本發(fā)明屬于化學(xué)合成領(lǐng)域，更具體的涉及一種膜莢黃芪皂苷Ⅱ的合成方法。

背景技術(shù)：

黃芪，是中醫(yī)中重要的補(bǔ)氣藥物，具有補(bǔ)氣升陽、益衛(wèi)固表、脫毒排膿、斂拖生肌等功效。現(xiàn)代研究表明，黃芪具有免疫增強(qiáng)作用、抗衰老作用、抗腫瘤作用、保護(hù)心腦血管、保護(hù)肝腎等作用，是補(bǔ)氣益中藥物中應(yīng)用最為廣泛的中藥品種，在許多中藥復(fù)方中作為主藥，是目前用量最大的中藥材之一。

近年來隨著現(xiàn)代分離和鑒定技術(shù)的發(fā)展，從黃芪中分離出了大量三萜皂苷、黃酮類化合物以及多糖類成分。后期的生物生化實(shí)驗(yàn)表明黃芪的藥用功效主要通過黃芪皂苷表現(xiàn)出來。近期研究表明，黃芪皂苷在免疫調(diào)節(jié)，降糖，改善胰島素抵抗活性，抗腫瘤，對心血管系統(tǒng)調(diào)節(jié)以及抗病毒，抗氧化活性等方面都表現(xiàn)出了極為可喜的藥用前景。

盡管黃芪皂苷廣泛的應(yīng)用前景促使人們對其研究不斷深入，但目前用于活性測試的黃芪皂苷多為從黃芪中分離提取所得，由于黃芪中所含皂苷種類繁多，且結(jié)構(gòu)類似，這給分離提純帶來很大困難。還有一些黃芪皂苷為次生皂苷，在黃芪中的含量很低，要得到足夠量以供活性測試之用更是不易，這已成為制約黃芪皂苷活性研究深入的瓶頸，到目前為止幾乎沒有關(guān)于黃芪皂苷的化學(xué)合成研究報(bào)道。

膜莢黃芪皂苷Ⅱ(Astramembrannin II)，結(jié)構(gòu)式見式I，在總黃芪皂苷中的質(zhì)量百分含量為0.42％。其甙元部分為環(huán)黃芪醇(結(jié)構(gòu)式見化合物1)，由于環(huán)黃芪醇(化合物1)的3位，6位，16位及25位含有4個(gè)惰性O(shè)H，4個(gè)惰性O(shè)H相互之間的反應(yīng)活性難以區(qū)分，選擇性的糖苷化其中部分羥基非常困難。

環(huán)黃芪醇的羥基保護(hù)反應(yīng)進(jìn)行困難且產(chǎn)物復(fù)雜多變，有文獻(xiàn)報(bào)道，在過量乙?；噭┳饔孟?，60℃，長達(dá)50天的反應(yīng)時(shí)間下，僅能得到56％收率的全乙?；沫h(huán)黃芪醇?？s短反應(yīng)時(shí)間或降低反應(yīng)溫度導(dǎo)致反應(yīng)產(chǎn)物十分復(fù)雜，為4個(gè)羥基中隨機(jī)的1或2個(gè)羥基被保護(hù)的環(huán)黃芪醇。

文獻(xiàn)中常用的對大位阻、惰性的羥基保護(hù)的方法在環(huán)黃芪醇保護(hù)中也不起作用，例如路易斯酸催化的乙?；磻?yīng)得不到選擇性保護(hù)的環(huán)黃芪醇。

因此黃芪皂苷合成國內(nèi)外至今未見成功的報(bào)道，膜莢黃芪皂苷Ⅱ的合成也未見報(bào)道。人工合成膜莢黃芪皂苷Ⅱ，以獲得足夠量的該化合物，有助于進(jìn)一步推進(jìn)對其生物活性，藥理活性的研究，有很高的學(xué)術(shù)及社會(huì)經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

a)Mamedova,R.P.；Agzamova,M.A.；Isaev,M.I.Chem.Nat.Compd.2001,37,533-536.b)Isaev,I.M.；Iskenderov,D.A.；Isaev,M.I.Chem.Nat.Compd.2009,45,381-384.c)Isaev,I.M.；Iskenderov,D.A.；Isaev,M.I.Chem.Nat.Compd.2010,46,407-411.d)Procopiou,P.A.；Baugh,S.P.D.；Flack,S.S.；Inglis,G.G.J.Org.Chem.1998,63,2342-2347.d)Kitagawa,I.；Wang,H.-K.；Saito,M.；Yoshikawa,M.Chem.Pharm.Bull.1983,31,709-715.e)Hirotani,M.；Zhou,Y.；Rui,H.；Furuya,T.Phytochemistry 1994,37,1403-1407.

