本發(fā)明涉及化學合成領域，具體涉及一種和田霉素A的全合成方法。

背景技術(shù)：

和田霉素A(Hetiamacin A)，即2-((4S，5S，6S)-5-羥基-6-(((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基))六氫嘧啶-4-基)乙酸，是一種植物葉片內(nèi)生枯草芽孢桿菌的次級代謝產(chǎn)物中分離得到Amicoumacin類抗生素；其結(jié)構(gòu)式如下所示：

專利文獻CN102977082A首次公開了和田霉素A，并公開其具有較廣譜的細菌抑制活性，對革蘭氏陽性菌如葡萄球菌屬(耐β-內(nèi)酰胺抗生素的菌株)、革蘭氏陰性菌如肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、福氏志賀氏菌(Shigella flexneri)、肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)等在體外都具有強抑制作用；同時，對HeLa腫瘤細胞也具有良好的抑制作用。

現(xiàn)有技術(shù)獲得和田霉素A的方法為從異香豆素類抗生素的發(fā)酵液中提取；然而，和田霉素A在發(fā)酵液中的含量低，提取分離操作比較復雜，目前，亟待開發(fā)一種和田霉素A的全合成方法，以便于和田霉素A的大規(guī)模生產(chǎn)和應用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種和田霉素A，即化合物2-((4S，5S，6S)-5-羥基-6-(((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基))六氫嘧啶-4-基)乙酸的全合成方法。

所述反應的合成路線如下：

該反應由化合物(S)-3-((S)-1-氨基-3-甲基丁基)-8-羥基異苯并二氫吡喃-1-酮與化合物(2S，3S，4S)-2-氨基-4-(芐氧羰基氨基)-6-(叔丁氧基)-3-((叔丁基二甲基)氧基)-6-氧代己酸經(jīng)縮合反應得到關鍵中間體(3S，4S，5S)-5-疊氮基-3-(芐氧羰基氨基)-4-羥基-6-((1-(8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基)-6-氧代己酸叔丁酯；再依次經(jīng)氫化還原、環(huán)化反應、脫掉叔丁基二甲基硅醚反應、水解反應得到2-((4S，5S，6S)-5-羥基-6-((1-(8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基甲?；?六氫嘧啶-4-基)乙酸，即和田霉素A。

具體而言，和田霉素A由以下具體步驟制備而成：

該步驟具體為：(S)-3-((S)-1-氨基-3-甲基丁基)-8-羥基異苯并二氫吡喃-1-酮(化合物8)與(2S，3S，4S)-2-氨基-4-(芐氧羰基氨基)-6-(叔丁氧基)-3-((叔丁基二甲基)氧基)-6-氧代己酸(化合物20)經(jīng)縮合反應得到((3S，4S，5S)-5-疊氮基-3-(芐氧羰基氨基)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-(((S)-1-S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基)-6-氧代己酸叔丁酯(化合物21)。

優(yōu)選地，此反應的堿為二異丙基乙胺，三乙胺等；縮合劑選擇EDCI，DCC，HATU，HBTU等；反應溫度為-10℃至25℃；所選溶劑可為二氯甲烷，四氫呋喃等。

該步驟具體為：((3S，4S，5S)-5-疊氮基-3-(芐氧羰基氨基)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-(((S)-1-S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基)-6-氧代己酸叔丁酯(化合物21)經(jīng)催化氫化得到(3S，4S，5S)-3,5-二氨基-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-(((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基)-6-氧代己酸叔丁酯(化合物22)。

優(yōu)選地，此反應的溫度為室溫；反應時間為1h至5h；反應溶劑可以為甲醇，乙醇，乙酸乙酯，四氫呋喃等；催化劑為10％的Pd/C,用量為原料藥重量的10％。

該步驟具體為：(3S，4S，5S)-3,5-二氨基-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-(((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基)-6-氧代己酸叔丁酯(化合物22)與甲醛關環(huán)反應得到2-((4S，5S，6S)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-6-(((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基

丁基)氨甲?；?六氫嘧啶-4-基)乙酸叔丁酯(化合物23)。

優(yōu)選地，該反應的溫度為30℃-60℃；反應時間為1h至5h；反應溶劑可以為甲醇，乙醇，四氫呋喃等。

該步驟具體為：2-((4S，5S，6S)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-6-(((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨甲?；?六氫嘧啶-4-基)乙酸叔丁酯(化合物23)脫叔丁基二甲硅醚保護基，得到2-((4S，5S，6S)-5-羥基-6-(((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基甲?；?六氫嘧啶-4-基)乙酸叔丁酯(化合物24)。

優(yōu)選地，該反應的溫度為室溫；反應時間為1h至20h；反應溶劑可以為二氯甲；脫保護的試劑選擇四丁基氟化銨或氫氟酸-吡啶等。

該步驟具體為：2-((4S，5S，6S)-5-羥基-6-(((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基甲?；?六氫嘧啶-4-基)乙酸叔丁酯(化合物24)經(jīng)水解反應得到2-((4S，5S，6S)-5-羥基-6-(((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基甲?；?六氫嘧啶-4-基)乙酸(化合物25，即和田霉素A)。

優(yōu)選地，該反應的溫度為0℃-25℃；反應時間為1h至5h；反應溶劑可以為甲醇，乙醇，四氫呋喃，1,4-二氧六環(huán)等；水解條件可選擇酸性或堿性條件；所述酸性條件中的酸為鹽酸，硫酸，三氟乙酸，優(yōu)先選擇鹽酸；所述堿性條件中的堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰、碳酸鉀、碳酸鈉等。

