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      一種產(chǎn)堿性果膠酶的重組菌及其應(yīng)用的制作方法

      文檔序號:11126068閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.一種堿性果膠酶基因,其特征在于,核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

      2.權(quán)利要求1所述基因編碼的堿性果膠酶。

      3.含有權(quán)利要求1所述基因的載體或細(xì)胞系。

      4.一株畢赤酵母基因工程菌,其特征在于,以pPIC9K為載體,表達(dá)SEQ ID NO.1所示的堿性果膠酶基因。

      5.權(quán)利要求4所述基因工程菌的構(gòu)建方法,其特征在于,將核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的堿性果膠酶基因與表達(dá)載體pPIC9K連接,轉(zhuǎn)化至畢赤酵母中。

      6.一種生產(chǎn)堿性果膠酶的方法,其特征在于,將權(quán)利要求4所述的基因工程菌接種至BMGY培養(yǎng)基中,發(fā)酵生產(chǎn)堿性果膠酶。

      7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,所述方法是先將基因工程菌接種至BMGY培養(yǎng)基中培養(yǎng)16~24h后再轉(zhuǎn)接至含有占培養(yǎng)基體積7-10%的甲醇的BMMY培養(yǎng)基中,于22-28℃、200~220rpm下誘導(dǎo),誘導(dǎo)過程中每24h添加終濃度為10-20mL/L發(fā)酵液的甲醇。

      8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法,其特征在于,是將權(quán)利要求4所述基因工程菌在液體培養(yǎng)基中活化,將活化后的菌液以10~15mL菌液/100mL培養(yǎng)基的接種量接種于裝液量500~1000mL發(fā)酵培養(yǎng)基的3L發(fā)酵罐中,初始攪拌轉(zhuǎn)速為500~550r/min,通氣量為1.5~2vvm,控制pH 5.5-6.0,生長期培養(yǎng)溫度為28-30℃;當(dāng)甘油耗盡溶氧反彈時以指數(shù)流加方式補(bǔ)加甘油,待甘油再次耗盡溶氧反彈時,饑餓培養(yǎng)1~2h,再流加誘導(dǎo)培養(yǎng)基,并將溫度降低至22-28℃,攪拌轉(zhuǎn)速升高至900-1000r/min;所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是含有12ml/L微量元素PTM1的甲醇。

      9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于,所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有磷酸20~26ml/L,CaSO4 0.93g/L,K2SO4 18.2g/L,MgSO4·7H2O 14.9g/L,KOH 4.13g/L,甘油40.0g/L,微量元素PTM1 4.35ml/L;。

      10.權(quán)利要求2所述堿性果膠酶在食品、紡織、環(huán)境、造紙方面的應(yīng)用。

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