本發(fā)明涉及一類新穎的5-肟酯b2a結(jié)構(gòu)的化合物及其制備方法與作為殺蟲、殺螨、殺線蟲劑的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

阿維菌素是由灰色鏈霉菌(streptomycesavermitilis)發(fā)酵得到的一組十六元大環(huán)內(nèi)酯類化合物，由結(jié)構(gòu)相近的8個同系物組成(a1a、a1b、a2a、a2b、b1a、b1b、b2a、b2b)。阿維菌素具有很好的殺蟲、殺螨和抗寄生蟲活性，對哺乳動物安全，其作用機理為激發(fā)神經(jīng)未梢釋放γ-氨基丁酸(ga-ba)和調(diào)控谷氨酸門控氯離子通道，促使gaba門控的氯離子通道和谷氨酸門控氯離子通道開放，大量氯離子涌入造成神經(jīng)膜電位超級化，致使神經(jīng)膜處于抑制狀態(tài)，使昆蟲麻痹死亡。

我國是阿維菌素生產(chǎn)大國，發(fā)酵過程中，b1(b1a+b1b)和b2(b2a+b2b)是兩個最主要的產(chǎn)物。由于對絕大多數(shù)防治靶標，b1的活性遠遠高于b2的活性，長期以來市場上商品化阿維菌素原藥特指b1(b1a≥96％，b1b≤4％)結(jié)構(gòu)。而在阿維菌素生產(chǎn)中占總量三分之一以上的b2(b2a≥95％,b2b≤5％)因其應(yīng)用價值不高，在國內(nèi)長期作為b1的輔料以“油膏”的形式推向市場，造成對環(huán)境的污染與資源的嚴重浪費。隨著我國農(nóng)業(yè)部對油膏的禁用，尋找b2在農(nóng)業(yè)病害中的應(yīng)用價值，降低資源浪費成為我國農(nóng)藥行業(yè)面臨的重要課題。我國主要阿維菌素發(fā)酵企業(yè)之一，石家莊市興柏生物工程有限公司發(fā)現(xiàn)b2a對玉米食根(甲)蟲的活性為b1a的3倍，從而開啟b2在防治地下害蟲中的應(yīng)用(專利申請?zhí)?01210547804.4)。

基于天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的衍生優(yōu)化是新農(nóng)藥創(chuàng)制的重要途徑之一，阿維菌素b1基礎(chǔ)上糖環(huán)修飾獲得的甲維鹽對甜菜夜蛾殺蟲活性比b1提高1000倍則是其成功的例證。而b2的結(jié)構(gòu)衍生在國內(nèi)外還是空白，由于b2的藥效有限，在發(fā)酵產(chǎn)物中含量比重高，對其進行結(jié)構(gòu)優(yōu)化，具有極高的研究價值。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的之一是提供一種5-肟酯b2a結(jié)構(gòu)的系列化合物cau-avm及其制備方法。

本發(fā)明所提供的化合物cau-avm的結(jié)構(gòu)式如式ⅰ、式ii或式iii所示:

上述式ⅰ和式ii中，r1，r2可獨立地選自苯基、苯乙基、2-氟苯基、2-氯苯基、2-溴苯基、2-三氟甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-氯苯基、4-硝基苯基、2，4-二氯苯基、3-三氟甲基-4-氯-苯基、3-吡啶基、2-氯-3-吡啶基、1-(4-氯苯基)-2-甲基-丙基,3-(2-氯-2-三氟甲基乙烯基)-2,2-二甲基環(huán)丙烷基和3-(2,2-二甲基乙烯基)-2,2-二甲基環(huán)丙烷基中的一種；

上述式iii中，r3可選自苯基、苯乙基、2-氟苯基、2-氯苯基、2-溴苯基、3-甲基苯基、4-氯苯基、4-硝基苯基、2，4-二氯苯基、3-三氟甲基-4-氯-苯基、3-吡啶基和2-氯-3-吡啶基中的一種。

