本發(fā)明涉及生物酶催化及有機(jī)合成領(lǐng)域，具體涉及一種替格瑞洛中間體(1R，2S)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙胺及其扁桃酸鹽的合成。

背景技術(shù)：

替格瑞洛是由英國阿斯利康公司研發(fā)的一種新型的具有選擇性的小分子抗凝血藥，屬于環(huán)戊基三唑嘧啶類口服抗血小板藥物，是一種選擇性二磷酸腺苷受體拮抗劑，作用于P2Y12ADP受體以抑制ADP介導(dǎo)的血小板活化和聚集，該藥于2011年7月被美國FDA批準(zhǔn)上市，2012年11月獲準(zhǔn)在中國上市。

(1R，2S)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙胺是制備替格瑞洛的關(guān)鍵中間體，因其是油狀物不方便儲(chǔ)存和使用，通常做成扁桃酸鹽或者鹽酸鹽使用。目前文獻(xiàn)報(bào)道的(1R，2S)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙胺的合成方法主要有以下幾種：

1)WO 2008018822A報(bào)道了以鄰二氟苯和氯乙酰氯為原料經(jīng)傅克反應(yīng)、不對(duì)稱還原、環(huán)化、環(huán)丙烷化，氨解和霍夫曼降解得到(1R，2S)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙胺，其合成路線如下：

2)CN 201210274432報(bào)道了以消旋的氯代苯乙醇為原料經(jīng)化學(xué)法光學(xué)拆分、環(huán)化、環(huán)丙烷化，水解和Curtius重排得到(1R，2S)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙胺，其合成路線如下：

3)CN 201310346985報(bào)道了以3，4-二氟溴苯和氯乙酰氯為原料經(jīng)傅克反應(yīng)、不對(duì)稱還原、環(huán)化、環(huán)丙烷化、水解、脫溴、氨化和霍夫曼降解得到(1R，2S)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙胺，其合成路線如下：

4)CN 201410609709報(bào)道了以丁二酸酐經(jīng)醇解得丁二酸單甲酯，丁二酸單甲酯酰氯化反應(yīng)得化合物丁二酸單甲酯酰氯與鄰二氟苯經(jīng)傅克反應(yīng)得化合物4-酮-4-(3，4-二氟苯基)酸甲酯，再經(jīng)不對(duì)稱還原反應(yīng)、環(huán)合反應(yīng)、Hoffman降解得產(chǎn)物(1R，2S)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙胺，其合成路線如下：

在上述合成路線中均采用化學(xué)方法進(jìn)行不對(duì)稱還原，存在收率低、光學(xué)純度差、操作繁瑣、生產(chǎn)成本高且污染嚴(yán)重等問題。

為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種新的(1R，2S)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙胺及其扁桃酸鹽的合成方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明的目的是提供化合物(I)所示的替格瑞洛中間體及化合物(VI)所示的鹽的制備方法，包括如下步驟：

(1)以2-氯-1-(3，4-二氟苯基)乙酮為原料，在羰基還原酶的催化下還原得到高選擇性的化合物(II)；

(2)將步驟(1)中得到的化合物(II)在堿性條件下反應(yīng)得到化合物(III)；

(3)將步驟(2)中得到的化合物(III)在堿性條件下與膦?；宜崛阴?TEPA)反應(yīng)得到化合物(IV)；

(4)將步驟(3)中得到的化合物(IV)進(jìn)行氨解得到化合物(V)；

(5)將步驟(4)中得到的化合物(V)進(jìn)行霍夫曼降解得到化合物(I)；

(6)將步驟(5)中得到的化合物(I)與D-扁桃酸反應(yīng)得到化合物(VI)。

關(guān)于化合物(I)所示的替格瑞洛中間體及化合物(VI)所示的鹽的制備方法，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一些優(yōu)選的技術(shù)方案。

一些實(shí)施例中，步驟(1)中所用溶劑為水和有機(jī)溶劑的混合物，有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、異丙醇、四氫呋喃和二氧六環(huán)，水和有機(jī)溶劑的比例為1∶0.2～2，優(yōu)選異丙醇。

