本發(fā)明屬于醫(yī)藥中間體的合成
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及具有苯基并四氫吡咯結(jié)構(gòu)的fshr拮抗劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：促性腺激素在人體中表現(xiàn)出重要的生理機(jī)能，比如新陳代謝、體溫調(diào)節(jié)和生殖過(guò)程。它是由下丘腦合成和分泌的，通過(guò)誘導(dǎo)垂體中促卵泡激素（fsh）/黃體生成激素（lh）的分泌，并進(jìn)一步誘導(dǎo)卵巢中各級(jí)卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育及排卵。fsh是哺乳動(dòng)物生殖過(guò)程中的核心激素，女性生殖功能的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)主要通過(guò)由下丘腦、垂體和卵巢組成的生殖功能調(diào)節(jié)軸得以實(shí)現(xiàn)，其中垂體前葉分泌的fsh在胎兒性分化、胎兒期卵子峰發(fā)生和卵泡閉鎖、性成熟期卵泡的發(fā)生發(fā)育和成熟、顆粒細(xì)胞芳香化酶活化和雄激素向雌激素的轉(zhuǎn)化、生殖周期的調(diào)節(jié)中起到不可替代的關(guān)鍵作用。fsh對(duì)靶器官的作用主要由fsh受體（fshr）所介導(dǎo)。研究表明，fshr不僅只表達(dá)于性腺，也在骨骼、前列腺、卵巢表面上皮等其它組織的表達(dá)。fsh在體內(nèi)水平過(guò)高，會(huì)導(dǎo)致骨質(zhì)流失，一些激素依賴(lài)性疾病，如卵巢癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜異位、卵巢過(guò)度刺激綜合征等，都受fsh影響很大；通過(guò)抑制fsh的分泌，可以進(jìn)而抑制性腺分泌性激素，導(dǎo)致血中疾病依賴(lài)性激素水平降低，抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)或預(yù)防、緩解、治療其他病癥；例如，西曲瑞克就是按照該機(jī)理對(duì)卵巢癌發(fā)揮抗增殖效應(yīng)。本發(fā)明根據(jù)目前已有的fsh受體抑制劑藥物分子，對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行優(yōu)化得到了一系列新型的fsh受體抑制劑藥物分子，并對(duì)其進(jìn)行了相關(guān)活性測(cè)試。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明解決的技術(shù)問(wèn)題是提供了一種合成方法簡(jiǎn)單、分子結(jié)構(gòu)新穎且對(duì)fsh受體作用效果較好的具有苯基并四氫吡咯結(jié)構(gòu)的fshr拮抗劑及其制備方法。本發(fā)明為解決上述技術(shù)問(wèn)題采用如下技術(shù)方案，具有苯基并四氫吡咯結(jié)構(gòu)的fshr拮抗劑，其特征在于：該fshr拮抗劑的結(jié)構(gòu)式為：，其中r為苯，對(duì)氟苯，對(duì)硝基苯。本發(fā)明所述的具有苯基并四氫吡咯結(jié)構(gòu)的fshr拮抗劑的制備方法，其特征在于具體步驟為：a、2-氨基-4-羥基-苯乙酸甲酯與2-溴-4,5-二甲氧基芐溴在羥基氫活化催化劑鈀/羥基磷灰石的作用下進(jìn)行取代反應(yīng)得到2-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯；b、(boc)2o對(duì)2-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯的2位氨基進(jìn)行活化保護(hù)反應(yīng)得到2-boc-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯；c、2-boc-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯在苯環(huán)氫活化催化劑鈀/羥基磷灰石的作用下發(fā)生分子內(nèi)縮合得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯；d、3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯在堿性溶液中經(jīng)過(guò)酯水解后再酸化得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸；e、3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸在催化劑氫化鋁鋰的作用下進(jìn)行羧基還原得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙醇；f、對(duì)甲苯磺酰氯在催化劑碳酸鉀的作用下對(duì)3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙醇的2位羥基進(jìn)行保護(hù)反應(yīng)得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基對(duì)甲苯磺酸酯；g、3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基對(duì)甲苯磺酸酯在弱酸性催化劑吡啶氫溴酸鹽的作用下脫去boc基團(tuán)得到3-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基對(duì)甲苯磺酸酯；h、3-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基對(duì)甲苯磺酸酯脫去對(duì)甲苯磺酯基后進(jìn)行分子內(nèi)成環(huán)得到8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氫吡咯；i、8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氫吡咯與不同的羧酸化合物進(jìn)行?