadiazol-2-yl)和1,2,4-噁二唑-3-基(1,2,4-oxadiazol-3-yl))，噻二唑基(thiadiazolyl)，噻唑基(thiazolyl)，咪唑基(imidazolyl)，三唑基(triazolyl)，四唑基(tetrazolyl)，呋喃基(furyl)，三嗪基(triazinyl)，噻吩基(thienyl)，嘧啶基(pyrimidyl)，苯并異噁唑基(benzisoxazolyl)，苯并噁唑基(benzoxazolyl)，苯并噻唑基(benzothiazolyl)，苯并噻二唑基(benzothiadiazolyl)，二氫苯并呋喃基(dihydrobenzofuranyl)，二氫吲哚基(indolinyl)，噠嗪基(pyridazinyl)，吲唑基(indazolyl)，異吲哚基(isoindolyl)，二氫苯并噻吩基(dihydrobenzothienyl)，吲嗪基(indolizinyl)，噌啉基(cinnolinyl)，酞嗪(phthalazinyl)，喹唑啉基(quinazolinyl)，萘啶基(naphthyridinyl)，咔唑基(carbazolyl)，苯并二氧戊環(huán)基(benzodioxolyl)，喹喔啉基(quinoxalinyl)，嘌呤基(purinyl)，呋枯基(furazanyl)，異芐基呋喃基(isobenzylfuranyl)，苯并咪唑基(benzimidazolyl)，苯并呋喃基(benzofuranyl)，苯并噻吩基(benzothienyl)，喹啉基(quinolyl)，吲哚基(indolyl)，異喹啉基(isoquinolyl)，二苯并呋喃基(dibenzofuranyl)等。對(duì)于雜環(huán)基和雜芳基基團(tuán)，包括含有3-15個(gè)原子的環(huán)和環(huán)系統(tǒng)，形成1-3個(gè)環(huán)。

“鹵素”指氟、氯、溴和碘。氯化物和氟化物一般是優(yōu)選的。當(dāng)在烷基或烷氧基基團(tuán)上取代鹵素時(shí)，氟化物是最優(yōu)選的(例如CF₃O和CF₃CH₂O)。

如本文中使用，術(shù)語(yǔ)“組合物”意指涵蓋包含規(guī)定量的規(guī)定成分的產(chǎn)物，以及直接或間接源自規(guī)定量的規(guī)定成分的組合的任何產(chǎn)物。所述術(shù)語(yǔ)就藥物組合物而言意圖涵蓋包含活性成分和構(gòu)成載體的惰性成分的產(chǎn)物，以及直接或間接源自任何兩種或更多種成分的組合、復(fù)合或聚集，或者一種或多種成分的解離，或者一種或多種成分的其它類型的反應(yīng)或相互作用的任何產(chǎn)物。因而，本發(fā)明的藥物組合物涵蓋通過(guò)混合本發(fā)明的化合物和藥學(xué)可接受載體制備的任何組合物。通過(guò)“藥學(xué)可接受”或“可接受”，意指載體、稀釋劑或賦形劑必須與配制劑的其它成分相容，并且對(duì)其接受者無(wú)害。

結(jié)構(gòu)式I、結(jié)構(gòu)式Ia和/或結(jié)構(gòu)式Ib的化合物可以含有一種或多種不對(duì)稱中心，并且因此可以作為外消旋物和外消旋混合物、單一對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體混合物和單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體發(fā)生。本發(fā)明意圖包括結(jié)構(gòu)式I,結(jié)構(gòu)式Ia和/或結(jié)構(gòu)式Ib的化合物的所有此類異構(gòu)形式。

可以將結(jié)構(gòu)式I、結(jié)構(gòu)式Ia和/或結(jié)構(gòu)式Ib的化合物分成其單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體，例如通過(guò)從合適的溶劑，例如甲醇或乙酸乙酯或其混合物的分步結(jié)晶，或者經(jīng)由使用光學(xué)活性靜止期的手性層析?？梢酝ㄟ^(guò)結(jié)晶產(chǎn)物或結(jié)晶中間體的X射線晶體學(xué)測(cè)定絕對(duì)立體化學(xué)，所述結(jié)晶產(chǎn)物或結(jié)晶中間體在必要時(shí)用含有已知的絕對(duì)構(gòu)型的非對(duì)稱中心的試劑衍生化。

或者，可以通過(guò)使用已知的絕對(duì)構(gòu)型的光學(xué)純的起始材料或試劑的立體特異性合成獲得通式結(jié)構(gòu)式I、結(jié)構(gòu)式Ia和/或結(jié)構(gòu)式Ib的化合物的任何立體異構(gòu)體。

根據(jù)需要，可以分離化合物的外消旋混合物，從而分離單獨(dú)的對(duì)映異構(gòu)體?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域中公知的方法，如將化合物的外消旋混合物與對(duì)映體上純的化合物偶聯(lián)以形成非對(duì)映異構(gòu)體混合物實(shí)施分離，接著通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法，如分步結(jié)晶或?qū)游龇蛛x單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體。偶聯(lián)反應(yīng)經(jīng)常是使用對(duì)映體上純的酸或堿的鹽形成。然后，可以通過(guò)切割添加的手性殘基將非對(duì)映異構(gòu)體衍生物轉(zhuǎn)化為純的對(duì)映異構(gòu)體。也可以通過(guò)利用手性靜止期的層析方法直接分離化合物的外消旋混合物，所述方法是本領(lǐng)域中公知的。

本文中描述的一些化合物含有烯屬雙鍵，并且除非另有規(guī)定，意指包括E和Z幾何異構(gòu)體二者。

本文中描述的一些化合物可以以互變異構(gòu)體存在，所述互變異構(gòu)體具有伴隨一個(gè)或多個(gè)雙鍵位移的不同氫附著點(diǎn)。例如，酮及其烯醇形式是酮-烯醇互變異構(gòu)體。本發(fā)明的化合物涵蓋單獨(dú)的互變異構(gòu)體及其混合物。

在通式I、通式Ia和/或通式Ib的化合物中，原子可以展現(xiàn)出其天然同位素豐度，或者一個(gè)或多個(gè)原子可以人工富集特定同位素，該同位素具有相同的原子數(shù)，但是與自然界中主要存在的原子量或質(zhì)量數(shù)不同的原子量或質(zhì)量數(shù)。本發(fā)明意指包括通式I、通式Ia和/或通式Ib的化合物的所有合適的同位素變異。例如，氫(H)的不同同位素形式包括氕(¹H)和氘(²H)。氕是自然界中找到的主要的氫同位素。氘的富集可以提供某些治療優(yōu)點(diǎn)，如延長(zhǎng)體內(nèi)半衰期或降低劑量需要，或者可以提供可用作表征生物樣品的標(biāo)準(zhǔn)品的化合物?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常規(guī)技術(shù)或者通過(guò)與本文中的方案和實(shí)施例中描述的方法類似的方法使用合適的同位素富集的試劑和/或中間體無(wú)需過(guò)度實(shí)驗(yàn)制備通式I、通式Ia和/或通式Ib內(nèi)的同位素富集的化合物。

鹽和配制劑

應(yīng)當(dāng)理解，如本文中使用的，提到結(jié)構(gòu)式I、結(jié)構(gòu)式Ia和/或結(jié)構(gòu)式Ib的化合物意指還包括藥學(xué)可接受鹽，并且還包括當(dāng)它們作為游離化合物或其藥學(xué)可接受鹽的前體或者在其它合成操作中使用時(shí)不是藥學(xué)可接受的鹽。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)可接受鹽”指從藥學(xué)可接受無(wú)毒性堿或酸，包括無(wú)機(jī)或有機(jī)堿和無(wú)機(jī)或有機(jī)酸制備的鹽。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)可接受鹽”內(nèi)涵蓋的基礎(chǔ)化合物的鹽指一般通過(guò)使游離堿與合適的有機(jī)或無(wú)機(jī)酸起反應(yīng)制備的本發(fā)明的化合物的無(wú)毒性鹽。本發(fā)明的基礎(chǔ)化合物的代表性鹽包括但不限于下列各項(xiàng)：乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、樟腦磺酸鹽、碳酸鹽、氯化物、克拉維酸鹽、檸檬酸鹽、依地酸鹽、乙二磺酸鹽、依托酸鹽(estolate)、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、己基間苯二酚鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥基萘甲酸鹽、碘化物、異硫代硫酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、甲基溴化物、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、粘酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、N-甲基葡糖胺銨鹽、油酸鹽、草酸鹽、撲酸鹽(pamoate)(雙羥萘酸鹽(embonate))、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、硫酸鹽、次醋酸鹽(subacetate)、琥珀酸鹽、鞣酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽(teoclate)、甲苯磺酸鹽、三乙基碘(triethiodide)和戊酸鹽。此外、在本發(fā)明化合物攜帶酸性的分子部分的情況下，合適的其藥學(xué)可接受鹽包括但不限于，由無(wú)機(jī)堿，包括鋁、銨、鈣、銅、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳、錳(mangamous)、鉀、鈉、鋅等衍生的鹽。特別優(yōu)選的是銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。從藥學(xué)可接受的有機(jī)無(wú)毒堿衍生的鹽包括伯、仲和叔胺、環(huán)胺和堿性離子交換樹(shù)脂、如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、N,N-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖、組氨酸、異丙胺、賴氨酸、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、聚胺樹(shù)脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙基胺、三甲基胺、三丙基胺、氨基丁三醇、等等的鹽。

此外，在本發(fā)明的化合物中存在羧酸(-COOH)或醇基團(tuán)的情況下，可以采用羧酸衍生物的藥學(xué)可接受酯，如醇的甲酯、乙酯、或特戊?；趸柞?pivaloyloxymethyl)、或?；パ苌?，如乙?；ァ⑻匚祯；ァ⒈郊柞；?、和氨基?；ァ０ㄓ糜谛薷娜芙舛然蛩馓卣饕杂米鞒掷m(xù)釋放或前藥配制劑的本領(lǐng)域中已知的那些酯和?；鶊F(tuán)。

本發(fā)明中也包括結(jié)構(gòu)式I、結(jié)構(gòu)式Ia和/或結(jié)構(gòu)式Ib的化合物的溶劑合物，特別是水合物。

根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，結(jié)構(gòu)式I、結(jié)構(gòu)式Ia和/或結(jié)構(gòu)式Ib的化合物可以被包含在用作藥物的各種配制劑中。用于口服使用的配制劑可以呈現(xiàn)為硬明膠膠囊，其中將活性成分與惰性固體稀釋劑，例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土混合，或者呈現(xiàn)為軟明膠膠囊，其中將活性成分與水或油介質(zhì)，例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合。

