本發(fā)明屬于化學(xué)合成的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到一種依魯替尼的中間體的分離純化方法。

技術(shù)背景

依魯替尼是由johnsonjohnson公司和pharmacyclics公司合作研發(fā)的靶向抗癌新藥,是一種口服的布魯頓酪氨酸激酶（btk）抑制劑類首創(chuàng)新藥，該藥通過(guò)與靶蛋白btk活性位點(diǎn)半胱氨酸殘基（cys-481）選擇性地共價(jià)結(jié)合，不可逆性地抑制btk，從而有效地阻止腫瘤從b細(xì)胞遷移到適應(yīng)于腫瘤生長(zhǎng)環(huán)境的淋巴組織。其于2013年2月被fda授予突破性治療藥物資格，并分別于2013年12月在美國(guó)上市，2014年10月在歐洲上市，批準(zhǔn)用于慢性淋巴細(xì)胞白血?。╟hroniclymphocyticleukemia，cll）和套細(xì)胞淋巴瘤（mantlecelllymphoma，mcl）的治療藥物。

研究表明，依魯替尼在治療復(fù)發(fā)性或難治性套細(xì)胞淋巴瘤上都表現(xiàn)出不錯(cuò)治療效果和單藥活性，且評(píng)估的獲益-風(fēng)險(xiǎn)比高，藥物安全性好。與奧法木單抗相比，依魯替尼可顯著提高對(duì)既往治療反應(yīng)欠佳的慢性淋巴細(xì)胞白血病/小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤患者無(wú)進(jìn)展生存期、總體存活率及反應(yīng)率。

mcl的接受依魯替尼（280或560mg），28天為一療程，共6個(gè)療程，隨后使用單藥直到疾病進(jìn)展。cll患者接受28天為一療程的依魯替尼（每天口服420mg），共24周，直至疾病進(jìn)展或發(fā)生限制性毒性。一個(gè)患者的用量約4.5kg~9kg原料藥，此原料藥的需求量極大，優(yōu)化工藝對(duì)控制該原料藥的成本、減少三廢排放等，顯得更為重要。

目前已有的依魯替尼合成方法如圖1所示。路線1—利用4-胺基-3-鹵代-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶為起始原料，與3(s)-羥基-1-叔丁氧基羰基哌啶進(jìn)行mitsunobu縮合反應(yīng)，得到中間體2。在金屬鈀和有機(jī)磷配體催化下與4-苯氧基苯硼酸進(jìn)行suzuki偶聯(lián)反應(yīng)，得到中間體5；（3r）-4-胺基-3-（4-苯氧基苯基）-1-（1-叔丁氧基羰基哌啶-3-基）-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶；

路線2—鹵代物1先與4-苯氧基苯硼酸進(jìn)行suzuki偶聯(lián)反應(yīng)得到中間體3；4-胺基-3-（4-苯氧基苯基）-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶；再與3(s)-羥基-1-叔丁氧基羰基哌啶進(jìn)行mitsunobu縮合反應(yīng)得中間體5；

路線3—化合物4的來(lái)源方便，無(wú)需經(jīng)貴重金屬參與的偶聯(lián)反應(yīng)，可由4-苯氧基苯甲酸經(jīng)氯代、與丙二腈縮合及甲基化，再與水合肼環(huán)合制得?；衔?與甲酰胺環(huán)合得中間體3，再與3(s)-羥基-1-叔丁氧基羰基哌啶進(jìn)行mitsunobu縮合反應(yīng)得到中間體5；

最后中間體5，脫去boc保護(hù)基，得到中間體6，再與丙烯酰氯進(jìn)行酰胺化反應(yīng)得到依魯替尼7。

路線1和2中，偶聯(lián)反應(yīng)的問(wèn)題：貴重金屬催化劑，貴重金屬的活性，價(jià)格昂貴，反應(yīng)條件：絕對(duì)無(wú)氧；路線3：避免了使用貴重金屬和苛刻反應(yīng)條件，先在原材料中引入了（4-苯氧基）苯基。因此工業(yè)化時(shí)優(yōu)選路線3。

