本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地本發(fā)明提供了一類新型雜環(huán)化合物，其合成及作為ido抑制劑和tdo抑制劑的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：吲哚胺2,3-雙加氧酶(indoleamine2,3-dioxygenase,ido)和色氨酸2,3-加氧酶(tryptophan2,3-dioxygenasetdo)是催化分解色氨酸為犬尿氨酸的含亞鐵氧化還原限速酶。吲哚胺2,3-雙加氧酶有兩種異構(gòu)體(ido1，ido2)，廣泛高表達(dá)于多種細(xì)胞中，列如：神經(jīng)元，星形膠質(zhì)細(xì)胞，小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，特別是抗原提呈細(xì)胞(巨噬細(xì)胞以及樹狀突細(xì)胞)。ido在人體正常細(xì)胞中的表達(dá)水平較低，但在機(jī)體處于感染、炎癥時(shí)，在脂多糖(lps)、ifn-γ等細(xì)胞因子的作用下其表達(dá)可明顯增加。ido在多種腫瘤組織中存在的高表達(dá)現(xiàn)象，已經(jīng)證實(shí)ido與惡性腫瘤的免疫耐受密切相關(guān)。ido可能通過(guò)三種機(jī)制抑制局部t細(xì)胞的免疫反應(yīng)：1.色氨酸耗竭機(jī)制，色氨酸是t細(xì)胞活化增生過(guò)程中的必需氨基酸，在腫瘤細(xì)胞ido過(guò)度表達(dá)后會(huì)導(dǎo)致色氨酸缺乏，ido抑制劑可使t細(xì)胞增殖抑制得到恢復(fù)；2.色氨酸代謝產(chǎn)物的毒性機(jī)制，色氨酸的代謝產(chǎn)物(l-犬尿氨酸和吡啶甲酸)可以直接抑制t細(xì)胞增殖和可誘導(dǎo)其死亡；3.調(diào)節(jié)性t細(xì)胞(tregs)可以抑制t細(xì)胞增殖生長(zhǎng)，過(guò)度表達(dá)的ido可通過(guò)誘導(dǎo)tregs的增殖來(lái)抑制活化的t細(xì)胞，從而為腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移創(chuàng)造有利條件。因此吲哚胺2,3-雙加氧酶在腫瘤免疫領(lǐng)域可能成為一種有效的靶點(diǎn)。色氨酸2,3-加氧酶主要表達(dá)于肝臟組織內(nèi)，主要負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)系統(tǒng)的色氨酸水平，可以分解食物中過(guò)多的色氨酸，在一定范圍維持血清色氨酸的濃度并且其活性不受免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。最近的研究結(jié)果表明轉(zhuǎn)染tdo的人細(xì)胞可以使色氨酸耗竭從而阻止t淋巴細(xì)胞增殖，tdo可能與ido1一樣可以調(diào)節(jié)腫瘤的免疫耐受，因此抑制tdo可能成為一種有效的腫瘤治療手段。越來(lái)越多的研究表明小分子ido抑制劑可以用于多種疾病的治療，列如，病毒引起的傳染病，如hiv，hpv，hcv等病毒引起的疾??；神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如抑郁、阿爾茨海默病、多發(fā)性硬化癥、帕金森綜合癥、亨廷頓疾病等；各種癌癥，肺癌、膀胱癌、乳腺癌、腎癌、胃癌、肝癌、卵巢癌、前列腺癌、宮頸癌、腸癌、上皮細(xì)胞癌、多發(fā)性骨髓瘤、胰腺癌、淋巴瘤、白血病等，動(dòng)脈粥樣硬化、炎癥、疼痛等。ido抑制劑不僅可以單獨(dú)使用，更可以和其他靶向藥物，化療藥物或免疫制劑(pd-1,ctla-4,pd-l1等等)聯(lián)合用藥,具有廣闊的應(yīng)用前景。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一類結(jié)構(gòu)新穎的ido抑制劑和tdo抑制劑，以及它們的制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明的第一方面，提供了一種如式(i)所示的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽、前藥、氘代衍生物、水合物、或溶劑合物：式(i)中：環(huán)a為5-元芳環(huán)，其中各個(gè)t和u各自獨(dú)立地為n或c；各個(gè)p、v、和w各自獨(dú)立地為n或cr3；環(huán)b為5-元或6-元芳環(huán)，其中各個(gè)d、e、和f各自獨(dú)立地為cr4＝cr5、cr4、n、o、s或nr6；z為cr8或n；r1和r2各自獨(dú)立地為氫、鹵素、c1-4烷基、c2-4烯基、c2-4炔基、c3-8環(huán)烷基、3-至8-元雜環(huán)基、-cn、-or9或-n(r9)2；或r1和r2與其相連的碳原子共同形成任選地含有0-2個(gè)獨(dú)立選自n、o或s的雜原子的3-至8-元環(huán)；m和n各自獨(dú)立地為0、1、2、3或4；各個(gè)r3獨(dú)立地為氫、鹵素或c1-4烷基；各個(gè)r4和r5各自獨(dú)立地為氫、鹵素、c1-4烷基、c2-4烯基、c2-4炔基、c3-8環(huán)烷基、3-至8-元雜環(huán)基、芳基、雜芳基、氰基、硝基、-or9、-n(r9)2、-sr9、-c(o)or9、-c(o)n(r9)2、-c(o)r9、-s(o)2r9、-s(o)2n(r9)2、-oc(o)r9、-oc(o)or9、-oc(o)n(r9)2、-n(r9)c(o)r9或-n(r9)c(o)n(r9)2；各個(gè)r6獨(dú)立地為氫、c1-4烷基、c2-4烯基、c2-4炔基、c3-8環(huán)烷基、3-至8-元雜環(huán)基、芳基、雜芳基、-c(o)r9、-c(o)or9、-c(o)n(r9)2或-s(o)2r9；各個(gè)r8獨(dú)立地為氫、鹵素或c1-4烷基；各個(gè)r9各自獨(dú)立地為氫、c1-4烷基、c2-4烯基、c2-4炔基、c3-8環(huán)烷基、3-至8-元雜環(huán)基、芳基、雜芳基、c3-8環(huán)烷基c1-4烷基、3-至8-元雜環(huán)基c1-4烷基、芳基c1-4烷基、或雜芳基c1-4烷基；或者在n(r9)2結(jié)構(gòu)中，兩個(gè)r9與其相連的氮原子共同形成3-至8-元環(huán)，所述3-至8-元環(huán)任選地還含有0-2個(gè)獨(dú)立選自n、o或s的雜原子，且所述3-至8-元環(huán)可任選地被＝o取代；r為ra、-ora、-n(ra)(rc)、-c(o)ra、-c(o)n(ra)(rc)、-c(orb)(ra)(rc)、-c(nhrb)(ra)(rc)、-c(＝n-orc)ra或-n(orc)(ra)，其中，各個(gè)ra獨(dú)立地為c6-12橋式二環(huán)烷基(c6-12bridgedbicycloalkyl)、或c4-11的含1-3個(gè)雜原子的6-至12-元橋式二環(huán)雜環(huán)基(bridgedbicyclicheterocyclyl)；各雜原子獨(dú)立地選自n、o或s，其中，ra任選地具有1-3個(gè)ra1取代基團(tuán)和/或任選地具有1-2個(gè)＝ra2取代基團(tuán)；各個(gè)ra1各自獨(dú)立地為氫、鹵素、c1-4烷基、c2-4烯基、c2-4炔基、芳基、雜芳基、c3-8環(huán)烷基、c3-8環(huán)烯基、3-至8-元雜環(huán)基、氰基、硝基、n-氧化物、-or9、-n(r9)2、-sr9、-c(o)or9、-c(o)n(r9)2、-c(o)n(oh)r9、-c(o)r9、-c(nr9)r9、-c(nr9)n(r9)r9、-n(r9)s(o)r9、-s(o)r9、-s(o)or9、-n(r9)s(o)n(r9)2、-s(o)n(r9)2、-n(r9)s(o)2r9、-s(o)2r9、-s(o)2or9、-n(r9)s(o)2n(r9)2、-s(o)2n(r9)2、-oc(o)r9、-oc(o)or9、-oc(o)n(r9)2、-n(r9)c(o)r9、-n(r9)c(o)or9、-n(r9)c(o)n(r9)2、-o(ch2)2-4or9、-o(ch2)2-4n(r9)2、-o(ch2)2-4n(r9)s(o)2r9、-o(ch2)2-4n(r9)s(o)2n(r9)2、-n(r9)(ch2)2-4or9、-n(r9)(ch2)2-4n(r9)2、-n(r9)(ch2)2-4n(r9)s(o)2r9、或-n(r9)(ch2)2-4n(r9)s(o)2n(r9)2；＝ra2為＝o、＝s、＝n(r9)、＝n(or9)、＝c(ra3)2、＝(c3-6螺環(huán)烷基),或＝(3-至6-元螺雜環(huán)基),其中，各個(gè)ra3獨(dú)立地為氫、鹵素、氰基、c1-4烷基、c3-8環(huán)烷基、或3-至8-雜環(huán)基；或者兩個(gè)ra3與其相連的原子共同形成c3-6環(huán)烷基或3-至6-元雜環(huán)基；各個(gè)rb獨(dú)立地為氫、c1-4烷基、-c(o)r9、-ch2-op(o)2(or9)2或-p(o)(or9)2；各個(gè)rc獨(dú)立地為氫或c1-4烷基；各個(gè)上述的烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、雜環(huán)基、芳基和雜芳基任選地且各自獨(dú)立地被1-3個(gè)各自獨(dú)立地選自下組的取代基取代：鹵素、c1-4烷基、c2-4烯基、c2-4炔基、c3-8環(huán)烷基、3-至12-元雜環(huán)基、芳基、雜芳基、-cn、-no2、-or9、-sr9、-n(r9)2、-c(o)r9、-c(o)or9、-c(o)n(r9)2或-s(o)2r9；除非特別說(shuō)明，上述的芳基為含有6-12個(gè)碳原子的芳基；雜芳基為5-至15-元雜芳基。在另一優(yōu)選例中，作為式(i)所示的化合物的一部分的式(ii)其中，表示式(ii)與式(i)所示的化合物其余部分的連接位點(diǎn)；各個(gè)r3、r4、r5、和r6各自分別如上所述。