水性懸浮液含有與適合于制備水性懸浮液的賦形劑混合的活性物質(zhì)。此類賦形劑是懸浮劑，例如羧甲基纖維素鈉，甲基纖維素，羥基丙基甲基纖維素，藻酸鈉，聚乙烯吡咯烷酮，黃蓍樹(shù)膠和阿拉伯樹(shù)膠；分散或潤(rùn)濕劑可以是天然存在的磷脂(phosphatide)，例如卵磷脂，或烯基氧化物與脂肪酸的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環(huán)氧乙烷與長(zhǎng)鏈脂肪族醇的縮合產(chǎn)物，例如十七亞乙基氧基十六醇(heptadecaethylene-oxycetanol)，或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的縮合產(chǎn)物，如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯，或環(huán)氧乙烷與由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的縮合產(chǎn)物，例如聚乙烯脫水山梨醇單油酸酯。水性懸浮液也可含有一種或多種防腐劑，例如對(duì)羥基苯甲酸乙基或正丙基酯，一種或多種著色劑，一種或多種調(diào)味劑，和一種或多種甜味劑，如蔗糖，糖精或阿斯巴甜。

可以通過(guò)在植物油，例如花生油，橄欖油，芝麻油或椰子油中，或在礦物油如液體石蠟中懸浮活性成分來(lái)配制油性懸浮液。油性懸浮液可含有增稠劑，例如蜂蠟，硬石蠟或鯨蠟醇。可以加入甜味劑，如上面列出的那些甜味劑和調(diào)味劑以提供可口的口服制劑。這些組合物可以通過(guò)加入抗氧化劑，如抗壞血酸來(lái)保存。

適合于通過(guò)加入水制備水性懸浮液的可分散粉劑和顆粒劑提供與分散劑或潤(rùn)濕劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑混合的活性成分。合適的分散或潤(rùn)濕劑和懸浮劑由上文已提及的那些舉例說(shuō)明。也可以存在另外的賦形劑，例如甜味劑，調(diào)味劑和著色劑。

本發(fā)明的藥物組合物也可以是水包油乳劑的形式。油相可以是植物油例如橄欖油或花生油，或礦物油例如液體石蠟或這些的混合物。合適的乳化劑可以是天然存在的磷脂，例如大豆，卵磷脂和自脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯，例如山梨糖醇單油酸酯，以及所述偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯。乳劑也可含有甜味劑和調(diào)味劑。

糖漿和酏劑可以用甜味劑配制，例如甘油，丙二醇，山梨醇或蔗糖。這類制劑也可含有緩和劑/防腐劑和調(diào)味劑和著色劑。藥物組合物可以是無(wú)菌可注射水性或油性懸浮液的形式?？梢允褂靡讶缟衔奶峒暗哪切┖线m的分散或濕潤(rùn)劑和懸浮劑，按照已知技術(shù)配制此懸浮液。無(wú)菌可注射制劑也可以是在無(wú)毒的胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無(wú)菌可注射溶液或懸浮液，例如作為在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的媒介物和溶劑中有水，林格氏溶液和等張氯化鈉溶液。此外，無(wú)菌、不揮發(fā)性油常規(guī)用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為此目的，任何溫和的不揮發(fā)性油都可以使用，包括合成的甘油單或二酯。此外，脂肪酸如油酸在注射物的制備中得到應(yīng)用。

也可以鼻內(nèi)或通過(guò)吸入，通常以干粉末的形式(單獨(dú)，作為混合物，例如在與乳糖的干燥混合物中，或作為混合組分顆粒，例如與磷脂，如磷脂酰膽堿混合)從干粉末吸入器或者作為氣溶膠噴霧從加壓容器、泵、噴射、霧化器(優(yōu)選使用電流體動(dòng)力學(xué)的I霧化器以產(chǎn)生細(xì)霧)、或噴霧器，使用或不使用合適的推進(jìn)劑，如1,1,1,2-四氟乙烷或1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷施用本發(fā)明的化合物。對(duì)于鼻內(nèi)使用，粉末可包含生物粘著劑，例如，殼聚糖或環(huán)糊精。

加壓容器、泵、噴霧、霧化器或噴霧器含有本發(fā)明的化合物的溶液或懸浮液，其包含例如乙醇，乙醇水溶液，或用于分散，增溶，或延長(zhǎng)活性物釋放的合適的備選劑，作為溶劑的推進(jìn)劑和可選的表面活性劑，如脫水山梨醇三油酸酯，油酸，或寡聚乳酸。

在干粉末或懸浮液配制劑中使用之前，將藥物產(chǎn)品微粉化至適合于通過(guò)吸入遞送的大小(通常小于5微米)。

這可以通過(guò)任何適當(dāng)?shù)姆鬯榉椒▽?shí)現(xiàn)，諸如螺旋噴射研磨，流化床噴射研磨，形成納米顆粒的超臨界流體加工，高壓均化，或噴霧干燥。

用于在吸入器或吹入器中使用的膠囊(例如由明膠或HPMC制成)、泡罩和藥筒可以配制成含有本發(fā)明的化合物、合適的粉末基質(zhì)如乳糖或淀粉和性能改性劑如l-亮氨酸，甘露醇或硬脂酸鎂的粉末混合物。乳糖可為無(wú)水的或呈單水合物形式，優(yōu)選后者。其它合適的賦形劑包括葡聚糖、葡萄糖、麥芽糖、山梨糖醇、木糖醇、果糖、蔗糖和海藻糖。

適合于在使用電流體動(dòng)力學(xué)以產(chǎn)生細(xì)霧的霧化器中使用的溶液配制劑可以含有每次動(dòng)作的對(duì)數(shù)(log)值至20mg的本發(fā)明的化合物，并且動(dòng)作體積可以從11變化到1001。典型的配制劑可以包含式I的化合物、丙二醇、無(wú)菌水、乙醇和氯化鈉。可以代替丙二醇使用的備選溶劑包括甘油和聚乙二醇。

合適的調(diào)味劑，如薄荷醇和左薄荷腦，或甜味劑，如糖精或糖精鈉，可以加入到旨在用于吸入/鼻內(nèi)施用的本發(fā)明的那些配制劑。

例如，可以使用聚(DL-乳酸-共乙醇酸)(PGLA)將用于吸入/鼻內(nèi)施用的配制劑配制為立即釋放和/或改進(jìn)釋放。改進(jìn)釋放配制劑包括延遲釋放，持續(xù)釋放，脈沖釋放，受控釋放，靶向釋放和程序釋放。

在干粉末吸入器和氣溶膠的情況中，依靠遞送計(jì)量的量的閥確定劑量單位。根據(jù)本發(fā)明的單位通常安排為施用計(jì)量劑量或含有1fig至10mg的式I的化合物的“噴”?？傆?jì)每日劑量通常會(huì)在1lag至10mg的范圍內(nèi)，其可以以單劑量或更通常貫穿整天作為分開(kāi)的劑量施用。

式Ia和/或式Ib的化合物也可以以栓劑形式施用，用于藥物的直腸施用。這些組合物可以通過(guò)將藥物與合適的無(wú)刺激性賦形劑混合制備，所述賦形劑在常溫下是固體但在直腸溫度下為液體，因此將在直腸中融化以釋放藥物混合。此類材料為可可脂和聚乙二醇。

對(duì)于局部使用，采用含有式I的化合物的霜?jiǎng)④浉鄤?、膠凍劑、溶液或懸浮液等。(對(duì)于本申請(qǐng)的目的而言，局部施用應(yīng)包括口腔洗劑和含漱劑)。

效用

本文中具體例示的化合物在抑制TC-PTP酶上展現(xiàn)良好的效力，如通過(guò)其體外測(cè)定法顯示?；衔镆话阍跍y(cè)定法部分中描述的酶測(cè)定法中具有小于10μM的IC₅₀值，并且優(yōu)選具有小于1μM的IC₅₀值。

根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，TC-PTP的抑制劑可以改善免疫抑制疾病并且可以具有在預(yù)防或治療免疫抑制疾病中的效用。

本發(fā)明的一個(gè)方面提供了用于治療和控制癌癥的方法，所述方法包括對(duì)需要此類治療的患者施用治療有效量的樹(shù)突細(xì)胞，所述樹(shù)突細(xì)胞已經(jīng)通過(guò)式I、式Ia和/或式Ib的化合物，和/或式II的化合物，和從影響患者的癌細(xì)胞衍生的抗原或抗原混合物處理活化。

本發(fā)明的第二個(gè)方面提供了用于治療和控制HIV感染的方法，所述方法包括對(duì)需要此類治療的患者施用治療有效量的樹(shù)突細(xì)胞，所述樹(shù)突細(xì)胞已經(jīng)通過(guò)式I、式Ia和/或式Ib的化合物，和/或式II的化合物，和對(duì)于HIV病毒而言特異的衍生的抗原或抗原混合物處理活化。

本發(fā)明的第三個(gè)方面提供了用于治療和控制免疫抑制疾病的方法，所述方法包括對(duì)需要此類治療的患者施用治療有效量的樹(shù)突細(xì)胞，所述樹(shù)突細(xì)胞已經(jīng)通過(guò)式I、式Ia和/或式Ib的化合物，和/或式II的化合物和從由免疫抑制疾病影響的細(xì)胞衍生的抗原或抗原混合物處理活化。

式II的化合物是具有以下通式的TC-PTP的抑制劑、其藥學(xué)可接受鹽，及其立體異構(gòu)體：

其中

X’選自CH和N；

R^1’選自下組：(a)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代和任選用一個(gè)選自以下的基團(tuán)取代：-OH、任選用1-3個(gè)鹵素取代的-OC_1-3烷基、-SOxC_1-3烷基、和-CN，(b)-C(＝O)H，(c)-C(＝O)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(d)-CN，(e)-HC＝NOH，(f)-(CH₃)C＝NOH，(g)-HC＝NOC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(h)-(CH₃)C＝NOC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(i)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(j)-C(＝O)NHR^6’，(k)-CH＝CH-苯基，其中-CH＝CH-任選用1-2個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，(I)-CH₂CH₂-苯基，其中-CH₂CH₂-任選用1-4個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，(m)苯基，(n)-HET-苯基，其中HET是含有1-3個(gè)選自O(shè)、N和S的雜原子的5或6元雜芳香環(huán)，(o)-C＝C-苯基，和(p)-CH₂-苯基，其中-CH₂-苯基的-CH₂-基團(tuán)任選用1-2個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素和任選用1-3個(gè)F取代的C_1-2烷基，其中苯基和HET在所有出現(xiàn)中任選用1-3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自(i)鹵素，(ii)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-C(＝O)OH，(iv)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(v)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(vi)–SOxMe，和(vii)-SO₂NH₂；