上述化合物cau-avm的藥學上可接受的鹽也屬于本發(fā)明的保護范圍。

上述式ⅰ所示的化合物cau-avm是按照包括下述步驟的方法制備得到的：

1)先將b2a(式iv所示化合物)與alloccl進行酯化反應(yīng)，反應(yīng)完畢后，純化，再

上述式v中，alloc表示烯丙氧羰基，tbdms表示叔丁基二甲基硅烷基；

2)使式v所示化合物發(fā)生脫除烯丙氧羰基保護基的反應(yīng)，得到式vi所示化合物；

3)使式vi所示化合物先與二氯化磷酸苯酯，dmso，四甲基乙二胺發(fā)生反應(yīng)得到23,4″-二-o-tbdms-5-oavermectinb2a，后處理后再與氟化氫吡啶溶液發(fā)生反應(yīng)，得到式vii所示化合物；

4)使式vii所示化合物與鹽酸羥胺反應(yīng)，得到式viii所示化合物；

5)使式viii所示化合物與r1cooh羧酸發(fā)生縮合反應(yīng)，得到式i所示化合物，

r1cooh中，r1可選自苯基、苯乙基、2-氟苯基、2-氯苯基、2-溴苯基、2-三氟甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-氯苯基、4-硝基苯基、2，4-二氯苯基、3-三氟甲基-4-氯-苯基、3-吡啶基、2-氯-3-吡啶基、1-(4-氯苯基)-2-甲基-丙基,3-(2-氯-2-三氟甲基乙烯基)-2,2-二甲基環(huán)丙烷基和3-(2,2-二甲基乙烯基)-2,2-二甲基環(huán)丙烷基中的一種。