以上所有路線中，都需經(jīng)mitsunobu反應(yīng)引入3-位手性哌啶結(jié)構(gòu)，mitsunobu反應(yīng)在工業(yè)化時(shí)最大的缺陷是其副產(chǎn)物三苯基氧磷很難除去，通常需要繁瑣的、成本高的柱層析。優(yōu)選的路線3中，由中間體3經(jīng)mitsunobu反應(yīng)得到中間體5,中間體5經(jīng)柱層析純化除去三苯基氧磷。柱層析是操作繁瑣、高成本的工藝過(guò)程，且大規(guī)模工業(yè)化也難。因此有必要開(kāi)發(fā)此步驟的簡(jiǎn)潔、低成本的工藝化方法。

mitsunobu反應(yīng)在工業(yè)化應(yīng)用時(shí)，其最大的缺陷是其副產(chǎn)物三苯基氧磷(ph3po)很難除去，通常需要繁瑣的、成本高的柱層析分離法。已知ph3po可以與很多“硬酸”金屬原子配合(newp-chirogenicphosphineandtheiruseincatalyticasymmetricreactions,topcurr.chem.2003,229:1-40)，典型的配合物,例如四面體型的nicl2(opph3)2；以及可與zncl2、znbr2、mgcl2、mgbr2等形成配合物。在制備依魯替尼中間體5的反應(yīng)終止后的混合物中，我們加入了最廉價(jià)的mgcl2與副產(chǎn)物ph3po形成復(fù)合物，升溫回流再冷卻，經(jīng)過(guò)濾去除了mgcl2與ph3po的復(fù)合物沉淀，這大大提高了分離純化的效率。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種簡(jiǎn)便的分離純化方法，用于純化由4-胺基-3-（4-苯氧基苯基）-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶（中間體3）經(jīng)mitsunobu反應(yīng)得到（3r）-4-胺基-3-（4-苯氧基苯基）-1-（1-叔丁氧基羰基哌啶-3-基）-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶（中間體5）（如圖2所示）。

該方法是在終止該mitsunobu反應(yīng)后的物料中，利用氯化鎂與mitsunobu反應(yīng)的副產(chǎn)物三苯基氧磷形成復(fù)合物沉淀，經(jīng)過(guò)濾可除去三苯基氧磷，從而無(wú)需繁瑣的、成本高的柱層析分離就可獲得高純度的依魯替尼關(guān)鍵中間體。

從依魯替尼中間體3制備其中間體5（圖2）：參照mitsunobu反應(yīng)的相關(guān)文獻(xiàn)(1.k.c.kumaraswamyetal,chem.rev.2009,109:2551-2651;2.jeffreya.dodgeetal.organicsynthesis,1998,coll.vol.9,p607),采用通常的加料順序：四氫呋喃溶劑、三苯基磷、(3s)-羥基-1-叔丁氧基羰基哌啶、偶氮二羧酸二異丙酯（diad）或偶氮二羧酸二乙酯（dead）的四氫呋喃溶液，最后加中間體3的四氫呋喃溶液。mitsunobu反應(yīng)中通常酸性提供質(zhì)子的底物稍過(guò)量，有利于反應(yīng)進(jìn)行，但是過(guò)量太多會(huì)帶來(lái)分離困難，因此中間體3采用1.05當(dāng)量；其它物料為采用通常的用量：3(s)-羥基-1-叔丁氧基羰基哌啶1.0當(dāng)量；三苯基磷1.25當(dāng)量，而diad（或dead）1.40當(dāng)量。加料及反應(yīng)溫度于0~5℃，加料后反應(yīng)時(shí)間為3-5h。溶劑采用通用的四氫呋喃，氯化鎂與三苯基氧磷形成的復(fù)合物在物料體系中可沉淀下來(lái)。

反應(yīng)的后處理：水可分解過(guò)量的ph3p和diad（或dead）成ph3po和肼二羧酸二異丙酯（或肼二羧酸二乙酯，其溶于水），當(dāng)加入少量水終止反應(yīng)，mitsunobu反應(yīng)結(jié)束后，加入氯化鎂，氯化鎂在水及四氫呋喃中都有很好的溶解度，溫?zé)嶂?0-60℃，mgcl2與ph3po形成復(fù)合物，在冷卻至0℃，mgcl2與ph3po形成沉淀，經(jīng)過(guò)濾除去ph3po·mgcl2的復(fù)合物，濾液經(jīng)減壓濃縮。將殘留的油狀物以乙酸乙酯打漿，加少量正己烷，過(guò)濾，濾液經(jīng)洗滌、干燥、濃縮，所得殘留物，經(jīng)檢測(cè)(hplc歸一化法)，當(dāng)氯化鎂為2.5當(dāng)量（相對(duì)于ph3po）用量時(shí)含有很低含量的ph3po（5.6wt%），再以異丙醇重結(jié)晶，所得產(chǎn)品，再經(jīng)檢測(cè)ph3po的含量降低至0.8wt%。此純度已適用于進(jìn)一步制備藥物依魯替尼。