一些實(shí)施例中，步驟(1)中2-氯-1-(3，4-二氟苯基)乙酮的濃度為5～20％，2-氯-1-(3，4-二氟苯基)乙酮與含羰基還原酶的菌體的重量比為1∶0.2～1。

一些實(shí)施例中，步驟(1)中所述的反應(yīng)溫度范圍為20～40℃，反應(yīng)pH為7.0～8.0，反應(yīng)時(shí)間2～10h。

一些實(shí)施例中，步驟(1)中所述提取溶劑為乙酸乙酯、苯、甲苯、二氯甲烷或二氯乙烷，優(yōu)選甲苯。

一些實(shí)施例中，步驟(2)中所述溶劑為苯、甲苯、二氯甲烷或二氯乙烷，優(yōu)選甲苯；所述的堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鋰，優(yōu)選氫氧化鈉；所述的反應(yīng)溫度范圍為20～50℃；所述的反應(yīng)時(shí)間1～5h。

一些實(shí)施例中，步驟(3)中所述溶劑為苯、甲苯、二甲苯或乙二醇二甲醚，優(yōu)選甲苯；所述的堿為叔丁醇鈉、叔丁醇鉀或氫化鈉，優(yōu)選叔丁醇鈉；所述的反應(yīng)溫度范圍為10～100℃；所述的反應(yīng)時(shí)間為10～24h。

一些實(shí)施例中，步驟(4)中所述的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮或四氫呋喃，優(yōu)選甲醇；所述的反應(yīng)溫度范圍為30～80℃，所述的反應(yīng)時(shí)間為6～20h。

一些實(shí)施例中，步驟(5)中所述的溶劑為水、甲醇、乙醇、苯、甲苯或二氯甲烷，優(yōu)選水和二氯甲烷；所述的反應(yīng)溫度范圍為0～70℃；所述的反應(yīng)時(shí)間1～5h；所述的堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鋰，優(yōu)選氫氧化鈉。

一些實(shí)施例中，步驟(6)中所述的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮或四氫呋喃，優(yōu)選甲醇；步驟(6)中所述的反應(yīng)溫度范圍為15～35℃；所述的反應(yīng)時(shí)間為6～15h。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明采用酶法進(jìn)行不對(duì)稱還原，羰基還原酶來源廣泛，在細(xì)菌、真菌和高等動(dòng)植物中均有分布，是一種高度的化學(xué)、區(qū)域和立體選擇性的生物催化劑，能夠高選擇性的催化酮類化合物不對(duì)稱還原得到高光學(xué)純度的手性醇，與化學(xué)催化羰基不對(duì)稱還原相比，羰基還原酶法催化的羰基不對(duì)稱還原具有良好的立體選擇性、反應(yīng)條件溫和、產(chǎn)物光學(xué)純度高、副產(chǎn)物少、收率高、環(huán)境友好等突出優(yōu)勢，在手性藥物及其中間體生產(chǎn)中作用日趨重要。本發(fā)明方法操作簡單、反應(yīng)條件溫和、污染小且產(chǎn)品收率高、光學(xué)純度好，適合大規(guī)模生產(chǎn)，大大降低了能耗和有機(jī)廢水的排放，更加適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)的要求。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明將用以下實(shí)施例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述的式I的化合物的制備，但對(duì)本發(fā)明沒有限制。

以下實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明的具體實(shí)施方式，以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠理解本發(fā)明，但不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明的具體實(shí)施方式中，未作特別說明的技術(shù)手段或方法等為本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)手段或方法等，未作特別說明，本發(fā)明所用的原料和試劑均為市售產(chǎn)品。除非另有說明，本發(fā)明所有的一部分和百分比均按重量計(jì)算，所有溫度均指攝氏度。

實(shí)施例中使用了下列縮略語：

DCM：二氯甲烷；

EA：乙酸乙酯；

ee：光學(xué)純度

g：克；

HPLC：高效液相色譜；

min：分鐘；

ml：毫升；

h或hr：小時(shí)