在另一優(yōu)選例中，式(ii)其中，各個(gè)r3、r4、和r5各自分別如上所述。在另一優(yōu)選例中，作為式(i)所示的化合物的一部分的式(iii)中，其中，表示式(iii)與式(i)所示的化合物其余部分的連接位點(diǎn)，m和n各自分別為0；r1、r2、和r各自分別如上所述。在另一優(yōu)選例中，式(iii)其中r如上所述。在另一優(yōu)選例中，式(i)所示的化合物如式iv、iv’、iv”、或iv”’所示：其中，各個(gè)r1、r2、r3、r4、和r各自分別如上所述。在另一優(yōu)選例中，式(i)所示的化合物如式v、v’、v”、或v”’所示：其中，各個(gè)r1、r2、r3、r4、和ra各自分別如上所述。在另一優(yōu)選例中，式(i)所示的化合物如式(vi)所示：其中，r3為氫、鹵素或c1-4烷基；r4為氫、鹵素、c1-4烷基、c3-8環(huán)烷基、氰基、or9；ra選自：其中，ra1如上所述，表示ra與式(vi)所示的化合物其余部分的連接位點(diǎn)。在另一優(yōu)選例中，ra具有1-3個(gè)(優(yōu)選為1或2個(gè))ra1取代基團(tuán)，優(yōu)選地至少1個(gè)所述ra1取代基團(tuán)取代了ra中叔碳原子上的氫。在另一優(yōu)選例中，各個(gè)ra獨(dú)立地為其中a、b、c各自獨(dú)立地為0，1，2，或3；各個(gè)ra1如上所述，表示式與式(vi)所示的化合物其余部分的連接位點(diǎn)。在另一優(yōu)選例中，各個(gè)ra獨(dú)立地選自：其中，ra1如上所述。在另一優(yōu)選例中，式(i)所示的化合物如式(vii)所示：其中，r4為氫、鹵素；ra選自：其中，ra1為-or9、-n(r9)2、-nhc(o)r9、-nhc(o)nhr9、-nhs(o)2r9、或-nhs(o)2nhr9、-c(o)n(r9)2、-o(ch2)2-4or9，其中，r9為氫、c1-4烷基、c3-8環(huán)烷基、3-至8-元雜環(huán)基、芳基、雜芳基、c3-8環(huán)烷基c1-4烷基、3-至8-元雜環(huán)基c1-4烷基、芳基c1-4烷基、或雜芳基c1-4烷基；或者在n(r9)2結(jié)構(gòu)中，兩個(gè)r9與其相連的氮原子共同形成3-至8-元環(huán)，所述3-至8-元環(huán)任選地還含有0-2個(gè)獨(dú)立選自n、o或s的雜原子，且所述3-至8-元環(huán)可任選地被＝o取代；表示ra與式(vii)所示的化合物其余部分的連接位點(diǎn)。在另一優(yōu)選例中，所述的式(i)化合物具有選自下組的結(jié)構(gòu)：在另一優(yōu)選例中，所述的式(i)化合物具有選自下組的結(jié)構(gòu)：本發(fā)明的第二方面，提供了本發(fā)明第一方面所述的式(i)化合物的用途，用于：(a)制備治療與ido和/或tdo活性或表達(dá)相關(guān)的疾病的藥物；和/或(b)制備ido和/或tdo靶向抑制劑；和/或(c)體外非治療性地抑制ido和/或tdo的活性。在另一優(yōu)選例中，所述“ido和/或tdo活性或表達(dá)相關(guān)的疾病”包括腫瘤(如，肺癌、膀胱癌、乳腺癌、腎癌、胃癌、肝癌、卵巢癌、前列腺癌、宮頸癌、腸癌、上皮細(xì)胞癌、多發(fā)性骨髓瘤、胰腺癌、淋巴瘤、白血病)；感染(如病毒感染、細(xì)菌感染)；神經(jīng)系統(tǒng)疾病(如抑郁、阿爾茨海默病、多發(fā)性硬化癥、帕金森綜合癥、亨廷頓疾病等)；動(dòng)脈粥樣硬化；炎癥；疼痛等。本發(fā)明的第三方面，提供了一種藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物包括：(i)有效量的本發(fā)明第一方面所述的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽；和(ii)藥學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明的第四方面，提供了一種抑制ido和/或tdo活性的方法，所述方法包括步驟：對(duì)抑制對(duì)象施用抑制有效量的如本發(fā)明第一方面所述的式(i)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，或?qū)σ种茖?duì)象施用抑制有效量的如本發(fā)明第三方面所述的藥物組合物。本發(fā)明的第五方面，提供了一種如本發(fā)明第一方面所述的化合物的制備方法，該方法包括步驟：(a)在惰性溶劑中，化合物a1和化合物a2反應(yīng)得到化合物a3(b)在惰性溶劑中，化合物a3和化合物a4-1或化合物a4-2在堿存在的條件下反應(yīng)得到化合物a5(c)在惰性溶劑中，化合物a5和酸反應(yīng)得到化合物a6(d)用還原劑還原化合物a6得到化合物a7其中，環(huán)b、r3、r4、r5、ra分別如上所述。在另一優(yōu)選例中，ra分選自下組：其中ra1如上所述。具體實(shí)施方式本發(fā)明人經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期而深入的研究，意外地發(fā)現(xiàn)了一類具有ido1和tdo抑制活性的雜環(huán)化合物，因此可以用于制備治療與ido1和/或tdo活性或表達(dá)量相關(guān)的疾病的藥物組合物?；谏鲜霭l(fā)現(xiàn)，發(fā)明人完成了本發(fā)明。術(shù)語(yǔ)除特別說(shuō)明之處，本文中提到的“或”具有與“和/或”相同的意義(指“或”以及“和”)。除特別說(shuō)明之處，本發(fā)明的所有化合物之中，各手性碳原子(手性中心)可以任選地為r構(gòu)型或s構(gòu)型，或r構(gòu)型和s構(gòu)型的混合物。如本文所用，在單獨(dú)或作為其他取代基一部分時(shí)，術(shù)語(yǔ)“烷基”指具有1～8個(gè)碳原子的直鏈(即，無(wú)支鏈)或支鏈烷基，或其組合。所述的烷基可以是飽和的，單不飽和或多不飽和的，且可以包括二價(jià)或多價(jià)的原子團(tuán)。當(dāng)烷基前具有碳原子數(shù)限定(如c1-10)時(shí)，指所述的烷基含有1-10個(gè)碳原子，例如，c1-8烷基可以包括具有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、或類似基團(tuán)。如本文所用，在單獨(dú)或作為其他取代基一部分時(shí)，術(shù)語(yǔ)“烯基”是指直鏈或支鏈，具有至少1個(gè)碳碳雙鍵的碳鏈。具有一個(gè)雙鍵的烯基可以被表示為-cnh2n-1，具有2個(gè)雙鍵的烯基可以被表示為-cnh2n-3。當(dāng)烯基前具有碳原子數(shù)限定(如c2-8)時(shí)，指所述的烯基含有2-8個(gè)碳原子，例如，具有2-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烯基，例如乙烯基、丙烯基、1,2-丁烯基、2,3-丁烯基、丁二烯基、或類似基團(tuán)。如本文所用，在單獨(dú)或作為其他取代基一部分時(shí)，術(shù)語(yǔ)“炔基”是指具有至少一個(gè)碳碳三鍵的脂肪族碳?xì)浠鶊F(tuán)。所述的炔基可以是直鏈或支鏈的，或其組合。在一些實(shí)施例中，所述的炔基具有2-12(例如，2-8，2-6，或2-4)個(gè)碳原子。當(dāng)炔基前具有碳原子數(shù)限定(如c2-8炔基)時(shí)，指所述的炔基含有2-8個(gè)碳原子，例如，術(shù)語(yǔ)“c2-8炔基”指具有2～8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈炔基，例如乙炔基、丙炔基、異丙炔基、丁炔基、異丁炔基、仲丁炔基、叔丁炔基、或類似基團(tuán)。如本文所用，在單獨(dú)或作為其他取代基一部分時(shí)，術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”指具有飽和的或部分飽和的單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)(包括并環(huán)、橋環(huán)或螺環(huán))環(huán)系。所述的環(huán)烷基可以具有3-16個(gè)(例如，3-10個(gè)，或5-10個(gè))碳原子。當(dāng)某個(gè)環(huán)烷基前具有碳原子數(shù)限定(如c3-10)時(shí)，指所述的環(huán)烷基含有3-10個(gè)碳原子。在一些優(yōu)選實(shí)施例中，術(shù)語(yǔ)“c3-8環(huán)烷基”指具有3～8個(gè)碳原子的飽和或部分飽和的單環(huán)或二環(huán)烷基，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)庚基、或類似基團(tuán)。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，c6-12橋式二環(huán)烷基(c6-12bridgedbicycloalkyl)包括但不局限于以下基團(tuán)：如本文所用，術(shù)語(yǔ)“烷氧基”或“烷基氧基”指通過(guò)氧原子相連的烷基(例如，-o-烷基)，其中烷基如上所述。特定的烷氧基的例子例如(但并不限于)甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、或類似基團(tuán)。烷氧基可以被1個(gè)或多個(gè)取代基取代，所述的取代基例如鹵素、氨基、氰基，或羥基。烷氧基可以為直鏈或支鏈的。當(dāng)烷氧基前具有碳原子數(shù)限定(如c1-8)時(shí)，指所述的環(huán)烷基含有1-8個(gè)碳原子。如本文所用，在單獨(dú)或作為其他取代基一部分時(shí)，術(shù)語(yǔ)“鹵素”指f、cl、br和i。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“烷氧基羰基”指直鏈或支鏈的烷基-氧羰基片段(烷氧基-c＝o)。