本實(shí)用新型涉及微生物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種厭氧微生物分離的固體夾層培養(yǎng)皿。

背景技術(shù)：

厭氧微生物絕大多數(shù)為細(xì)菌，很少數(shù)是放線菌，極少數(shù)是支原體，厭氧真菌尚見(jiàn)于個(gè)別的報(bào)道。厭氧菌是一類在無(wú)氧條件下生長(zhǎng)的細(xì)菌，尤其是嚴(yán)格厭氧菌因缺乏超氧化物歧化酶等而極易受到氧氣的毒害，即使短暫暴露于空氣中也會(huì)引起損傷，甚至導(dǎo)致死亡，所以相比好氧菌，厭氧菌的分離培養(yǎng)較為困難。然而作為海洋微生物中的重要類群，厭氧微生物在海洋生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)循環(huán)、能量流動(dòng)、海洋污染環(huán)境的生物修復(fù)、綠色能源開(kāi)發(fā)乃至全球氣候變化等過(guò)程中都發(fā)揮著關(guān)鍵作用。對(duì)厭氧微生物進(jìn)行分離培養(yǎng)，有助于深入認(rèn)識(shí)海洋微生物多樣性、豐富微生物種質(zhì)資源庫(kù)等。

由于氧氣對(duì)于厭氧微生物的生長(zhǎng)有毒害作用，所以培養(yǎng)厭氧微生物需要特殊的方法與設(shè)備，目前比較普遍采用的方法包括使用厭氧培養(yǎng)基、厭氧培養(yǎng)罐、厭氧培養(yǎng)箱等。厭氧培養(yǎng)基是通過(guò)在培養(yǎng)基中加入具有還原作用的物質(zhì)或者在液體培養(yǎng)基的上層澆入液體石蠟密封等方法，部分地去除或隔離氧氣。直接加入在培養(yǎng)基中的還原劑可能會(huì)對(duì)某些厭氧微生物具有抑制作用，并且石蠟密封僅能夠簡(jiǎn)易地隔絕外部的空氣，兩者均不能營(yíng)造相對(duì)嚴(yán)格的厭氧環(huán)境，且在大批量分離純化厭氧微生物時(shí)會(huì)大量的消耗培養(yǎng)皿盒培養(yǎng)及藥品。厭氧培養(yǎng)罐和厭氧培養(yǎng)箱都是通過(guò)物理或化學(xué)的手段去除培養(yǎng)器材內(nèi)部的氧，以實(shí)現(xiàn)對(duì)厭氧微生物的培養(yǎng)。雖然他們除氧效果好，但是這兩種設(shè)備都因結(jié)構(gòu)復(fù)雜，購(gòu)置和維持運(yùn)行成本高，攜帶不方便等原因無(wú)法廣泛推廣使用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本實(shí)用新型的目的在于提供一種厭氧微生物分離的固體夾層培養(yǎng)皿，以解決厭氧微生物培養(yǎng)過(guò)程中無(wú)氧環(huán)境的控制問(wèn)題，并在此基礎(chǔ)上能夠減少微生物分離過(guò)程中平板及培養(yǎng)基原料的大量使用，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作。

其技術(shù)解決方案包括：

一種厭氧微生物分離的固體夾層培養(yǎng)皿，包括培養(yǎng)皿盒和培養(yǎng)皿蓋，所述的培養(yǎng)皿盒包括一體式連接的下培養(yǎng)層、下除氧層、凹槽部，所述下培養(yǎng)層位于培養(yǎng)皿盒的中部由隔板分成若干區(qū)域，所述下除氧層位于所述培養(yǎng)層的外圍呈環(huán)狀，所述凹槽部位于所述的培養(yǎng)皿盒的中心位置呈圓柱狀且內(nèi)部中間位置有兩處對(duì)稱的圓形小孔；

所述的培養(yǎng)皿蓋包括一體式連接的上培養(yǎng)層、上除氧層、凸起部，所述的上培養(yǎng)層、上除氧層分別與所述培養(yǎng)皿盒的下培養(yǎng)層、下除氧層結(jié)構(gòu)相同且對(duì)應(yīng)，所述的凸起部呈圓柱狀位于所述的培養(yǎng)皿蓋的中心位置并且中間位置有兩處對(duì)稱的圓形凸起。

上述方案中的上培養(yǎng)層和下培養(yǎng)層，是在普通固體培養(yǎng)皿的基礎(chǔ)上添加N個(gè)隔板，N為正整數(shù)，可將培養(yǎng)皿劃分為N+1個(gè)大小相等的區(qū)域，在劃分好的區(qū)域內(nèi)加入不同的培養(yǎng)基，便于比較不同微生物的群落形態(tài)且避免了培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基原料使用的浪費(fèi)；上述的培養(yǎng)皿盒和培養(yǎng)皿蓋，通過(guò)培養(yǎng)皿中心的凸起部和凹槽部緊密結(jié)合在一起，中間形成無(wú)氧夾層，加之外圍的除氧層，可有效控制無(wú)氧環(huán)境。

作為本實(shí)用新型的第一個(gè)優(yōu)選方案， 所述的培養(yǎng)皿盒與培養(yǎng)皿蓋的培養(yǎng)層中隔板數(shù)量相同，隔板位置相互對(duì)應(yīng)。

上述方案中，培養(yǎng)層中的隔板數(shù)量相同、隔板位置相互對(duì)應(yīng)，能夠保證每種培養(yǎng)基上下兩層相互對(duì)應(yīng)，構(gòu)成無(wú)氧夾層。

優(yōu)選的，所述的培養(yǎng)皿盒與培養(yǎng)皿蓋中培養(yǎng)層的隔板，均為連接培養(yǎng)皿中心與培養(yǎng)層邊緣的矩形結(jié)構(gòu)。