mgcl2的用量，為mitsunobu反應(yīng)中使用的ph3p量的1.5~3.0當(dāng)量，其2.5當(dāng)量的用量時(shí)較佳；為充分絡(luò)合，加入mgcl2需將物料溫?zé)嶂?0~60℃，再冷卻使ph3po·mgcl2的復(fù)合物，冷卻溫度范圍可在5~-10℃，-10℃時(shí)，復(fù)合物沉淀更充分。最后濾除復(fù)合物，將物料濃縮。于殘留物中加入乙酸乙酯將產(chǎn)品溶解，再加入少量正己烷，使得ph3po·mgcl2的復(fù)合物再次充分沉淀，再過(guò)濾濃縮，殘留物最后以異丙醇重結(jié)晶。殘留ph3po經(jīng)高效液相（hplc）法檢測(cè)。

本發(fā)明顯著的技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明在制備依魯替尼中間體（3r）-4-胺基-3-（4-苯氧基苯基）-1-（1-叔丁氧基羰基哌啶-3-基）-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶的mitsunobu反應(yīng)終止后的混合物中，加入了最廉價(jià)的mgcl2與其副產(chǎn)物ph3po形成復(fù)合物，升溫回流再冷卻，經(jīng)過(guò)濾去除了mgcl2與ph3po的復(fù)合物沉淀，這大大提高了分離純化的效率。

附圖說(shuō)明

圖1為依魯替尼的合成路線；

圖2為制備依魯替尼中間體5的mitsunobu反應(yīng)。

具體實(shí)施方式

為進(jìn)一步公開(kāi)而不是限制本發(fā)明，以下結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。

實(shí)施例1

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，ph3p（29.2g，112mmol，1.25eq）、(3s)-羥基-1-叔丁氧基羰基哌啶（18.0g，89.3mmol，1.0eq）溶于四氫呋喃150ml后，冷卻至0℃，控制溫度不超過(guò)5℃，在20-30min內(nèi)加入diad（25.3g，125mmol，1.4eq）的四氫呋喃（40ml）溶液，加畢，黃色溶液繼續(xù)攪拌10min。再于0~5℃下加入4-胺基-3-（4-苯氧基苯基）-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶（28.4g，93.8mmol，1.05eq）的四氫呋喃（150ml）溶液，加畢，于室溫下攪拌5h。加水3.2ml，溫?zé)嶂?0-60℃30min，然后加入氯化鎂（10.6g，112mmol，1.25eq），攪拌溫?zé)嶂?0-60℃2.5h，冷卻至0℃，過(guò)濾，并用四氫呋喃（50ml×2）洗滌，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，將殘留的油狀物以乙酸乙酯（300ml）打漿，加入正己烷（50ml），過(guò)濾，以乙酸乙酯（30ml×2）洗滌濾渣，濾液以水（100ml×2）、飽和食鹽水（150ml）洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，殘留物中ph3po含量：32.4wt%，再于殘留物中加入異丙醇（40ml）溫?zé)嶂?0-60℃攪拌，冷卻結(jié)晶，過(guò)濾少量冷異丙醇洗滌，真空干燥得到產(chǎn)物33.5g，其中ph3po含量：14wt%。

實(shí)施例2

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，ph3p（29.0g，112mmol，1.25eq）、(3s)-羥基-1-叔丁氧基羰基哌啶（18.0g，89.3mmol，1.0eq）溶于四氫呋喃150ml后，冷卻至0℃，控制溫度不超過(guò)5℃，在20-30min內(nèi)加入diad（25.1g，125mmol，1.4eq）的四氫呋喃（40ml）溶液，加畢，黃色溶液繼續(xù)攪拌10min。再于0~5℃下加入4-胺基-3-（4-苯氧基苯基）-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶（28.4g，93.9mmol，1.05eq）的四氫呋喃（150ml）溶液，加畢，于室溫下攪拌5h。加水3.2ml，溫?zé)嶂?0-60℃30min，然后加入氯化鎂（14.3g，168mmol，1.5eq），攪拌溫?zé)嶂?0-60℃2.5h，冷卻至0℃，過(guò)濾，并用四氫呋喃（50ml×2）洗滌，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，將殘留的油狀物以乙酸乙酯（300ml）打漿，加入正己烷（50ml），過(guò)濾，以乙酸乙酯（30ml×2）洗滌濾渣，濾液以水（100ml×2）、飽和食鹽水（150ml）洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，殘留物中ph3po含量：24%，再于殘留物中加入異丙醇（40ml）溫?zé)嶂?0-60℃攪拌，冷卻結(jié)晶，過(guò)濾少量冷異丙醇洗滌，真空干燥得到產(chǎn)物32g，ph3po含量：9wt%。