上述方法步驟1)中，b2a與alloccl、tbdmscl的摩爾比依次可為1：1-1.5，4-6具體可為1:1.2:5；

所述酯化反應(yīng)的溫度為-20--30℃，具體可為-25℃；

所述酯化反應(yīng)在氮氣氣氛下進行；

所述酯化反應(yīng)的時間為0.5-1h，具體可為0.6h。

與tbdmscl反應(yīng)的溫度可為0--10℃，具體可為-5℃，時間可為40-60h，具體可為48h。

上述方法步驟2)中，所述脫除烯丙氧羰基保護基的反應(yīng)在meoh/thf＝1:1的混合溶劑中進行。

所述脫除烯丙氧羰基保護基的反應(yīng)在四(三苯基膦)鈀、硼氫化鈉和醋酸銨作用下進行。

式v所示化合物與四(三苯基膦)鈀、硼氫化鈉和醋酸銨的摩爾比依次可為：1：0.02-0.08：0.4-0.6：18-25，具體可為1：0.04：0.52：20。

所述脫除烯丙氧羰基保護基的反應(yīng)的溫度可為-5-5℃，具體可為0℃，時間可為0.1-0.3h，具體可為0.2h。

上述方法步驟3)中，所述式vi所示化合物與二氯化磷酸苯酯、dmso、四甲基乙二胺的摩爾比依次可為：1：1-2：3-6：4-7，具體可為1：1.5：4：4.9。

所述反應(yīng)在有機溶劑中進行，所述有機溶劑具體可為二氯甲烷。

所述反應(yīng)在冰浴下進行。

上述方法步驟4)中，式vii所示化合物與鹽酸羥胺的摩爾比可為1：4-7，具體可為1：5。

所述反應(yīng)在甲醇和1,4-二氧六環(huán)的混合溶液中進行。

所述反應(yīng)的溫度可為20-30℃，時間可為5-8h，具體可為6h。

上述方法步驟5)中，所述縮合反應(yīng)在dcc、damp存在下進行。

式viii所示化合物與羧酸、dcc、damp的摩爾比依次可為1:1-2：1-2：0.01-0.10。

所述縮合反應(yīng)的反應(yīng)溫度可為20-30℃，時間可為36-60h，具體可為48h。

所述縮合反應(yīng)在有機溶劑中進行，所述有機溶劑具體可為二氯甲烷。

上述式ii所示的化合物cau-avm是按照包括下述步驟的方法制備得到的：

1)將式vii所示化合物溶于3％(硫酸：甲醇體積比＝97:3)硫酸甲醇溶液中，反應(yīng)，得到式ix所示化合物；

2)使式ix所示化合物與鹽酸羥胺反應(yīng)，得式x所示化合物；

3)使式x所示化合物與r2cooh羧酸發(fā)生縮合反應(yīng)，得到式ii所示化合物；

r2cooh中，r2可選自苯基、苯乙基、2-氟苯基、2-氯苯基、2-溴苯基、2-三氟甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-氯苯基、4-硝基苯基、2，4-二氯苯基、3-三氟甲基-4-氯-苯基、3-吡啶基、2-氯-3-吡啶基、1-(4-氯苯基)-2-甲基-丙基,3-(2-氯-2-三氟甲基乙烯基)-2,2-二甲基環(huán)丙烷基和3-(2,2-二甲基乙烯基)-2,2-二甲基環(huán)丙烷基中的一種。

上述方法步驟1)中，所述反應(yīng)的溫度可為-10-0℃，具體可為-5℃。

所述反應(yīng)的時間可為20-42h，具體可為24h。

上述方法步驟2)中，所述反應(yīng)在甲醇和1,4-二氧六環(huán)的混合溶液中進行。

式ix所示化合物與鹽酸羥胺的摩爾比可為1：4-6，具體可為1：5。

所述反應(yīng)的溫度可為20-30℃，時間可為5-7h，具體可為6h。

上述方法步驟3)中，所述縮合反應(yīng)在dcc、damp存在下進行。

式x所示化合物與羧酸、dcc、damp的摩爾比依次可為1:1-1.8：1-1.8：0.01-0.1。

所述縮合反應(yīng)的反應(yīng)溫度可為20-30℃，時間可為20-30h，具體可為24h。

所述縮合反應(yīng)在有機溶劑中進行，所述有機溶劑具體可為二氯甲烷。

上述式iii所示的化合物cau-avm是按照包括下述步驟的方法制備得到的：

1)將式vii所示化合物溶于5％(硫酸：甲醇體積比＝95:5)硫酸甲醇溶液中，反應(yīng)，得到式ix所示化合物；

2)使式xi所示化合物與鹽酸羥胺反應(yīng)，得式xii所示化合物；

3)使式xii所示化合物與r3cooh羧酸發(fā)生縮合反應(yīng)，得到式iii所示化合物；

r3cooh中，r3可選自苯基、苯乙基、2-氟苯基、2-氯苯基、2-溴苯基、3-甲基苯基、4-氯苯基、4-硝基苯基、2，4-二氯苯基、3-三氟甲基-4-氯-苯基、3-吡啶基和2-氯-3-吡啶基中的一種。

上述方法步驟1)中，所述反應(yīng)的溫度可為-10-0℃，具體可為-5℃。

所述反應(yīng)的時間可為10-15h，具體可為12h。

上述方法步驟2)中，所述反應(yīng)在甲醇和1,4-二氧六環(huán)的混合溶液中進行。

式ix所示化合物與鹽酸羥胺的摩爾比可為1：4-6，具體可為1：5。

所述反應(yīng)的溫度可為20-30℃，時間可為5-8h，具體可為5h。

上述方法步驟3)中，所述縮合反應(yīng)在dcc、damp存在下進行。

式xii所示化合物與羧酸、dcc、damp的摩爾比依次可為1:1-1.5：1-1.5：0.01-0.1。

所述縮合反應(yīng)的反應(yīng)溫度可為20-30℃，時間可為15-25h，具體可為18h。

所述縮合反應(yīng)在有機溶劑中進行，所述有機溶劑具體可為二氯甲烷。

本發(fā)明的另一目的是提供上述5-肟酯b2a結(jié)構(gòu)系列化合物cau-avm的用途。

所述5-肟酯b2a結(jié)構(gòu)系列化合物cau-avm的用途為5-肟酯b2a結(jié)構(gòu)系列化合物cau-avm在防治農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)病蟲害中的應(yīng)用。