；磻?yīng)得到8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氫吡咯n-?；交衔铩＿M(jìn)一步優(yōu)選，步驟a的具體過(guò)程為：在反應(yīng)容器中將2-氨基-4-羥基-苯乙酸甲酯和2-溴-4,5-二甲氧基芐溴加入到干燥的丙酮中，再加入羥基氫活化催化劑鈀/羥基磷灰石，其中2-氨基-4-羥基-苯乙酸甲酯與羥基氫活化催化劑鈀/羥基磷灰石的質(zhì)量比為10:1，加熱升溫至80℃進(jìn)行回流反應(yīng)，反應(yīng)4h后tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，在真空條件下蒸除溶劑，剩余物加入二氯甲烷中，再用純凈水洗滌三次，有機(jī)相經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥后，蒸除溶劑，再經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到純凈的2-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯。進(jìn)一步優(yōu)選，步驟b的具體過(guò)程為：在反應(yīng)容器中將2-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯加入到乙腈中，再加入(boc)2o，在室溫下攪拌反應(yīng)直至tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，蒸除反應(yīng)溶劑乙腈，加水后水相用二氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相，加入無(wú)水硫酸鈉干燥后蒸除溶劑得到2-boc-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯。進(jìn)一步優(yōu)選，步驟c的具體過(guò)程為：在反應(yīng)容器中將2-boc-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯加入到二甲基乙酰胺中，在n2保護(hù)下加入苯環(huán)氫活化催化劑鈀/羥基磷灰石，其中2-boc-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯與苯環(huán)氫活化催化劑鈀/羥基磷灰石的質(zhì)量比為20:1，向反應(yīng)體系中持續(xù)通入n2，同時(shí)排出n2，使其保持一個(gè)穩(wěn)定流通環(huán)境，室溫?cái)嚢?0min后密閉反應(yīng)容器，再將反應(yīng)容器放置在微波反應(yīng)器中加熱至130℃反應(yīng)直至tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，從微波反應(yīng)器中取出反應(yīng)容器并加入純凈水淬滅反應(yīng)，再用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液三次，合并有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鈉干燥后蒸除溶劑，最后經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯。進(jìn)一步優(yōu)選，步驟d的具體過(guò)程為：在反應(yīng)容器中將3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯加入到乙醇中，再加入溶有氫氧化鈉的水溶液，升溫至80℃反應(yīng)直至tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，在真空條件下蒸除溶劑，剩余物加入到水中，再用乙酸乙酯洗滌水相三次，水相再用稀鹽酸溶解調(diào)節(jié)ph為4，再用二氯甲烷萃取水相三次，合并有機(jī)相，最后蒸除溶劑后得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸。進(jìn)一步優(yōu)選，步驟e的具體過(guò)程為：在反應(yīng)容器中將3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯加入到無(wú)水thf中，反應(yīng)溫度降低至-60℃，滴加氫化鋁鋰的四氫呋喃溶液，保持溫度繼續(xù)反應(yīng)2h，再緩慢升溫至0℃繼續(xù)反應(yīng)2h，加入冰水淬滅反應(yīng)，抽濾反應(yīng)液，濾液用乙酸乙酯萃取多次，合并有機(jī)相，蒸除溶劑后得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙醇。進(jìn)一步優(yōu)選，步驟f的具體過(guò)程為：在反應(yīng)容器中將3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙醇和碳酸鉀加入到二氯甲烷中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于0℃加入溶有對(duì)甲苯磺酰氯的二氯甲烷溶液，升至室溫反應(yīng)直至tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，加入稀鹽酸淬滅反應(yīng)，水相ph為6-7，分出有機(jī)相，水相用二氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相，有機(jī)相經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥后蒸除溶劑得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基對(duì)甲苯磺酸酯。