實(shí)施例3

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，ph3p（29.0g，112mmol，1.25eq）、(3s)-羥基-1-叔丁氧基羰基哌啶（18.0g，89.3mmol，1.0eq）溶于四氫呋喃150ml后，冷卻至0℃，控制溫度不超過(guò)5℃，在20-30min內(nèi)加入diad（25.1g，125mmol，1.4eq）的四氫呋喃（40ml）溶液，加畢，黃色溶液繼續(xù)攪拌10min。再于0~5℃下加入4-胺基-3-（4-苯氧基苯基）-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶（28.2g，93.9mmol，1.05eq）的四氫呋喃（150ml）溶液，加畢，于室溫下攪拌5h。加水3.2ml，溫?zé)嶂?0-60℃30min，然后加入氯化鎂（21.3g，224mmol，2.0eq），攪拌溫?zé)嶂?0-60℃2.5h，冷卻至0℃，過(guò)濾，并用四氫呋喃（50ml×2）洗滌，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，將殘留的油狀物以乙酸乙酯（300ml）打漿，加入正己烷（50ml），過(guò)濾，以乙酸乙酯（30ml×2）洗滌濾渣，濾液以水（100ml×2）、飽和食鹽水（150ml）洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，殘留物中ph3po含量：14wt%，再于殘留物中加入異丙醇（40ml）溫?zé)嶂?0-60℃攪拌，冷卻結(jié)晶，過(guò)濾少量冷異丙醇洗滌，真空干燥得到產(chǎn)物30.5g，ph3po含量：5.3wt%。

實(shí)施例4

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，ph3p（29.0g，112mmol，1.25eq）、(3s)-羥基-1-叔丁氧基羰基哌啶（18.0g，89.3mmol，1.0eq）溶于四氫呋喃150ml后，冷卻至0℃，控制溫度不超過(guò)5℃，在20-30min內(nèi)加入diad（25.1g，125mmol，1.4eq）的四氫呋喃（40ml）溶液，加畢，黃色溶液繼續(xù)攪拌10min。再于0~5℃下加入4-胺基-3-（4-苯氧基苯基）-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶（28.1g，93.9mmol，1.05eq）的四氫呋喃（150ml）溶液，加畢，于室溫下攪拌5h。加水3.2ml，溫?zé)嶂?0-60℃30min，然后加入氯化鎂（27.0g，280mmol，2.5eq），攪拌回流2.5h，冷卻至0℃，過(guò)濾，并用四氫呋喃（50ml×2）洗滌，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，將殘留的油狀物以乙酸乙酯（300ml）打漿，加入正己烷（50ml），過(guò)濾，以乙酸乙酯（30ml×2）洗滌濾渣，濾液以水（100ml×2）、飽和食鹽水（150ml）洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，殘留物中ph3po含量：5.6wt%，再于殘留物中加入異丙醇（40ml）溫?zé)嶂?0-60℃攪拌，冷卻結(jié)晶，過(guò)濾少量冷異丙醇洗滌，真空干燥得到產(chǎn)物28.1g（收率72wt%，淡黃色固體），ph3po含量：0.8wt%。

