本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種新的來(lái)源于斑點(diǎn)雀鱔(lepisosteusoculatus)具有降低血清鈣離子濃度活性的降鈣素多肽、含有該肽的藥物組合物以及該組合物在治療骨代謝和/或鈣代謝紊亂等相關(guān)疾病中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：降鈣素(calcitonin，ct)是由加拿大生理學(xué)家coop于1961年發(fā)現(xiàn)的一種具有調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣、磷代謝作用的肽類激素，主要起降低血鈣和血磷的作用。其具體機(jī)理為：通過(guò)降鈣素受體(calcitoninreceptor，ctr)抑制破骨細(xì)胞的功能，抑制骨吸收，減少骨組織內(nèi)鈣、磷的釋放；抑制腎小管對(duì)鈣、磷、鈉、氯的重吸收，增加它們?cè)谀蛑械呐懦隽?；抑制小腸吸收鈣和磷(daveyra,turnerag,mcmanusjf,eta1.calcitoninreceptorplaysaphysiologicalroletoprotectagainsthypercalcemiainmice.jboneminerres,2008；23(8):1182-93.)。在臨床上，降鈣素主要用于骨質(zhì)疏松癥、高鈣血癥、佩吉特骨病(paget'sdisease)和骨痛癥等疾病的治療。天然降鈣素存在于魚(yú)類、爬蟲(chóng)類、鳥(niǎo)類、哺乳類體內(nèi)，在哺乳動(dòng)物中是由甲狀腺的濾泡旁細(xì)胞(parafollicularcells，又稱c細(xì)胞)分泌產(chǎn)生，在鳥(niǎo)和魚(yú)類等非哺乳類脊椎動(dòng)物中是由后腮體分泌產(chǎn)生。不同來(lái)源的降鈣素的生物活性不同，其活性主要取決于降鈣素多肽的氨基酸序列、其與降鈣素受體的親和力以及在體內(nèi)的穩(wěn)定性。此外，不同來(lái)源的降鈣素，其氨基酸序列也有所不同，但一般都為由32個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多肽，具有酰胺化羧基末端，并且在第1和7位的半胱氨酸殘基之間具有一個(gè)分子內(nèi)二硫鍵。不同降鈣素的氨基酸序列差異主要位于多肽中段的8-22位氨基酸，是形成影響活性的兩親性α螺旋的部位。魚(yú)類來(lái)源的降鈣素和哺乳動(dòng)物的降鈣素受體之間的結(jié)合能力比哺乳動(dòng)物來(lái)源的降鈣素和其受體之間的結(jié)合能力高的多。因此，魚(yú)類降鈣素比人降鈣素具有更強(qiáng)的降低人血鈣的能力。目前臨床使用的人工合成降鈣素已有多種，如鮭魚(yú)降鈣素(salmoncalcitonin，sct)、鰻魚(yú)降鈣素(eelcalcitonin，ect)、人降鈣素(humancalcitonin，hct)和豬降鈣素(porcinecalcitonin，pct)等，其中鮭魚(yú)降鈣素最為常用，其活性比人降鈣素高10多倍，使用量在臨床上約占一半(daveyra,findlaydm.calcitonin:physiologyorfantasyjboneminerres.2013；28(5):973-9.)。雖然鮭魚(yú)降鈣素、人降鈣素等制劑已在臨床上廣泛使用，但由于受限于降鈣素的活性，一般臨床用量較大，使得生產(chǎn)成本較高，病人的醫(yī)療費(fèi)用負(fù)擔(dān)較重。此外，由于鮭魚(yú)降鈣素與人降鈣素存在16個(gè)氨基酸的不同，其n端17個(gè)氨基酸中有8個(gè)不同，故對(duì)人有較強(qiáng)的免疫原性。如能提高降鈣素的活性，而減少使用劑量，也將有助于減少其免疫原性所導(dǎo)致的耐受性。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明是為解決上述問(wèn)題而進(jìn)行的，目的在于提供一種新的來(lái)源于斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源的降鈣素、合成方法、含有該降鈣素的藥物組合物以及該組合物在調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣、磷代謝或治療骨代謝和/或鈣代謝紊亂等相關(guān)疾病中的應(yīng)用。本發(fā)明的第一方面提供了一種新的斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源的高活性降鈣素多肽，其氨基酸序列結(jié)構(gòu)如下(seqidno:17所示的氨基酸序列)：cys-ser-asn-leu-ser-thr-cys-val-leu-gly-lys-leu-ser-gln-glu-leu-his-lys-leu-gln-thr-phe-pro-arg-thr-asp-val-gly-ala-ser-thr-pro-nh2。