R^6’選自下組：H、任選用1-3個(gè)鹵素取代的C_1-3烷基、苯基、和-CH₂-苯基，其中苯基在這兩次出現(xiàn)中任選用1-3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立選自(i)鹵素,(ii)-C(＝O)OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，(iii)-C(＝O)OH，(iv)C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，和(v)-OC_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代；

R^2’和R^4’獨(dú)立選自H、鹵素、-CH₃-、CF₃、-OCH₃和-OCF₃；

R^3’是鹵素，其中所述鹵素在與-CF₂PO(OR^5’)₂基團(tuán)鄰位的位置處與式II的稠合芳香環(huán)鍵合，

每個(gè)R5’基團(tuán)獨(dú)立選自下組：H和C_1-3烷基，任選用1-3個(gè)鹵素取代，并且

x是0、1、或2。

除了靈長(zhǎng)類如人外，多種其它哺乳動(dòng)物可按照本發(fā)明的方法進(jìn)行治療。例如，可以治療哺乳動(dòng)物，包括但不限于，牛，綿羊，山羊，馬，狗，貓，豚鼠，大鼠或其它牛，羊，馬，犬，貓，嚙齒類(如小鼠)物種。然而，該方法也可以在其它物種，如禽類物種(例如，雞)中實(shí)施。

最佳濃度

可以通過(guò)在細(xì)胞中體外滴定化合物并且監(jiān)測(cè)IL-12的釋放測(cè)定用于活化APC的式I的化合物的有效濃度。在缺乏細(xì)胞毒性的情況下提供IL-12的最大釋放的最低濃度將取決于該化合物的內(nèi)在效力和其抑制細(xì)胞中的TC-PTP的能力。然后，該最佳濃度用于處理用于活化抗原呈遞的ACP。有用的濃度范圍為水性緩沖液或細(xì)胞培養(yǎng)基中的1nM至1mM。優(yōu)選地，使用的濃度介于1μM和100μM之間。

對(duì)于體外使用，可以以水、DMSO或水和DMSO的混合物中的溶液施用式I、式Ia和/或式Ib的化合物，到典型培養(yǎng)基中的APC懸浮液，使得終濃度是約1nM至約500μM。

對(duì)于體內(nèi)使用，每天的約0.01mg至約140mg/kg體重的等級(jí)的劑量水平可用于治療上文指定的疾患，或者可選每天每名患者約0.5mg至約7g。

可以與載體材料組合以產(chǎn)生單一劑量形式的活性成分的量會(huì)隨著治療的宿主和具體的施用模式而變化。例如，意在用于人的口服施用的配制劑可以含有0.5mg至5g與合適且方便的量的載體材料復(fù)合的活性劑，所述載體材料可以從總組合物的約5％變化到約95％。劑量單位形式一般會(huì)含有約1mg至約500mg的活性成分，通常25mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、800mg、或1000mg。

試劑盒

在用于體外目的時(shí)可以將式I、式Ia和/或式Ib的化合物包裝以用作結(jié)晶固體，無(wú)定形固體或凍干粉末。合適數(shù)量的范圍為約0.1mg至1g。理想地，將化合物包裝在容器中，該容器可以添加有適當(dāng)?shù)娜軇┮詫?shí)現(xiàn)期望的溶液濃度?；蛘?，可以將化合物包裝為固定濃度的水溶液，或包裝為固定濃度的水溶性有機(jī)溶劑中的溶液。合適的有機(jī)溶劑可以包括DMSO，甲醇，乙醇或乙腈，或這些溶劑與水的混合物。合適的濃度為約0.1mM至約25mM。

本發(fā)明包括試劑盒，該試劑盒包含式I，式Ia和/或式Ib的化合物，和關(guān)于如何使用所述化合物的用法說(shuō)明。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，試劑盒還可以包括區(qū)分靶細(xì)胞的材料，和/或抗原和/或合適的細(xì)胞培養(yǎng)基的選擇。試劑盒將允許患者的細(xì)胞被方便地活化，分離和在臨床背景中再注射?？梢詢?yōu)化此種處理以用目前的臨床治療標(biāo)準(zhǔn)品最佳起作用。

可以在一次或多次注射中對(duì)需要免疫療法的患者施用式I，式Ia和/或式Ib的化合物活化的APC。將調(diào)節(jié)注射的頻率和注射間的間隔以最大化治療響應(yīng)。例如，可以每天一次、兩次或更多次，或者每周一次、兩次或更多次，每?jī)芍?、每月或每?jī)稍禄蛞哉J(rèn)為最適合于患者的治療益處的任何其它間隔發(fā)生注射。

聯(lián)合療法

可以用APC治療需要免疫療法的患者，所述APC用式I，式Ia和/或式Ib的化合物與對(duì)于醫(yī)學(xué)從業(yè)人員已知的其它治療同時(shí)活化。此類多種治療的使用對(duì)于患者可以是特別有利的。此列治療可以包括但不限于手術(shù)切除、放射、化學(xué)療法、靶向療法和其它類型的免疫療法?？梢允褂玫幕瘜W(xué)治療劑包括：

a)細(xì)胞毒劑，如泰素、松胞菌素B、短桿菌肽D、溴化乙啶、依米丁、絲裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春堿、秋水仙堿、多柔比星、柔紅霉素、二羥基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光輝霉素、放線菌素D、1-去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾、嘌呤霉素和其類似物或同系物；

b)抗代謝物，如甲氨蝶呤、6-巰嘌呤、6-硫鳥(niǎo)嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、氨烯咪胺；

c)烷化劑，如氮芥、塞替派、苯丁酸氮芥、美法侖、卡莫司汀(BSNU)和洛莫司汀(CCNU)、環(huán)磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、鏈脲霉素、絲裂霉素C，和順式-二氯二胺鉑(II)(DDP)順鉑；

d)蒽環(huán)類抗生素，如柔紅霉素和多柔比星；

e)抗生素，如更生霉素、博萊霉素、光輝霉素、和氨茴霉素(AMC)；

f)抗有絲分裂劑，如長(zhǎng)春新堿和長(zhǎng)春堿；

g)可以使用的靶向療法包括，但是它們不限于：激素療法(如地加瑞克(degarelix)，降低前列腺癌中的睪酮水平的促黃體素釋放素(LHRH)拮抗劑)，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑(如伊馬替尼和曲妥珠單抗)，以及基因表達(dá)調(diào)節(jié)劑(例如HDAC抑制劑帕比司他(panobinostat)和貝利司他(belinostat))，凋亡誘導(dǎo)劑(如重組人TNF相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL))和血管發(fā)生抑制劑(如索拉非尼、舒尼替尼、帕唑帕尼和依維莫司)；

h)可以使用的免疫療法劑包括單克隆抗體治療(抗CTLA4，抗PD1)，和嵌合抗原受體(CAR)-T-細(xì)胞。

用于測(cè)量生物活性的測(cè)定法

可以使用用于TC-PTP-抑制活性的以下測(cè)定法評(píng)估本申請(qǐng)的化合物的活性。式I的化合物在此測(cè)定法中會(huì)具有<10μM的活性，并且優(yōu)選是<1μM的活性。

1)用于TC-PTP的酶測(cè)定法

測(cè)定緩沖液：50mM Bis-Tris(pH＝6.3)

2mM EDTA

5mM N,N’-二甲基-N,N’-二(巰基乙酰基)肼(DMH)

底物：在-20℃貯存的10mM熒光素二磷酸(FDP)(也可以使用10mM DiFMUP)

酶稀釋緩沖液：50mM Bis-Tris(pH＝6.3)

2mM EDTA

5mM DMH

20％(v/v)甘油

0.01％非離子表面活性劑(Triton X-100)

在96孔板中在室溫實(shí)施測(cè)定法。170μl中的反應(yīng)混合物含有50mM Bis-Tris(pH＝6.3)、2mM EDTA、5mM N,N’-二甲基-N,N’-二(巰基乙?；?肼(DMH)和10μM熒光素二磷酸(FDP)或6,8-二氟-4-甲基傘形酮基磷酸(DiFMUP)。將10μl的溶解于DMSO中的測(cè)試化合物(抑制劑)的10個(gè)濃度(連續(xù)稀釋)或用于對(duì)照的單獨(dú)DMSO添加到每個(gè)孔，并且將板混合2min。通過(guò)添加20μl稀釋的TC-PTP(FDP為50nM，50mM Bis/Tris(pH＝6.3)中的DiFMUP為0.5nM，2mM EDTA，5mM DMH，20％甘油和0.01％非離子表面活性劑(Triton X-100))啟動(dòng)反應(yīng)。通過(guò)以440nm的激發(fā)和530nm的發(fā)射(在525nm的截留濾器)(對(duì)于FDP)和360nm的激發(fā)和450nm的發(fā)射(在435nm的截留濾器)(對(duì)于DiFMUP)使用光譜最大通用迷你型(Spectromax Gemini)熒光讀板儀(分子探針，Molecular probes)連續(xù)監(jiān)測(cè)熒光產(chǎn)物熒光素單磷酸(FMP)或6,8-二氟-7-羥基-4-香豆素(DiFMU)的出現(xiàn)達(dá)15-30min追蹤磷酸酶活性。至少一式兩份完成所有測(cè)定法。相對(duì)于抑制劑的濃度繪圖FMP或DiFMU形成的初始速率，并且將數(shù)據(jù)擬合到4參數(shù)方程，并且擬合的拐點(diǎn)是IC₅₀。

2)小鼠樹(shù)突細(xì)胞測(cè)定法

使用裝備有23號(hào)針的注射器將小鼠骨髓細(xì)胞從股骨和脛骨沖洗到RPMI(補(bǔ)充有10％FBS、慶大霉素、HEPES、非必需氨基酸)。通過(guò)經(jīng)由注射器將細(xì)胞懸浮液溫和通過(guò)幾次，以分散塊。通過(guò)使細(xì)胞懸浮液通過(guò)70μM尼龍濾器除去細(xì)胞和碎片的任何剩余的塊。將懸浮液離心(300x g達(dá)10min)，棄去上清液，并且在5ml紅細(xì)胞裂解緩沖液(SIGMA)中重懸細(xì)胞。對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)，并且根據(jù)用于CD11b細(xì)胞的陽(yáng)性選擇的用法說(shuō)明(Stemcell technologies)分離小鼠單核細(xì)胞(CD11b+)。然后，在補(bǔ)充有10％FBS、慶大霉素、HEPES(羥乙基哌嗪乙硫磺酸的縮寫)和非必需的氨基酸(aa)的RPMI培養(yǎng)基中重懸細(xì)胞，并且用40ng/ml重組小鼠GM-CSF和IL-4(Peprotech)處理。以1x10⁶個(gè)細(xì)胞/mL鋪板小鼠單核細(xì)胞。在存在不同濃度的化合物(0-32μM)的情況下在濕潤(rùn)的培養(yǎng)箱中在37℃,5％CO₂溫育細(xì)胞6天。通過(guò)從板除去培養(yǎng)基的一半，并且用相同體積的補(bǔ)充有相同濃度的細(xì)胞因子和測(cè)試化合物的新鮮培養(yǎng)基補(bǔ)充，每三天更換培養(yǎng)基。