所述病蟲害具體可為紅蜘蛛、甜菜夜蛾、秀麗線蟲、松材線蟲、南方根結(jié)線蟲和菜豆蚜引起的病蟲害。

優(yōu)選地，所述5-肟酯b2a結(jié)構(gòu)系列化合物cau-avm作為農(nóng)藥的活性成分或者助劑。

本發(fā)明還提供一種農(nóng)藥或獸藥，其包含上述5-肟酯b2a結(jié)構(gòu)系列化合物cau-avm中的一種或多種。

本發(fā)明對阿維菌素生產(chǎn)過程中的副產(chǎn)物b2a進行了結(jié)構(gòu)優(yōu)化，設(shè)計合成了一系列結(jié)構(gòu)全新的5-肟酯b2a系列化合物，并對該類化合物進行了廣泛的殺蟲活性測定，發(fā)現(xiàn)藥效很好的化合物。

本發(fā)明制備化合物cau-avm所需原料為阿維菌素生產(chǎn)過程中的副產(chǎn)物b2a，反應(yīng)路線簡單，產(chǎn)物具有良好的殺蟲活性。大多數(shù)化合物的生物活性率超過對照藥劑阿維菌素，生物活性顯著提高，因此本發(fā)明所述化合物具有很高的農(nóng)藥研究價值。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例1中化合物cau-avm-01的合成路線圖。

圖2為本發(fā)明實施例2中化合物cau-avm-18的合成路線圖。

圖3為本發(fā)明實施例3中化合物cau-avm-35的合成路線圖。

圖4為本發(fā)明實施例1制備的式cau-avm-01所示的化合物的核磁共振氫譜圖。

圖5為本發(fā)明實施例1制備的式cau-avm-01所示的化合物的核磁共振碳譜圖。

圖6為本發(fā)明實施例2制備的式cau-avm-18所示的化合物的核磁共振氫譜圖

圖7為本發(fā)明實施例2制備的式cau-avm-18所示的化合物的核磁共振碳譜圖。

圖8為本發(fā)明實施例3制備的式cau-avm-35所示的化合物的核磁共振氫譜圖。

圖9為本發(fā)明實施例3制備的式cau-avm-35所示的化合物的核磁共振碳譜圖。

具體實施方式

下面通過具體實施例對本發(fā)明進行說明，但本發(fā)明并不局限于此。

下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法；下述實施例中所用的試劑、材料等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。

實施例1、化合物cau-avm-01(式ⅰ中r＝苯基)的制備及結(jié)構(gòu)鑒定

根據(jù)圖1所示的合成路線圖合成化合物cau-avm-01。

(1)在250ml的圓底燒瓶中加入b2a(6g，6.7mmol)，無水二氯甲烷45ml溶解，后加入三乙胺(1.0g，10mmol)，在-25℃和氮氣保護條件下，緩慢滴加氯甲酸烯丙酯(0.97g，8mmol),滴完后繼續(xù)反應(yīng)40min，tlc監(jiān)測反應(yīng)完全，加1ml甲醇淬滅，二氯甲烷萃取，依次用1n鹽酸，飽和氯化鈉溶液、水洗滌有機相，無水硫酸鈉干燥后蒸去二氯甲烷，柱層析純化得到淡黃色固體5-o-allocavermectinb2a6.1g，收率93％。將5-o-allocavermectinb2a(6.0g，6.2mmol)溶于40mldmf中，加入三乙胺(4.4g，43mmol)，將反應(yīng)瓶置于-5℃低溫冷浴槽中，5min后，加入tbdmscl(5.6g，37mmol)，再加入催化量dmap,反應(yīng)48h后，tlc檢測反應(yīng)完全，用乙酸乙酯稀釋，水洗，水層用乙酸乙酯萃取兩遍，合并有機相，依次用飽和食鹽水，水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮后柱層析得淡黃色固體23,4″-二-o-tbdms-5-o-allocavermectinb2a6.8g，產(chǎn)率91％。