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：開發(fā)一種合成膜莢黃芪皂苷Ⅱ的方法，以獲得足夠量的該化合物，進(jìn)一步推進(jìn)對其生物活性，藥理活性的研究。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

一種膜莢黃芪皂苷Ⅱ的合成方法，包括以下步驟：

(1)3位羥基選擇性保護(hù)：將環(huán)黃芪醇溶于第一溶劑中，在堿性條件下，與硅基化試劑作用反應(yīng)，得到3位羥基選擇性保護(hù)的化合物2；

(2)6，16，20位羥基選擇性保護(hù)：0℃以下，將化合物2和PPy溶于第二溶劑中，再加入酸酐和DIPEA，將反應(yīng)溫度緩慢升至室溫后再加熱到100～120℃，繼續(xù)反應(yīng)直到TLC跟蹤顯示反應(yīng)完全，得到6，16，20位羥基保護(hù)的化合物3；

(3)選擇性脫除3位羥基：將化合物3溶于第三溶劑中，酸性條件下脫除3位保護(hù)基，得到化合物4；

(4)構(gòu)建3位糖苷鍵：將化合物4和木糖炔酯給體5溶于第四溶劑中，并加入干燥劑，在室溫下攪拌后，加入催化劑，繼續(xù)在室溫下反應(yīng)，直到TLC跟蹤顯示化合物4反應(yīng)完全，得到化合物6；

(5)最終脫保護(hù)：在堿性條件下，第五溶劑中，將化合物6的所有保護(hù)基脫除，即得膜莢黃芪皂苷Ⅱ，

其中，所述R¹選自烷硅基；所述R²選自取代或非取代的C2-C6烷?；?；所述R³選自取代或非取代的C1-C6芳酰基；X選自取代或非取代的炔苯甲酰氧基。

優(yōu)選的，R¹選自大位阻的烷硅基，更優(yōu)選的R¹選自TBS或TBDPS。

所述R²選自乙酰基、丙?；?、丁?；?、異丙?；籖³選自苯甲?；谆郊柞；⑧徏谆郊柞；?，優(yōu)選的，X任選自所述以下基團(tuán)之一：

最優(yōu)選的，X為

步驟(1)中，所述第一溶劑選自二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、DMF、甲苯、苯、二氧六環(huán)、吡啶、四氫呋喃、三乙胺、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇、DMSO或乙醚中的一種或多種；優(yōu)選的，所述第一溶劑選自干燥的二氯甲烷、DMF、THF或甲苯中的一種或多種。所述化合物1在所述第一溶劑中的濃度為0.1～1.5mol/L，優(yōu)選為1.36～1.5mol/L。

步驟(1)中，所述硅基化試劑選自TBSCl，所述堿選自三乙胺、咪唑或二異丙基乙基胺中的一種或多種，化合物1、所述硅基化試劑和所述堿的摩爾比為1:1.5:2～1:4:6，優(yōu)選為1:2:4～1:4:6。環(huán)黃芪醇含有4個(gè)羥基，常規(guī)情況下，多羥基反應(yīng)底物選擇性保護(hù)其中一個(gè)羥基時(shí)，保護(hù)基試劑和底物的的摩爾比不可過量，否則容易生成羥基過度保護(hù)的產(chǎn)物，但在本發(fā)明中，保護(hù)基試劑和底物的的摩爾比高達(dá)4個(gè)當(dāng)量時(shí)，仍無明顯羥基過度保護(hù)的產(chǎn)物生成。

步驟(2)中，所述第二溶劑選自二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、DMF、甲苯、苯、二氧六環(huán)、吡啶、四氫呋喃、三乙胺、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇、DMSO或乙醚中的一種或多種，優(yōu)選的，所述第二溶劑為甲苯或1,2-二氯乙烷；所述化合物2在所述第二溶劑中的濃度為0.1～5mol/L，優(yōu)選為0.11～0.5mol/L。