可以將未成熟的單核細(xì)胞衍生的DC與含有測(cè)試化合物的DC成熟混合劑一起溫育，并且再溫育24-72小時(shí)。存在有文獻(xiàn)中鑒定的許多DC成熟混合劑，“黃金標(biāo)準(zhǔn)”由10ng/ml TNF-α、10ng/ml IL-1β、1000個(gè)單位/ml IL-6和1μg/mL PGE2組成?；蛘撸惨呀?jīng)使用MPLA(10μg/mL)和IFNγ(500U/ml,制備Peprotech，用于臨床研究)。對(duì)于實(shí)施例12中顯示的數(shù)據(jù)，用LPS(1μg/mL))培養(yǎng)未成熟的單核細(xì)胞衍生的DC達(dá)48小時(shí)以誘導(dǎo)成熟。以1和32μM之間變化的濃度在成熟混合劑中包含測(cè)試化合物。

可以通過(guò)許多測(cè)定法測(cè)定成熟的DC的特征以評(píng)估DC介導(dǎo)的抗腫瘤響應(yīng)和癌癥免疫，包括對(duì)DC上表達(dá)的表面標(biāo)志物的流式細(xì)胞術(shù)分析，活化的DC的細(xì)胞因子生成譜，抗原呈遞測(cè)定法和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。

3)人樹(shù)突細(xì)胞測(cè)定法

用相等體積的加有2％FBS的PBS稀釋人血液的樣品。在名稱為L(zhǎng)ymphoprep的淋巴細(xì)胞分離劑(Stemcell technologies)上分層稀釋的血液，注意最小化血液與名稱為L(zhǎng)ymphoprep的淋巴細(xì)胞分離劑的混合。在室溫以800x g離心混合物20分鐘，驟停。如果已經(jīng)將血液貯存超過(guò)2小時(shí)，那么將離心時(shí)間增加到30分鐘。然后，在不破壞血漿-名稱為L(zhǎng)ymphoprep的淋巴細(xì)胞分離劑界面的情況下取出并棄去上血漿層。在不破壞紅細(xì)胞/粒細(xì)胞團(tuán)粒的情況下取出并保留血漿-名稱為L(zhǎng)ymphoprep的淋巴細(xì)胞分離劑界面處的單核細(xì)胞層(PMBC)。用培養(yǎng)基將單核細(xì)胞清洗一次，并且根據(jù)CD14+陽(yáng)性選擇試劑盒(Stemcell technologies)的用法說(shuō)明分離CD14+細(xì)胞。在PromoCell單核細(xì)胞附著培養(yǎng)基(PromoCell)中培養(yǎng)所得的CD14+細(xì)胞。以0.5x 10⁶個(gè)細(xì)胞/cm²鋪板細(xì)胞，并且在濕潤(rùn)的培養(yǎng)箱中在5％CO₂和37℃溫育1h。然后，在存在不同濃度的測(cè)試化合物(0-32μM)的情況下用補(bǔ)充有慶大霉素、50ng/mL重組GM-CSF和35ng/ml重組IL-4的StemXVivo無(wú)血清樹(shù)突細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基替換PromoCell單核細(xì)胞附著培養(yǎng)基。

在濕潤(rùn)的培養(yǎng)箱中在37℃,5％CO₂溫育細(xì)胞6天。通過(guò)從板除去培養(yǎng)基的一半并且用相同體積的補(bǔ)充有細(xì)胞因子和測(cè)試化合物的新鮮培養(yǎng)基補(bǔ)充，每三天更換培養(yǎng)基?；蛘?，可以除去整個(gè)培養(yǎng)基體積，并且立即用含有細(xì)胞因子和測(cè)試化合物的新鮮培養(yǎng)基替換。

用MPLA(2.5ng/mL)和IFNγ(1000U/ml,Peprotech，用于臨床研究)和合適濃度的TC-PTP抑制劑處理所得的未成熟的單核細(xì)胞衍生的DC，并且將細(xì)胞再溫育48小時(shí)。也可以使用其它DC成熟混合劑，包括10ng/ml TNF-α、10ng/ml IL-1β、1000個(gè)單位/ml IL-6和1μg/mL PGE2以及合適濃度的TC-PTP抑制劑。

可以通過(guò)許多測(cè)定法測(cè)定成熟的DC的特征，以評(píng)估DC介導(dǎo)的抗腫瘤響應(yīng)和癌癥免疫，包括對(duì)DC上表達(dá)的表面標(biāo)志物的流式細(xì)胞術(shù)分析，活化的DC的細(xì)胞因子生成譜，抗原呈遞測(cè)定法和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。

4)小鼠同基因腫瘤模型

通過(guò)從兩種商品化的構(gòu)建體(addgene 19360:pLenti pgk和addgene 18751:MSCV-IRES-GFP)亞克隆產(chǎn)生新的雙重報(bào)告物(GFP和螢光素酶)的基于MSCV的質(zhì)粒。使用此構(gòu)建體產(chǎn)生逆轉(zhuǎn)錄病毒，以感染EG7淋巴瘤細(xì)胞(ATCC#CRL-2133)。EG7-ova表達(dá)細(xì)胞是T細(xì)胞淋巴瘤的常用的模型，所述T細(xì)胞淋巴瘤工程化為表達(dá)卵清蛋白抗原，使得它們可用于免疫學(xué)和藥物發(fā)現(xiàn)應(yīng)用。然后，在McGill大學(xué)(McGill University Life Sciences Complex flow cytometry core(BD FACscalibur))對(duì)這些細(xì)胞進(jìn)行GFP分選，之后在同基因C57b16小鼠(Harlan)中皮下植入(5x10⁵個(gè)細(xì)胞)。允許在小鼠中建立腫瘤，然后在植入后10天成像(Perkin Elmer IVIS100)，并且使用IVIS軟件量化發(fā)光。然后，在用2x10⁶個(gè)離體衍生的并且經(jīng)抑制劑處理的成熟樹(shù)突細(xì)胞(IP注射)(參見(jiàn)用PTP抑制劑對(duì)單核細(xì)胞衍生的DC的離體活化)注射后第10天處理小鼠。在成熟期間以2.5mg/mL的濃度將卵清蛋白添加到DC培養(yǎng)物。在成熟后，通過(guò)用磷酸鹽緩沖鹽水溫和重懸以取出任何松散附著的細(xì)胞收獲DC。然后，將細(xì)胞旋下，并且用磷酸鹽緩沖鹽水清洗兩次。在注射前，在磷酸鹽緩沖鹽水中以每mL的2000萬(wàn)個(gè)細(xì)胞的濃度重懸DC。

本發(fā)明的化合物的制備

在以下方案、方法和實(shí)施例中闡述了用于制備本發(fā)明的化合物的合成方法。起始材料是商品化的或者可以根據(jù)本領(lǐng)域中已知或如本文中闡述的方案制備。在某些情況下，進(jìn)行上述反應(yīng)方案的順序可以改變，以促進(jìn)反應(yīng)或者避免不需要的反應(yīng)產(chǎn)物。本發(fā)明的化合物依靠以下所示的具體實(shí)施例闡述。然而，這些具體實(shí)施例不應(yīng)解釋為形成認(rèn)為是本發(fā)明的唯一屬。這些實(shí)施例進(jìn)一步闡述了本發(fā)明的化合物的制備細(xì)節(jié)。本領(lǐng)域技術(shù)人員將容易理解，以下制備方案的條件和過(guò)程的已知變化可用于制備這些化合物。所有的溫度均為攝氏度，除非另有說(shuō)明。質(zhì)譜(MS)通過(guò)電噴霧離子質(zhì)譜法(ESI)進(jìn)行測(cè)定。¹H NMR譜是在400或500MHz在Bruker儀上記錄。

縮寫列表：

Alk＝烷基

Ar＝芳基

BINAP＝2,2'-二(聯(lián)苯基膦基)-1,1'-二萘

Boc＝叔丁氧基羰基

br＝寬

CH₂Cl₂＝二氯甲烷

d＝雙峰

DBU＝1,8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯

DEAD＝偶氮二羧酸二乙酯

DIBAL＝二異丁基氫化鋁

DIPEA＝N,N-二異丙基乙胺

DMF＝二甲基甲酰胺

DMSO＝二甲亞砜

ESI＝電噴射離子化

EtOAc＝乙酸乙酯

h＝小時(shí)

HATU＝O-(7-偶氮苯并三氮唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯

HOAc＝乙酸

Hunig堿＝二異丙基乙胺

LiOH＝氫氧化鋰

m＝多重峰

MeCN＝乙腈

MeOH＝甲醇

MeTHF＝2-甲基四氫呋喃

MgSO₄＝硫酸鎂

min＝分鐘

MS＝質(zhì)譜法

MTBE＝甲基叔丁基醚

NaOH＝氫氧化鈉

Na₂SO₄＝硫酸鈉

NMP＝N-甲基2-吡咯烷酮

NMR＝核磁共振譜學(xué)

PG＝保護(hù)基

Ph＝苯基

rt＝室溫

s＝單峰

t＝三重峰

TFA＝三氟乙酸

TFAA＝三氟乙酸酐

THF＝四氫呋喃

TMEDA＝N,N,N',N'-四甲基乙二胺

方法A：

可以通過(guò)單金屬化四溴苯，接著用?；瘎鏒MF捕獲制備本發(fā)明的化合物?？梢栽趬A性條件下用適當(dāng)官能化的硫醇處理所獲得的α-鹵代苯甲醛，以置換與醛相鄰的溴。如果R¹是吸電子基團(tuán)，那么隨后的加熱將產(chǎn)生羥醛與醛的縮合產(chǎn)物，形成適當(dāng)取代的苯并噻吩?？梢苑沁x擇性金屬化剩余的溴原子之一并用碘捕獲。將所得的芳基碘與商品化的溴氟甲基膦酸二乙酯的鋅酸鹽偶聯(lián)。在這一點(diǎn)上，可以再官能化R¹基團(tuán)以提供本發(fā)明的膦酸酯前體。隨后乙酯水解和用合適的堿如氫氧化銨或氫氧化鈉的鹽形成，提供了本發(fā)明的化合物。可以通過(guò)最后兩步的任一步的層析分離產(chǎn)品的混合物。