作為本發(fā)明采用的核心原料之一，化合物(S)-3-((S)-1-氨基-3-甲基丁基)-8-羥基異苯并二氫吡喃-1-酮由如下方法合成得到：

該方法以2-甲氧基6-甲基苯甲酸為起始原料，保護羧基后，與(4-甲基-1-氧代戊烷-2-基-氨基甲酸芐酯加成內(nèi)酯化生成中間產(chǎn)物(S)-1-((S)-8-甲氧基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基-氨基甲酸芐酯，再依次脫除甲基、芐氧羰基保護基所得。

具體而言，所述化合物(S)-3-((S)-1-氨基-3-甲基丁基)-8-羥基異苯并二氫吡喃-1-酮由以下步驟S1～S9的反應制備而成。

S1：2-甲氧基-6-甲基苯甲酸(化合物1)與二氯亞砜反應生成相應的酰氯，再與噁唑烷-2-酮反應生成3-(2-甲氧基-6-甲基芐基)惡唑烷-2-酮(化合物2)。

優(yōu)選地，該反應的溫度為60℃～90℃，反應時間為2～12小時。

S2：3-(2-甲氧基-6-甲基芐基)惡唑烷-2-酮(化合物2)在堿性條件下開環(huán)得到N-(2-羥乙基)-2-甲氧基-6-甲基苯甲酰胺(化合物3)。

優(yōu)選地，該反應所用的堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、所用的溶劑喂甲醇、乙醇或丙酮、乙腈，反應溫度60℃至100℃，反應時間為1至12小時。

S3：N-(2-羥乙基)-2-甲氧基-6-甲基苯甲酰胺(化合物3)羥基鹵化生成N-(2-氯乙基)-2-甲氧基-6-甲基苯甲酰胺(化合物4)。

優(yōu)選地，此反應的溫度為0℃至100℃，反應時間為2至12小時。

S4：N-(2-氯乙基)-2-甲氧基-6-甲基苯甲酰胺(化合物4)在堿性條件下關環(huán)得到2-(2-甲氧基-6-甲基苯基)-4,5-二氫惡唑(化合物5)

優(yōu)選地，該反應所用的堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、所用的溶劑為甲醇、乙醇或丙酮、乙腈，反應溫度60℃至100℃，反應時間為1至12小時。

S7：2-(2-甲氧基-6-甲基苯基)-4,5-二氫噁唑(化合物5)與(4-甲基-1-氧代戊烷-2-基-氨基甲酸芐酯(化合物11)反應得到(S)-1-((S)-8-甲氧基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基-氨基甲酸芐酯(化合物6)。

優(yōu)選地，此反應的堿為丁基鋰、二異丙基氨基鋰、氰化鈉、氫化鋰，反應的溶劑為四氫呋喃，環(huán)己烷等，反應溫度為-78℃至-60℃。

S8：(S)-1-((S)-8-甲氧基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基-氨基甲酸芐酯(化合物6)與三溴化硼反應得到芐基(S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基-氨基甲酸酯(化合物7)。

優(yōu)選地，該反應的溫度為-78℃至25℃，優(yōu)先選擇-78℃至-60℃，溶劑選擇二氯甲烷、四氯化碳，環(huán)己烷。三溴化硼的用量為原料藥的1-20倍。

S9：(S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基-氨基甲酸芐酯(化合物7)經(jīng)催化氫化反應，脫掉芐氧羰基，得到(S)-3-((S)-1-氨基-3-甲基丁基)-8-羥基異苯并二氫吡喃-1-酮(化合物8)。

優(yōu)選地，該反應溫度為室溫；反應時間為1h至5h；反應溶劑可以為甲醇，乙醇，乙酸乙酯，四氫呋喃等；催化劑為10％的Pd/C,用量為原料藥重量的10％。

其中，作為原料的(4-甲基-1-氧代戊烷-2-基-氨基甲酸芐酯(化合物11)，是由如下方法合成得到：

該方法以亮氨酸甲酯為起始原料，依次經(jīng)芐氧基羰基保護氨基、還原反應所得。

具體而言，所述(4-甲基-1-氧代戊烷-2-基-氨基甲酸芐酯可由以下步驟S5～S6的反應制備而成。

S5：L-亮氨酸甲酯(化合物9)經(jīng)芐氧基羰基保護，得到N-芐氧基羰基-L-亮氨酸甲酯(化合物10)

優(yōu)選地，此反應的堿為二異丙基乙胺，三乙胺等；反應溫度為-10℃至25℃；所選溶劑可為二氯甲烷，四氫呋喃等。

S6：N-芐氧基羰基-L-亮氨酸甲酯(化合物10)在低溫下用DIBAL-H選擇性還原得到4-甲基-1-氧代戊烷-2-基-氨基甲酸芐酯(化合物11)

優(yōu)選地，該反應的溫度為-78℃至-60℃，溶劑選擇四氫呋喃，環(huán)己烷。

作為本發(fā)明采用的核心原料之一，所述化合物(2S，3S，4S)-2-氨基-4-(芐氧羰基氨基)-6-(叔丁氧基)-3-((叔丁基二甲基)氧基)-6-氧代己酸由如下方法合成得到：

該方法以N-芐氧羰基-L-天冬氨酸-4-叔丁酯為起始原料，依次經(jīng)縮合反應、還原反應、維蒂希反應、夏普萊斯不對稱雙羥基化反應、磺?；?、疊氮化、叔丁基二甲基硅醚保護羥基、水解反應所得。