步驟(2)中，所述酸酐選自取代或非取代的C₂-C₆脂肪酸的酸酐，優(yōu)選為乙酸酐、丙酸酐、丁酸酐、異丙酸酐；最優(yōu)選為乙酸酐；所述化合物1、PPy、酸酐和DIPEA的摩爾比為1:1.5:8:12～1:2:15:20，優(yōu)選為1:2:10:15～1:2:15:20。

步驟(3)中，所述第三溶劑為甲醇，化合物3在所述第三溶劑中的濃度為0.014～0.5mol/L；所述酸為樟腦磺酸，所述化合物3和樟腦磺酸的摩爾比為1:3～1:4。

步驟(4)中，所述催化劑選自一價(jià)金的絡(luò)合物；優(yōu)選為PPh₃AuNTf₂或PPh₃AuOTf；所述干燥劑選自分子篩，優(yōu)選的為分子篩或酸洗的分子篩，更優(yōu)選的為4A分子篩，所述分子篩相對化合物4的加入量為100～300g/mol。所述干燥劑選自分子篩；化合物4、木糖炔酯給體5和催化劑的摩爾比為1:1:0.1～1:5:0.8，優(yōu)選為1:1:0.1～1:2:0.5。

加入分子篩后攪拌時(shí)間可為0.5～2小時(shí)，以充分干燥溶劑為準(zhǔn)。

步驟(4)中，所述第四溶劑選自二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、DMF、甲苯、苯、二氧六環(huán)、吡啶、冰醋酸、四氫呋喃、三乙胺、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇、DMSO或乙醚中的一種或多種，優(yōu)選的，所述第四溶劑為二氯甲烷。所述化合物4在第四溶劑中的濃度為0.001～1mol/L，優(yōu)選為0.01～0.08mol/L。。

步驟(5)中，所述堿選自甲醇鈉、氫氧化鈉、碳酸鉀、氫氧化鉀；所述化合物6和所述堿的摩爾比為1:7～20，優(yōu)選為1:7～10。

步驟(5)中，所述第五溶劑選自二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、DMF、甲苯、苯、二氧六環(huán)、吡啶、冰醋酸、四氫呋喃、三乙胺、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇、DMSO或乙醚中的一種或多種，優(yōu)選為甲醇；所述化合物6在第五溶劑中的濃度為0.001～1mol/L，優(yōu)選為0.01～0.016mol/L。。

優(yōu)選的，步驟(1～(5)中，在惰性氣體氣氛中反應(yīng)，所述惰性氣體選自氮?dú)?、氬氣或氦氣?/p>

優(yōu)選的，步驟(1～(5)中，使用的溶劑，使用前先干燥除水。

本發(fā)明中，R的上標(biāo)表示基團(tuán)的序號(hào)，下標(biāo)表示有幾個(gè)基團(tuán)，例如R¹₂表示兩個(gè)R¹基團(tuán)。

有益效果：本發(fā)明高效高立體選擇性高收率的制備了膜莢黃芪皂苷Ⅱ，填補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的空白，將大大推進(jìn)黃芪皂苷類化合物的活性機(jī)理研究及其藥物開發(fā)的進(jìn)程。

具體實(shí)施方式

根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí)施例所描述的內(nèi)容僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。

本發(fā)明中PPy表示4-吡咯烷基吡啶(英文名：4-(1-pyrrolidino)-pyridine))，DIPEA表示N,N-二異丙基乙胺；以下每步反應(yīng)得到的產(chǎn)物純度較高，在400兆核磁共振氫譜中見不到雜質(zhì)峰。

Bz保護(hù)的糖5按照本領(lǐng)域常規(guī)方法合成，參考文獻(xiàn)Chem.Sci.2013,4,3899-3905.