TEPA：膦?；宜崛阴?；

TLC：薄層色譜。

本發(fā)明中的化合物可以采用于但不限于采用以下一個(gè)或多個(gè)通用反應(yīng)路線來合成：

一般情況下，本發(fā)明提供的化合物可根據(jù)通用路線I描述的一般合成方法進(jìn)行制備，但本發(fā)明提供的化合物并不僅限于使用該路線進(jìn)行制備。隨后的實(shí)施例更具體地解釋了通用路線I中的一般合成方法，以使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能夠制備和使用本發(fā)明提供的化合物。

通用路線I

實(shí)施例1：羰基還原酶菌體的培養(yǎng)

種子培養(yǎng)：

培養(yǎng)基配方：蛋白胨1.0％，酵母浸粉0.5％，氯化鈉0.5％，消毒前pH7.0，消毒前體積100mL(1000mL搖瓶)，滅菌后冷卻，于無菌狀態(tài)下種子瓶加100uL濃度為10mg/mL氨芐青霉素和0.1mL甘油管菌液(大腸桿菌，E.Coli BL21)，于37℃搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速200rpm，培養(yǎng)時(shí)間為18-20小時(shí)。

發(fā)酵培養(yǎng)：

培養(yǎng)基配方：蛋白胨2.0％，酵母浸粉1.0％，氯化鈉0.5％，泡敵(消泡劑)0.02％，甘油0.2％。消毒前pH7.5，消毒前體積5L(10L發(fā)酵罐)；培養(yǎng)基滅菌以后通過火焰接種接入培養(yǎng)好的種子培養(yǎng)液進(jìn)行發(fā)酵，培養(yǎng)條件為發(fā)酵溫度30±0.5℃，空氣流量5L/min，轉(zhuǎn)速500轉(zhuǎn)/分，罐壓0.03-0.05MPa；培養(yǎng)6小時(shí)以后在火焰條件下從罐口加入10mg/L的異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)，同時(shí)開始補(bǔ)料，每小時(shí)按發(fā)酵液體積0.1-0.15％補(bǔ)加甘油15-20小時(shí)，用20％磷酸和17％氨水控制發(fā)酵pH7.0；誘導(dǎo)15小時(shí)，菌濃度達(dá)到5％以上停止發(fā)酵；放罐后，離心收集菌體約400g，菌體保存在-20℃冰箱中備用。

實(shí)施例2：2-氯-1-S-(3，4-二氟苯基)乙醇(II)的制備

在帶攪拌的500ml四口瓶中順序加入40g 2-氯-1-(3，4-二氟苯基)乙酮、200ml水和100ml異丙醇的混合溶劑中，開啟攪拌，加入實(shí)施例1中獲得的含羰基還原酶的菌體20g，升溫至30℃開始反應(yīng)，3h后每隔0.5h取樣并用HPLC檢測2-氯-1-(3，4-二氟苯基)乙酮的殘留，反應(yīng)結(jié)束后過濾除去菌體，濾液用甲苯萃取，甲苯相用無水硫酸鎂干燥后過濾，濃縮得到39.5g黃色油狀化合物(II)，收率98.8％，HPLC純度98.5％，ee值99.9％。

實(shí)施例3：2-氯-1-S-(3，4-二氟苯基)乙醇(II)的制備

在帶攪拌的500ml四口瓶中順序加入40g2-氯-1-(3，4-二氟苯基)乙酮、200ml水和40ml四氫呋喃的混合溶劑中，開啟攪拌，加入實(shí)施例1中獲得的含羰基還原酶的菌體12g，升溫至40℃開始反應(yīng)，3h后每隔0.5h取樣并用HPLC檢測2-氯-1-(3，4-二氟苯基)乙酮的殘留，反應(yīng)結(jié)束后過濾除去菌體，濾液用EA萃取，EA相用無水硫酸鎂干燥后過濾，濃縮得到39.1g黃色油狀化合物(II)，收率96.7％，HPLC純度98.6％，ee值99.8％。