烷氧基可具有1-8個(gè)碳原子。當(dāng)烷氧基羰基前具有碳原子數(shù)限定(如c1-8)時(shí)，指所述的烷氧基羰基的烷基部分含有1-8個(gè)碳原子，例如，c1-8烷氧基羰基指具有c1-8烷氧基-c＝o-結(jié)構(gòu)的基團(tuán)，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基，或類似基團(tuán)。如本文所用，在單獨(dú)或作為其他取代基一部分時(shí)，術(shù)語(yǔ)“芳基”指單環(huán)，二環(huán)或稠環(huán)的芳香族碳?xì)浠鶊F(tuán)。所述的芳基可以是取代或未取代的。當(dāng)一個(gè)芳基前具有碳原子數(shù)限定(如c6-12)時(shí)，指所述的芳基含有6-12個(gè)碳原子。芳基的例子例如(但并不限于)：苯基、聯(lián)苯基、萘基、或類似基團(tuán)(其中的每個(gè)碳原子均可以被任意取代)。所述的芳基可以不含或包含一個(gè)或多個(gè)相同或不同的(如2、3、4個(gè))雜原子，所述雜原子可以選自n、o或s。如本文所用，在單獨(dú)或作為其他取代基一部分時(shí)，術(shù)語(yǔ)“雜芳基”指單環(huán)，二環(huán)或稠環(huán)的芳香族基團(tuán)，所述基團(tuán)具有特定的成環(huán)碳原子數(shù)(例如，c4-10即具有4-10個(gè)成環(huán)碳原子)，且包括至少一個(gè)相同或不同的選自n、o或s的雜原子。每個(gè)環(huán)上原子可以被任意取代。所述的雜芳基可以是5-至15-元的，具有1-5個(gè)各自獨(dú)立地選自n、o或s的雜原子的芳香環(huán)基。雜芳基的例子例如(但并不限于)：吡啶、嘧啶、吡咯、吲唑、吲哚、呋喃、苯并呋喃、噻吩，或類似基團(tuán)。如本文所用，在單獨(dú)或作為其他取代基一部分時(shí)，術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”指單環(huán)或稠環(huán)的飽和或部分飽和取代基，所述基團(tuán)具有特定的成環(huán)碳原子數(shù)(例如，c3-11即具有3-11個(gè)成環(huán)碳原子)，且包括至少一個(gè)相同或不同的選自n、o或s的雜原子。所述的雜環(huán)基可以是3-至15-元的，具有1-5個(gè)各自獨(dú)立地選自n、o或s的雜原子的雜環(huán)基。雜環(huán)基的例子例如(但并不限于)：氮雜環(huán)基、氧雜環(huán)基、硫雜環(huán)基、氮氧雜環(huán)基、氮硫雜環(huán)基、氧硫雜環(huán)基等，更優(yōu)選的為本申請(qǐng)各實(shí)施例中所出現(xiàn)的雜環(huán)基。本發(fā)明中，雜環(huán)基可以為單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)(包括并環(huán)、橋環(huán)或螺環(huán))。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選地實(shí)施方式中，所述6-至12-元橋式二環(huán)雜環(huán)基(bridgedbicyclicheterocyclyl)包括但不局限于以下基團(tuán)：如本文所用，術(shù)語(yǔ)“任意的”或“任選的”(例如，“被任意取代的”)指所述的部分為取代的或未取代的，且該取代僅發(fā)生與化學(xué)上可實(shí)現(xiàn)的位置。例如，h、共價(jià)鍵或-c(＝o)-基團(tuán)不可以被取代基取代。如本文所用，“氧”或“氧基”指＝o。如本文所用，除非特別說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”指適合與對(duì)象(例如，人)的組織接觸，而不會(huì)產(chǎn)生不適度的副作用的鹽。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明的某一化合物的藥學(xué)上可接受的鹽包括具有酸性基團(tuán)的本發(fā)明的化合物的鹽(例如，鉀鹽，鈉鹽，鎂鹽，鈣鹽)或具有堿性基團(tuán)的本發(fā)明的化合物的鹽(例如，硫酸鹽，鹽酸鹽，磷酸鹽，硝酸鹽，碳酸鹽)。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“取代”(在有或無(wú)“任意地”修飾時(shí))指特定的基團(tuán)上的一個(gè)或多個(gè)氫原子被特定的取代基所取代。特定的取代基為在前文中相應(yīng)描述的取代基，或各實(shí)施例中所出現(xiàn)的取代基。除非特別說(shuō)明，某個(gè)任意取代的基團(tuán)可以在該基團(tuán)的任何可取代的位點(diǎn)上具有一個(gè)選自特定組的取代基，所述的取代基在各個(gè)位置上可以是相同或不同的。環(huán)狀取代基，例如雜環(huán)烷基，可以與另一個(gè)環(huán)相連，例如環(huán)烷基，從而形成螺二環(huán)系，例如，兩個(gè)環(huán)具有一個(gè)共用碳原子。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，本發(fā)明所預(yù)期的取代基的組合是那些穩(wěn)定的或化學(xué)上可實(shí)現(xiàn)的組合。所述取代基例如(但并不限于)：c1-8烷基、c2-8烯基、c2-8炔基、c3-8環(huán)烷基、3-至12-元雜環(huán)基，芳基、雜芳基、鹵素、羥基、羧基(-cooh)、c1-8醛基、c2-10?；?、c2-10酯基、氨基。為了方便以及符合常規(guī)理解，術(shù)語(yǔ)“任意取代”或“任選取代”只適用于能夠被取代基所取代的位點(diǎn)，而不包括那些化學(xué)上不能實(shí)現(xiàn)的取代?；衔锏耐ㄓ煤铣煞椒ū颈景l(fā)明通式i所示化合物可通過(guò)如下的方法制得，然而該方法的條件，例如反應(yīng)物、溶劑、堿、所用化合物的量、反應(yīng)溫度、反應(yīng)所需時(shí)間等不限于下面的解釋。本發(fā)明化合物還可以任選將在本說(shuō)明書中描述的或本領(lǐng)域已知的各種合成方法組合起來(lái)而方便的制得，這樣的組合可由本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員容易地進(jìn)行。在本發(fā)明的制備方法中，各反應(yīng)通常在惰性溶劑中，反應(yīng)溫度-78℃～150℃(優(yōu)選20～120℃)下進(jìn)行。各步反應(yīng)時(shí)間通常為0.5～48h，較佳地為2～12h。反應(yīng)式a描述了化合物a7的通用合成方法：反應(yīng)式a：藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物、立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體如本文所用，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”指本發(fā)明化合物與藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)酸和有機(jī)酸所形成的鹽，其中，優(yōu)選的無(wú)機(jī)酸包括(但并不限于)：鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸；優(yōu)選的有機(jī)酸包括(但并不限于)：甲酸、乙酸、丙酸、丁二酸、萘二磺酸(1,5)、亞細(xì)亞酸、草酸、酒石酸、乳酸、水楊酸、苯甲酸、戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、庚二酸、己二酸、馬來(lái)酸、蘋果酸、氨基磺酸、苯丙酸、葡糖酸、抗壞血酸、煙酸、異煙酸、甲磺酸、對(duì)甲苯磺酸、檸檬酸，以及氨基酸。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的溶劑合物”指本發(fā)明化合物與藥學(xué)上可接受的溶劑形成溶劑合物，其中，所述藥學(xué)上可接受的溶劑包括(但并不限于)：水、乙醇、甲醇、異丙醇、四氫呋喃、二氯甲烷。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的立體異構(gòu)體”指本發(fā)明化合物所涉及手性碳原子可以為r構(gòu)型，也可以為s構(gòu)型，或其組合。藥物組合物和施用方法由于本發(fā)明化合物具有優(yōu)異的對(duì)ido1和tdo抑制活性，因此本發(fā)明化合物及其各種晶型，藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)或有機(jī)鹽，水合物或溶劑合物，以及含有本發(fā)明化合物為主要活性成分的藥物組合物可用于治療、預(yù)防以及緩解由與ido1和/或tdo活性或表達(dá)量相關(guān)的疾病。根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明化合物可用于治療以下疾病(但并不限于)：各種癌癥，列如肺癌、膀胱癌、乳腺癌、腎癌、胃癌、肝癌、卵巢癌、前列腺癌、宮頸癌、腸癌、上皮細(xì)胞癌、多發(fā)性骨髓瘤、胰腺癌、淋巴瘤、白血病等等；病毒引起的傳染病，如hiv，hpv，hcv等病毒引起的疾病；神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如抑郁、阿爾茨海默病、多發(fā)性硬化癥、帕金森綜合癥、亨廷頓疾病等；動(dòng)脈粥樣硬化、炎癥、疼痛等。本發(fā)明的藥物組合物包含安全有效量范圍內(nèi)的本發(fā)明化合物或其藥理上可接受的鹽及藥理上可以接受的賦形劑或載體。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明顯改善病情，而不至于產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用。