在氮?dú)獗Ｗo(hù)，將異頭位羥基裸露的全Bz木糖(0.17mmol)溶于干燥的二氯甲烷(4mL)中，再向體系中加入鄰炔基苯甲酸(0.2mmol),DMAP(0.23mmol),EDCI(0.23mmol),DIPEA(0.45mmol)，室溫下攪拌過夜直到TLC跟蹤顯示原料反應(yīng)完全，將反應(yīng)體系用二氯甲烷萃取，并依次用1mol/l HCl、飽和碳酸氫鈉、飽和NaCl洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮粗產(chǎn)品，然后柱層析得到白色固體化合物5。(612mg,89％)：[α]_D²⁵＝0.02(c 1.0,CHCl₃)；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.04-7.98(m,6H),7.90(dd,J＝1.2,8.0Hz,1H),7.58-7.51(m,3H),7.49-7.42(m,2H),7.38-7.30(m,6H),7.21(td,J＝1.6,7.6Hz,1H),6.42(d,J＝7.6Hz,1H),5.81(t,J＝5.2Hz,1H),5.58(dd,J＝4.0,5.2Hz,1H),5.36-5.32(m,1H),4.63(dd,J＝3.6,12.8Hz,1H),4.06(dd,J＝4.8,12.4Hz,1H),1.54-1.47(m,1H),0.90-0.84(m,4H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ164.9,164.4,164.3,163.3,133.7,132.8,129.9,129.7,129.4,129.3,128.5,128.3,127.8(2C),126.3,124.7,99.7,91.4,73.6,67.8,67.6,67.2,60.9,8.2,-0.0；HRMS(ESI-TOF)m/z:[M+H]⁺calcd for C₃₈H₃₁O₉ 631.1968；found 631.1966.

實(shí)施例1：3位羥基保護(hù)的環(huán)黃芪醇衍生物3的合成

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將環(huán)黃芪醇(400mg,0.82mmol)溶于干燥的DMF(0.6mL)再向體系中加入TBSCl(489mg,3.27mmol),咪唑(333mg,4.90mmol)，在室溫?cái)嚢柚钡絋LC跟蹤顯示原料反應(yīng)完全，將反應(yīng)體系用乙酸乙酯萃取，并依次用1mol/l HCl、飽和碳酸氫鈉、飽和NaCl洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮粗產(chǎn)品，然后柱層析得到白色固體化合物2(376.5mg,76.8％)：[α]_D²⁵＝30.5(c＝1,CHCl₃)；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.67(dd,J＝7.6,14.4Hz,1H),3.72(dd,J＝6.0,8.0Hz,1H),3.51(td,J＝3.6,9.6Hz,1H),3.25(dd,J＝4.8,10.0Hz,1H),2.59(dd,J＝10.4,21.6Hz,1H),2.31(d,J＝8.0Hz,1H),2.00-1.92(m,4H),1.76(dd,J＝4.0,12.0Hz,1H),1.25(s,3H),1.21(s,3H),1.17(s,3H),1.13(s,3H),1.11(s,3H),1.09(s,3H),0.91(s,3H),0.89(s,3H),0.85(s,9H),0.47(d,J＝4.0Hz,1H),0.31(d,J＝4.4Hz,1H),0.00(s,3H),-0.005(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ87.1,81.4,78.8,73.4,71.8,68.9,57.5,53.7,46.9,46.5,46.0,45.0,42.1,37.7,34.4,33.0,32.1,31.4,30.8,29.4,28.6,27.9,27.7,26.4,25.9(2C),25.8,21.4,20.5,20.0,18.1,15.8；HRMS(ESI)calcd for C₃₆H₆₅O₅Si[M+H]⁺605.4596,found 605.4599.

實(shí)施例2：全羥基保護(hù)的環(huán)黃芪醇衍生物3的合成

在氮?dú)獗Ｗo(hù)，0攝氏度條件下，化合物2(133mg，0.22mmol)，PPy(58mg，0.44mmol)溶于干燥的甲苯(2ml)中，再向體系中加入乙酸酐(0.18ml，2.2mmol)，DIPEA(0.479ml，3.3mmol)，體系緩慢升至室溫然后在加熱到105攝氏度，攪拌直到TLC跟蹤顯示原料反應(yīng)完全，將反應(yīng)體系用乙酸乙酯萃取，并依次用1mol/l HCl、飽和碳酸氫鈉、飽和NaCl洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮粗產(chǎn)品，然后柱層析得到白色固體化合物3(139.7mg,99％)：[α]_D²⁵＝78.3(c＝1,CHCl₃)；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.31(m,1H),4.70(td,J＝4.8,8.8Hz,1H),3.96(t,J＝7.2Hz,1H),3.24(m,1H),2.40(d,J＝8.0Hz,1H),2.14(m,1H),2.13(dd,J＝8.0,13.6Hz,1H),1.98(s,3H),1.95(s,3H),1.93(s,3H),1.40(s,3H),1.38(s,3H),1.29(s,3H),0.92(s,3H),0.85(s,15H),0.84(s,3H),0.54(d,J＝4.8Hz,1H),0.27(d,J＝4.8Hz,1H),0.00(s,6H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ170.4(2C),170.2,85.6,83.1,81.3,78.4,75.8,70.6,57.5,49.6,46.5,46.3,45.4,44.6,41.8,37.3,32.8,32.3,31.6,30.6,28.8,28.4,27.0(2C),26.2,26.0,25.9,22.8,22.5,21.8,21.6,21.5,20.5,20.2,19.9,18.1,15.5；HRMS(ESI)calcd for C₄₂H₇₁O₈Si[M+H]⁺731.4913,found 731.4912.