具體而言，所述化合物(2S，3S，4S)-2-氨基-4-(芐氧羰基氨基)-6-(叔丁氧基)-3-((叔丁基二甲基)氧基)-6-氧代己酸由以下步驟S10～S17的反應制備而成。

S10：N-芐氧羰基-L-天冬氨酸-4-叔丁酯(化合物12)與N,O-二甲基羥胺鹽酸縮合反應生成(S)-3-芐氧羰基氨基)-4-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯(化合物13)。

優(yōu)選地，此反應的堿為二異丙基乙胺，三乙胺等；縮合劑選擇EDCI，DCC，HATU，HBTU等；反應溫度為-10℃至25℃；所選溶劑可為二氯甲烷，四氫呋喃等。

S11：(S)-3-(芐氧羰基氨基)-4-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯(化合物13)用DIBAL-H還原得到(S)-3-(芐氧羰基氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯(化合物14)。

優(yōu)選地，該反應的溫度為-78℃至-60℃，溶劑選擇四氫呋喃，環(huán)己烷。

S12：(S)-3-(芐氧羰基氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯(化合物14)與(三苯基膦烯)乙酸乙酯發(fā)生Wittig反應生成(S，E)-4-(芐氧羰基氨基)己-2-烯二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物15)

優(yōu)選地，此反應在氮氣或惰性氣體的保護下進行；反應的溶劑選擇二氯甲烷，四氫呋喃，甲苯等；溫度為室溫。

S13：(S，E)-4-(芐氧羰基氨基)己-2-烯二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(15)與AD-mix-a在甲磺酰胺的催化下反應生成(2R，3S，4S)-4-(芐氧羰基氨基)-2,3-二羥基己二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(16)。

優(yōu)選地，此反應的溶劑選擇叔丁醇與水，叔丁醇和水的比例為1:1；反應的溫度為0℃，甲磺酰胺的量與原料藥的比例為1:1。

S14：(2R，3S，4S)-4-(芐氧羰基氨基)-2,3-二羥基己二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物16)與對硝基苯磺酰氯反應得到(2S，3S，4S)-4-(芐氧羰基氨基)-3-羥基-2-((4-硝基苯磺?；?氧基)己二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物17)。

優(yōu)選地，此反應的堿為二異丙基乙胺，三乙胺等；反應溫度為-10℃至25℃；所選溶劑可為二氯甲烷，四氫呋喃等。

S15：(2S，3S，4S)-4-(芐氧羰基氨基)-3-羥基-2-((4-硝基苯磺?；?氧基)己二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物17)與疊氮鈉反應得到(2S，3S，4S)-2-疊氮基-4-(芐氧羰基氨基)-3-羥基己二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物18)。

優(yōu)選地，該反應為疊氮鈉的SN2反應；原料：疊氮鈉的摩爾比為1:1-10；反應溫度為50℃-80℃；溶劑為DMF。

S16：(2S，3S，4S)-2-疊氮基-4-(芐氧羰基氨基)-3-羥基己二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物18)轉(zhuǎn)化為硅醚，得到(2S，3S，4S)-4-(芐氧羰基氨基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-((4-硝基苯磺?；?氧基)己二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物19)。

優(yōu)選地，此反應溫度為-78℃至-30℃；堿為2,6-二甲基吡啶或三乙胺；反應時間為0.5-2小時；反應在無水二氯甲烷或四氫呋喃中進行。

S17：(2S，3S，4S)-4-(芐氧羰基氨基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-((4-硝基苯磺?；?氧基)己二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物19)在堿性條件下水解得到(2S，3S，4S)-2-氨基-4-(芐氧羰基氨基)-6-(叔丁氧基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-氧代己酸(化合物20)。

優(yōu)選地，此反應溫度為0℃；堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰、碳酸鉀、碳酸鈉等；反應時間為0.5-2小時；溶劑為水和四氫呋喃混合溶液。

作為本發(fā)明的優(yōu)選方案，本發(fā)明所述和田菌素A的全合成整體路線如下所示：

該優(yōu)選方案以亮氨酸甲酯為起始原料，經(jīng)芐氧基羰基保護氨基，還原反應得到中間體芐基(4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸酯；以2-甲氧基6-甲基苯甲酸為起始原料，用2-烷基-1,3-噁唑啉保護羧基，經(jīng)加成內(nèi)酯化，再脫除甲基、芐氧羰基保護基得到關鍵中間體異苯并二氫吡喃-1-酮母核；以N-芐氧羰基-L-天冬氨酸-4-叔丁酯為起始原料，經(jīng)縮合反應、還原反應、維蒂希反應、夏普萊斯不對稱雙羥基化反應、磺?；?、疊氮化、叔丁基二甲基硅醚保護羥基、水解反應、縮合反應得到關鍵中間體(3S，4S，5S)-5-疊氮基-3-(芐氧羰基氨基)-4-羥基-6-((1-(8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基)-6-氧代己酸叔丁酯；再通過氫化還原，環(huán)化反應，脫掉叔丁基二甲基硅醚反應，水解反應得到2-((4S，5S，6S)-5-羥基-6-((1-(8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基甲?；?六氫嘧啶-4-基)乙酸，即和田霉素A。

本發(fā)明提供的和田菌素A的全合成方法，具有原料藥易得、操作簡便、成本低廉等優(yōu)點。該方法合成得到的和田菌素A具有較廣譜的細菌抑制活性及抗腫瘤活性。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。

下面的具體實施例是本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，其不應理解為對本發(fā)明構(gòu)成任何限制。其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所做的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。本發(fā)明用于標準化合物信息的¹H-NMR和¹³C-NMR用Bruker(500M，600M)超導核磁儀測定。