通常，藥物組合物含有1-2000mg本發(fā)明化合物/劑，更佳地，含有5-200mg本發(fā)明化合物/劑。較佳地，所述的“一劑”為一個(gè)膠囊或藥片。“藥學(xué)上可以接受的載體”指的是：一種或多種相容性固體或液體填料或凝膠物質(zhì)，它們適合于人使用，而且必須有足夠的純度和足夠低的毒性。“相容性”在此指的是組合物中各組份能和本發(fā)明的化合物以及它們之間相互摻和，而不明顯降低化合物的藥效。藥學(xué)上可以接受的載體部分例子有纖維素及其衍生物(如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素鈉、纖維素乙酸酯等)、明膠、滑石、固體潤(rùn)滑劑(如硬脂酸、硬脂酸鎂)、硫酸鈣、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄欖油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化劑潤(rùn)濕劑(如十二烷基硫酸鈉)、著色劑、調(diào)味劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑、防腐劑、無(wú)熱原水等。本發(fā)明化合物或藥物組合物的施用方式?jīng)]有特別限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤內(nèi)、直腸、腸胃外(靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下)、和局部給藥。用于口服給藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、丸劑、散劑和顆粒劑。在這些固體劑型中，活性化合物與至少一種常規(guī)惰性賦形劑(或載體)混合，如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或與下述成分混合：(a)填料或增容劑，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合劑，例如，羥甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；(c)保濕劑，例如，甘油；(d)崩解劑，例如，瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些復(fù)合硅酸鹽、和碳酸鈉；(e)緩溶劑，例如石蠟；(f)吸收加速劑，例如，季胺化合物；(g)潤(rùn)濕劑，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(h)吸附劑，例如，高嶺土；和(i)潤(rùn)滑劑，例如，滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉，或其混合物。膠囊劑、片劑和丸劑中，劑型也可包含緩沖劑。固體劑型如片劑、糖丸、膠囊劑、丸劑和顆粒劑可采用包衣和殼材制備，如腸衣和其它本領(lǐng)域公知的材料。它們可包含不透明劑，并且，這種組合物中活性化合物或化合物的釋放可以延遲的方式在消化道內(nèi)的某一部分中釋放?？刹捎玫陌窠M分的實(shí)例是聚合物質(zhì)和蠟類物質(zhì)。必要時(shí)，活性化合物也可與上述賦形劑中的一種或多種形成微膠囊形式。用于口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳液、溶液、懸浮液、糖漿或酊劑。除了活性化合物外，液體劑型可包含本領(lǐng)域中常規(guī)采用的惰性稀釋劑，如水或其它溶劑，增溶劑和乳化劑，例知，乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特別是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油或這些物質(zhì)的混合物等。除了這些惰性稀釋劑外，組合物也可包含助劑，如潤(rùn)濕劑、乳化劑和懸浮劑、甜味劑、矯味劑和香料。除了活性化合物外，懸浮液可包含懸浮劑，例如，乙氧基化異十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶纖維素、甲醇鋁和瓊脂或這些物質(zhì)的混合物等。用于腸胃外注射的組合物可包含生理上可接受的無(wú)菌含水或無(wú)水溶液、分散液、懸浮液或乳液，和用于重新溶解成無(wú)菌的可注射溶液或分散液的無(wú)菌粉末。適宜的含水和非水載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑包括水、乙醇、多元醇及其適宜的混合物。用于局部給藥的本發(fā)明化合物的劑型包括軟膏劑、散劑、貼劑、噴射劑和吸入劑?；钚猿煞衷跓o(wú)菌條件下與生理上可接受的載體及任何防腐劑、緩沖劑，或必要時(shí)可能需要的推進(jìn)劑一起混合。本發(fā)明化合物可以單獨(dú)給藥，或者與其他藥學(xué)上可接受的化合物聯(lián)合給藥。使用藥物組合物時(shí)，是將安全有效量的本發(fā)明化合物適用于需要治療的哺乳動(dòng)物(如人)，其中施用時(shí)劑量為藥學(xué)上認(rèn)為的有效給藥劑量，對(duì)于60kg體重的人而言，日給藥劑量通常為1～2000mg，優(yōu)選5～500mg。當(dāng)然，具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)包括：1.提供了一種如式i所示的化合物。2.提供了一種結(jié)構(gòu)新穎的ido1和/或tdo抑制劑及其制備和應(yīng)用，所述的抑制劑在極低濃度下即可抑制ido1和/或tdo的活性。3.提供了一類治療與ido1和/或tdo活性相關(guān)疾病的藥物組合物。下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。實(shí)施例1：化合物1的制備在室溫?cái)嚢柘聦⒌饧淄?1.5g，10.57mmol)在五分鐘內(nèi)滴加到化合物1a(1.2g,7.05mmol)和碳酸鉀(1.5g,10.85mmol)在無(wú)水n,n-二甲基甲酰胺(20ml)的溶液中，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌16小時(shí)，tlc監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成，向反應(yīng)體系加入20毫升水，然后用乙酸乙酯提取三次(30mlx3)。合并有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(30ml)，并用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液減壓濃縮后得到黃色固體化合物1b(1.2g，收率92％)，無(wú)需進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。1hnmr(dmso-d6,400mhz):δ4.34(s,1h),3.55(s,3h),1.81-1.75(m,6h),1.53-1.48(m,6h)。將化合物1b(1.2g,6.51mmol)和2,6-二甲基吡啶(2.1g,19.60mmol)溶于干燥的n,n-二甲基甲酰胺(15ml)中,然后在0℃下向其中滴加叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯(5.2g,19.67mmol)，反應(yīng)體系在室溫下攪拌過(guò)夜。向體系中加入20ml水淬滅，用乙酸乙酯萃取三遍(30mlx3)。合并有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(30ml)，并用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液減壓濃縮后得到殘留物。殘留物通過(guò)硅膠柱層析分離(石油醚/乙酸乙酯＝50/1)得到黃色油狀化合物1c(1.5g，收率77％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ3.62(s,3h),1.90-1.85(m,6h),1.68-1.62(m,6h),0.82(s,9h),0.04(s,6h).將甲基膦酸二甲酯(209mg，1.68mmol)溶于無(wú)水四氫呋喃(6ml)中并冷卻至-78℃，向其中緩慢滴加正丁基鋰(2.5m正己烷溶液,0.84ml，2.10mmol)，反應(yīng)體系在-78℃攪拌40分鐘。然后將化合物1c(250mg，0.84mmol)的無(wú)水四氫呋喃溶液(1.0ml)緩慢滴加至上述反應(yīng)體系中，在-78℃攪拌反應(yīng)2小時(shí)。將反應(yīng)體系緩慢加入到冰的氯化銨水溶液中(10ml)，用乙酸乙酯萃取三遍(20mlx3)，合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(20ml)，并用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液減壓濃縮后得到黃色油狀化合物1d(300mg，收率92％),無(wú)需進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ3.79(s,3h),3.77(s,3h),3.14(s,1h),3.08(s,1h),1.87-1.81(m,6h),1.71-1.65(m,6h),0.83(s,9h),0.04(s,6h).