在上列氨基酸序列中，pro-nh2表示脯氨酰胺，第1和第7位上的兩個(gè)cys殘基由一個(gè)二硫鍵相連。根據(jù)中國(guó)藥典2010版中的降鈣素生物測(cè)定法對(duì)該種降鈣素多肽進(jìn)行生物學(xué)活性測(cè)定。結(jié)果顯示，來(lái)源于斑點(diǎn)雀鱔的降鈣素具有很高的降低血鈣的生物活性，其效價(jià)為8296iu/mg，高于鮭魚(yú)降鈣素。本發(fā)明的第二方面，提供了一種斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源的降鈣素的合成方法，采用fmoc固相合成法進(jìn)行合成，包括以下步驟：(1)選擇rinkamidembha樹(shù)脂作為固相載體，用fmoc保護(hù)各種所用氨基酸的α-氨基；(2)按照降鈣素的氨基酸序列順序，將斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源降鈣素c端的第一個(gè)fmoc保護(hù)氨基酸裝在含rinkamidembha樹(shù)脂的反應(yīng)器中，用六氫吡啶的體積分?jǐn)?shù)為20％的六氫吡啶-二甲基甲酰胺(dmf)室溫處理，除去fmoc保護(hù)基團(tuán)；(3)利用n,n-二環(huán)己基碳二亞胺作為偶聯(lián)劑將cys與第二個(gè)羧基已被活化的fmoc保護(hù)氨基酸形成肽鍵；(4)在負(fù)壓作用下對(duì)形成的二肽進(jìn)行洗滌過(guò)濾；(5)重復(fù)步驟(2)～步驟(4)，由c端向n端逐個(gè)縮合各被保護(hù)的氨基酸，直至達(dá)到所要合成的肽鏈長(zhǎng)度；(6)利用三氟乙酸將肽鏈從rinkamidembha樹(shù)脂上裂解下來(lái)，經(jīng)過(guò)純化處理，得到降鈣素多肽的粗品；(7)將所述降鈣素多肽的粗品溶解于乙酸-水溶液中，并調(diào)節(jié)ph至6.0，置于一定溫度下保溫一段時(shí)間，使之形成二硫鍵，復(fù)性獲得所述斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源的降鈣素。其中，在步驟(7)中，所述乙酸-水溶液的濃度為1mg/ml，乙酸和水的體積比為1:19。采用(nh4)2co3對(duì)溶解有降鈣素多肽粗品的乙酸-水溶液進(jìn)行ph調(diào)節(jié)。所述一定溫度為37℃，所述一定時(shí)間為4h。此外，本發(fā)明的合成方法中還包括采用反相高效液相色譜對(duì)斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源的降鈣素進(jìn)行純化的步驟，采用c18反相柱對(duì)所述降鈣素進(jìn)行純化，流動(dòng)相a為0.1％tfa-100％h2o，流動(dòng)相b為0.1％tfa-100％cnch3，流速為1ml/min，線性洗脫梯度為30min內(nèi)流動(dòng)相b從20％到90％，接5min內(nèi)流動(dòng)相b從90％到100％。本發(fā)明的第三方面，提供了斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源的降鈣素在制備調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣、磷代謝的藥物中的用途以及在制備治療或預(yù)防骨代謝和/或鈣代謝紊亂相關(guān)疾病的藥物中的用途。其中，調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣、磷代謝的藥物為抑制破骨細(xì)胞功能的藥物、抑制股吸收的藥物、抑制腎小管對(duì)鈣、磷、鈉、氯重吸收的藥物或抑制小腸吸收鈣和磷的藥物；治療或預(yù)防骨代謝和/或鈣代謝紊亂相關(guān)疾病的藥物為治療或預(yù)防骨痛癥、骨質(zhì)疏松癥或佩吉特骨病的藥物。本發(fā)明的第四方面，提供了一種含有上述斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源的降鈣素的藥物組合物。該藥物組合物以斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源的降鈣素為基本成分，還包括可藥用賦形劑、稀釋劑與載體中的任意一種。發(fā)明的作用與效果本發(fā)明的斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源降鈣素具有顯著的降血鈣生物活性，其降低血清鈣含量的效果優(yōu)于臨床上常用的鮭魚(yú)降鈣素。因此，可將本發(fā)明的斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源降鈣素制成以該肽為基本活性成分的藥物組合物，用于治療和預(yù)防諸如骨代謝和/或鈣代謝紊亂、骨質(zhì)疏松癥、佩吉特骨病和骨痛癥等相關(guān)性疾病或病理狀態(tài)，既能夠減小臨床用量，又能夠減輕病人的醫(yī)療費(fèi)用。