進(jìn)一步優(yōu)選，步驟g的具體過(guò)程為：在反應(yīng)容器中將3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基對(duì)甲苯磺酸酯加入到四氫呋喃中，再加入弱酸性催化劑吡啶氫溴酸鹽，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，最后蒸除溶劑得到3-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基對(duì)甲苯磺酸酯。進(jìn)一步優(yōu)選，步驟h的具體過(guò)程為：在反應(yīng)容器中將3-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基對(duì)甲苯磺酸酯加入到乙腈中，機(jī)械攪拌，加熱至70℃反應(yīng)直至tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，減壓蒸出溶劑乙腈，再加入正己烷，冷卻至-5℃，攪拌過(guò)程中有大量固體析出，過(guò)濾反應(yīng)液得到固體，并用冷甲苯洗滌，濾餅烘干后得到8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氫吡咯。進(jìn)一步優(yōu)選，步驟i的具體過(guò)程為：在反應(yīng)容器中將8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氫吡咯、羧酸類(lèi)化合物、1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、二異丙基乙胺和1-羥基苯并三唑加入到n,n-二甲基甲酰胺中，室溫反應(yīng)直至tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，向反應(yīng)液中加入純凈水，再用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液三次，合并有機(jī)相，然后用無(wú)水硫酸鈉干燥后經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到純品fsh拮抗劑藥物分子。本發(fā)明所述的具有苯基并四氫吡咯結(jié)構(gòu)的fshr拮抗劑的具體合成路線為：。本發(fā)明合成工藝簡(jiǎn)單且成本低廉，經(jīng)過(guò)活性測(cè)試可知制得的fsh受體拮抗劑藥物分子對(duì)fsh受體的作用效果較好，有望進(jìn)一步推廣應(yīng)用。具體實(shí)施方式以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，但不應(yīng)該將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1在反應(yīng)瓶中加入二氯化鈀5g，再加入質(zhì)量比為1:1的甲醇與水的混合溶液250ml，然后加入羧甲基纖維素鈉1g，用碳酸鈉調(diào)節(jié)體系的ph為4.5，加入羥基磷灰石50g，在室溫下攪拌2h后放入高壓釜中，在100kpa，100℃條件下攪拌加氫還原反應(yīng)2h，減壓抽濾，去離子水洗至中性且經(jīng)硝酸銀溶液檢測(cè)無(wú)氯離子，在常壓60℃條件下干燥3h得到鈀/羥基磷灰石40g。實(shí)施例2在反應(yīng)瓶中，將2-氨基-4-羥基-苯乙酸甲酯1g和2-溴-4,5-二甲氧基芐溴2g加入到干燥的丙酮160ml中，再加入鈀/羥基磷灰石0.1g，緩慢升高溫度至80℃進(jìn)行回流反應(yīng)，反應(yīng)4h后tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，在真空條件下蒸除溶劑，剩余物加入二氯甲烷100ml中，再用純凈水40ml洗滌三次，有機(jī)相經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥后，蒸除溶劑，再經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到純凈的2-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯1.26g，收率95%；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:10.63(s,1h),7.79(s,1h),7.11(s,1h),7.03(s,1h),6.77(s,2h),6.56-6.50(m,2h),6.11(s,1h),5.08(s,2h),3.92(s,3h),3.89(s,3h),3.86(s,3h)。實(shí)施例3在反應(yīng)瓶中，將2-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯2.0g和(boc)2o3.0g加入到乙腈20ml中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)中升至室溫反應(yīng)3h，tlc監(jiān)控[展開(kāi)劑:pe:ea=10:1]原料反應(yīng)完全，整除溶劑乙腈后在加入一定量的水，水相再用二氯甲烷10ml萃取三次，合并有機(jī)相，加入無(wú)水硫酸鈉10g除去有機(jī)相殘留水分，蒸除溶劑后得到2-boc-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯1.9g。