將氫化鈉(60％,62mg，1.55mmol)加入到冰浴冷卻的化合物1d(300mg，0.77mmol)的無(wú)水四氫呋喃(6ml)中，反應(yīng)體系室溫下攪拌20分鐘后，再次將反應(yīng)體系置于冰水浴中冷至0℃,將化合物1e(332mg,0.77mmol)緩慢(5分鐘內(nèi))加入到反應(yīng)體系中,該反應(yīng)體系在室溫下攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)體系緩慢加入到冰的氯化銨水溶液中(20ml)，用乙酸乙酯萃取三遍(25mlx3)，合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(20ml)，并用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液減壓濃縮后得到殘留物。殘留物通過(guò)硅膠柱層析分離(石油醚/乙酸乙酯＝8/1)得到黃色固體化合物1f(400mg，收率74％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.72(d,j＝12.0hz,1h),7.57(d,j＝8.0hz,1h),7.50(s,1h),7.39-7.26(m,10h),7.20-7.16(m,6h),7.10-6.97(m,2h),6.88(s,1h).1.84-1.78(m,6h),1.71-1.65(m,6h),0.83(s,9h),0.06(s,6h)。將化合物1f(400mg,0.57mmol)溶于甲醇/乙酸(10ml/2.5ml)中，然后反應(yīng)體系加熱至60℃攪拌反應(yīng)2小時(shí)。lcms監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢，將該反應(yīng)體系減壓濃縮，向其中加入碳酸鈉水溶液(30ml)，用乙酸乙酯萃取三遍(30mlx3)。合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(30ml)，并用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液減壓濃縮后得到殘留物。殘留物通過(guò)硅膠柱層析分離(石油醚/乙酸乙酯＝8/1)得到黃色固體化合物1g(220mg，收率84％)。ms455.2[m+h]+.將化合物1g(172mg，0.375mmol)溶于二氯甲烷/三氟乙酸(4ml/1ml)中，該反應(yīng)體系在室溫下攪拌反應(yīng)16小時(shí)。反應(yīng)體系減壓濃縮，然后向其中加入飽和碳酸鈉水溶液(20ml)，用乙酸乙酯萃取三遍(20mlx3)。合并有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(20ml)，無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濃縮后得到的殘留物。殘留物用制備薄板層析(ch2cl2/meoh＝15/1)純化得到黃色固體化合物1h(75mg，收率59％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.55(s,1h),7.40-7.28(m,2h),7.18(s,1h),6.94(dd,j＝9.2hz,8.4hz,1h),5.74(d,j＝9.6hz,1h),3.49(s,1h),3.43(dd,j＝18.8hz,2.0hz,1h),2.80(dd,j＝18.4hz,10.4hz,1h),1.91-1.82(m,6h),1.72-1.66(m,6h)；ms341.2[m+h]+.將硼氫化鈉(16mg，0.423mmol)攪拌下加入到冰浴冷卻的化合物1h(46mg，0.135mmol)的甲醇(3ml)溶液中，然后該反應(yīng)混合物在冰浴冷卻下繼續(xù)攪拌反應(yīng)8分鐘。然后反應(yīng)液用冰冷的飽和氯化銨溶液淬滅(10ml)，乙酸乙酯萃取三次(10mlx3)。合并有機(jī)相用飽和食鹽水(10ml)洗滌、無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液濃縮后的粗品通過(guò)用制備薄板層析(ch2cl2:meoh＝10:1)純化得到白色固體化合物1(34mg，收率73％)。1hnmr(非對(duì)映體異構(gòu)體的混合物，dmso-d6,400mhz):δ7.97and7.95(twos,1h),7.47-7.37(m,2h),7.21and7.17(twos,1h),7.13-7.04(m,1h),5.63-5.57and5.55-5.50(twom,1h),4.95and4.51(twod,j＝6.4hz,6.4hz,1h),4.17(s,1h),3.18-3.08(m,1h),2.35-2.20(m,1h),1.83-1.73(m,1h),1.50-1.31(m,12h)；ms343.2[m+h]+。化合物1的四個(gè)對(duì)映異構(gòu)體1-1，1-2，1-3和1-4經(jīng)waters手性制備色譜sfc-80進(jìn)行拆分而得。手性制備柱條件：chiralceloj柱,daicel,30x250mm,5μm；流動(dòng)相:溶劑a是二氧化碳,共溶劑是b15％乙醇含0.1％dea；檢測(cè)波長(zhǎng):272nm；柱溫:35℃。手性分析柱條件：chiralceloj柱,daicel，4.6x100mm，3μm；流動(dòng)相:溶劑a是二氧化碳,共溶劑b是20％乙醇含0.1％dea；檢測(cè)波長(zhǎng):273nm；柱溫:35℃?；衔?-1:1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.82(s,1h),7.38-7.29(m,2h),7.20(s,1h),6.95-6.90(m,1h),5.61(d,j＝8.8hz,1h),3.53(d,j＝10.8hz,1h),2.43-2.33(m,1h),2.10-1.97(m,1h),1.74-1.45(m,12h)；ms343.2[m+h]+；rt＝2.16min.化合物1-2:1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.83(s,1h),7.37-7.29(m,2h),7.18(s,1h),6.96-6.90(m,1h),5.44(t,j＝4.8hz,1h),3.41(d,j＝10.4hz,1h),2.35-2.27(m,1h),2.06-1.97(m,1h),1.74-1.43(m,12h)；ms343.2[m+h]+；rt＝2.89min.化合物1-3:1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.86(s,1h),7.39-7.29(m,2h),7.18(s,1h),6.95-6.90(m,1h),5.44(t,j＝4.8hz,1h),3.42(d,j＝9.6hz,1h),2.35-2.27(m,1h),2.06-1.97(m,1h),1.76-1.43(m,12h)；ms343.2[m+h]+；rt＝3.31min.化合物1-4:1hnmr(cdcl3,400mhz):δ7.82(s,1h),7.39-7.30(m,2h),7.20(s,1h),6.94(dd,j＝9.2hz,8.4hz,1h),5.61(d,j＝8.4hz,1h),3.53(d,j＝10.8hz,1h),2.43-2.33(m,1h),2.10-1.97(m,1h),1.73-1.46(m,12h)；ms343.2[m+h]+；rt＝4.46min.實(shí)施例2：化合物2的制備將甲基磷酸二甲酯(811mg，6.54mmol)溶于無(wú)水四氫呋喃中(5ml)，然后冷卻至-78℃，在攪拌的狀態(tài)下向反應(yīng)液中緩慢滴加n-buli(2.5m正己烷溶液，2.62ml，6.54mmol)。該反應(yīng)液在-78℃攪拌反應(yīng)1小時(shí)后，在保持-78℃和攪拌的狀態(tài)下向反應(yīng)體系中滴加2a(300mg，1.64mmol)的無(wú)水四氫呋喃(2ml)溶液。該反應(yīng)液在-78℃攪拌反應(yīng)3小時(shí)，lcms檢測(cè)反應(yīng)完畢，加入飽和氯化銨水溶液(5ml)淬滅，再將反應(yīng)液用2mhcl調(diào)至ph＝1，加入乙酸乙酯(20ml)攪拌、分液。水相用飽和碳酸鈉水溶液調(diào)至ph＝9-10，加入二氯甲烷(10mlx4)萃取四次。合并后的有機(jī)相用飽和食鹽水(5ml)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液減壓濃縮后得到淺黃色淺黃色油狀物2b(220mg，收率49％)，無(wú)需進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。1hnmr(dmso-d6，400mhz,):δ3.80(s,3h),3.77(s,3h),3.15(s,1h),3.10(s,1h),1.85-1.53(m,14h)；ms276.3[m+h]+。將氫化鈉(60％,116mg，2.91mmol)加入到冰浴冷卻的化合物2b(200mg，0.73mmol)的無(wú)水四氫呋喃(5ml)中，反應(yīng)體系0℃下攪拌反應(yīng)1小時(shí)后，將化合物1e(315mg,0.73mmol)緩慢加入到反應(yīng)體系中。該反應(yīng)體系在室溫下攪拌3小時(shí)。將反應(yīng)體系緩慢加入到冰的飽和氯化銨溶液中(10ml)，用乙酸乙酯萃取三遍(25mlx3)。合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(20ml)，并用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液減壓濃縮后的粗品通過(guò)硅膠柱層析(二氯甲烷/甲醇＝5/1混合溶劑淋洗)分離純化得到的淺黃色固體化合物2c(90mg，收率21％)。582.3[m+h]+。將化合物2c(90mg，0.15mmol)溶于甲醇/乙酸(4ml/1ml)中，然后該反應(yīng)液加熱至60℃攪拌反應(yīng)2小時(shí)。lcms監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢，將該反應(yīng)液減壓濃縮，向其中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(5ml)，用乙酸乙酯萃取三遍(10mlx3)。