實(shí)施例4：2-氯-1-S-(3，4-二氟苯基)乙醇(II)的制備

在帶攪拌的500ml四口瓶中順序加入40g 2-氯-1-(3，4-二氟苯基)乙酮、200ml水和400ml甲醇的混合溶劑中，開啟攪拌，加入實(shí)施例1中獲得的含羰基還原酶的菌體32g，升溫至20℃開始反應(yīng)，3h后每隔0.5h取樣并用HPLC檢測2-氯-1-(3，4-二氟苯基)乙酮的殘留，反應(yīng)結(jié)束后過濾除去菌體，濾液用DCM萃取，DCM相用無水硫酸鎂干燥后過濾，濃縮得到37.6g黃色油狀化合物(II)，收率93.0％，HPLC純度98.6％，ee值99.8％。

實(shí)施例5：(2S)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)氧乙烷(III)的制備

在帶攪拌的500ml四口瓶中順序加入39g化合物(II)、120ml甲苯和120ml 15％的氫氧化鈉溶液，開啟攪拌，升溫至35℃反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后分相并用甲苯萃取水相，甲苯相用無水硫酸鎂干燥后過濾，濃縮得到30.7g化合物(III)，黃色油狀物，收率97.2％，HPLC純度98.0％。

實(shí)施例6：(2S)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)氧乙烷(III)的制備

在帶攪拌的500ml四口瓶中順序加入38g化合物(II)、120ml甲苯和120ml 15％的KOH溶液，開啟攪拌，升溫至25℃反應(yīng)4h，反應(yīng)結(jié)束后分相并用60ml甲苯萃取水相，甲苯相用無水硫酸鎂干燥后過濾，濃縮得到28.9g黃色油狀化合物(III)，收率93.8％，HPLC純度98.1％。

實(shí)施例7：(2S)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)氧乙烷(III)的制備

在帶攪拌的500ml四口瓶中順序加入37g化合物(II)、120ml DCM和120ml 15％的氫氧化鈉溶液，開啟攪拌，升溫至50℃反應(yīng)1h，反應(yīng)結(jié)束后分相并用60ml DCM萃取水相，DCM相用無水硫酸鎂干燥后過濾，濃縮得到29.0g黃色油狀化合物(III)，收率96.7％，HPLC純度98.0％。

實(shí)施例8：(1R，2R)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙基甲酸乙酯(IV)的制備

在帶攪拌的1000ml四口瓶中順序加入74g叔丁醇鈉和350ml甲苯，控制在30℃以下滴加87g TEPA的100ml甲苯溶液，控制1h滴完，滴完后30℃保溫1h，然后升溫至50℃，滴加30g化合物(III)的100ml甲苯溶液，控制1h滴完，滴完后升溫至70℃繼續(xù)反應(yīng)16h，TLC監(jiān)測，反應(yīng)結(jié)束后降溫至10℃以下并加入600ml水?dāng)嚢?min，分液，300ml水洗有機(jī)相，有機(jī)相用無水硫酸鎂干燥后過濾，濃縮得到40.5g黃色油狀化合物(IV)，收率93.8％，HPLC純度92.5％。

實(shí)施例9：(1R，2R)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙基甲酸乙酯(IV)的制備

在帶攪拌的1000ml四口瓶中順序加入72g叔丁醇鈉和350ml乙二醇二甲醚，控制在30℃以下滴加84g TEPA的100ml乙二醇二甲醚溶液，控制1h滴完，滴完后30℃保溫1h，然后升溫至50℃，滴加28g化合物(III)的100ml乙二醇二甲醚溶液，控制1h滴完，滴完后升溫至70℃繼續(xù)反應(yīng)16h，TLC監(jiān)測，反應(yīng)結(jié)束后降溫至10℃以下并加入600ml水?dāng)嚢?min，分液，300ml水洗有機(jī)相，有機(jī)相用無水硫酸鎂干燥后過濾，濃縮得到37.6g黃色油狀化合物(IV)，收率92.7％，HPLC純度92.0％。

實(shí)施例10：(1R，2R)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙基甲酸乙酯(IV)的制備