實(shí)施例3：3位羥基裸露的環(huán)黃芪醇衍生物4的合成

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將化合物3(20mg,0.03mmol)溶于干燥的甲醇(2mL)中，在室溫下加入樟腦磺酸(26mg,0.11mmol)，攪拌直到TLC跟蹤顯示原料反應(yīng)完全，減壓濃縮粗產(chǎn)品，然后柱層析得到白色固體化合物4(15mg,88.9％)：[α]_D²⁵＝162.2(c＝1,CHCl₃)；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.35-5.30(m,1H),4.76(td,J＝4.4,9.2Hz,1H),4.02(t,J＝7.6Hz,1H),3.32(dd,J＝3.6,10.8Hz,1H),2.43(d,J＝8.0Hz,1H),2.18-2.12(m,2H),2.01(s,3H),2.00(s,3H),1.97(s,3H),1.43(s,3H),1.41(s,3H),1.324(s,3H),1.319(s,3H),0.99(s,3H),0.96(s,3H),0.91(s,3H),0.59(d,J＝4.8Hz,1H),0.36(d,J＝4.4Hz,1H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ170.4,170.2,85.5,83.1,81.3,77.8,75.8,70.7,57.5,49.7,46.4,46.3,45.5,45.1,41.2,37.3,33.1,32.3,31.7,30.2,29.2,28.6,27.0,26.6,26.2,26.0,22.8,22.5,21.8,21.6,21.5,20.6,20.3,20.0,15.1；HRMS(ESI)calcd for C₃₆H₅₇O₈[M+H]⁺617.4048,found 617.4048.

實(shí)施例4：3位羥基糖苷化產(chǎn)物6的合成

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將化合物4(12mg,0.02mmol)和木糖炔酯給體5(25mg,0.04mmol)溶于干燥的二氯甲烷(2.5ml)中，并加入4A分子篩，在室溫下攪拌半個(gè)小時(shí)再加入催化劑Ph₃PAuNTf₂(8mg，0.01mmol)繼續(xù)在室溫下攪拌直到TLC跟蹤顯示原料反應(yīng)完全，減壓濃縮粗產(chǎn)品，然后柱層析得到白色固體化合物18(22mg，92％)：[α]_D²⁵＝29.4(c＝1,CHCl₃)；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.01-7.94(m,6H),7.56-7.47(m,3H),7.40-7.31(m,6H),5.78(t,J＝7.6Hz,1H),5.45(dd,J＝5.6,7.6Hz,1H),5.34-5.28(m,2H),4.85(d,J＝5.6Hz,1H),4.64(td,J＝4.4,8.8Hz,1H),4.46(dd,J＝4.4,12.0Hz,1H),4.02(t,J＝7.2Hz,1H),3.68(dd,J＝7.6,12.0Hz,1H),3.25(dd,J＝4.4,11.6Hz,1H),2.42(d,J＝8.0Hz,1H),2.00(s,3H),1.96(s,3H),1.90(s,3H),1.43(s,3H),1.41(s,3H),1.32(s,3H),1.30(s,3H),0.95(s,3H),0.80(s,3H),0.78(s,3H),0.55(d,J＝4.4Hz,1H),0.34(d,J＝4.4Hz,1H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ170.5,170.3(2C),165.6,165.5,165.2,133.4,133.3,133.2,129.9,129.8,129.4,129.2,129.1,128.4(2C),128.3,102.5,88.3,85.6,83.1,81.2,75.8,70.8,70.7,70.3,69.5,61.5,57.4,49.7,46.4,46.3,45.4,44.6,41.5,37.2,32.8,32.3,31.6,29.7,28.9,28.8,28.1,27.1,26.2,26.0,22.8,22.6,21.8,21.6,20.6,20.2,20.0,15.8；HRMS(ESI)calcd for C₆₂H₈₀O₁₅N[M+NH₄]⁺1078.55225,found 1078.55305.