合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(10ml)，并用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液減壓濃縮后得到殘留物。殘留物通過(guò)用制備薄板層析(ch2cl2:meoh＝5:1)純化得到淺黃色固體化合物2d(33mg，收率63％)。ms340.2[m+h]+。將化合物2d(30mg，0.088mmol)溶于甲醇(1ml)中，然后在0℃攪拌的狀態(tài)下，向該溶液中加入硼氫化鈉(17mg，0.45mmol)。該反應(yīng)液在0℃下攪拌反應(yīng)15分鐘。lcms監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液用飽和氯化銨水溶液(3ml)淬滅后直接旋干，固體用適量的甲醇打漿、過(guò)濾，濾液濃縮得到淺黃色固體產(chǎn)物2(30mg，產(chǎn)率99％)。ms342.2[m+h]+。實(shí)施例3：化合物3的制備將化合物2(27mg，0.079mmol)，磺酰胺(51mg，0.53mmol)和二異丙基乙胺(68mg，0.53mmol)溶于1,4-二氧六環(huán)(1ml)中。該反應(yīng)液在100℃下攪拌反應(yīng)6小時(shí)后減壓濃縮得到殘留物，通過(guò)制備薄板層析(石油醚/乙酸乙酯＝7/1)純化得到白色固體化合物3(2.74mg，收率8.2％)。1hnmr(非對(duì)映體異構(gòu)體的混合物，dmso-d6,400mhz):δ7.93and7.91(twos,1h),7.46-7.37(m,2h),7.19and7.14(twos,1h),7.12-7.03(m,1h),6.39(s,2h),6.23(s,1h),5.62-5.57and5.55-5.51(twom,1h),4.96and4.51(twod,j＝6.4hz,6.4hz,1h),3.15-3.04(m,1h),2.34-2.20(m,1h),1.83-1.65(m,7h),1.46-1.28(m,6h)；ms421.2[m+h]+。實(shí)施例4：化合物4的制備將化合物2b(110mg，0.40mmol)和三乙胺(121mg，1.20mmol)加入二氯甲烷(5ml)中，然后在室溫?cái)嚢璧臓顟B(tài)下加入mscl(69mg，0.60mmol)。該反應(yīng)體系在室溫下攪拌反應(yīng)16小時(shí)后，向反應(yīng)體系中加入二氯甲烷(15ml)和飽和食鹽水(10ml)，攪拌后分離出有機(jī)相，有機(jī)相用飽和食鹽水(5ml)洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液減壓濃縮后得到淺黃色淺黃色油狀物4a(63mg，收率45％)，無(wú)需進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。ms354.2[m+h]+。將氫化鈉(60％,36mg，0.89mmol)加入到冰浴冷卻的化合物4a(63mg，0.18mmol)的無(wú)水四氫呋喃(5ml)中，反應(yīng)體系室溫下攪拌60分鐘后，再次將反應(yīng)體系置于冰水浴中冷至0℃,將化合物1e(77mg，0.18mmol)加入到反應(yīng)體系中。反應(yīng)體系在室溫下攪拌3小時(shí)，將反應(yīng)體系緩慢加入到冰的飽和氯化銨溶液中(10ml)，用乙酸乙酯萃取三遍(10mlx3)。合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(10ml)，并用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液減壓濃縮后得到殘留物。殘留物通過(guò)制備薄板層析(石油醚/乙酸乙酯＝3/2)純化得到淺黃色固體化合物4b(15mg，收率13％)。1hnmr(dmso-d6,400mhz,):δ7.61-7.54(m,3h),7.45-7.36(m,10h),7.24-7.05(m,8h),6.96(s,1h),6.90(s,1h),2.93(s,3h),1.83-1.64(m,12h)。將化合物4b(15mg，0.02mmol)溶于甲醇/乙酸(4ml/1ml)中，然后該反應(yīng)液加熱至60℃攪拌反應(yīng)1小時(shí)。lcms監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢，將該反應(yīng)液減壓濃縮，向其中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)，用乙酸乙酯萃取三遍(10mlx3)。合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(10ml)，并用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液減壓濃縮后得到殘留物。殘留物通過(guò)制備薄板層析(乙酸乙酯)純化得到淺黃色固體化合物4c(7.5mg，收率79％)。ms418.2[m+h]+.將硼氫化鈉(3.4mg，0.09mmol)攪拌下加入到冰浴冷卻的化合物4c(7.5mg，0.02mmol)的甲醇(3ml)溶液中，反應(yīng)混合物在冰浴冷卻下繼續(xù)攪拌反應(yīng)15分鐘。然后用冰冷的飽和氯化銨溶液淬滅(5ml)后直接旋干，固體用適量的甲醇打漿、過(guò)濾，濾液減壓濃縮，粗品經(jīng)過(guò)制備博板層析(二氯甲烷/甲醇＝5/1)分離純化，得到白色固體化合物4(6.51mg，收率86％)。1hnmr(非對(duì)映體異構(gòu)體的混合物，dmso-d6,400mhz):δ7.93and7.91(twos,1h),7.46-7.37(m,2h),7.19and7.15(twos,1h),7.12-7.03(m,1h),6.75(s,1h),5.63-5.57and5.55-5.50(twom,1h),5.00and4.56(twod,j＝6.4hz,6.4hz,1h),3.17-3.08(m,1h),2.89(s,3h),2.35-2.20(m,1h),1.83-1.75(m,1h),1.75-1.65(m,6h),1.49-1.31(m,6h)；ms420.2[m+h]+.實(shí)施例5：化合物5的制備將4-碘-5-甲基-咪唑(1.0g，4.80mmol)和n,n-二異丙基乙胺(1.2g，9.29mmol)溶于干燥的n,n-二甲基甲酰胺(20ml)中，在攪拌狀態(tài)下向反應(yīng)液中加入三苯基氯甲烷(1.4g，5.02mmol),反應(yīng)體系在室溫下攪拌反應(yīng)16小時(shí)。將反應(yīng)溶液倒入水(40ml)中，攪拌、固體析出,抽濾，固體用水和乙醚分別洗滌兩遍,將固體真空干燥得到白色固體化合物5b(1.3g，收率60％)。該化合物無(wú)需進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。將化合物5b(1.2g，2.67mmol),化合物5c(500mg，2.94mmol)和七水磷酸鉀(1.8g，5.32mmol)溶于1,4-二氧六環(huán)/水(12ml/2ml)混合溶劑中，再加入pd(pph3)4(154mg，0.134mmol)。反應(yīng)體系用氬氣置換3次，將反應(yīng)體系加熱到90℃攪拌5小時(shí)。反應(yīng)液冷卻至室溫,然后將其倒入水(20ml)中，用乙酸乙酯萃取三遍(20mlx3)。合并的有機(jī)層用飽和食鹽水洗滌，然后無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮后得到的粗品通過(guò)柱層析分離(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)純化得到黃色固體化合物5d(440mg，收率37％)。1hnmr(dmso-d6,400mhz,):δ9.84(s,1h),7.67-7.61(m,1h),7.50-7.39(m,9h),7.30-7.25(m,3h),7.19-7.12(m,6h),1.46(s,3h).將化合物1d(150mg，0.385mmol)溶于無(wú)水四氫呋喃(5ml)中，將體系置于冰水浴中冷至0℃,向體系中加入氫化鈉(60％,46mg，1.15mmol),室溫下攪拌30分鐘。再次將反應(yīng)體系置于冰水浴中冷至0℃,將化合物5d(172mg，0.386mmol)分三批加入到反應(yīng)體系中。反應(yīng)體系在室溫下攪拌2小時(shí)后，將反應(yīng)體系緩慢倒入到飽和氯化銨溶液中(20ml),用乙酸乙酯萃取三遍(20mlx3)。合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(20ml)，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮后得到黃色固體化合物5e。該化合物沒有進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。將上述所得的化合物5e溶于甲醇/乙酸(4ml/1ml)中，然后該反應(yīng)液加熱至60℃攪拌反應(yīng)2小時(shí)。lcms監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢，將該反應(yīng)液減壓濃縮，向其中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)，用乙酸乙酯萃取三遍(10mlx3)。合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(10ml)，然后無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮后得到的粗品通過(guò)制備層析薄板(石油醚/乙酸乙酯＝2/1混合溶劑淋洗)純化得到黃色固體化合物5f(48mg，兩步收率27％)。ms469.3[m+h]+。