(2)取23,4″-二-o-tbdms-5-o-allocavermectinb2a(6.0g，5.0mmol)，溶于30mlmeoh:thf＝1:1混合液中，加入乙酸銨(7.7g，100mmol)，將反應(yīng)瓶置于冰鹽浴中，10min后，加入硼氫化鈉(0.045g，1.3mmol)，后立即依次加入四三苯基膦鈀(0.23g，0.20mmol)，硼氫化鈉(0.045g，1.3mmol)，10min后，tlc檢測反應(yīng)完全，濃縮，二氯甲烷稀釋，水洗，水層用二氯甲烷萃取兩遍，合并有機相，依次用飽和食鹽水，水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮后柱層析得淡黃色固體23,4″-二-o-tbdmsavermectinb2a5.3g，產(chǎn)率95％。

(3)取23,4″-二-o-tbdmsavermectinb2a(5g，4.5mmol)，溶于30mldcm中，加入四甲基乙二胺(2.6g，22mmol)，dmso(1.4g，18mmol)，在冰浴和氮氣保護條件下，滴加30ml二氯化磷酸苯酯(1.4g，6.8mmol)二氯甲烷溶液，1小時后tlc檢測反應(yīng)完全，二氯甲烷稀釋，水洗，水層用二氯甲烷萃取兩遍，合并有機相，依次用稀鹽酸，飽和食鹽水，水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮后得到23,4″-二-o-tbdms-5-oavermectinb2a，不經(jīng)純化溶于30mlthf和15ml吡啶中,置于冰浴中，滴加5ml70％氟化氫吡啶溶液，后室溫反應(yīng)約4天，tlc檢測反應(yīng)完全，濃縮，二氯甲烷稀釋，水洗，水層用二氯甲烷萃取兩遍，合并有機相，依次用稀鹽酸，飽和食鹽水，水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮后柱層析得淡黃色固體5-oavermectinb2a2.3g，產(chǎn)率66％。

(4)取5-oavermectinb2a(2.0g，2.3mmol)溶于10mlmeoh和10ml1,4-二氧六環(huán)溶液中；將鹽酸羥胺(0.94g，13mmol)溶于8ml水中，后將其滴加進反應(yīng)體系中，tlc檢測反應(yīng)完全，濃縮，二氯甲烷稀釋，水洗，水層用二氯甲烷萃取兩遍，合并有機相，依次用稀鹽酸，飽和食鹽水，水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮后柱層析，重結(jié)晶得白色固體5-nohavermectinb2a1.9g，產(chǎn)率91％。

(5)取苯甲酸(0.2g，1.7mmol)溶于20mldcm中，依次加入dcc(0.34g，1.7mmol)，5-nohavermectinb2a(1.0g,1.1mmol)，室溫反應(yīng)24h，tlc檢測反應(yīng)完全，二氯甲烷稀釋，水洗，水層用二氯甲烷萃取兩遍，合并有機相，依次用稀鹽酸，飽和食鹽水，水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮后柱層析，重結(jié)晶得白色固體5-苯甲酸肟酯avermectinb2a0.8g，產(chǎn)率73％