實施例

按照以下步驟S1～S22合成和田霉素A：

S1：制備3-(2-甲氧基-6-甲基芐基)惡唑烷-2-酮(化合物2)：

在250mL反應瓶中，加入2-甲氧基-6-甲基苯甲酸(1，6g，36.11mmol)、二氯亞砜(40mL)，磁力攪拌回流50min。將反應體系冷卻至室溫，減壓除去過量的二氯亞砜。得到油狀物直接用于下一步反應。

S2：制備N-(2-羥乙基)-2-甲氧基-6-甲基苯甲酰胺(化合物3)：

向步驟S1所得油狀物中加入惡唑烷酮(3.46g，39.72mmol)，65℃反應2小時。反應完成后。將反應體系冷卻至室溫，向其中加入NaOH溶液(10％，35mL)和乙醇(35mL)?；旌弦杭訜峄亓?h后冷卻至室溫，用3N稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至5。用二氯甲烷萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓除去溶劑。殘余物用硅膠柱色譜進行純化得白色固體5.9g，產(chǎn)率78.04％。

所得產(chǎn)物的表征信息如下：

¹H NMR(500MHz,CDCl)δ7.26(t,J＝8.0Hz,1H),6.85(d,J＝7.7Hz,1H),6.79(d,J＝8.3Hz,1H),6.30(s,1H),3.85(d,J＝2.7Hz,5H),3.63(q,J＝5.3Hz,2H),2.79(s,1H),2.38(s,3H)。

S3：制備N-(2-氯乙基)-2-甲氧基-6-甲基苯甲酰胺(化合物4)：

在100mL圓底燒瓶中，加入步驟S2所得N-(2-羥乙基)-2-甲氧基-6-甲基苯甲酰胺(化合物3，5.9g，28.20mmol)、二氯亞砜(20mL)，回流反應2小時。反應結(jié)束后，減壓除去過量的二氯亞砜。加入二氯甲烷，用飽和碳酸氫鈉洗滌。用二氯甲烷萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓除去溶劑。殘余物用硅膠柱色譜進行純化得白色固體4.31g，產(chǎn)率67.13％。

所得產(chǎn)物的表征信息如下：

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.20(t,J＝8.0Hz,1H),6.79(d,J＝7.7Hz,1H),6.74(d,J＝8.3Hz,1H),6.29(s,1H),3.79(d,J＝10.5Hz,5H),3.56(q,J＝5.3Hz,2H),2.83(s,1H),2.32(s,3H)。

S4：制備2-(2-甲氧基-6-甲基苯基)-4,5-二氫噁唑(化合物5)：

在100mL反應瓶中，加入步驟S3所得N-(2-氯乙基)-2-甲氧基-6-甲基苯甲酰胺(化合物4，4.31g，18.93mmol)、乙醇(17.5mL)、鹽酸(10％，17.5mL)?；亓鞣磻?h。反應后，用二氯甲烷萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓除去溶劑。殘余物用硅膠柱色譜進行純化得白色固體3.13g，產(chǎn)率86.46％。

所得產(chǎn)物的表征信息如下：

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ7.30(t,J＝8.0Hz,1H),6.86(dd,J＝13.7,8.0Hz,2H),4.46(t,J＝9.6Hz,2H),4.02(t,J＝9.6Hz,2H),3.79(s,3H),2.27(s,3H)。

S5：制備N-芐氧基羰基-L-亮氨酸甲酯(化合物10)：

在250mL反應瓶中，加入L-亮氨酸甲酯(9，5.1g，35.12mmol)、蒸餾水(50mL)，0℃時加入NaHCO₃(7.38g，87.8mmol)、氯甲酸芐酯(7.79g，45.66mmol)，反應15小時。反應結(jié)束后，用二氯甲烷萃取，有機層用1N稀鹽酸溶液、飽和食鹽水洗，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓除去溶劑。殘余物用硅膠柱色譜進行純化得白色固體9.56g，產(chǎn)率97.45％。經(jīng)鑒定，所得產(chǎn)物為N-芐氧基羰基-L-亮氨酸甲酯。

S6：制備4-甲基-1-氧代戊烷-2-基-氨基甲酸芐酯(化合物11)：

在250mL圓底燒瓶中，加入步驟S5所得N-芐氧基羰基-L-亮氨酸甲酯(化合物10，9.56g，34.2mmol)、四氫呋喃(100mL)，溶液冷卻至-78℃。在氮氣保護下滴加二異丁基氫化鋁(51.3mL，1.0mol/L in THF，51.34mmol)，反應30分鐘后，用甲醇和飽和碳酸氫鈉淬滅反應。加入乙酸乙酯稀釋，常溫快速攪拌30min。有機相用飽和食鹽水洗滌，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓除去溶劑。殘余物用硅膠柱色譜進行純化得白色固體7g，產(chǎn)率82.06％。經(jīng)鑒定，所得產(chǎn)物為4-甲基-1-氧代戊烷-2-基-氨基甲酸芐酯。

S7：制備(S)-1-((S)-8-甲氧基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基氨基甲酸芐酯(化合物6)：