方法B：

可以使用I₂、ICl或其它碘化劑在5位中選擇性碘化商品化的2-氯-4-氨基苯甲酸的甲酯。酯還原成相應(yīng)的醛，接著在堿性條件下用適當(dāng)官能化的硫醇處理會(huì)置換與醛相鄰的氯。如果R¹是吸電子基團(tuán)，那么隨后的加熱將產(chǎn)生羥醛與醛的縮合產(chǎn)物，形成適當(dāng)取代的苯并噻吩?？梢允褂蒙５逻~爾反應(yīng)將苯胺氮轉(zhuǎn)化為溴原子。將所得的芳基碘與商品化的溴二氟甲基膦酸二乙酯的鋅酸鹽偶聯(lián)。在這一點(diǎn)上，可以再官能化R¹基團(tuán)以提供本發(fā)明的膦酸酯前體。隨后使用TMSBr的膦酸酯水解和用合適的堿如氫氧化銨或氫氧化鈉的鹽形成，提供了本發(fā)明的化合物。

方法C:

可以用試劑如NBS在5位中選擇性溴化商品化的2-氯-4-氨基苯甲酸的甲酯。酯還原成相應(yīng)的醛，接著在堿性條件下用適當(dāng)官能化的硫醇處理會(huì)置換與醛相鄰的氯。如果R¹是吸電子基團(tuán)，那么隨后的加熱將產(chǎn)生羥醛與醛的縮合產(chǎn)物，形成適當(dāng)取代的苯并噻吩?？梢允褂蒙５逻~爾反應(yīng)將苯胺氮轉(zhuǎn)化為碘原子。將所得的芳基碘與商品化的溴二氟甲基膦酸二乙酯的鋅酸鹽偶聯(lián)。在這一點(diǎn)上，可以再官能化R¹基團(tuán)以提供本發(fā)明的膦酸酯前體。隨后使用TMSBr的膦酸酯水解和用合適的堿如氫氧化銨或氫氧化鈉的鹽形成，提供了本發(fā)明的化合物。

方法D：

可以使用NBS或其它溴化劑在5位中選擇性溴化商品化的2-氯-4-氨基苯甲酸?？梢允褂蒙５逻~爾反應(yīng)將苯胺氮轉(zhuǎn)化為碘原子，并且可以在費(fèi)希爾條件下酯化酸。將所得的芳基碘與商品化的溴二氟甲基膦酸二乙酯的鋅酸鹽偶聯(lián)?？梢允褂门饸浠c或其它還原劑將酯還原成醇，然后使用氧化劑如MnO₂、斯文氧化劑(Swern)或TPAP氧化成醛?；蛘?，可以使用DiBAL-H將此酯直接還原成醛?？梢栽趬A性條件下用適當(dāng)官能化的硫醇處理α-鹵代醛以置換與醛相鄰的氟。如果R¹是吸電子基團(tuán)，那么隨后的加熱將產(chǎn)生羥醛與醛的縮合產(chǎn)物，形成適當(dāng)取代的苯并噻吩。在這一點(diǎn)上，可以再官能化R¹基團(tuán)以提供本發(fā)明的膦酸酯前體。隨后使用TMSBr的膦酸酯水解和用合適的堿如氫氧化銨或氫氧化鈉的鹽形成，提供了本發(fā)明的化合物。

提供以下實(shí)施例以闡述本發(fā)明，并且不應(yīng)解釋為以任何方式限制本發(fā)明。本發(fā)明的范圍以所附權(quán)利要求書限定。

實(shí)施例1

((6-溴-2-(乙氧基羰基)苯并[B]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸酯

步驟1：4-氨基-2-氯苯甲酸甲酯

對(duì)0℃的甲醇逐滴添加氯化乙酰(314.7mmol,22.4mL)。在添加氯化乙酰后，在rt攪拌反應(yīng)混合物30min，然后一次就添加4-氨基-2-氯苯甲酸1(116.6mmol,20.0g)。在回流時(shí)加熱反應(yīng)混合物18小時(shí)，冷卻到0℃，并且在真空下濃縮。將殘留物在250mL乙酸乙酯中懸浮，冷卻到0℃，并且添加飽和水性NaHCO₃(pH是8)。將混合物分配，并且用乙酸乙酯(200mL)提取。用鹽水清洗組合有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮以提供作為黃色固體的20.9g標(biāo)題化合物，其在下一步中在不純化的情況下照原樣使用：¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.78(d,J＝8.6Hz,1H),6.70(d,J＝2.3Hz,1H),6.52(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),4.09(bs,1H),3.86(s,3H)。LCMS(M+1)＝186.1,188.1。

步驟2：4-氨基-2-氯-5-碘-苯甲酸甲酯

對(duì)MeOH(216mL)中的4-氨基-2-氯苯甲酸甲酯(20.0g,107.75mmol)和CaCO₃(21.58g,215.5mmol)的懸浮液添加CH₂Cl₂(102mL)中的一氯化碘(20.0g,123.2mmol)的溶液。在室溫?cái)嚢杷玫姆磻?yīng)混合物5h，并且通過(guò)添加冷卻水(700mL)和乙酸乙酯(700mL)淬滅。通過(guò)賽麗特(celite)將它過(guò)濾，用300mL 10％硫代硫酸鈉處理濾液，分配，并且用乙酸乙酯(400mL)提取水性層。用10％硫代硫酸鈉(2x)和鹽水清洗合并的有機(jī)層。通過(guò)MgSO₄干燥有機(jī)層，并且在真空下濃縮到干燥。將殘留物在硅膠中吸附，加載到快速柱中，用5、7.5和10％乙酸乙酯/甲苯洗脫所述快速柱以提供作為黃色固體的17.0g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.26(s,1H),6.75(s,1H),4.52(bs,1H),3.87(s,3H)。LCMS(M+1)＝312.0,314.0。

步驟3：(4-氨基-2-氯-5-碘苯基)甲醇

在-40℃在氮?dú)庀略?0min的時(shí)間段里對(duì)CH₂Cl₂(400mL)和THF(100mL)中的4-氨基-2-氯-5-碘-苯甲酸甲酯(17.0g,54.6mmol)的溶液緩慢添加二異丁基氫化鋁(136.0mL,136.0mmol,1.0M，在CH₂Cl₂中)。在完成添加后除去冷卻浴。在rt攪拌2h后，將混合物倒入0℃飽和水性酒石酸鉀鈉。將層分配，并且用CH₂Cl₂(600mL)提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮到干燥，以提供作為橙色固體的15.5g標(biāo)題化合物，其在下一步中在不進(jìn)一步純化的情況下使用。

步驟4：4-氨基-2-氯-5-碘苯甲醛

在rt對(duì)DMF(270mL)中的(4-氨基-2-氯-5-碘苯基)甲醇(15.5g,54.7mmol)的溶液逐批次添加活化的MnO₂(23.8g,273.4mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌18h，TLC顯示不完全的反應(yīng)。再添加15.0g MnO₂，并且在rt再攪拌反應(yīng)混合物18h，然后經(jīng)由賽麗特過(guò)濾。用乙酸乙酯(400mL)和水(300mL)稀釋濾液。分配層，并且用乙酸乙酯(300mL x 2)提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮到干燥。在50％Et₂O/己烷中研磨殘留物以提供作為黃色固體的10.2g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ10.12(d,J＝0.8Hz,1H),8.22(s,1H),6.70(d,J＝0.8Hz,1H),4.79(bs,1H)。LCMS(M+1)＝282.0,283.9。

步驟5：6-氨基-5-碘苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯

用氮?dú)鈱?6mL無(wú)水DMF中的4-氨基-2-氯-5-碘苯甲醛(10.2g,36.2mmol)和K₂CO₃(12.5g,90.6mmol)的懸浮溶液脫氣15min，緩慢添加巰基乙酸乙酯(8.34mL,76.1mmol)，然后在rt攪拌所得的反應(yīng)混合物3天。對(duì)等分試樣的分析顯示了約5％的起始材料和95％2-((5-氨基-2-甲?；?4-碘苯基)硫代)乙酸乙酯。然后，在75℃將反應(yīng)混合物加熱5h。將它冷卻到rt，倒入水(500mL)和CH₂Cl₂(400mL)的混合物中，并且分配。用CH₂Cl₂(300mL)提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮到干燥。在50％Et₂O/己烷中研磨殘留物以提供作為黃色固體的5.0g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.17(s,1H),7.81(s,1H),7.15(s,1H),4.37(q,J＝7.0Hz,2H),4.30(s,2H),1.40(t,J＝7.0Hz,3H)。LCMS(M+1)＝348.0。

步驟6：6-溴-5-碘苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯

對(duì)69mL無(wú)水乙腈中的6-氨基-5-碘苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯6(2.4g,6.9mmol)和CuBr(1.0g,7.6mmol)的懸浮溶液添加亞硝酸叔丁酯(1.0mL,10.34mmol)。在45℃將所得的反應(yīng)混合物加熱6h，冷卻到rt，并且倒入5％硫代硫酸鈉中。用DCM(150mL X 2)提取它，用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮到干燥。在硅膠中吸附殘留物，加載到快速柱中，用20和30％CH₂Cl₂/己烷洗脫所述快速柱以提供作為淡黃色固體的的900mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.38(s,1H),8.15(s,1H),7.15(s,1H),4.44-4.38(m,2H),1.42(t,J＝7.0Hz,3H)。LCMS(M+1)＝410.9,412.9。

活化的鋅粉的制備

用1.0N HCl(40mL x 3)、H₂O(100mL x 5)、MeOH(100mL x 3)和Et₂O(100mL x 3)清洗燒結(jié)漏斗中的鋅粉。然后，在高真空下放置收集的鋅過(guò)夜。

步驟7：((二乙氧基磷?；?二氟甲基)溴化鋅(II)

對(duì)86mL無(wú)水THF中的活化的Zn粉末(2.26g,34.56mmol)的懸浮溶液添加1,2-二溴乙烷(149.0pL,1.73mmol)，并且在50℃加熱反應(yīng)混合物15min。在冷卻到rt后，添加三甲基氯硅烷(262.0μL,2.0mmol)，并且將混合物超聲處理15分鐘。逐滴添加(溴二氟甲基)膦酸二乙酯(6.15mL,34.56mmol)，然后在50℃加熱混合物1h。將混合物(約0.4M)冷卻到rt，并且直接用于下一個(gè)步驟。