結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)：

¹hnmr(cdcl3,300mhz)δ:8.02～8.19(m,2h,ar-h),7.56～7.69(m,1h,ar-h),7.41～7.54(m,2h,ar-h),6.08～6.17(m,1h,h3),5.92～6.06(m,1h,h9),5.70～5.89(m,2h,h10,h11),5.22～5.51(m,2h,h15,h19),5.01(t,j＝7.2hz,1h,h1″),4.71～4.91(m,4h,h1′,h8ax2,h6),3.99(s,1h,7-oh),3.72～3.93(m,4h,h23,h13,h5″,h5′),3.41～3.71(m,11h,h2,h25,h17,h3″,h3′,3″-och3,3′-och3),3.28(t,j＝9.0hz,1h,h4′),3.19(t,1h,j＝9.1hz,h4″),2.50～2.65(m,1h,h12),1.92～2.46(m,10h,h24,h18,h16x2,h2′,h2″,me4a,h20),1.43～1.85(m,11h,me14a,h20,h26,h27x2,h22x2,h2′,h2″),1.25～1.39(m,6h,me6′,me6″),1.21(d,j＝6.9hz,3h,me12a),0.77～1.07(m,10h,h28,me24a,me26a,h18)(見圖4)

¹³cnmr(75mhz,cd3dh)δ:172.37,163.06,157.35,138.75,137.57,135.60,133.35,131.84,129.77,129.71,128.68,128.47,124.64,121.89,117.52,99.57,98.42,94.79,81.60,80.33,79.22,79.04,78.11,77.20,75.96,74.35,70.77,69.75,68.97,68.26,68.08,67.95,67.21,56.37,56.29,46.36,41.83,41.08,40.69,39.86,36.31,35.62,35.04,34.39,34.16,34.00,27.19,26.89,24.87,20.03,18.29,17.59,17.51,15.08,13.67,12.33,11.72.(見圖5)

hrms(esi)calcdforc55h78no16(m+h)⁺1008.5321,found1008.5315.

實施例2、化合物cau-avm-18(式ii中r＝苯基)的制備及結(jié)構(gòu)鑒定

根據(jù)圖2所示的合成路線圖合成化合物cau-avm-18。

(1)取5-oavermectinb2a(4g，3.6mmol)溶于3％硫酸甲醇溶液中，-5℃反應(yīng)24h，三乙胺中和之中性，濃縮，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮后柱層析得淡黃色固體5-oavermectinb2amonosaccharide2.3g，產(chǎn)率85％。

(2)取5-oavermectinb2amonosaccharide(1.7g，2.3mmol)溶于10mlmeoh和10ml1,4-二氧六環(huán)溶液中；將鹽酸羥胺(0.94g，13mmol)溶于8ml水中，后將其滴加進反應(yīng)體系中，tlc檢測反應(yīng)完全，濃縮，二氯甲烷稀釋，水洗，水層用二氯甲烷萃取兩遍，合并有機相，依次用稀鹽酸，飽和食鹽水，水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮后柱層析，重結(jié)晶得白色固體5-nohavermectinb2amonosaccharide1.6g，產(chǎn)率90％。

(3)取苯甲酸(0.2g，1.7mmol)溶于20mldcm中，依次加入dcc(0.34g，1.7mmol)，5-nohavermectinb2amonosaccharide(0.8g,1.1mmol)，室溫反應(yīng)24h，tlc檢測反應(yīng)完全，二氯甲烷稀釋，水洗，水層用二氯甲烷萃取兩遍，合并有機相，依次用稀鹽酸，飽和食鹽水，水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮后柱層析，重結(jié)晶得白色固體5-苯甲酸肟酯avermectinb2amonosaccharide0.78g，產(chǎn)率82％