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:10.57(s,1h),7.59(d,j=8.8hz,1h),7.42(s,2h),7.16(s,1h),7.08(s,1h),7.03(s,1h),6.59-6.55(m,2h),5.16(s,1h),3.97-3.89(m,6h),2.31(s,3h),1.17(s,9h)。實(shí)施例4在反應(yīng)瓶中，將2-boc-氨基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯2g和鈀/羥基磷灰石0.1g加入到二甲基乙酰胺30ml中，往反應(yīng)體系中不停通入n2，同時(shí)排出n2，使其保持一個(gè)穩(wěn)定流通環(huán)境，室溫?cái)嚢?0min后密閉反應(yīng)瓶，把其放置在微波反應(yīng)器中，加熱到130℃反應(yīng)2h，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，從微波反應(yīng)器中拿出反應(yīng)瓶，加入一定量的純凈水淬滅反應(yīng)，再用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液三次，合并有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鈉干燥后蒸除溶劑，最后經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯1.66g，收率為97%；1hnmr(400mhz,cdcl3):8.97(s,1h),7.95-7.61(m,2h),7.31-7.25(m,2h),5.11(s,2h),4.61-4.50(m,6h),3.97(s,3h),3.40(d,j=12.0hz,2h),1.14(s,9h)。實(shí)施例5在反應(yīng)瓶中，將3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯2g加入到乙醇20ml中，再加入溶有氫氧化鈉2g的水溶液15ml，升溫至80℃反應(yīng)1h，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，在真空條件下蒸除溶劑，剩余物加入到水中，再用乙酸乙酯洗滌水相三次，水相再用稀鹽酸溶解調(diào)節(jié)ph為4，再用二氯甲烷萃取水相三次，合并有機(jī)相，最后蒸除溶劑后得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸1.7g；1hnmr(400mhz,cdcl3):9.15(s,1h),7.81-7.67(m,2h),7.31-7.25(m,2h),5.13(s,2h),4.61-4.50(m,3h),3.97(s,3h),3.42(d,j=12.0hz,2h),1.19(s,9h)。實(shí)施例6在反應(yīng)瓶中，將3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸5g加入到無(wú)水thf50ml中，反應(yīng)溫度降低至-60℃，緩慢滴加氫化鋁鋰的四氫呋喃溶液20ml，滴加完后保持溫度繼續(xù)反應(yīng)2h，再緩慢升溫至0℃，繼續(xù)反應(yīng)2h，加入一定量的冰水淬滅反應(yīng)，抽濾反應(yīng)液，濾液用乙酸乙酯20ml萃取多次，合并有機(jī)相，蒸除溶劑后得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙醇4.2g；1hnmr(400mhz,cdcl3):9.15(s,1h),7.69-7.37(m,4h),5.21(s,1h),5.09(s,1h),4.61-4.50(m,3h),3.97(s,3h),3.63-3.55(m,5h),1.16(s,9h)。實(shí)施例7在反應(yīng)瓶中，將3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙醇5.0g和碳酸鉀5.0g加入二氯甲烷20ml中，在0℃條件下，氮?dú)獗Ｗo(hù)中，緩慢滴加溶有對(duì)甲苯磺酰氯(2.0g)的二氯甲烷(30ml)溶液，滴加完后升至室溫反應(yīng)3h，tlc監(jiān)控[展開(kāi)劑:pe:ea=10:1]原料反應(yīng)完全，用0.5mol/l稀鹽酸(10ml)淬滅反應(yīng)液，水相ph為6-7，分出有機(jī)相，水相再用二氯甲烷(10ml)萃取三次，合并有機(jī)相，加入無(wú)水硫酸鈉(10g)除去有機(jī)相殘留水分，蒸除溶劑后得到3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基對(duì)甲苯磺酸酯(4.3g)。1hnmr(400mhz,cdcl3):9.13(s,1h),7.91-7.82(m,2h),7.69-7.37(m,4h),7.22-7.17(m,2h),5.15-5.11(m,2h),4.55(s,3h),3.93(s,3h),3.63-3.55(m,5h),2.36(s,3h),1.16(s,9h)。實(shí)施例8在反應(yīng)瓶中，將3-boc-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基對(duì)甲苯磺酸酯10g加入到四氫呋喃100ml中，再加入一定量的吡啶氫溴酸鹽10g，室溫?cái)嚢枰欢〞r(shí)間，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，最后蒸除溶劑后加入一定量的純凈水，用氯仿萃取水相三次，合并有機(jī)相，蒸除氯仿后得到3-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基對(duì)甲苯磺酸酯8.5g；1hnmr(400mhz,cdcl3):9.09(s,1h),7.95-7.89(m,3h),7.61-7.49(m,3h),7.23-7.19(m,2h),5.19-5.17(m,2h),4.54(s,3h),3.93(s,3h),3.61-3.58(m,5h),2.24(s,3h)。