附圖說(shuō)明圖1是本發(fā)明中顯示27條不同種屬來(lái)源的降鈣素序列的進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果；圖2是本發(fā)明中的斑點(diǎn)雀鱔降鈣素的hplc純度鑒定結(jié)果；圖3是本發(fā)明中的斑點(diǎn)雀鱔降鈣素質(zhì)譜分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。但下列實(shí)施例不應(yīng)看作對(duì)本發(fā)明范圍的限制。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。實(shí)施例一：blast獲得降鈣素序列，并構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)以鮭魚(yú)降鈣素序列(csnlstcvlgklsqelhklqtyprtntgsgtp)為查詢序列，使用blast的blastp程序搜索ncbi數(shù)據(jù)庫(kù)中的非冗余蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)，并對(duì)大黃魚(yú)、海馬、石斑魚(yú)、三種金線鲃、金龍魚(yú)和兩種彈涂魚(yú)等水生生物基因組進(jìn)行本地blast比對(duì)，共得到68條來(lái)自不同物種的蛋白質(zhì)序列，其中13條來(lái)自水生生物。對(duì)序列進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，68條蛋白質(zhì)序列中與鮭魚(yú)降鈣素的32個(gè)氨基酸相對(duì)應(yīng)的比對(duì)區(qū)段的氨基酸序列存在許多重復(fù)，將這些比對(duì)區(qū)段序列重復(fù)的序列歸并后得到包括鮭魚(yú)降鈣素序列在內(nèi)的27條不同的降鈣素多肽序列(seqidno.1～seqidno.27)。然后，利用mega5(http://www.megasoftware.net/)軟件的鄰接(n-j)法進(jìn)行聚類，并構(gòu)建如圖1所示的進(jìn)化樹(shù)。本發(fā)明的斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源降鈣素氨基酸序列產(chǎn)生于blast所獲得的68條蛋白質(zhì)序列之一。該蛋白質(zhì)序列是由斑點(diǎn)雀鱔基因組序列通過(guò)計(jì)算機(jī)自動(dòng)注釋預(yù)測(cè)產(chǎn)生，其ncbi登錄號(hào)：xp_006642550，gi：573909664，長(zhǎng)度為139aa，序列如下：1mvmlkisaflvtyalvicqmyssqaaparpglesmtdrvtlsdyearrllnalvkefvqm61taeeleqqvndgnsldrpiskrcsnlstcvlgklsqelhklqtfprtdvgastpgkkrsv121asgleneryanygetfdsi斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源降鈣素氨基酸序列位于此蛋白質(zhì)序列的第83位至第114位，序列為seqidno:17所示的氨基酸序列。實(shí)施例二：降鈣素多肽的固相化學(xué)合成斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源降鈣素的結(jié)構(gòu)如下：cys-ser-gly-leu-ser-thr-cys-val-leu-gly-lys-leu-ser-gln-asp-leu-his-lys-leu-gln-thr-phe-pro-arg-thr-asn-val-gly-ala-gly-thr-pro-nh2在上列氨基酸序列中，pro-nh2表示脯氨酰胺，第1和第7位上的兩個(gè)cys殘基由一個(gè)二硫鍵相連。使用以固相或液相方法合成本發(fā)明實(shí)施例一中所涉及的27條降鈣素多肽。本實(shí)施例中以fmoc(9-芴甲氧羰基)固相合成法合成斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源降鈣素為例說(shuō)明多肽合成過(guò)程，但不僅限于此法進(jìn)行多肽合成，步驟如下：(1)選擇(2,4-二甲氧基苯基-fmoc-氨甲基)-苯氧基乙酰氨基-正亮氨酰-mbha樹(shù)脂(即rinkamidembha樹(shù)脂)作為固相載體，用fmoc保護(hù)各種所用氨基酸的α-氨基。