結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)：

¹hnmr(cdcl3,300mhz)δ:8.03～8.15(m,2h,ar-h),7.54-7.66(m,1h,ar-h),7.41～7.52(m,2h,ar-h),6.05～6.10(m,1h,h3),5.93～6.03(m,1h,h9),5.72～5.85(m,2h,h10,h11),5.32～5.49(m,1h,h19),4.98(t,j＝6.7hz,1h,h15),4.68～4.89(m,4h,h1′,h8ax2,h6),3.98(s,1h,7-oh),3.71～3.92(m,4h,23-oh,h23,h13,h5′),3.43～3.63(m,7h,h17,h25,h2,h3′,3′-och3),3.17(t,1h,j＝9.2hz,h4′),2.51～2.58(m,2h,h12,h24),2.22～2.40(m,3h,h16x2,h2′),2.15(s,3h,me4a),1.93～2.07(m,2h,h18,h20),1.43～1.78(m,10h,me14a,h20,h2′,h26,h27x2,h22x2),1.28(d,j＝6.2hz,3h,me6′),1.17(d,j＝6.9hz,3h,me12a),0.83～1.02(m,10h,h28,me24a,me26a,h18)(見圖6)

¹³cnmr(75mhz,cd3dh)δ:172.20,163.02,157.34,138.68,137.50,135.51,133.32,131.70,129.88,129.66,128.63,128.44,124.60,121.92,117.48,99.54,94.91,81.47,79.02,78.18,75.89,74.35,70.69,69.73,68.90,68.24,68.08,67.87,56.43,46.32,41.01,40.67,39.82,36.25,35.56,35.00,33.95,33.85,27.14,20.00,17.59,17.48,15.04,13.64,12.29,11.69.(見圖7)

hrms(esi)calcdforc48h66no13(m+h)⁺864.4534,found864.4528.

實施例3、化合物cau-avm-35(式iii中r＝苯基)的制備及結(jié)構(gòu)鑒定

根據(jù)圖3所示的合成路線圖合成化合物cau-avm-35。

(1)取5-oavermectinb2a(4g，3.6mmol)溶于5％硫酸甲醇溶液中，-5℃反應(yīng)24h，三乙胺中和之中性，濃縮，二氯甲烷萃取，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮后柱層析得淡黃色固體5-oavermectinb2aaglycone2.0g，產(chǎn)率93％。

(2)取5-oavermectinb2aaglycone(1.4g，2.3mmol)溶于10mlmeoh和10ml1,4-二氧六環(huán)溶液中；將鹽酸羥胺(0.94g，13mmol)溶于8ml水中，后將其滴加進反應(yīng)體系中，tlc檢測反應(yīng)完全，濃縮，二氯甲烷稀釋，水洗，水層用二氯甲烷萃取兩遍，合并有機相，依次用稀鹽酸，飽和食鹽水，水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮后柱層析，重結(jié)晶得白色固體5-nohavermectinb2aaglycone1.2g，產(chǎn)率86％。

(3)取苯甲酸(0.2g，1.7mmol)溶于20mldcm中，依次加入dcc(0.34g，1.7mmol)，5-nohavermectinb2aaglycone(0.7g,1.1mmol)，室溫反應(yīng)24h，tlc檢測反應(yīng)完全，二氯甲烷稀釋，水洗，水層用二氯甲烷萃取兩遍，合并有機相，依次用稀鹽酸，飽和食鹽水，水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮后柱層析，重結(jié)晶得白色固體5-苯甲酸肟酯avermectinb2aaglycone0.7g，產(chǎn)率91％

結(jié)構(gòu)確證數(shù)據(jù)：

¹hnmr(cdcl3,300mhz)δ:8.02-8.14(m,2h,ar-h),7.53-7.65(m,1h,ar-h),7.40-7.53(m,2h,ar-h),6.03-6.10(m,1h,h3),5.87-5.96(m,1h,h9),5.69-5.85(m,2h,h10,h11),5.27-5.38(m,1h,h19,h15),4.68-4.88(m,3h,h8ax2,h6),4.01(s,1h,7-oh),3.92(s,1h,23-oh),3.65-3.83(m,2h,h23,h13),3.39-3.61(m,2h,h17,h25),3.37-3.45(m,1h,h2),2.45-2.59(m,1h,h12),1.86-2.40(m,8h,h16x2,h24,me4a,h18,h20),1.36-1.75(m,9h,me14a,h20,h26,h27x2,h22x2),1.17(d,j＝7.0hz,3h,me12a),0.80-1.04(m,10h,h28,me24a,me26a,h18)(見圖8)