步驟8：6-溴-5-((二乙氧基磷酰基)二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯

在rt對(duì)THF中的0.4M((二乙氧基磷?；?二氟甲基)溴化鋅(II)(14.6mL,5.84mmol)的新鮮制備的溶液一次就添加CuBr(420mg,2.93mmol)。在rt將所得的反應(yīng)混合物攪拌30min，然后緩慢添加14.6mL無(wú)水THF中的6-溴-5-碘苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(來(lái)自步驟6，800mg,1.95mmol)的溶液。在45℃加熱混合物過(guò)夜，冷卻到rt，然后添加乙酸乙酯(100mL)和水性飽和氯化銨(100mL)。分配混合物，并且用乙酸乙酯(100mL)提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮到干燥。

將殘留物在硅膠上吸附，然后加載到快速柱上，用5、7、10和12％乙酸乙酯/甲苯洗脫所述快速柱以提供作為黃色固體的260mg標(biāo)題化合物?；厥?00mg起始材料。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.19(s,1H),8.16(s,1H),8.04(s,1H),4.44-4.40(m,2H),4.32-4.21(m,4H),1.42(t,J＝7.2Hz,3H),1.39-1.32(m,6H)。LCMS(M+1)＝471.0,473.0。

步驟9：((6-溴-2-(乙氧基羰基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二銨

在rt對(duì)1mL無(wú)水二氯甲烷中的6-溴-5-((二乙氧基磷酰基)二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(40mg,0.09mmol)的攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(112pL,0.85mmol)。在rt攪拌反應(yīng)混合物過(guò)夜，在真空下濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和乙醇(3x)共蒸發(fā)。在0.5mL乙醇中溶解殘留物，并且添加1.0mL氨(0.5M，在二噁烷中)。攪拌懸浮液30min，在真空下濃縮到干燥，并且在Et₂O中研磨殘留物以提供作為無(wú)色粉末的20mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,MeOH-d4):δ8.42(s,1H),8.26(s,1H),8.11(s,1H),4.39(q,J＝7.1Hz,2H),1.40(t,J＝7.1Hz,3H)。LCMS(M+1)＝414.9,416.9。

實(shí)施例2

6-溴-5-(二氟(膦酰基)甲基)苯并[B]噻吩-2-羧酸鹽(6-BROMO-5-(DIFLUORO(PHOSPHONATO)METHYL)BENZO[B]THIOPHENE-2-CARBOXYLATE)

步驟1：6-溴-5-((乙氧基(羥基)磷?；?二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸

在0℃對(duì)0.90mL乙醇和1.60mL THF中的6-溴-5-((二乙氧基磷酰基)二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯8(實(shí)施例1，步驟8；120mg，0.25mmol)的攪拌溶液逐滴添加1N LiOH(380μL,0.38mmol)。除去冷卻浴，并且在rt攪拌反應(yīng)混合物3h。將溶液冷卻到0℃，添加1N HCl以達(dá)到pH 2，并且用乙酸乙酯(2x)提取混合物。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO4干燥，并且在真空下濃縮至干燥。通過(guò)用10％MeOH/CH₂Cl₂和i-PrOH/NH₄OH/H₂O(12:3:1)洗脫的快速柱純化殘留物，以提供作為無(wú)色固體的51mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,MeOH-d4):δ8.31(s,1H),8.26(s,1H),8.09(s,1H),4.18-4.10(m,2H),1.29(s,J＝7.04Hz,3H)。LCMS(M+1)＝415.0,417.0。

步驟2：6-溴-5-(二氟(膦酰基)甲基)苯并[B]噻吩-2-羧酸三銨

在rt對(duì)1mL無(wú)水二氯甲烷中的6-溴-5-((乙氧基(羥基)磷?；?二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸11(51mg,0.12mmol)的攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(162μL,1.2mmol)。在rt將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜,在真空下濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和乙醇(3x)共蒸發(fā)。在0.5mL乙醇中溶解殘留物，并且添加1.0mL氨(0.5M，在二噁烷中)。將它攪拌30min，在真空下濃縮到干燥，并且在i-PrOH/NH₄OH/H₂O(12:3:1)中研磨殘留物，提供作為無(wú)色粉末的26mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,D₂O):δ8.15(s,1H),8.07(s,1H),7.72(s,1H)。LCMS(M+1)＝386.9,388.9。

實(shí)施例3

((6-溴-2-氨基甲?；讲B]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸鹽

步驟1：氫((6-溴-2-氨基甲酰基苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸乙酯

在rt對(duì)0.50mL THF中的6-溴-5-((二乙氧基磷?；?二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(實(shí)施例1，步驟8；60mg，0.13mmol)的攪拌溶液添加0.50mL氫氧化銨(28-30％/H₂O)。在65℃加熱混合物過(guò)夜，并且在真空下濃縮至干燥。通過(guò)用i-PrOH/NH₄OH/H₂O(54:2.5:0.5至30:2.5:0.5)洗脫的快速柱純化殘留物。在真空下濃縮級(jí)份，在乙酸乙酯中懸浮殘留物，并且添加1N HCl以調(diào)節(jié)pH 2。分配混合物，并且用乙酸乙酯提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮到干燥以提供黃色固體的26mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,MeOH-d4):δ8.33(s,1H),8.19(s,1H),8.04(s,1H),4.21-4.14(m,2H),1.33-1.27(m,3H)。LCMS(M+1)＝414.0,416.0。

步驟2：((6-溴-2-氨基甲酰基苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二銨

在rt對(duì)1mL無(wú)水二氯甲烷中的氫((6-溴-2-氨基甲?；讲b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸乙酯(26mg,0.06mmol)的攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(83μL,0.63mmol)。在rt將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜。LCMS顯示了不完全反應(yīng)；再添加160μL三甲基溴硅烷。在rt將它攪拌過(guò)夜，在真空下濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和乙醇(3x)共蒸發(fā)。在0.5mL乙醇中溶解殘留物，并且添加1.0mL氨(濃度為0.5M，在二噁烷中)。將它攪拌30min，在真空下濃縮到干燥，并且在2-丙醇中研磨殘留物，以提供作為淡黃色粉末的15mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,D₂O):δ8.13(2s,2H),7.83(s,1H)。LCMS(M+1)＝385.8,387.9。

實(shí)施例4

((6-溴-2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸鹽

步驟1：((6-溴-2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸乙基甲酯

對(duì)氫((6-溴-2-氨基甲?；讲b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸乙酯(實(shí)施例3，步驟1；26mg，0.06mmol)添加POCl₃(2mL)，并且在90℃加熱反應(yīng)混合物過(guò)夜。將它在真空下濃縮到干燥，然后添加2mL無(wú)水甲醇，在rt攪拌30min。然后，在真空下濃縮至干燥混合物。通過(guò)用0至60％EtOAc/己烷洗脫的商品名為Isco Combiflash的儀器純化殘留物，以提供8mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.21(s,1H),8.18(s,1H),7.91(s,1H),4.33-4.27(m,2H),3.92(s,1.5H),3.89(s,1.5H),1.37(t,J＝7.0Hz,3H)。LCMS(M+1)＝410.0,412.0。

步驟2：((6-溴-2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二銨

在rt對(duì)1mL無(wú)水二氯甲烷中的((6-溴-2-氰基苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸乙基甲酯(8mg,0.02mmol)的攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(52μL,0.4mmol)。整個(gè)周末在rt攪拌反應(yīng)混合物，在真空下濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和乙醇(3x)共蒸發(fā)。在0.5mL乙醇中溶解殘留物，并且添加1.0mL氨(0.5M，在二噁烷中)。攪拌懸浮液30min，在真空下濃縮到干燥，并且在2-丙醇中研磨殘留物以提供3mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,D₂O):δ8.27(s,1H),8.18(s,1H),8.04(s,1H)。LCMS(M+1)＝367.8,369.9。

實(shí)施例5

((6-溴-2-(羥基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸鹽

步驟1：((6-溴-2-(羥基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二乙酯

在65℃在30min里對(duì)1.0mL THF中的6-溴-5-((二乙氧基膦酰基)二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(200mg,0.42mmol)和硼氫化鈉(96mg,2.55mmol)的懸浮液逐滴添加無(wú)水甲醇(300μL)。將反應(yīng)于65℃保持3h，冷卻到rt，倒入1N HCl中，用EtOAc(2x)提取。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮至干燥。通過(guò)用0至90％EtOAc/己烷洗脫的商品名為Isco Combiflash的儀器(24g柱)純化殘留物，以提供作為黃色固體的100mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCI₃):δ8.10(s,1H),7.96(s,1H),7.14(s,1H),4.89(s,2H),4.29-4.18(m,4H),1.36-1.25(m,6H),LCMS(M+1)＝429.1,431.1。

步驟2：((6-溴-2-(羥基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二銨

在rt對(duì)2mL無(wú)水二氯甲烷中的((6-溴-2-(羥基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二乙酯(100mg,0.23mmol)攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(307μL,2.30mmol)。在rt將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，在真空下濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和乙醇(3x)共蒸發(fā)。通過(guò)在用10-20％EtOH/H₂O洗脫的C-18上的快速層析純化殘留物。收集級(jí)份，并且在真空下濃縮至干燥。在0.5mL乙醇中溶解殘留物，并且添加1.0mL氨(0.5M，在二噁烷中)。將它攪拌30min，在真空下濃縮到干燥，并且在2-丙醇中研磨殘留物，以提供作為黃色固體的9mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,D₂O):δ8.13(s,1H),8.10(s,1H),7.24(s,1H),4.75(s,2H)。LCMS(M+1)＝372.9,375.9。

實(shí)施例6

((6-溴-2-(氰基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸鹽

步驟1：((6-溴-2-(氯甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二乙酯

在0℃對(duì)無(wú)水二噁烷(1mL)中的((6-溴-2-(羥基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二乙酯(實(shí)施例5，步驟1；60mg，0.14mmol)的攪拌溶液添加亞硫酰氯(16μL,0.22mmol)。反應(yīng)混合物在rt達(dá)3h，然后再添加亞硫酰氯(16μL,0.22mmol)，并且攪拌2h。在真空下濃縮至干燥。通過(guò)用20至40％EtOAc/己烷洗脫的快速層析純化殘留物，以提供作為無(wú)色膠質(zhì)的37mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.12(s,1H),8.02(d,J＝1Hz,1H),7.31(d,J＝1Hz,1H),4.84(s,2H),4.38-4.20(m,4H),1.37-1.34(m,6H)。LCMS(M+1)＝447.0,449.0。