將化合物5f(48mg，0.103mmol)溶于二氯甲烷/三氟乙酸(2ml/0.5ml)中，該反應(yīng)體系在室溫下攪拌反應(yīng)5小時(shí)。tlc監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢，將該反應(yīng)液減壓濃縮，向其中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)，用乙酸乙酯萃取三遍(10mlx3)。合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(10ml)，然后無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮后得到的粗品通過(guò)制備層析薄板(二氯甲烷/甲醇＝25/1)純化得到黃色固體化合物5g(35mg，收率96％)。ms355.2[m+h]+。將化合物5g(34mg，0.096mmol)溶于甲醇(1ml)中，然后在0℃攪拌狀態(tài)下加入硼氫化鈉(11mg，0.289mmol)。該反應(yīng)體系在0℃下攪拌反應(yīng)10分鐘。tlc監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液用飽和氯化銨水溶液(5ml)淬滅，用乙酸乙酯萃取三遍(5mlx3)。合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌，然后無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮后得到的粗品通過(guò)制備層析薄板(二氯甲烷/甲醇＝15/1)純化得到白色固體化合物5(32mg，收率94％)。1hnmr(非對(duì)映體異構(gòu)體的混合物，dmso-d6,400mhz):δ7.78(s,1h),7.45-7.35(m,2h),7.08-6.97(m,1h),5.55-5.51and5.50-5.41(twom,1h),4.92and4.48(twod,j＝6.4hz,6.4hz,1h),4.15(s,1h),3.16-3.07(m,1h),2.33(s,3h),2.28-2.17(m,1h),1.79-1.69(m,1h),1.50-1.31(m,12h)；ms357.2[m+h]+。實(shí)施例6：化合物6的制備將化合物6a(1.5g，6.25mmol)溶于甲醇/水(15ml/3ml)中,然后向其中加入氫氧化鉀(350mg，6.24mmol),反應(yīng)體系在室溫下攪拌反應(yīng)過(guò)夜。反應(yīng)體系減壓濃縮除去甲醇，加入水(15ml)，用乙酸乙酯萃取兩遍(15mlx2)。水層用稀鹽酸中和至ph為3，然后用乙酸乙酯萃取三遍(15mlx3)。合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(20ml)，然后無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮后得到黃色固體化合物6b(1.0g，收率71％)。該化合物無(wú)需進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。1hnmr(dmso-d6,400mhz):δ12.04(s,1h),3.57(m,3h),1.83-1.62(m,14h)。將化合物6b(1.5g，6.25mmol)溶于丙酮(12ml)中,然后向其中加入1n氫氧化鈉(4.42ml，4.42mmol)水溶液,反應(yīng)體系在室溫下攪拌10分鐘,然后將硝酸銀(790mg，4.65mmol)水溶液緩慢滴加至反應(yīng)體系中。反應(yīng)體系在室溫下攪拌20分鐘，抽濾，固體用水、丙酮、乙醚依次洗滌，將固體真空干燥得到白色固體化合物6c(1.2g，收率75％)。將化合物6c(1.2g，3.60mmol)分散于石油醚(12ml)中,然后將溴素(596mg，3.73mmol)緩慢滴加至體系中，在室溫下攪拌20分鐘，然后加熱至80℃攪拌反應(yīng)30分鐘。將反應(yīng)體系過(guò)濾，用石油醚洗滌固體，合并濾液，濾液用1n氫氧化鈉溶液洗滌(10ml)，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮后得到黃色油狀化合物6d(225mg，收率24％)。該化合物沒有進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。1hnmr(dmso-d6,400mhz):δ3.58(s,3h),2.44-2.37(m,6h),1.98-1.60(m,8h)；ms261.0[m+h]+,263.0[m+h]+。將化合物6d(225mg，0.86mmol)溶于1％的氫氧化鈉(23ml)中,反應(yīng)體系加熱至100℃攪拌16小時(shí)。將反應(yīng)液冷卻到室溫，用稀鹽酸中和至體系ph值為3，用乙酸乙酯萃取七遍(20mlx7)。合并的有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮后得到黃色固體化合物6e(144mg，收率90％)。該化合物無(wú)需進(jìn)一步純化，直接用于下一步反應(yīng)。1hnmr(dmso-d6,400mhz):δ11.96(s,1h),4.21(s,1h),1.82-1.45(m,14h).將化合物6e(140mg，0.76mmol)和碳酸鉀(157mg，1.14mmol)溶于干燥的n,n-二甲基甲酰胺(2ml)中,然后向其中滴加碘甲烷(324mg，2.25mmol)，反應(yīng)體系在室溫下攪拌16小時(shí)。向體系中加入10ml水淬滅反應(yīng)，用乙酸乙酯萃取三遍(10mlx3)。合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(10ml)，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮后得到的粗品通過(guò)柱層析分離(石油醚/乙酸乙酯＝3/1混合溶劑淋洗)純化得到黃色固體化合物6f(139mg，收率92％)。1hnmr(dmso-d6,400mhz):δ4.22(s,1h),3.56(s,3h),1.83-1.50(m,14h)；ms199.2[m+h]+。將化合物6f(137mg，0.69mmol)和2,6-二甲基吡啶(227mg，2.12mmol)溶于干燥的n,n-二甲基甲酰胺(2ml)中,然后在0℃下向其中滴加叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯(559mg，2.12mmol)，反應(yīng)體系在室溫下攪拌過(guò)夜。向體系中加入10ml水淬滅，用乙酸乙酯萃取三遍(10mlx3)。合并有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(10ml)，并用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液減壓濃縮后得到殘留物。殘留物通過(guò)柱層析分離(石油醚/乙酸乙酯＝50/1混合溶劑淋洗)純化得到黃色固體化合物6g(60mg，收率28％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ3.65(s,3h),1.93-1.60(m,14h),0.83(s,9h),0.07(s,6h)。將甲基膦酸二甲酯(72mg，0.58mmol)溶于無(wú)水四氫呋喃(1.5ml)中并冷卻至-78℃，向其中緩慢滴加正丁基鋰(2.5m正己烷溶液,0.31ml，0.78mmol)，反應(yīng)體系在-78℃攪拌30分鐘。然后將化合物6g(60mg，0.19mmol)的無(wú)水四氫呋喃溶液(0.3ml)緩慢滴加至上述反應(yīng)體系中，在-78℃攪拌反應(yīng)2小時(shí)。將反應(yīng)體系緩慢加入到冰的飽和氯化銨溶液中(10ml)，用乙酸乙酯萃取三遍(10mlx3)，合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(10ml)，并用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液濃縮后得到的粗品通過(guò)柱層析分離(乙酸乙酯淋洗)純化得到黃色固體化合物6h(60mg，收率77％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ3.80-3.76(m,6h),3.13(s,1h),3.07(s,1h),1.91-1.58(m,14h),0.84and0.83(twos,9h),0.07and0.05(twos,6h)；ms405.2[m+h]+。將氫化鈉(60％,17mg，0.43mmol)加入到冰浴冷卻的化合物6h(60mg，0.14mmol)的無(wú)水四氫呋喃(1.5ml)中，反應(yīng)體系室溫下攪拌30分鐘后，再次將反應(yīng)體系置于冰水浴中冷至0℃,將化合物1e(78mg，0.18mmol)緩慢加入到反應(yīng)體系中,該反應(yīng)體系在室溫下攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)體系緩慢加入到冰的飽和氯化銨溶液中(10ml)，用乙酸乙酯萃取三遍(10mlx3)，合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(10ml)，并用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾，濾液減壓濃縮后得到殘留物。殘留物通過(guò)制備層析薄板(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)純化得到黃色固體化合物6i(20mg，收率20％)。將化合物6i(20mg,0.028mmol)溶于甲醇/乙酸(2ml/0.5ml)中，然后該反應(yīng)液加熱至60℃攪拌反應(yīng)2小時(shí)。lcms監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液減壓濃縮，向其中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)，用乙酸乙酯萃取三遍(10mlx3)。