在250mL圓底燒瓶中加入步驟S4所得2-(2-甲氧基-6-甲基苯基)-4,5-二氫噁唑(化合物5，1g，5.23mmol)、四氫呋喃(30mL)，攪拌至完全溶解，-78℃下滴加正丁基鋰和步驟S6所得4-甲基-1-氧代戊烷-2-基-氨基甲酸芐酯(化合物11，1.1g，4.41mmol)。-78℃反應1小時，反應完成后，加飽和氯化銨淬滅，將體系升至室溫。用二氯甲烷萃取，有機相用飽和食鹽水洗三次，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓除去溶劑。殘余物用硅膠柱色譜進行純化得白色固體210.32mg，產(chǎn)率10.11％。

所得產(chǎn)物的表征信息如下：

¹H-NMR(500MHz,CD₃OD)δ7.52(t,J＝8.1Hz,1H),7.34(dt,J＝24.8,7.3Hz,5H),7.05(d,J＝7.5Hz,1H),6.85(d,J＝7.2Hz,1H),5.10(s,2H),4.32–4.20(m,1H),3.89(s,4H),2.98–2.83(m,2H),1.78–1.65(m,1H),1.58–1.41(m,2H),0.96(d,J＝6.7Hz,3H),0.93(d,J＝6.5Hz,3H)。

S8：制備(S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基氨基甲酸芐酯(化合物7)：

在100mL圓底燒瓶中，加入步驟S7所得(S)-1-((S)-8-甲氧基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基氨基甲酸芐酯(化合物6，400mg，1.04mmol)、二氯甲烷(15mL)。-78℃下加入三溴化硼(0.5mL)，反應2小時后，用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅，用二氯甲烷萃取，有機相用飽和食鹽水洗滌，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓除去溶劑。殘余物用硅膠柱色譜進行純化得白色固體370.71mg，產(chǎn)率96.07％。

所得產(chǎn)物的表征信息如下：

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ7.44(t,J＝7.9Hz,1H),7.39–7.26(m,5H),6.84(d,J＝8.4Hz,1H),6.74(d,J＝7.5Hz,1H),5.10(s,2H),4.50–4.41(m,1H),3.97(dt,J＝10.6,5.1Hz,1H),3.05–2.91(m,2H),1.71(h,J＝6.2Hz,1H),1.53(dq,J＝13.8,9.9Hz,2H),0.97(d,J＝6.7Hz,3H),0.93(d,J＝6.6Hz,3H).

S9：制備(S)-3-((S)-1-氨基-3-甲基丁基)-8-羥基異苯并二氫吡喃-1-酮(化合物8)：

在50mL反應瓶中，加入步驟S8所得((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基甲酸芐酯(化合物7，300mg，0.78mmol)、乙醇(15mL)、10％的Pd/C(30mg)、3N鹽酸水溶液(4d)。在氫氣流下室溫常壓反應10小時。反應結(jié)束后過濾，將濾液減壓旋干。得白色固體181.70mg，產(chǎn)率96.07％。

所得產(chǎn)物的表征信息如下：

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ7.51(dt,J＝8.3,4.2Hz,1H),6.89(dd,J＝19.6,7.7Hz,2H),4.91(dd,J＝13.3,3.2Hz,1H),3.71(s,1H),3.19–3.07(m,1H),3.01(dd,J＝15.9,3.5Hz,1H),1.84–1.56(m,3H),1.04(ddd,J＝15.7,6.5,3.0Hz,6H).

S10：制備(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)－4－(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯(化合物13)：

在500mL反應瓶中，加入(S)-4-(叔丁氧基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物12，25g，86.41mmol)、二氯甲烷(200mL)，冷卻至-15℃，加入N，O-二甲基羥胺鹽酸鹽(7.2g，86.41mmol)、NMM(17mL，172.82mmol)、15min內(nèi)分批次加入EDCI(14.2g，86.41mmol)。室溫下攪拌2小后，加入冷的1M稀鹽酸溶液(80mL)。用二氯甲烷萃取，有機相分別用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水洗三次，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓除去溶劑。殘余物用硅膠柱色譜進行純化得白色固體26g，產(chǎn)率90.5％。

所得產(chǎn)物的表征信息如下：

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.34(d,J＝4.2Hz,5H),5.65(d,J＝9.2Hz,1H),5.08(dd,J＝27.4,15.2Hz,3H),3.78(s,3H),3.22(s,3H),2.71(dd,J＝15.2,5.4Hz,1H),2.59–2.48(m,1H),1.42(s,9H)；

¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ170.99,169.22,155.69,136.28,128.47,128.09,128.01,81.37,66.90,61.65,48.42,38.33,32.31,27.97。

S11：制備(S)-3-(芐氧羰基氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯(化合物14)：

在500mL反應瓶中，加入步驟S10所得(S)-3-(芐氧羰基氨基)-4-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁酸叔丁酯(化合物13，26g，70.96mmol)、甲苯(200mL)，冷卻至-78℃。在氮氣保護下滴加DIBAL-H(1.0M的四氫呋喃溶液，141.9mL，141.9mmol，2當量)，-78℃攪拌30分鐘后。用甲醇淬滅反應，加入飽和硫酸氫鈉溶液、乙酸乙酯，攪拌30分鐘，過濾。有機層用飽和食鹽水洗三次，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓除去溶劑，得到為黃色油狀物。產(chǎn)物無需純化，直接用于下一步反應。

S12：制備(S，E)-4-(芐氧羰基氨基)己-2-烯二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物15)：

在1000mL反應瓶中，加入(三苯基亞正膦基)乙酸乙酯(21.2g，60.8mmol，1.1當量)、二氯甲烷(300mL)、步驟S11所得黃色油狀物(化合物14，17g，55.3mmol)。在氮氣流下室溫反應10h。反應液減壓除去溶劑。殘余物中反復加入乙酸乙酯中，過濾，減壓除去溶劑，除去三苯基氧磷。殘余物用硅膠柱色譜進行純化得白色固體18g，產(chǎn)率86％。