(2)按照降鈣素的氨基酸序列順序，首先將斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源降鈣素c端的第一個(gè)氨基酸(c端fmoc-pro)裝在含rinkamidembha樹(shù)脂的反應(yīng)器中，用六氫吡啶的體積分?jǐn)?shù)為20％的六氫吡啶-二甲基甲酰胺溶液(dmf)室溫處理，除去fmoc保護(hù)基團(tuán)。(3)利用dcc(n,n-二環(huán)己基碳二亞胺)作為偶聯(lián)劑與下一個(gè)羧基已被活化的fmoc保護(hù)氨基酸形成肽鍵。(4)經(jīng)負(fù)壓作用洗滌過(guò)濾，對(duì)生成的二肽進(jìn)行中和。(5)重復(fù)步驟(2)～步驟(4)，通過(guò)這種不斷重復(fù)的循環(huán)(縮合→洗滌→去保護(hù)→中和和洗滌→下一輪縮合)，由c端向n端逐個(gè)縮合各被保護(hù)的氨基酸，達(dá)到所要合成的肽鏈長(zhǎng)度。(6)利用三氟乙酸(tfa)將肽鏈從rinkamidembha樹(shù)脂上裂解下來(lái)，經(jīng)過(guò)純化處理，得到目標(biāo)多肽的粗品。(7)將目標(biāo)多肽的粗品溶解于乙酸-水溶液(乙酸:水＝1:19)中，濃度為1mg/ml，再加(nh4)2co3調(diào)至ph6.0，置于37℃保溫4h，使之形成二硫鍵，復(fù)性獲得斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源降鈣素。實(shí)施例三：降鈣素多肽的高效液相色譜(hplc)純化和質(zhì)譜鑒定利用反相高效液相色譜(rp-hplc)對(duì)由實(shí)施例二所得斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源降鈣素多肽進(jìn)行純化。純化條件如下：層析柱為c18反相柱(hichromvydac218tptmc-18reversed-phasecolumns，5μm,4.6mmi.d.x250mm)，流動(dòng)相a為0.1％tfa-100％h2o中，流動(dòng)相b為0.1％tfa-100％cnch3，流速為1ml/min，線性洗脫梯度為30min內(nèi)流動(dòng)相b從20％到90％，接5min內(nèi)流動(dòng)相b從90％到100％。如圖2所示，所得斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源降鈣素多肽經(jīng)hplc純度鑒定，其純度達(dá)到97％以上。如圖3所示，esi質(zhì)譜鑒定結(jié)果符合理論值，分子量(mw)為3428.96da，實(shí)驗(yàn)條件為：sprayvoltage(kv)：5.02；spraycurrent(μa)：0.14；sheathgasflowrate:35；aux/sweepgasflowrate:0；capillaryvoltage(v):14.85；capillarytemp(℃):250.00。實(shí)施例四：生物學(xué)活性測(cè)定以購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所的鮭魚(yú)降鈣素(mw：3432，純度：86.2％，效價(jià)：6016iu/mg，批號(hào)：140665-200902)作為標(biāo)準(zhǔn)品，以本發(fā)明的斑點(diǎn)雀鱔降鈣素作為供試品，將二者分別用稀釋溶媒配制成濃度為0.08iu/ml的高劑量組和濃度為0.03iu/ml的低劑量組。稀釋溶媒配制方法如下：稱取牛血清白蛋白0.2g，加水20ml，混勻，在56℃水浴中保溫1小時(shí)，取出放置室溫，置冰箱冷凍室-20℃速凍備用。臨用時(shí)將備用液融化(36±0.5℃水浴)，加至含有2gnaac的水溶液中，再加濃hcl約3.5ml，調(diào)節(jié)ph值為4.0左右，用水補(bǔ)足至200ml即得。按照《中國(guó)藥典》2010版附錄xiiio降鈣素生物測(cè)定法進(jìn)行斑點(diǎn)雀鱔降鈣素生物學(xué)活性測(cè)定：取健康雄性、同一來(lái)源，出生日期相近的成年sd大鼠，體重為160～180g，體重相差不超過(guò)20g，實(shí)驗(yàn)前禁食16小時(shí)，自由飲用蒸餾水。按體重將這些成年sd大鼠隨機(jī)分成4組，分別為標(biāo)準(zhǔn)品高、低劑量組和供試品高、低劑量組，每組不小于5只。將各組動(dòng)物稱重，逐只編號(hào)。各組大鼠分別自腹部皮下注入一種相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或供試品稀釋液，每只大鼠按100g體重注射0.4ml。注射后1小時(shí)，按給藥先后順序分別自眼靜脈叢采血0.5ml(約10-15滴)，在離心機(jī)上以3000rpm轉(zhuǎn)速離心15～20min，取血清0.1ml待測(cè)。