實(shí)施例9在反應(yīng)瓶中，將3-氨基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基對(duì)甲苯磺酸酯10g加入到乙腈100ml中，機(jī)械攪拌，加熱至70℃，反應(yīng)10h后經(jīng)tlc監(jiān)控[展開(kāi)劑:pe:ea=7:1]原料反應(yīng)完全，減壓蒸出溶劑乙腈，再加入一定量的正己烷700ml，冷卻至-5℃，攪拌過(guò)程中逐漸有大量固體析出，過(guò)濾反應(yīng)液得到固體，并用一定量的冷甲苯200ml洗滌，濾餅烘干后得到8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氫吡咯7.6g。實(shí)施例10在反應(yīng)瓶中，將1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽0.092g加入到溶有8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氫吡咯2.0g、二異丙基乙胺0.167ml、1-羥基苯并三唑0.065g和苯甲酸1g的dmf20ml中，在室溫條件下反應(yīng)24h，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全后，加入一定量的純凈水，再用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液三次，合并有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鈉干燥后經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到純品8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氫吡咯-n-酰胺基甲苯2.2g；1hnmr(400mhz,cdcl3):7.78-7.68(m,5h),7.53-7.45(m,3h),7.11(s,1h),5.10(s,2h),4.69-4.65(m,2h),3.67-3.61(m,6h),3.22-3.20(m,2h)。實(shí)施例11在反應(yīng)瓶中，將1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽0.092g加入到溶有8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氫吡咯2.0g、二異丙基乙胺0.167ml、1-羥基苯并三唑0.065g和對(duì)硝基苯甲酸1.6g的dmf20ml中，在室溫條件下反應(yīng)24h，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全后，加入一定量的純凈水，再用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液三次，合并有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鈉干燥后經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到純品8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氫吡咯-n-酰胺基甲對(duì)硝基苯2.4g;1hnmr(400mhz,cdcl3):7.79-7.60(m,4h),7.52-7.47(m,3h),7.11-7.10(m,1h),5.12(s,2h),4.69-4.68(m,1h),4.64-4.65(m,1h),3.64-3.60(m,6h),3.21-3.19(m,2h)。實(shí)施例12抗腫瘤活性測(cè)試收集生長(zhǎng)期卵巢癌細(xì)胞ovcar-3，以mts法測(cè)定一下化合物的抗癌活性，將細(xì)胞以適當(dāng)濃度（每毫升4×104個(gè)細(xì)胞）加到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中（含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液），培養(yǎng)24小時(shí)后，在37℃、體積濃度為5%的co2條件下與不同濃度的化合物作用72小時(shí)，然后將mts（最終質(zhì)量濃度2mg/ml）和dms（最終摩爾濃度30μm）的混合物直接加入含細(xì)胞的培養(yǎng)基中，繼續(xù)置培養(yǎng)箱孵育4h。作用4h后，棄去上清液，每孔加入150μldmso，振蕩，細(xì)胞存活率通過(guò)其對(duì)mts作用的代謝物在酶聯(lián)免疫監(jiān)測(cè)儀490nm波長(zhǎng)下的吸收率測(cè)定化合物ic50/(μmol·l-1)47.620.361.8初步生物活性測(cè)試表明，該類(lèi)化合物在卵巢癌細(xì)胞ovcar-3中對(duì)癌細(xì)胞均有抑制作用。綜上所述，本發(fā)明提供了具有苯基并四氫吡咯結(jié)構(gòu)的fshr拮抗劑及其制備方法，這是該類(lèi)化合物該用途的首次發(fā)現(xiàn)，具有重大的研發(fā)潛力。以上實(shí)施例描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征及優(yōu)點(diǎn)，本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說(shuō)明書(shū)中描述的只是說(shuō)明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明原理的范圍下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)均落入本發(fā)明保護(hù)的范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12