實(shí)施例5：膜莢黃芪皂苷Ⅱ的合成

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將化合物6(50mg,0.047mmol)溶于干燥的甲醇(3ml)中，再加入甲醇鈉(0.329mmol)，室溫下攪拌直到TLC跟蹤顯示原料反應(yīng)完全，先用酸性樹脂中和PH至中性偏酸性，抽濾，減壓濃縮粗產(chǎn)品，然后柱層析得到白色固體化合物膜莢黃芪皂苷Ⅱ(25.3mg,86％)：[α]_D²⁵＝57.2(c＝0.5,CH₃OH)；¹H NMR(400MHz,C₅D₅N)δ6.55(bs,1H),5.68(bs,1H),5.05(dd,J＝6.8,14.0Hz,1H),4.93(d,J＝7.2Hz,1H)；4.40(dd,J＝4.8,11.2Hz,1H),4.27-4.22(m,1H),4.19(t,J＝8.4Hz,1H),4.09-4.05(m,1H),3.91(dd,J＝5.6,8.8Hz,1H),3.81-3.72(m,2H),3.66(dd,J＝4.0,11.6Hz,1H),3.15(dd,J＝10.8,20.4Hz,1H),2.55(d,J＝7.6Hz,1H),2.45-2.42(m,1H),2.35-2.28(m,1H),2.00(s,3H),1.58(s,3H),1.43(s,3H),1.34(s,3H),1.32(s,3H),1.30(s,3H),1.01(s,3H)；0.58(d,J＝4.0Hz,1H),0.30(d,J＝4.0Hz,1H)；¹³C NMR(100MHz,C₅D₅N)δ107.4,88.5,87.0,81.5,78.3,75.4,73.2,71.0,67.8,66.8,58.1,53.8,46.8,46.4,45.9,44.8,42.5,38.4,34.7,33.2,32.3,30.4,30.1,29.3,28.7,28.3,28.0,26.9,26.2,26.0,21.3,20.8,20.0,16.4；HRMS(ESI)calcd for C₃₅H₅₈O₉Na[M+Na]⁺645.3973,found 645.3974.

實(shí)施例6：3位羥基保護(hù)的環(huán)黃芪醇衍生物3的合成

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將環(huán)黃芪醇(400mg,0.82mmol)溶于干燥的DMF(0.6 6mL)再向體系中加入TBSCl(245mg,1.63mmol),咪唑(222mg,3.27mmol)，在室溫?cái)嚢柚钡絋LC跟蹤顯示原料反應(yīng)完全，將反應(yīng)體系用乙酸乙酯萃取，并依次用1mol/l HCl、飽和碳酸氫鈉、飽和NaCl洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮粗產(chǎn)品，然后柱層析得到白色固體化合物2(343.2mg,70％)：

實(shí)施例7：全羥基保護(hù)的環(huán)黃芪醇衍生物3的合成

在氮?dú)獗Ｗo(hù)，0攝氏度條件下，化合物2(133mg，0.22mmol)，PPy(58mg，0.44mmol)溶于干燥的甲苯(0.44ml)中，再向體系中加入乙酸酐(0.27ml，3.3mmol)，DIPEA(0.639ml，4.4mmol)，體系緩慢升至室溫然后在加熱到105攝氏度，攪拌直到TLC跟蹤顯示原料反應(yīng)完全，將反應(yīng)體系用乙酸乙酯萃取，并依次用1mol/l HCl、飽和碳酸氫鈉、飽和NaCl洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮粗產(chǎn)品，然后柱層析得到白色固體化合物3(139.7mg,99％)。

實(shí)施例8：3位羥基裸露的環(huán)黃芪醇衍生物4的合成

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將化合物3(20mg,0.03mmol)溶于干燥的甲醇(0.6mL)中，在室溫下加入樟腦磺酸(19mg,0.09mmol)，攪拌直到TLC跟蹤顯示原料反應(yīng)完全，減壓濃縮粗產(chǎn)品，然后柱層析得到白色固體化合物4(14mg,83％)。

實(shí)施例9：3位羥基糖苷化產(chǎn)物6的合成

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將化合物4(12mg,0.02mmol)和木糖炔酯給體5(12.5mg,0.02mmol)溶于干燥的二氯甲烷(2ml)中，并加入4A分子篩，在室溫下攪拌半個(gè)小時(shí)再加入催化劑Ph₃PAuNTf₂(1.6mg，0.002mmol)繼續(xù)在室溫下攪拌直到TLC跟蹤顯示原料反應(yīng)完全，減壓濃縮粗產(chǎn)品，然后柱層析得到白色固體化合物18(21mg，88％).