此方法割除經(jīng)柱層析純化除去三苯基氧磷，簡(jiǎn)化了工藝、大幅降低了工業(yè)成本，此法也適合于大規(guī)模工業(yè)化。

實(shí)施例5

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，ph3p（29.0g，112mmol，1.25eq）、(3s)-羥基-1-叔丁氧基羰基哌啶（18.0g，89.3mmol，1.0eq）溶于四氫呋喃150ml后，冷卻至0℃，控制溫度不超過(guò)5℃，在20-30min內(nèi)加入diad（25.1g，125mmol，1.4eq）的四氫呋喃（40ml）溶液，加畢，黃色溶液繼續(xù)攪拌10min。再于0~5℃下加入4-胺基-3-（4-苯氧基苯基）-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶（28.3g，93.9mmol，1.05eq）的四氫呋喃（150ml）溶液，加畢，于室溫下攪拌5h。加水4ml，溫?zé)嶂?0-60℃30min，然后加入氯化鎂（27.0g，280mmol，2.5eq），攪拌回流2.5h，冷卻至-10℃，過(guò)濾，并用四氫呋喃（50ml×2）洗滌，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，將殘留的油狀物以乙酸乙酯（300ml）打漿，加入正己烷（50ml），過(guò)濾，以乙酸乙酯（30ml×2）洗滌濾渣，濾液以水（100ml×2）、飽和食鹽水（150ml）洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，殘留物中ph3po含量：3.5wt%，再于殘留物中加入異丙醇（40ml）溫?zé)嶂?0-60℃攪拌，冷卻結(jié)晶，過(guò)濾少量冷異丙醇洗滌，真空干燥得到產(chǎn)物27.0g（收率70wt%，淡黃色固體），ph3po含量：0wt%。

實(shí)施例6

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，ph3p（58.0g，224mmol，1.25eq）、(3s)-羥基-1-叔丁氧基羰基哌啶（36.0g，179mmol，1.0eq）溶于四氫呋喃300ml后，冷卻至0℃，控制溫度不超過(guò)5℃，在20-30min內(nèi)加入diad（50.0g，250mmol，1.4eq）的四氫呋喃（80ml）溶液，加畢，黃色溶液繼續(xù)攪拌10min。再于0~5℃下加入4-胺基-3-（4-苯氧基苯基）-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶（56.0g，184mmol，1.05eq）的四氫呋喃（300ml）溶液，加畢，于室溫下攪拌5h。加水7ml，溫?zé)嶂?0-60℃30min，然后加入氯化鎂（54.0g，560mmol，2.5eq），攪拌溫?zé)嶂?0-60℃2.5h，冷卻至0℃，過(guò)濾，并用四氫呋喃（100ml×2）洗滌，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，將殘留的油狀物以乙酸乙酯（600ml）打漿，加入正己烷（100ml），過(guò)濾，以乙酸乙酯（60ml×2）洗滌濾渣，濾液以水（200ml×2）、飽和食鹽水（300ml）洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，殘留物中ph3po含量：4.5wt%，再于殘留物中加入異丙醇（100ml）溫?zé)嶂?0-60℃攪拌，冷卻結(jié)晶，過(guò)濾少量冷異丙醇洗滌，真空干燥得到產(chǎn)物51.2g（收率65wt%，淡黃色固體），ph3po含量：0wt%。

實(shí)施例7

在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，ph3p（29.0g，112mmol，1.25eq）、(3s)-羥基-1-叔丁氧基羰基哌啶（18.0g，89.3mmol，1.0eq）溶于四氫呋喃150ml后，冷卻至0℃，控制溫度不超過(guò)5℃，在20-30min內(nèi)加入diad（25.1g，125mmol，1.4eq）的四氫呋喃（40ml）溶液，加畢，黃色溶液繼續(xù)攪拌10min。再于0~5℃下加入4-胺基-3-（4-苯氧基苯基）-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶（28.1g，93.9mmol，1.05eq）的四氫呋喃（150ml）溶液，加畢，于室溫下攪拌5h。加水3.2ml，溫?zé)嶂?0-60℃30min，然后加入氯化鎂（31.9g，336mmol，3.0eq），攪拌回流2.5h，冷卻至0℃，過(guò)濾，并用四氫呋喃（50ml×2）洗滌，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，將殘留的油狀物以乙酸乙酯（300ml）打漿，加入正己烷（50ml），過(guò)濾，以乙酸乙酯（30ml×2）洗滌濾渣，濾液以水（100ml×2）、飽和食鹽水（150ml）洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，殘留物中ph3po含量2.1wt%，再于殘留物中加入異丙醇（40ml）溫?zé)嶂?0-60℃攪拌，冷卻結(jié)晶，過(guò)濾少量冷異丙醇洗滌，真空干燥得到產(chǎn)物26.5g（淡黃色固體，67.6wt%），ph3po含量：0wt%。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。