所得產(chǎn)物的表征信息如下：

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.42–7.30(m,5H),6.89(dd,J＝15.7,5.0Hz,1H),5.96(dd,J＝15.7,1.9Hz,1H),5.62(s,1H),5.12(t,J＝10.3Hz,2H),4.71(s,1H),4.19(q,J＝7.1Hz,2H),2.66–2.49(m,2H),1.42(s,9H),1.28(t,J＝7.1Hz,3H)；

¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ169.78,165.91,155.49,146.06,136.18,128.52,128.18,128.12,81.89,66.99,60.52,48.71,39.39,27.99,14.19。

S13：制備(2R，3S，4S)-4-(芐氧羰基氨基)-2,3-二羥基己二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物16)：

在1000mL反應瓶中，加入AD-mix-a(63g，1.4g/mmol)、叔丁醇150mL、蒸餾水150mL，0℃下加入MeSO₂NH₂(4.28g，62.79mmol)，攪拌2小時后，加入步驟S12所得(S，E)-4-(芐氧羰基氨基)己-2-烯二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物15，23.7g，62.79mmol)?；旌先芤涸?℃下反應96小時，反應結(jié)束后，用飽和亞硫酸鈉猝滅反應，加入乙酸乙酯稀釋。有機相用水洗三次后，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓除去溶劑。殘余物用硅膠柱色譜進行純化得白色固體15g，產(chǎn)率80.9％。

所得產(chǎn)物的表征信息如下：

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.41–7.29(m,1H),5.75(d,J＝9.1Hz,1H),5.21–5.05(m,0H),4.27(ddt,J＝13.5,6.5,3.2Hz,1H),4.13–4.03(m,0H),3.96(t,J＝8.9Hz,0H),3.65(s,0H),2.79–2.55(m,1H),1.44(s,2H),1.30(t,J＝7.1Hz,1H)；

¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ172.31,171.25,156.73,136.03,128.57,128.30,128.21,81.67,73.01,70.45,67.25,62.10,50.21,36.53,28.02,14.16。

S14：制備(2S，3S，4S)-4-(芐氧羰基氨基)-3-羥基-2-((4-硝基苯磺?；?氧基)己二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物17)

250mL反應瓶中，加入步驟S13所得(2R，3S，4S)-4-(芐氧羰基氨基)-2,3-二羥基己二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物16，10g，24.3mmol)、TEA(4.1mL，29.17mmol)、4-硝基苯磺酰氯(915mg，4.13mmol)、二氯甲烷(100mL)。0℃下反應12小時。反應結(jié)束后，用二氯甲烷稀釋，分別用1N稀鹽酸(100mL)、飽和碳酸鈉溶液(100mL)和飽和食鹽水洗滌。有機相用水洗三次后，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓除去溶劑。殘余物用硅膠柱色譜純化得淺黃色固體10.5g，產(chǎn)率72.4％。

所得產(chǎn)物的表征信息如下：

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.35(d,J＝8.5Hz,2H),8.17(d,J＝8.5Hz,2H),7.36(p,J＝10.1,8.6Hz,5H),5.47(d,J＝9.0Hz,1H),5.23(s,1H),5.09(s,2H),4.35(d,J＝8.1Hz,1H),4.20(d,J＝9.3Hz,2H),3.96(s,1H),2.72(qd,J＝16.6,5.3Hz,2H),2.32(s,1H),1.42(s,9H),1.25(dt,J＝7.5,3.9Hz,3H)；

¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ172.74,164.58,155.64,151.02,141.38,135.48,128.70,128.60,128.32,124.31,83.29,67.60,63.13,49.55,33.93,13.96。

S15：制備(2S，3S，4S)-2-疊氮基-4-(芐氧羰基氨基)-3-羥基己二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物18)：

在250mL反應瓶中加入，疊氮化鈉(3.7g，56.88mmol)、DMF(30mL)，加熱至50℃，在反應液中加入步驟S14所得(2S，3S，4S)-4-(芐氧羰基氨基)-3-羥基-2-((4-硝基苯磺?；?氧基)己二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物17，8g，14.22mmol)、DMF(5mL)50℃下反應12小時。反應結(jié)束后，加入適量水，用乙酸乙酯萃取、有機相用飽和食鹽水洗三次，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓除去溶劑。殘余物用硅膠柱色譜純化得到白色固體4.8g，產(chǎn)率83.9％。

所得產(chǎn)物的表征信息如下：

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.42–7.28(m,5H),5.56(d,J＝8.8Hz,1H),5.10(s,2H),4.28(q,J＝7.2Hz,2H),4.19–4.06(m,2H),4.03(d,J＝5.7Hz,1H),3.62(d,J＝7.0Hz,1H),2.65(qd,J＝16.5,5.0Hz,2H),1.43(s,9H),1.32(t,J＝7.2Hz,3H)；

¹³C NMR(151MHz,CDCl₃)δ171.52,168.74,155.90,136.16,128.53,128.22,128.12,81.79,73.11,67.02,63.45,62.35,49.67,35.89,28.00,14.11。

S16：制備(2S，3S，4S)-4-(芐氧羰基氨基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-((4-硝基苯磺?；?氧基)己二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物19)：