在帶攪拌的1000ml四口瓶中順序加入72g氫化鈉和350ml甲苯，控制在30℃以下滴加84g TEPA的100ml甲苯溶液，控制1h滴完，滴完后30℃保溫1h，然后升溫至50℃，滴加30g化合物(III)的100ml甲苯溶液，控制1h滴完，滴完后升溫至70℃繼續(xù)反應(yīng)16h，TLC監(jiān)測，反應(yīng)結(jié)束后降溫至10℃以下并加入600ml水，攪拌5分鐘，分液，300ml水洗有機(jī)相，有機(jī)相用無水硫酸鎂干燥后過濾，濃縮得到3g.0g黃色油狀化合物(IV)，收率93.7％，HPLC純度92.2％。

實(shí)施例11：(1R，2R)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙基甲酰胺(V)的制備

向350ml耐壓瓶中順序加入40g化合物(IV)，20％氨氣甲醇溶液160ml，30％甲醇鈉甲醇溶液72ml，擰緊瓶蓋后升溫至70℃反應(yīng)12h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，攪拌下加水200ml，加完后降溫至20℃以下結(jié)晶，過濾，洗滌，干燥得31.5g白色固體化合物(V)，收率90.3％，HPLC純度98.5％。

實(shí)施例12：(1R，2R)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙基甲酰胺(V)的制備

向350ml耐壓瓶中順序加入37g化合物(IV)，20％氨氣甲醇溶液160ml，30％甲醇鈉甲醇溶液70ml，擰緊瓶蓋后升溫至50℃反應(yīng)20h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，攪拌下加水200ml，加完后降溫至20℃以下結(jié)晶，過濾，洗滌，干燥得28.9g白色固體化合物(V)，收率89.6％，HPLC純度98.2％。

實(shí)施例13：(1R，2S)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙胺(I)的制備

在帶攪拌的1000ml四口瓶中加入30g化合物(V)和200g 30％氫氧化鈉溶液，開啟攪拌并降溫，控制0～5℃滴加12％次氯酸鈉溶液260g，約1h滴完，滴完后繼續(xù)攪拌至溶液澄清后升溫至65℃繼續(xù)反應(yīng)1h，反應(yīng)結(jié)束后降溫至5℃以下，用濃鹽酸調(diào)pH8～8.5，然后用二氯甲烷萃取，有機(jī)相用無水硫酸鎂干燥后過濾，濃縮得到20.8g黃色油狀化合物(I)，收率80.8％，HPLC純度98.9％。

實(shí)施例14：(1R，2S)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙胺(I)的制備

在帶攪拌的1000ml四口瓶中加入28g化合物(V)和200g 30％氨氧化鉀溶液，開啟攪拌并降溫，控制0～5℃滴加12％次氯酸鈉溶液251g，約1h滴完，滴完后繼續(xù)攪拌至溶液澄清后升溫至65℃繼續(xù)反應(yīng)1h，反應(yīng)結(jié)束后降溫至5℃以下，用濃鹽酸調(diào)pH8～8.5，然后用二氯甲烷萃取，有機(jī)相用無水硫酸鎂干燥后過濾，濃縮得到17.9g黃色油狀化合物(I)，收率74.5％，HPLC純度98.6％。

實(shí)施例15：(1R，2S)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙胺D-扁桃酸鹽(VI)的制備

在帶攪拌的500ml四口瓶中加入20g化合物(I)和100ml甲醇，開啟攪拌并控溫25～28℃，滴加22g D-扁桃酸的180ml甲醇溶液，滴完后繼續(xù)反應(yīng)12h，過濾并用少量甲醇洗滌濾餅，干燥，得24.3g白色固體化合物(VI)，收率50.6％，HPLC純度99.8％，ee值99.9％。

實(shí)施例16：(1R，2S)-2-(3，4-二氟苯基)環(huán)丙胺D-扁桃酸鹽(VI)的制備

在帶攪拌的500ml四口瓶中加入17g化合物(I)和100ml乙醇，開啟攪拌并控溫30～35℃，滴加20g D-扁桃酸的180ml乙醇溶液，滴完后繼續(xù)反應(yīng)15h，過濾并用少量乙醇洗滌濾餅，干燥，得16.5g白色固體化合物(VI)，收率50.1％，HPLC純度99.8％，ee值99.9％。