步驟2：((6-溴-2-(氰基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二乙酯

在rt對(duì)DMSO(1mL)中的((6-溴-2-(氯甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二乙酯(36mg,0.08mmol)的攪拌溶液添加氰化鉀(7mg,0.1mmol)。反應(yīng)混合物在rt達(dá)5h，然后超聲處理1h(水浴的溫度達(dá)到45℃)。將它冷卻到rt，倒入H₂O:EtOAc(1:1)的混合物中，分配，并且用EtOAc提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮至干燥。通過(guò)用50至60％EtOAc/己烷洗脫的快速層析純化殘留物，以提供作為黃色固體的9mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl ₃):δ8.11(s,1H),8.03(s,1H),7.34(s,1H),4.31-4.21(m,4H),3.99(s,2H),1.38-1.25(m,6H)。LCMS(M+1)＝438.0,440.0。

步驟3:((6-溴-2-(氰基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二銨

在rt對(duì)0.5mL無(wú)水二氯甲烷中的((6-溴-2-(氰基甲基)苯并[b]噻吩-5-基)二氟甲基)膦酸二乙酯(9mg,0.02mmol)的攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(27μL,0.20mmol)。在rt將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，LCMS顯示了不完全反應(yīng)。將它超聲處理3h(水浴的溫度達(dá)到45℃)，在真空下濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和乙醇(3x)共蒸發(fā)。在0.5mL乙醇中溶解殘留物，并且添加1.0mL氨(0.5M，在二噁烷中)。將懸浮液攪拌30min，在真空下濃縮到干燥，在2-丙醇中研磨殘留物以提供7mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,D₂O):δ8.11(s,1H),8.09(s,1H),7.33(s,1H),4.10(s,2H)。LCMS(M+1)＝381.9,383.9。

實(shí)施例7

((5-溴-2-(乙氧基羰基)苯并[B]噻吩-6-基)二氟甲基)膦酸鹽

步驟1：4-氨基-5-溴-2-氯苯甲酸甲酯

在rt對(duì)196mL THF中的4-氨基-2-氯苯甲酸甲酯(10.9g,58.73mmol)的攪拌溶液添加NBS(11.5g,64.6mmol)。整個(gè)周末在rt攪拌反應(yīng)混合物，添加200mL EtOAc，并且用10％硫代硫酸鈉，接著用10％碳酸鈉和鹽水清洗有機(jī)層。通過(guò)MgSO₄干燥有機(jī)層，并且在真空下濃縮至干燥。在硅膠上吸附殘留物，加載到快速柱上，并且用10-30％EtOAc/己烷洗脫。再次通過(guò)用8％EtOAc/甲苯洗脫的快速層析純化混合的級(jí)份以提供作為淺黃色固體的總共9.58g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.03(s,1H),6.79(s,1H),4.52(bs,2H),3.87(s,3H)。LCMS(M+1)＝263.9,265.9。

步驟2：(4-氨基-5-溴-2-氯苯基)甲醇

在-40℃在氮?dú)庀略?0min里對(duì)二氯甲烷(650mL)中的4-氨基-5-溴-2-氯苯甲酸甲酯(16.73g,63.25mmol)的溶液緩慢添加二異丁基氫化鋁(158mL,158mmol,1.0M/CH₂Cl₂)；在完成添加后除去冷卻浴。在rt攪拌2h后，將混合物倒入0℃飽和水性酒石酸鉀鈉。將層分離，并且用二氯甲烷(600mL)提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮至干燥。在硅膠上吸附殘留物，加載到快速柱上，所述快速柱用10-15％乙酸乙酯/甲苯洗脫，以提供作為橙色固體的10.8g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.49(s,1H),6.78(s,1H),4.64(s,2H),4.15(bs,2H)。LCMS(M+1)＝236.0,238.0。

步驟3：4-氨基-5-溴-2-氯苯甲醛

在rt對(duì)DMF(229mL)中的(4-氨基-5-溴-2-氯苯基)甲醇(10.8g,45.7mmol)的溶液逐批次添加活化的MnO₂(19.9g,228.3mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌18h，并且通過(guò)賽麗特過(guò)濾。用乙酸乙酯(300mL)和水(200mL)洗脫濾液，將層分配，并且用乙酸乙酯(200mL)提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮到干燥以提供作為橙色固體的10.7g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ10.16(s,1H),8.02(s,1H),6.75(s,H),4.81(bs,2H)。LCMS(M+1)＝234.0,236.0。

步驟4：6-氨基-5-溴苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯

用氮?dú)鈱?duì)45mL無(wú)水DMF中的4-氨基-5-溴-2-氯苯甲醛(10.6g,45.2mmol)和K₂CO₃(15.6g,113.0mmol)的懸浮液脫氣15min，然后冷卻到0℃。緩慢添加巰基乙酸乙酯(5.9mL,54.25mmol)，并且在rt將所得的反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜。LCMS顯示了約50％轉(zhuǎn)化；再添加巰基乙酸乙酯(5.9mL,54.25mmol)，并且在rt攪拌過(guò)夜。然后，在75℃加熱混合物5h，冷卻到rt，并且倒入水(500mL)和CH₂Cl₂(400mL)的混合物中。將層分離，并且用CH₂Cl₂(300mL)提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮至干燥。通過(guò)用30-50％CH₂Cl₂/己烷洗脫的快速層析純化殘留物。收集級(jí)份，并且在真空下濃縮至干燥。在50％Et₂O/己烷(60mL)中研磨殘留物以提供作為黃色固體的3g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ7.93(s,1H),7.83(s,1H),7.15(s,1H),4.37(q,J＝7.2Hz,2H),4.15(bs,2H),1.39(t,J＝7.2Hz,3H)。LCMS(M+1)＝300.0,302.0。

步驟5：5-溴-6-碘苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯

對(duì)15mL無(wú)水乙腈中的6-氨基-5-溴苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(2.12g,7.06mmol)和Cul(1.48g,7.76mmol)的懸浮液添加亞硝酸叔丁酯(1.26mL,10.60mmol)。在45℃加熱所得的反應(yīng)混合物6h，冷卻到rt，并且倒入5％硫代硫酸鈉中。用CH₂Cl₂(150mL x 2)提取它，并且用鹽水清洗合并的有機(jī)層,通過(guò)MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮至干燥。在硅膠上吸附殘留物，加載到快速柱上，并且用20至30％CH₂Cl₂/己烷洗脫以提供400mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl ₃):δ8.38(s,1H),8.16(s,1H),7.90(s,1H),4.46-4.39(m,2H),1.42(t,J＝7.0Hz,3H)。LCMS(M+1)＝410.9,412.9。

步驟6：5-溴-6-((二乙氧基磷?；?二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯

在rt對(duì)THF中的0.4M((二乙氧基磷?；?二氟甲基)溴化鋅(II)(實(shí)施例1，步驟7；7.5mL,3.0mmol)的新鮮制備的溶液一次就添加CuBr(215mg,1.5mmol)。在rt將所得的混合物攪拌30min，然后緩慢添加7.5mL無(wú)水THF中的5-溴-6-碘苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(400mg,1.33mmol)的溶液。在45℃加熱混合物過(guò)夜，冷卻到rt，然后添加乙酸乙酯(80mL)和水性飽和氯化銨(80mL)。將層分配，并且用乙酸乙酯(80mL)提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且在真空下濃縮至干燥。在硅膠上吸附殘留物，加載到快速柱上，并且用5-10％乙酸乙酯/甲苯洗脫以提供55mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl ₃):δ8.17(s,1H),8.14(s,1H),7.96(s,1H),4.42(d,J＝7.0Hz,2H),4.32-4.20(m,4H),1.40(t,J＝7.0Hz,3H),1.37-1.33(m,6H)。LCMS(M+1)＝471.0,473.0。

步驟7：((5-溴-2-(乙氧基羰基)苯并[b]噻吩-6-基)二氟甲基)膦酸二銨

在rt對(duì)1mL無(wú)水二氯甲烷中的5-溴-6-((二乙氧基磷?；?二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(55mg,0.12mmol)的攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(178μL,1.16mmol)。在rt將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，在真空下濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和乙醇(3x)共蒸發(fā)。在0.5mL乙醇中溶解殘留物，并且添加1.0mL氨(0.5M，在二噁烷中)。將它攪拌30min，在真空下濃縮到干燥，并且在Et₂O中研磨殘留物以提供作為無(wú)色粉末的43mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,MeOH-d4):δ8.55(s,1H),8.22(s,1H),8.03(s,1H),4.40(q,J＝7.1Hz,2H),1.40(t,J＝7.1Hz,3H)。LCMS(M+1)＝415.0,417.0。

實(shí)施例8

((5-溴-2-(甲氧基羰基)苯并[b]噻吩-6-基)二氟甲基)膦酸鹽

步驟1：4-氨基-5-溴-2-氟苯甲酸

在40min的時(shí)段里分成多個(gè)小的批次對(duì)116mL THF中的4-氨基-2-氟苯甲酸1(18g,116.0mmol)的-10℃溶液添加N-溴琥珀酰亞胺(22.3g,125.3mmol)，期間將內(nèi)部溫度維持在低于-5℃。允許反應(yīng)加熱到室溫，并且攪拌18h。在真空下除去THF后，在58mL DMF中溶解殘留物，并且緩慢添加116mL水以誘導(dǎo)沉淀。劇烈攪拌混合物1h，然后過(guò)濾，用水清洗，并且在真空下干燥以提供20.7g黃色固體。在120mL乙酸乙酯中研磨提供作為淡黃色固體的14.5g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.60(s,1H),7.78(d,J＝7.4Hz,1H),6.50(d,J＝13.3Hz,1H),6.34(s,2H)。LCMS(M+1):234.0和236.0。

步驟2：5-溴-2-氟-4-碘苯甲酸

對(duì)370mL水中的4-氨基-3-溴-2-氟苯甲酸(15.58g,66.58mmol)的0℃懸浮液逐滴添加53.3mL濃縮的HCl。緩慢添加水(49mL)中的亞硝酸鈉(5.05g,73.33mmol)溶液以維持內(nèi)部溫度<10℃。將所得的懸浮液加熱到rt，并且攪拌1h，直至它形成溶液。在裝備有機(jī)械攪拌器的三頸燒瓶中裝入水(290mL)，添加碘化鉀(55.3g,332.9mmol)，并且將所得的溶液加熱到30℃。在1h里將重氮鹽溶液緩慢轉(zhuǎn)移到碘化鉀溶液，從而控制氣體放出的速率，并且維持內(nèi)部溫度為35℃±5℃。用水(25mL)和濃縮的HCl(2.5mL)的溶液漂洗含有重氮鹽的燒瓶，然后添加到Kl溶液。在30℃將所得的懸浮液攪拌過(guò)夜。過(guò)濾固體，并且用水清洗兩次，然后干燥以給出作為黃色固體的20.3g粗制5-溴-2-氟-4-碘苯甲酸，其在不進(jìn)一步純化的情況下用于下一步。