作為本實(shí)用新型的第二個(gè)優(yōu)選方案，所述的除氧層為環(huán)狀且位于所述培養(yǎng)層的外圍，使用時(shí)內(nèi)部裝入還原劑溶液。

上述方案中，位于培養(yǎng)層外圍的環(huán)狀除氧層，內(nèi)裝有還原劑溶液，既有效避免外界氧氣的進(jìn)入，又不對(duì)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物造成毒害。所述的還原劑溶液主要成分為硫化鈉和刃天青，起到檢測(cè)和控制無(wú)氧環(huán)境的作用。

作為本實(shí)用新型的第三個(gè)優(yōu)選方案，所述培養(yǎng)皿盒的凹槽部與所述培養(yǎng)皿蓋的凸起部形狀、大小相配，并且分別位于兩者內(nèi)部的圓形小孔和圓形凸起相互匹配。

通過(guò)凸起部和凹槽部的配合連接，可實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)皿盒和培養(yǎng)皿蓋的快速緊密套置。

優(yōu)選的，所述培養(yǎng)皿盒和培養(yǎng)皿蓋均為圓形或矩形或其他多邊形器皿。

優(yōu)選的，所述的厭氧微生物分離的夾層培養(yǎng)皿均由透明的聚丙烯塑料制成。

本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)是，將普通培養(yǎng)皿加入隔板劃分區(qū)域，并在其外圍設(shè)計(jì)了環(huán)狀除氧層，有效地減少了培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基原料的使用量，且便于比較不同微生物的群落形態(tài)，還原劑的加入解決了厭氧微生物生長(zhǎng)無(wú)氧環(huán)境的檢測(cè)和控制問(wèn)題。

本案一體化的裝置制作簡(jiǎn)單，設(shè)備要求低，成本低廉，方便攜帶。

附圖說(shuō)明

下面結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型做進(jìn)一步說(shuō)明：

圖1為本實(shí)用新型厭氧微生物分離的固體夾層培養(yǎng)裝置的俯視平面圖；

圖2為本實(shí)用新型厭氧微生物分離的固體夾層培養(yǎng)裝置的A-A剖面圖；

圖中所示標(biāo)號(hào)，1、培養(yǎng)層，2、隔板，3、除氧層，4、凸起部，5、凹槽部，6、圓形凸起，7.、圓形小孔8、培養(yǎng)皿盒，9、培養(yǎng)皿蓋。

具體實(shí)施方式

本實(shí)用新型提出了一種厭氧微生物分離的固體夾層培養(yǎng)皿，為了使本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)、技術(shù)方案更加清楚、明確，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型做詳細(xì)說(shuō)明。

如圖1～2中所示的厭氧微生物分離的固體夾層培養(yǎng)皿，它由培養(yǎng)皿盒8和培養(yǎng)皿蓋9兩部分組成，兩部分均利用透明聚丙烯塑料材質(zhì)制作。其中，培養(yǎng)層1被隔板2劃分為若干區(qū)域，這些區(qū)域可倒入不同種類的瓊脂培養(yǎng)基。培養(yǎng)皿盒8的培養(yǎng)層1中央有一凹槽部5，且凹槽部?jī)?nèi)有兩處對(duì)稱的圓形小孔7，培養(yǎng)皿蓋9的培養(yǎng)層1中央有一凸起部4，凸起部4的中間部分有兩處對(duì)稱的圓形凸起。凹槽部5與凸起部4能夠套置，圓形凸起6和圓形小孔7相互嵌和，使整個(gè)裝置固定且密封。培養(yǎng)層1外圍的環(huán)狀凹槽為除氧層3，其中含有還原劑溶液，其組成為適宜濃度的硫化鈉溶液，并添加厭氧處理過(guò)的刃天青作為指示劑。

上述厭氧微生物分離的固體夾層培養(yǎng)皿的使用方法，大體包括以下步驟：

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，組成厭氧微生物分離的固體夾層培養(yǎng)皿的培養(yǎng)皿盒和培養(yǎng)皿蓋兩部分是嵌合在一起的，且處于無(wú)菌的密封袋中。事先將使用的各種固體培養(yǎng)基滅菌，并配制好適宜濃度的硫化鈉溶液，添加已厭氧處理的刃天青作為指示劑。

將稍冷卻的不同種類的固體培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)層1中由隔板2所劃分的若干區(qū)域內(nèi)，保證每個(gè)區(qū)域內(nèi)都只包含一種培養(yǎng)基。該培養(yǎng)皿的培養(yǎng)皿盒和培養(yǎng)皿蓋兩部分的培養(yǎng)層劃分區(qū)域都要倒入培養(yǎng)基，并且保證上下兩部分中相對(duì)應(yīng)的區(qū)域?yàn)橥慌囵B(yǎng)基。待固體培養(yǎng)基凝固且表層干燥后，可用接種環(huán)劃線分離微生物。劃線結(jié)束后，在除氧層3內(nèi)倒入約1/3培養(yǎng)皿盒8高度的還原劑溶液，立即將裝置的上下兩部分通過(guò)凸起部4與凹槽部5套置在一起，并用敷口膜將培養(yǎng)皿盒和培養(yǎng)皿蓋之間的縫隙密封，靜置在培養(yǎng)箱內(nèi)。此操作應(yīng)迅速，防止氧氣大量進(jìn)入，且應(yīng)在厭氧箱內(nèi)進(jìn)行。

需要說(shuō)明的是，上述培養(yǎng)層的隔板數(shù)、培養(yǎng)基的種類以及培養(yǎng)皿的形狀并不限于上述的例舉，本領(lǐng)域技術(shù)人員在本實(shí)用新型的啟示下，得到的其它簡(jiǎn)單替換變形方式均應(yīng)在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。