合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(10ml)，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮后得到的粗品通過(guò)制備層析薄板(二氯甲烷/甲醇＝30/1)純化得到黃色固體化合物6j(10mg，收率76％)。ms469.3[m+h]+。將化合物6j(10mg，0.021mmol)溶于二氯甲烷/三氟乙酸(1ml/0.25ml)中，反應(yīng)體系在室溫下攪拌反應(yīng)5小時(shí)。tlc監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢，將該反應(yīng)液濃縮，向其中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(5ml)，用乙酸乙酯萃取三遍(10mlx3)。將合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(10ml)，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液濃縮后得到的粗品通過(guò)制備層析薄板(二氯甲烷/甲醇＝20/1)純化得到黃色固體化合物6k(6mg，收率79％)。ms355.2[m+h]+。將化合物6k(6mg，0.017mmol)溶于甲醇(0.5ml)中，然后在0℃攪拌狀態(tài)下，向該體系中加入硼氫化鈉(2mg，0.053mmol)。該反應(yīng)液在0℃下攪拌反應(yīng)10分鐘。tlc監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液用飽和氯化銨水溶液(5ml)淬滅，用乙酸乙酯萃取三遍(5mlx3)。將合并的有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(5ml)，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮后得到的粗品通過(guò)制備層析薄板(二氯甲烷/甲醇＝12/1)純化得到白色固體化合物6(5.3mg，收率88％)。1hnmr(非對(duì)映體異構(gòu)體的混合物，dmso-d6,400mhz):δ7.93(s,1h),7.48-7.36(m,2h),7.19and7.16(twos,1h),7.11-7.02(m,1h),5.62-5.55and5.53-5.49(twom,1h),5.04and4.64(twod,j＝6.0hz,6.0hz,1h),4.06(s,1h),3.11-3.04(m,1h),2.33-2.22(m,1h),1.83-1.72(m,1h),1.68-1.27(m,14h)；ms357.2[m+h]+。實(shí)施例7：化合物7的制備化合物7采用類似于化合物1的制備方法而得。1hnmr(非對(duì)映體異構(gòu)體的混合物，dmso-d6,400mhz):δ7.95and7.91(twos,1h),7.46-7.38(m,2h),7.19and7.16(twos,1h),7.14-7.04(m,1h),5.67-5.61and5.60-5.55(twom,1h),5.04-4.99and4.59-4.55(twom,1h),4.47-4.43and4.22-4.18(twom,1h),3.77-3.73and3.31-3.20(twom,1h),3.61-3.52and3.42-3.34(twom,1h),2.37-2.22(m,1h),1.93-1.74(m,3h),1.67-0.94(m,7h)；ms317.2[m+h]+。實(shí)施例8：化合物8的制備化合物8采用類似于化合物1的制備方法而得。1hnmr(非對(duì)映體異構(gòu)體的混合物,dmso-d6,400mhz):δ7.95(s,1h),7.44-7.38(m,2h),7.15(s,1h),7.10-7.04(m,1h),5.55(t,j＝4.8hz,1h),4.54(d,j＝6.4hz,1h),3.04-2.98(m,,1h),2.38-2.31(m,1h),1.91(s,3h),1.87-1.77(m,1h),1.68-1.40(m,12h)；ms353.2[m+h]+.實(shí)施例9:ido1蛋白酶學(xué)實(shí)驗(yàn)方法ido1的體外酶學(xué)實(shí)驗(yàn)是在以下反應(yīng)體系中進(jìn)行：50mm，ph6.5的mes緩沖液，200nm人源ido1蛋白酶，150um的l-色氨酸，2250units/ml過(guò)氧化氫酶，20mm的維生素c和和10um亞甲基藍(lán)。將待測(cè)化合物用100％dmso配制成10mm的儲(chǔ)存液，再使用mes緩沖液將其配制成所需濃度。取25ul稀釋完畢的化合物加入96孔板中，而后加入25ul33.68ng/ul的ido1蛋白，離心1min混勻后室溫孵育30min?；衔锓跤?，向反應(yīng)體系中加入50ul的50mm，ph6.5的mes緩沖液配制的300uml-色氨酸，4500unites/ml的過(guò)氧化氫酶，20um亞甲基藍(lán)和40mm的維生素c。25℃下反應(yīng)40min。用50ul30％(w/v)的三氯乙酸終止反應(yīng)并于60℃下孵育30min，而后2000rpm離心5min，取上清與等量的2％的4-(二甲基氨基)苯甲醛(溶解于乙酸中)，室溫孵育10min后于490nm處測(cè)定od值?；衔锏囊种瓢俜直韧ㄟ^(guò)以下公式計(jì)算：化合物的抑制百分比＝100-(samplesignal-lowcontrol)/(highcontrol-lowcontrol)×100。其中highcontrol為不添加化合物組，lowcontrol為不添加酶也不添加化合物組，其他同樣本相同?；衔飅c50值數(shù)據(jù)應(yīng)用xlfit4.3.1統(tǒng)計(jì)軟件分析，通過(guò)抑制率百分比數(shù)據(jù)相對(duì)于化合物濃度的非線性回歸擬合曲線。代表性化合物的活性如表1所示。ic50值：a:1-50nm；b:51-100nm；c:101-500nm；d:>501nm。表1ido1活性抑制化合物ido1抑制ic50值130nm1-1d1-2a1-3d1-4b3a4a622nm7204nm891nm實(shí)施例10:hek293t細(xì)胞中檢測(cè)抑制ido1活性的實(shí)驗(yàn)方法將5x106的hek293t細(xì)胞分別種到2個(gè)t75的培養(yǎng)瓶里置于37℃,5％co2的培養(yǎng)箱內(nèi)孵育過(guò)夜。將0.6ul含有1.5ughido1質(zhì)粒與300ul的opti-mem制成混和液a；18ul的脂質(zhì)體fugene6與300ul的opti-mem制成混和液b，并在室溫下放置5分鐘?；煲篴和混液b混勻，在室溫下放置20分鐘后，加到種有hek293t的培養(yǎng)瓶里，另外一瓶作為對(duì)照，置于37℃,5％co2的培養(yǎng)箱內(nèi)孵育過(guò)夜。將已瞬時(shí)轉(zhuǎn)染hido1的hek293t以20000細(xì)胞每孔的密度種于96孔板，每孔80ul。加入10ul10倍的色氨酸于細(xì)胞中，陰性對(duì)照孔不加色氨酸。使用完全培養(yǎng)基配制成10倍的化合物溶液(dmso濃度為2％)，加入10ul的化合物溶液于細(xì)胞中。細(xì)胞板置于37℃,5％co2的培養(yǎng)箱內(nèi)孵育16小時(shí)。將80ul上清轉(zhuǎn)到另外一個(gè)96孔板，加入10ul的6.1n三氟乙酸,50℃孵育30分鐘。2800rpm離心10分鐘，轉(zhuǎn)移70ul上清至一96孔u(yù)v板中。加入70ul2％(w/v)對(duì)二甲胺苯基甲醛?；靹蚝鬁y(cè)量480nm處的吸光值。細(xì)胞板中加入100ulctg試劑，混勻15分鐘后檢測(cè)化學(xué)發(fā)光值。代表性化合物的活性如表2所示。ic50值：a:≤120nm；b:121-400nm；c:401-1000nm；d:>1000nm。表2hek293t細(xì)胞活性抑制實(shí)施例11:tdo2蛋白酶學(xué)實(shí)驗(yàn)方法tdo2的體外酶學(xué)實(shí)驗(yàn)是在以下反應(yīng)體系中進(jìn)行：50mm，ph6.5的磷酸鉀緩沖液，200nm人源tdo2蛋白酶，300um的l-色氨酸，0.2mg/ml過(guò)氧化氫酶，20mm的維生素c和20um亞甲基藍(lán)。將待測(cè)100x的化合物用100％dmso配制成1mm的起始液，然后三倍稀釋，共配制8個(gè)濃度。取2ul稀釋完畢的化合物加入96孔板中，隨后在每個(gè)孔中加入100μl400nmtdo2和0.4mg/ml過(guò)氧化氫酶。離心1min混勻后室溫孵育10min。化合物孵育后，向反應(yīng)體系中加入50mm，ph6.5的磷酸鉀緩沖液配制的100ul600uml-色氨酸，40um亞甲基藍(lán)和40mm的維生素c。反應(yīng)液混勻30秒后立即在spectramax384儀器上實(shí)時(shí)讀取od321的數(shù)據(jù)，常溫下讀數(shù)時(shí)長(zhǎng)為20分鐘。從軟件上導(dǎo)出斜率的數(shù)據(jù)，再根據(jù)斜率轉(zhuǎn)換成化合物的抑制率。抑制率＝(最大值-孔值)/(最大值-最小值)*100.最大值是指有酶有底物的孔值，最小值為沒有酶僅有底物的孔值。將化合物濃度和抑制率代入公式，用graphpadprism5.0軟件擬合化合物的ic50值，具體公式為：y＝bottom+(top-bottom)/(1+10^((logic50-x)*hillslope).代表性化合物的活性如表3所示。ic50值：a:1-50nm；b:51-100nm；c:101-500nm；d:>501nm。表3tdo2活性抑制compoundtdo2抑制ic50值1c當(dāng)前第1頁(yè)12