在250mL反應瓶中，加入步驟S15所得(2S，3S，4S)-2-疊氮基-4-(芐氧羰基氨基)-3-羥基己二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物18，4g，9.16mmol)、二氯甲烷(100mL)，冷卻至-30℃。反應液中加入2,6-二甲基吡啶(4.27mL，36.66mmol)、TBSOTf(4.21mL，18.33mmol，4當量)，-30℃下反應1小時。反應結(jié)束后，加入乙酸乙酯，用0.5N稀鹽酸、飽和碳酸氫鈉溶液洗滌。有機相用飽和食鹽水洗三次，無水Na₂SO ₄干燥，過濾，減壓除去溶劑。殘余物用硅膠柱色譜純化得到透明油狀物3g，產(chǎn)率59.4％。

所得產(chǎn)物的表征信息如下：

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ7.27(dt,J＝22.1,7.4Hz,5H),5.00(s,2H),4.33(d,J＝3.1Hz,1H),4.12(ddh,J＝10.7,7.7,3.5Hz,3H),2.61(dd,J＝15.3,3.7Hz,1H),2.34(dd,J＝15.3,9.5Hz,1H),1.35(s,9H),1.22(t,J＝7.1Hz,3H),0.86(d,J＝2.4Hz,9H),0.10(s,3H),0.07(s,3H)；

¹³C NMR(151MHz,CD₃OD)δ172.39,169.23,157.58,138.16,129.44,129.01,82.13,75.73,67.51,66.67,63.00,51.69,38.17,28.32,26.34,18.87,14.44,-3.57,-4.24。

S17：制備(2S，3S，4S)-2-氨基-4-(芐氧羰基氨基)-6-(叔丁氧基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-氧代己酸(化合物20)：

在100mL反應瓶中，加入步驟S16所得(2S，3S，4S)-2-疊氮基-4-(芐氧羰基氨基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)己二酸-1-乙酯-6-叔丁酯(化合物19，500mg，0.91mmol)、四氫呋喃(6mL)、蒸餾水(6mL)，0℃下加入氫氧化鋰(9.1mL，0.1mol/L)，攪拌1小時后。室溫下反應4小時。反應完成后，將混合物用稀鹽酸(1mol/L)酸化，用乙酸乙酯萃取，有機相用飽和食鹽水洗三次，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓除去溶劑，得到油狀物410mg，產(chǎn)率59.4％。產(chǎn)物無需純化，直接用于下一步反應。

S18：制備((3S，4S，5S)-5-疊氮基-3-(芐氧羰基氨基)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-(((S)-1-S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基)-6-氧代己酸叔丁酯(化合物21)：

在250mL反應瓶中，加入步驟S17所得油狀物(2S，3S，4S)-2-氨基-4-(芐氧羰基氨基)-6-(叔丁氧基)-3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-氧代己酸(化合物20，400mg，0.77mmol)、步驟S9所得(S)-3-((S)-1-氨基-3-甲基丁基)-8-羥基異苯并二氫吡喃-1-酮(化合物8，190.8mg，0.77mmol)、DIEA(0.38mL，2.3mmol)、二氯甲烷(50mL)，在0℃下加入HATU(290mg，0.77mmol)，攪拌30分鐘后，加熱至室溫反應3小時。反應結(jié)束后，加入二氯甲烷，用稀鹽酸(1mol/L)和飽和食鹽水洗滌，無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓除去溶劑。殘余物用硅膠柱色譜法純化，得到白色固體280mg，產(chǎn)率48.5％。

所得產(chǎn)物的表征信息如下：

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ7.43(t,J＝8.0Hz,1H),7.36–7.25(m,5H),6.83(d,J＝8.4Hz,1H),6.76(d,J＝7.4Hz,1H),5.06(s,2H),4.72–4.65(m,1H),4.31(d,J＝9.8Hz,1H),4.20(s,1H),4.05(dd,J＝7.1,2.8Hz,1H),3.20–3.11(m,1H),2.91(d,J＝16.3Hz,1H),2.72(dd,J＝15.9,3.8Hz,1H),2.34(dd,J＝15.8,10.0Hz,1H),1.84–1.75(m,1H),1.69(d,J＝6.6Hz,1H),1.54–1.44(m,1H),1.35(s,9H),0.97(d,J＝6.7Hz,3H),0.93(d,J＝6.4Hz,3H),0.85(s,9H),0.17(s,3H),0.08(s,3H)；

¹³C NMR(151MHz,CD₃OD)δ171.97,171.07,168.41,163.24,158.40,141.61,138.25,137.37,129.48,129.11,119.62,116.69,109.60,82.24,76.23,67.78,67.08,51.99,51.22,40.54,38.20,31.12,28.33,26.56,25.86,23.71,22.20,19.02,-3.74,-4.61。

S19：制備(3S，4S，5S)-3,5-二氨基-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-(((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基)-6-氧代己酸叔丁酯(化合物22)：

在100mL反應瓶中，加入步驟S18所得((3S，4S，5S)-5-疊氮基-3-(芐氧羰基氨基)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-(((S)-1-S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基)-6-氧代己酸叔丁酯(化合物21，200mg，0.27mmol)、乙醇(10mL)、10％的Pd/C(20mg)。在30psi氫氣中室溫反應12小時。反應結(jié)束后過濾，將濾液減壓旋干。得到無色油狀150mg，產(chǎn)率92％。所得產(chǎn)物直接用于下一步反應。

S20：制備2-((4S，5S，6S)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-6-(((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨甲酰基)六氫嘧啶-4-基)乙酸叔丁酯(化合物23)