步驟3：5-溴-2-氟-4-碘苯甲酸甲酯

在0℃對(duì)甲醇(118mL)逐滴添加氯化乙酰(11.3mL,158.9mmol)。在完成氯化乙酰的添加后，在rt攪拌溶液30min，然后一次就添加5-溴-2-氟-4-碘苯甲酸(20.3g,58.9mmol)。在回流加熱反應(yīng)混合物4h，冷卻到0℃，并且在真空下濃縮。在50mL二乙醚中懸浮殘留物，加熱到40℃，并且添加30mL己烷。在rt攪拌懸浮液混合物90min，過(guò)濾，并且用15mL己烷-Et₂O(2:1)清洗固體。在真空下干燥收集固體以提供作為黃色固體的13.52g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.14-8.13(m,1H),7.69-7.66(m,1H),3.93(s,3H)。

步驟4：5-溴-4-((二乙氧基磷?；?二氟甲基)-2-氟苯甲酸甲酯

對(duì)脫氣的、無(wú)水的THF(19.7mL)中的Zn粉末(4.93g,75.33mmol)的懸浮液添加TMSCl(3.33mL,26.37mmol)，并且在劇烈攪拌的情況下將懸浮液添加到50℃達(dá)1.5h。將內(nèi)容物冷卻到30℃，并且逐滴添加THF(81mL)中的(溴二氟甲基)膦酸二乙酯(20.1g,75.33mmol)的溶液(溫度保持于40-45℃)。在30℃攪拌反應(yīng)混合物2h(渾濁的懸浮液變?yōu)榫哂幸恍┏练e物的溶液)。將溴化銅(10.81g,75.33mmol)火焰干燥，并且在無(wú)水DMAC(21.5mL)中懸浮。將有機(jī)鋅溶液緩慢轉(zhuǎn)移到懸浮的溴化銅，并且在rt攪拌混合物30min。將DMAC(54mL)中的5-溴-2-氟-4-碘苯甲酸甲酯4(13.52g,37.67mmol)溶液緩慢添加到反應(yīng)混合物，將它加熱到50℃達(dá)8h。將反應(yīng)混合物冷卻到rt，并且倒入水-乙酸乙酯(1:1)的混合物中。將層分開(kāi)，并且用乙酸乙酯(2x)提取水層。用水、3％氫氧化銨和鹽水依序清洗合并的有機(jī)層，然后通過(guò)MgSO₄干燥，并且蒸發(fā)到干燥，以提供19g粗制材料，將該粗制材料置于高真空下36h。通過(guò)用10-40％乙酸乙酯/己烷洗脫的柱層析純化粗制材料以提供作為淺黃色油的12.2g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.15(d,J＝6.7Hz,1H),7.60-7.57(m,1H),4.20-4.16(m,4H),3.87(s,3H),1.24(t,J＝7.0Hz,6H)。

步驟5：((2-溴-5-氟-4-(羥基甲基)苯基)二氟甲基)膦酸二乙酯

在65℃對(duì)THF(140mL)中的5-溴-4-((二乙氧基磷酰基)二氟甲基)-2-氟苯甲酸甲酯(12g,28.63mmol)和硼氫化鈉(5.4g,143.15mmol)的懸浮液添加甲醇(10mL)，從而控制氣體放出。在添加甲醇后(30分鐘)，將反應(yīng)混合物冷卻到0℃，并且緩慢添加水性飽和氯化銨。用二氯甲烷(2x)提取混合物，用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且蒸發(fā)到干燥。通過(guò)用30％和65％乙酸乙酯/己烷洗脫的柱層析純化粗制材料以提供作為無(wú)色固體的7g標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.79(6,J＝7.0Hz,1H),7.37-7.34(m,1H),5.53(t,J＝5.9Hz,1H),4.57(d,J＝5.9Hz,2H),4.21-4.11(m,4H),1.24(t,J＝7.0Hz,6H)。

步驟6：((2-溴-5-氟-4-甲酰基苯基)二氟甲基)膦酸二乙酯

在rt對(duì)無(wú)水DMF(71mL)中的((2-溴-5-氟-4-(羥基甲基)苯基)二氟甲基)膦酸二乙酯(7.0g,17.9mmol)的溶液添加活化的MnO₂(15.6g,179.0mmol)。在rt攪拌反應(yīng)混合物18h，然后加熱到60℃達(dá)4h。將二乙醚(71mL)和水(71mL)添加到反應(yīng)混合物，并且通過(guò)賽麗特將它過(guò)濾。將層分開(kāi)，并且用二乙醚(2x)提取水層。用水和鹽水依序清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且蒸發(fā)到干燥。通過(guò)用20-65％乙酸乙酯/己烷洗脫的柱層析純化粗制材料以提供作為無(wú)色油的2.1g標(biāo)題化合物?；厥?.6起始材料。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.12(s,1H),8.12(d,J＝6.7Hz,1H),7.63(d,J＝11.0Hz,1H),4.21-4.16(m,4H),1.24(t,J＝7.2Hz,6H)。

步驟7：5-溴-6-((二乙氧基磷?；?二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸甲酯

用氮?dú)鈱?duì)3mL無(wú)水DMF中的((2-溴-5-氟-4-甲?；交?二氟甲基)膦酸二乙酯7(270mg,0.69mmol)和碳酸鉀(201mg,1.46mmol)的懸浮溶液脫氣15min，然后在30min的時(shí)段里添加1mL無(wú)水DMF中的巰基乙酸甲酯(70μL,0.76mmol)的溶液。在rt將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物加熱到45℃達(dá)4h，并且冷卻到0℃。添加水和乙酸乙酯，將層分開(kāi)，并且用乙酸乙酯提取水層。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且蒸發(fā)到干燥。通過(guò)用20-50％乙酸乙酯/己烷洗脫的柱層析純化粗制材料以提供作為無(wú)色固體的190mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47(s,1H),8.46(s,1H),8.20(s,1H),4.20-4.11(m,4H),3.30(s,3H),1.22(t,J＝7.0Hz,6H)。

步驟8((5-溴-2-(甲氧基羰基)苯并[b]噻吩-6-基)二氟甲基)膦酸銨

在rt對(duì)2.6mL無(wú)水二氯甲烷中的5-溴-6-((二乙氧基磷酰基)二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸甲酯(119mg,0.26mmol)的攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(515μL，3.9mmol)。在rt將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜，濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和甲醇(3x)共蒸發(fā)。在甲醇(3mL)中溶解殘留物，并且添加5.2mL氨(0.5M，在二噁烷中)。將它攪拌1h，在真空下濃縮到干燥，在Et₂O(3mL)中研磨殘留物，以提供作為無(wú)色粉末的100mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ8.22(s,1H),8.13(s,1H),7.92(s,1H),3.81(s,3H)。LCMS(M+1):400.8和402.8。

實(shí)施例9

((5-溴-2-(羧基)苯并[B]噻吩-6-基)二氟甲基)膦酸鹽

在rt對(duì)2mL無(wú)水二氯甲烷中的5-溴-6-((二乙氧基磷?；?二氟甲基)苯并[b]噻吩-2-羧酸乙酯(100mg,0.21mmol)的攪拌溶液添加三甲基溴硅烷(280μL,2.12mmol)。在rt將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜。LCMS顯示了反應(yīng)不是完全的。將它超聲處理4h(在40℃的浴溫度)，并且將反應(yīng)混合物濃縮到干燥，與二氯甲烷(3x)和乙醇(3x)共蒸發(fā)。在乙醇(0.5mL)和水(1.0mL)中溶解殘留物。將1.0N NaOH(280μL,0.27mmol)添加到反應(yīng)混合物，并且rt攪拌過(guò)夜。添加20mL水和20mL Et₂O，分配，并且用Et₂O清洗水層，然后用1N HCl處理它以調(diào)節(jié)pH為3，用乙酸乙酯(2x)提取。用鹽水清洗合并的有機(jī)層，通過(guò)MgSO₄干燥，并且蒸發(fā)到干燥。在EtOH(2mL)中溶解殘留物，并且添加5.4mL氨(0.5M，在二噁烷中)。將它攪拌1h，在真空下濃縮到干燥，并且在Et₂O(2mL)中研磨殘留物以提供作為無(wú)色粉末的46mg標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ8.11(s,1H),8.10(s,1H),7.62(s,1H)。LCMS(M+1):386.9和388.8。

實(shí)施例10

[(3-溴-7-氰基-2-萘基)(二氟)甲基]膦酸鹽

如WO 2008/089581中所述，制備此化合物。

實(shí)施例11

關(guān)于TC-PTP的酶測(cè)定數(shù)據(jù)

在針對(duì)TC-PTP測(cè)試時(shí)，觀察到酶活性的以下抑制劑：

實(shí)施例12

關(guān)于TC-PTP抑制劑對(duì)樹(shù)突細(xì)胞的刺激的細(xì)胞測(cè)定數(shù)據(jù)

*相對(duì)經(jīng)媒介物處理的細(xì)胞在存在32μM測(cè)試化合物的情況下6天的DC溫育和成熟后的24hIL-12生成

實(shí)施例13

使用用實(shí)施例5的化合物活化的DC在小鼠癌癥模型中的效力。

現(xiàn)在參考圖1，其顯示了通過(guò)實(shí)施例6或?qū)嵤├?的化合物活化的成熟樹(shù)突細(xì)胞的單次處理后28天的小鼠中的腫瘤體積。這些數(shù)據(jù)顯示了通過(guò)實(shí)施例5的化合物(其在實(shí)施例12中顯示的IL-12釋放測(cè)定法中是有效力的)活化的樹(shù)突細(xì)胞比通過(guò)實(shí)施例6的化合物(其在IL-12釋放測(cè)定法中效力低)活化的樹(shù)突細(xì)胞在降低此模型中的腫瘤體積上提供更大的效力。

實(shí)施例14

在存在和缺乏實(shí)施例7的化合物的情況下分化和成熟后的人DC中的IL-12誘導(dǎo)。

現(xiàn)在參考圖2，其顯示了衍生自從人胰腺癌患者采集的單核細(xì)胞的樹(shù)突細(xì)胞(其在存在實(shí)施例7的化合物的情況下成熟)顯示了比在沒(méi)有實(shí)施例7的化合物的情況下成熟的相同細(xì)胞更大的IL-12釋放。IL-12釋放指示這些細(xì)胞的活化狀態(tài)，并且由于TC-PTP抑制劑的存在所致的IL-12增加表明了本發(fā)明的效用。

雖然優(yōu)選的實(shí)施方案已經(jīng)在上文描述并且在附圖中闡明，但是對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)明顯的是，可以在不偏離此公開(kāi)的前提下做出修改。認(rèn)為此類修改是公開(kāi)的范圍內(nèi)所包括的可能的變型。

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