用鄰甲酚酞絡(luò)合酮比色法測(cè)定血鈣，實(shí)驗(yàn)結(jié)果按《中國(guó)藥典》2010版附錄檢定統(tǒng)計(jì)法中的量反應(yīng)平行線進(jìn)行計(jì)算，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)可靠性檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1。然后利用隨機(jī)區(qū)組測(cè)定(2.2)法計(jì)算計(jì)算效價(jià)以及實(shí)驗(yàn)誤差。表1血鈣濃度測(cè)定結(jié)果根據(jù)表1可知，本發(fā)明的斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源的降鈣素能有效降低血鈣，而且每個(gè)平行組之間的測(cè)試結(jié)果近似，說(shuō)明本發(fā)明的方法回歸極顯著、偏離平行不顯著，可靠性檢驗(yàn)通過(guò)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。通過(guò)效價(jià)計(jì)算，本發(fā)明的斑點(diǎn)雀鱔降鈣素效價(jià)為8296iu/mg，fl％＝37％，測(cè)得效價(jià)的95％可信限范圍為6034.7～12305.4iu/mg。實(shí)施例1中其余多肽序列的固相化學(xué)合成、hplc純化、質(zhì)譜鑒定和生物學(xué)活性的檢測(cè)同上，其降血鈣活性見(jiàn)表2：編號(hào)序列名詞序列名詞活性(iu/mg)1salmon1salmosalar鮭魚(yú)161412salmon2chumsalmon鮭魚(yú)259923characidaearowana脂鯉科金龍魚(yú)26534larimichthyscroceaoryziaslatipes大黃魚(yú)青鳉28545seahorse海馬47256carassiusauratus鮒魚(yú)未檢測(cè)到7daniorerio斑馬魚(yú)39728sardinopsmelanostictus沙丁魚(yú)35849boleophthalmuspectinirostris大彈涂魚(yú)420310anguillajaponica日本鰻427511pythonbivittatus緬甸蟒蛇未檢測(cè)到12astyanaxmexicanus墨西哥麗脂鯉未檢測(cè)到13ornithorhynchusanatinus鴨嘴獸789214gallusgallus原雞未檢測(cè)到15anoliscarolinensis安樂(lè)蜥484516oncorhynchusmykiss1gorbuscha虹鱒495617lepisosteusoculatus斑點(diǎn)雀鱔829618sinocyclocheilusgraham1金線鲃1537719sinocyclocheilusgraham2金線鲃2482620salmon4oncorhynchusketa鮭魚(yú)4584321salmon3oncorhynchuskisutch鮭魚(yú)3617222oncorhynchusmykiss2虹鱒527423tetraodonnigroviridis斑點(diǎn)綠河鲀358524paralichthysolivaceus牙鲆267425stegastespartitus眶鋸雀鯛473626monodelphisdomestica短尾負(fù)鼠未檢測(cè)到27callorhinchusmiliix銀鮫2354由表2可知，在發(fā)明人篩選出的27種降鈣素中，斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源的降鈣素的效價(jià)最高，比目前臨床常用的鮭魚(yú)降鈣素的效價(jià)(中國(guó)藥品生物制品檢定所的鮭魚(yú)降鈣素標(biāo)準(zhǔn)品效價(jià)為6016iu/mg)高出很多，因此，具有更好的降血鈣生物學(xué)活性。以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說(shuō)明書中描述的只是說(shuō)明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等同物界定。