實(shí)施例10：膜莢黃芪皂苷Ⅱ的合成

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將化合物6(50mg,0.047mmol)溶于干燥的甲醇(4.7ml)中，再加入甲醇鈉(0.47mmol)，室溫下攪拌直到TLC跟蹤顯示原料反應(yīng)完全，先用酸性樹脂中和PH至中性偏酸性，抽濾，減壓濃縮粗產(chǎn)品，然后柱層析得到白色固體化合物膜莢黃芪皂苷Ⅱ(25.3mg,86％)。

對比例1：保護(hù)基使用常規(guī)當(dāng)量，3-OH不能完全被保護(hù)。

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，將環(huán)黃芪醇(400mg,0.82mmol)溶于干燥的DMF(0.6mL)再向體系中加入TBSCl(147mg,0.98mmol),咪唑(111mg,1.64mmol)，在室溫?cái)嚢柚钡絋LC跟蹤顯示原料反應(yīng)完全，將反應(yīng)體系用乙酸乙酯萃取，并依次用1mol/l HCl、飽和碳酸氫鈉、飽和NaCl洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮粗產(chǎn)品，然后柱層析得到白色固體化合物2(196mg,40％)。

對比例2：低濃度下，25-OH不能被乙酰化。

在氮?dú)獗Ｗo(hù)，0℃條件下，環(huán)黃芪醇(180mg,0.37mmol)，PPy(108mg,0.74mmol)溶于干燥的甲苯(10mL)中，再向體系中加入乙酸酐(348μL,3.67mmol)，DIPEA(912μL,5.55mmol)，體系緩慢升至室溫然后在加熱到105℃，攪拌直到TLC跟蹤顯示原料反應(yīng)完全，將反應(yīng)體系用乙酸乙酯萃取，并依次用1mol/l HCl、飽和碳酸氫鈉、飽和NaCl洗，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮粗產(chǎn)品，然后柱層析得到25-OH不能被乙?；陌咨腆w化合物(184mg,81.3％)：[α]D25＝73.5(c＝1,CHCl3)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.44-5.39(m,1H),4.75(td,J＝4.4,9.2Hz,1H),4.60(dd,J＝4.4,11.2Hz,1H),3.72(dd,J＝6.8,8.4Hz,1H),2.50(d,J＝8.4Hz,1H),2.38(td,J＝5.2,11.6Hz,1H),2.17(dd,J＝8.0,13.6Hz,1H),2.05(s,3H),2.02(s,3H),1.99(s,3H),1.30(s,3H),1.29(s,3H),1.20(s,3H),1.09(s,3H),0.99(s,3H),0.98(s,3H),0.85(s,3H),0.61(d,J＝4.8Hz,1H),0.38(d,J＝4.8Hz,1H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ170.8,170.6,170.4,85.6,81.9,79.5,75.6,70.9,70.2,57.1,49.7,46.2,46.1,45.3,45.0,40.1,36.5,32.9,32.5,31.4,29.7,29.2,28.4,27.8,27.7,26.6,26.0(2C),24.5,21.8,21.6,21.2,20.7,20.4,20.0,16.2；HRMS(ESI)calcd for C36H57O8[M+H]+617.4048,found 617.4049.

對比例3：常規(guī)TBS脫保護(hù)的不能得到化合物4。

在氮?dú)獗Ｗo(hù)，0℃條件下，環(huán)黃芪醇3位TBS保護(hù)，6、16位Piv保護(hù)，25位接全Bz保護(hù)的葡萄糖的化合物(15mg,0.011mmol)，溶于干燥的四氫呋喃(1.5mL)中，再向體系中加入醋酸(3μL,0.055mmol)，然后再加入TBAF(4.31mg,0.0165mmol)，體系緩慢升至室溫，攪拌，TLC跟蹤顯示原料一直未反應(yīng)。

在氮?dú)獗Ｗo(hù)，0℃條件下，環(huán)黃芪醇3位TBS保護(hù)，6、16位Piv保護(hù)，25位接全Bz保護(hù)的葡萄糖的化合物(10mg,0.0074mmol)，溶于干燥的甲醇(0.4mL)中，再向體系中加入70％HF·Py(30μL)，攪拌，體系緩慢升至室溫，TLC跟蹤顯示原料一直未反應(yīng)。