在50mL的反應瓶中，加入步驟S19所得無色油狀物(3S，4S，5S)-3,5-二氨基-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-6-(((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基)-6-氧代己酸叔丁酯(化合物22，120mg，)、甲醛(0.3mL，30％)、甲醇(5mL)?；旌先芤涸?0℃下反應8小時。反應結(jié)束后，減壓除去溶劑，用硅膠柱色譜法純化，得到為白色固體80mg，產(chǎn)率65.6％。

所得產(chǎn)物的表征信息如下：

¹H NMR(600MHz,CD₃OD)δ7.45(dd,J＝8.4,7.4Hz,1H),6.85(dt,J＝8.5,1.0Hz,1H),6.76(d,J＝7.3Hz,1H),4.70(dt,J＝12.8,3.1Hz,1H),4.27(ddd,J＝9.7,4.7,3.1Hz,1H),3.86–3.78(m,2H),3.51(d,J＝13.1Hz,1H),3.31(p,J＝1.6Hz,2H),3.25(d,J＝7.5Hz,1H),3.15–3.07(m,1H),2.97–2.87(m,2H),2.65(dd,J＝16.5,4.3Hz,1H),2.36(dd,J＝16.5,7.7Hz,1H),1.73(tdd,J＝14.9,8.6,4.9Hz,2H),1.57–1.48(m,1H),1.45(s,9H),0.97(dd,J＝11.8,6.5Hz,6H),0.83(s,9H),0.11(s,3H),0.02(s,3H)；

¹³C NMR(151MHz,CD₃OD)δ173.70,172.84,171.04,163.40,141.46,137.67,119.60,116.96,109.53,82.21,81.80,69.98,66.28,60.05,58.99,50.94,40.73,38.05,30.81,28.56,26.65,25.78,23.85,22.47,19.20,-3.16,-3.75。

S21：制備2-((4S，5S，6S)-5-羥基-6-(((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基甲?；?六氫嘧啶-4-基)乙酸叔丁酯(化合物24)：

在50mL反應瓶中，加入步驟S20所得2-((4S，5S，6S)-5-((叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-6-(((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨甲酰基)六氫嘧啶-4-基)乙酸叔丁酯(23，70mg,)、四氫呋喃(2mL)、氫氟酸-吡啶(2mL)。混合溶液在室溫下反應12小時。反應結(jié)束后。用乙酸乙酯萃取，有機層用稀鹽酸(1mol/L)和飽和食鹽水洗滌，減壓除去溶劑，殘余物用制備型HPLC純化，得到白色固體30mg，產(chǎn)率52.8％。

所得產(chǎn)物的表征信息如下：

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ7.47–7.41(m,1H),6.83(t,J＝6.4Hz,1H),6.78(t,J＝7.8Hz,1H),4.65(dt,J＝12.8,2.8Hz,1H),4.38–4.30(m,1H),3.88(d,J＝12.9Hz,1H),3.51(d,J＝12.9Hz,1H),3.29–3.16(m,3H),2.93–2.81(m,2H),2.67(dd,J＝16.1,3.9Hz,1H),2.29(dd,J＝16.1,7.7Hz,1H),1.85–1.70(m,2H),1.46(s,1H),1.43(s,9H),0.98(d,J＝6.6Hz,3H),0.94(d,J＝6.5Hz,3H)；

¹³C NMR(151MHz,CD₃OD)δ173.63,173.01,171.21,163.21,141.95,137.49,119.57,116.61,109.42,82.87,82.06,71.43,65.92,60.97,59.68,50.44,40.90,38.65,30.83,28.39,25.75,23.80,22.15。

S22：制備2-((4S，5S，6S)-5-羥基-6-(((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基甲?；?六氫嘧啶-4-基)乙酸(化合物25)：

在50mL反應瓶中，加入步驟S21所得2-((4S，5S，6S)-5-羥基-6-(((S)-1-((S)-8-羥基-1-氧代異苯并二氫吡喃-3-基)-3-甲基丁基)氨基甲?；?六氫嘧啶-4-基)乙酸叔丁酯(化合物24，15mg，0.058mmol)、鹽酸-二氧六環(huán)(1mol/mL，2mL)。在氮氣保護下室溫反應15小時。反應結(jié)束后，加壓除去溶劑，得到黃色油狀物。用制備型HPLC純化，得到白色固體10mg，產(chǎn)率75.2％。

所得產(chǎn)物的表征信息如下：

¹H NMR(600MHz,CD₃OD)δ7.39(t,J＝7.9Hz,1H),6.78(d,J＝8.3Hz,1H),6.72(d,J＝7.4Hz,1H),4.61(dt,J＝12.9,2.7Hz,1H),4.33–4.27(m,2H),3.91(d,J＝12.4Hz,1H),3.51(d,J＝9.7Hz,1H),3.35(d,J＝9.4Hz,1H),3.19–3.09(m,2H),2.80(dd,J＝16.5,2.9Hz,1H),2.70(d,J＝16.9Hz,1H),2.41(dd,J＝17.1,7.5Hz,1H),1.78(ddd,J＝13.8,10.8,4.6Hz,1H),1.70–1.62(m,1H),1.41(ddd,J＝13.8,9.4,4.2Hz,1H),0.93(d,J＝6.7Hz,3H),0.89(d,J＝6.5Hz,3H)¹³C NMR(151MHz,CD₃OD)δ172.0,171.6,171.1,141.6,137.5,119.5,116.7,109.4,83.0,82.7,82.0,67.9,60.5,59.0,50.4,40.7,33.5,30.9,25.9,23.7,22.0。

經(jīng)鑒定，所得產(chǎn)物為化合物25，即和田菌素A。

雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明、具體實施方式及試驗，對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。