sequencelisting<110>中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)<120>一種斑點(diǎn)雀鱔來(lái)源的降鈣素及其應(yīng)用<130>2017<160>27<170>patentinversion3.3<210>1<211>32<212>prt<213>鮭魚(yú)1大西洋鮭（salmon1salmosalar）<400>1cysserasnleuserthrcysvalleuglylysleuserglngluleu51015hislysleuglnthrtyrproargthrasnthrglyserglythrpro202530<210>2<211>32<212>prt<213>鮭魚(yú)2大馬哈魚(yú)鮭（salmon1chumsalmon）<400>2cysserasnleuserthrcysvalleuglylysleuserglngluleu51015hislysleuglnthr-tyr-pro-arg-thr-asn-thr-gly-asn-gly-thr-pro202530<210>3<211>32<212>prt<213>脂鯉科金龍魚(yú)（characidaearowana）<400>3cysserasnleuserthrcysvalleuglylysleuserglngluleu51015hislysleuglnthrtyrproargthrasnvalglyalaglythrpro202530<210>4<211>32<212>prt<213>大黃魚(yú)青鳉（larimichthyscroceaoryziaslatipes）<400>4cysserasnleuserthrcysvalleuglylysleuserglngluleu51015hislysleuglnthrpheproargthrasnvalglyalaglythrpro202530<210>5<211>32<212>prt<213>海馬（seahorse）<400>5cysserasnleuserthrcysileleuglylyspheserglngluleu51015hislysleuglnthrpheproargthrasnvalglyalaglythrpro202530<210>6<211>32<212>prt<213>鮒魚(yú)（carassiusauratis）<400>6cysserserleuserthrcysvalleuglylysleuserglngluleu51015hislysleuglnthrtyrproargthrasnvalglyalaglythrpro202530<210>7<211>32<212>prt<213>斑馬魚(yú)（daniorerio）<400>7cysserserleuserthrcysvalleuglylysleuserglngluleu51015leulysleuglnthrtyrproargthrasnvalglyalaglythrpro202530<210>8<211>32<212>prt<213>沙丁魚(yú)（sardinopsmelanostictus）<400>8cysserasnleuserthrcysalaleuglylysleuserglngluleu51015hislysleuglnsertyrproargthrasnvalglyalaglythrpro202530<210>9<211>32<212>prt<213>大彈涂魚(yú)（boleophthalmuspectinirostris）<400>9cysserglyleuserthrcysvalleuglylysleuserglnaspleu51015hislysleuglnthrpheproargthrasnvalglyalaglythrpro202530<210>10<211>32<212>prt<213>日本鰻（anguillajaponica）<400>10cysserasnleuserthrcysvalleuglylysleuserglngluleu51015hislysleuglnthrtyrproargthraspvalglyalaglythrpro202530<210>11<211>32<212>prt<213>緬甸蟒蛇（pythonbivittatus）<400>11cysalaasnleuserthrcysvalleuglylysleuserglngluleu51015hislysleuglnthrtyrproargthraspvalglyalaglythrpro202530<210>12<211>32<212>prt<213>墨西哥麗脂鯉（astyanaxmexicanus）<400>12cysserasnleuserthrcysvalleuglylysleuserglngluleu51015hislysleuglnthrpheproargthraspvalglyalaglythrpro202530<210>13<211>32<212>prt<213>鴨嘴獸（ornithorhynchusanatinus）<400>13cysserasnleuserthrcysvalleuglylysleuserglngluleu51015hislysleuglnthrasnproargthraspvalglyalaglythrpro202530<210>14<211>32<212>prt<213>原雞（gallusgallus）<400>14cysalaserleuserthrcysvalleuglylysleuserglngluleu51015hislysleuglnthrtyrproargthraspvalglyalaglythrpro202530<210>15<211>32<212>prt<213>安樂(lè)蜥（anoliscarolinensis）<400>15cysalaasnleuserthrcysvalleuglylysleuserglngluleu51015hislysmetglnthrtyrproargthraspvalglyalaglythrpro202530<210>16<211>32<212>prt<213>虹鱒（oncorhynchusmykissgorbuscha）<400>16cysserasnleuserthrcysvalleuglylysleuserglnaspleu51015hislysleuglnthrpheproargthraspvalglyalaglythrpro202530<210>17<211>32<212>prt<213>斑點(diǎn)雀鱔（lepisosteusoculatus）<400>17cysserasnleuserthrcysvalleuglylysleuserglngluleu51015hislysleuglnthrpheproargthraspvalglyalaserthrpro202530<210>18<211>32<212>prt<213>金線鲃1（sinocyclocheilusgraham1）<400>18cysserasnleuserthrcysvalleuglylysleuserglngluleu51015hislysleuglnthrpheproglnthraspvalglyalaglythrpro202530<210>19<211>32<212>prt<213>金線鲃2（sinocyclocheilusgraham2）<400>19cysserasnleuserthrcysvalleuglylysleuseralagluleu51015hislysleuglnmetleuproglnthraspvalglyalaglythrpro202530<210>20<211>32<212>prt<213>鮭魚(yú)4大馬哈魚(yú)（salmon4oncorhynchusketa）<400>20cysserasnleuserthrcysvalleuglylysleuserglnaspleu51015hislysleuglnthrpheproargthrasnthrglyalaglyvalpro202530<210>21<211>32<212>prt<213>鮭魚(yú)3銀鮭（salmon3oncorhynchuskisutch）<400>21cysserasnleuserthrcysmetleuglylysleuserglnaspleu51015hislysleuglnthrpheproargthrasnthrglyalaglyvalpro202530<210>22<211>32<212>prt<213>虹鱒2（oncorhynchusmykiss2）<400>22cysserasnleuserthrcysmetleuglylysleuserglnaspleu51015hislysleuglnthrpheproargthraspvalglyalaglythrpro202530<210>23<211>32<212>prt<213>斑點(diǎn)綠河鲀（tetraodonnigroviridia）<400>23cysalaglyleuserthrcysvalleuglylysleuserglnaspile51015hislysleuglnthrtyrproargthrasnvalglyalaglythrpro202530<210>24<211>32<212>prt<213>牙鲆（paralichthysolivaceus）<400>24cysthrglyleuserthrcysvalleuglylysleuserglnaspile51015hislysleuglnthrtyrproargthrasnvalglyalaglythrpro202530<210>25<211>32<212>prt<213>眶鋸雀鯛（stegastespartitus）<400>25cysthrglyleuserthrcysvalleuglylysleuserglnaspile51015hislysleuglnthrtyrproargthraspvalglyalaglythrpro202530<210>26<211>32<212>prt<213>短尾負(fù)鼠（monodelphisdomestica）<400>26cysserasnleuserthrcysleuleuglylysleuserglngluleu51015hisargleuglnthrtyrthrargthraspvalglyalaargthrpro202530<210>27<211>32<212>prt<213>銀鮫（callorhinchusmiliix）<400>27cysthrserleuserthrcysvalvalglylysleuserglngluleu51015hislysleuglnthrileglnargthraspvalglyseralathrpro202530當(dāng)前第1頁(yè)12