¹³cnmr(75mhz,cd3dh)δ:172.15,163.11,157.42,139.14,138.11,137.55,133.36,131.69,129.97,129.72,128.70,128.48,124.53,121.99,116.47,99.53,78.95,77.36,74.39,71.33,69.86,69.02,68.35,67.90,46.34,41.10,40.81,40.18,36.15,35.64,35.10,34.12,27.41,19.03,17.52,14.52,13.73,12.44,11.41.(見圖9)

hrms(esi)calcdforc41h54no10(m+h)⁺720.3742,found720.3738.

其他通式為cau-avm的系列化合物均按照相應(yīng)的方法制備得到。它們的化合物編號，r對應(yīng)的取代基團、理化數(shù)據(jù)見表1，結(jié)構(gòu)鑒定的核磁共振氫譜、質(zhì)譜數(shù)據(jù)見表2。

實施例2、通式為cau-avm的化合物的生物活性測定

紅蜘蛛：4齡紅蜘蛛幼蟲在藥液中浸漬5s，晾干后記錄蟲數(shù)放入加有保濕濾紙的培養(yǎng)皿中，加蓋后放入(25±1)℃光照培養(yǎng)箱中。每個藥劑處理30頭以上。48小時后檢查結(jié)果。

甜菜夜蛾：將油菜葉在藥液中浸漬10s，晾干后放入加有保濕濾紙的培養(yǎng)皿中，接入甜菜夜蛾4齡幼蟲，加蓋后放入(25±1)℃光照培養(yǎng)箱中。每個藥劑處理10頭以上。分別在2、3天檢查結(jié)果。輕觸蟲體，不能正常爬行個體視為死亡。計算其校正死亡率(％)。與對照藥劑比對，判斷藥劑毒力大小

秀麗線蟲：24孔板中加入m9緩沖液，阿維菌素稀釋液和秀麗線蟲(約50條)，置于室溫20℃培養(yǎng)。設(shè)置不加藥劑的空白對照，每處理重復(fù)3次。24h后顯微鏡下鏡檢，觀察線蟲的活動情況，并計數(shù)秀麗線蟲的死、活蟲數(shù)。

松材線蟲、南方根結(jié)線蟲：將凹玻片置于密封性良好的干燥器內(nèi)(干燥器中加5ml無菌水)，分別取50μl2000條/ml線蟲懸浮液添加到兩孔凹玻片凹穴內(nèi)。阿維菌素處理凹玻片中添加阿維菌素稀釋液(皿底置于干燥器內(nèi))，施藥后迅速蓋上蓋子并用封口膜密封，置于室溫25℃培養(yǎng)。設(shè)置不加熏蒸藥劑的空白對照，每處理重復(fù)3次。熏蒸24h后取出凹玻片，空氣中暴露放置3min，體視顯微鏡下鏡檢，觀察線蟲的活動情況，并計數(shù)根結(jié)線蟲的死、活蟲數(shù)。

菜豆蚜：選擇帶蚜葉片，將帶蚜葉片在藥液中浸漬5s，晾干后記錄蟲數(shù)放入加有保濕濾紙的培養(yǎng)皿中，加蓋后放入(25±1)℃光照培養(yǎng)箱中。每個藥劑處理30頭以上。24-48小時后檢查結(jié)果。

表1通式為cau-avm的系列化合物的編號、取代基團、理化數(shù)據(jù)

表2cau-avm系列化合物核磁共振氫譜、質(zhì)譜數(shù)據(jù)

(pos：質(zhì)譜測定的正離子模式；neg：質(zhì)譜測定的負離子模式)

表3cau-avm系列化合物的殺蟲活性

從表3可以看出，大多數(shù)化合物cau-avm對紅蜘蛛、甜菜夜蛾、秀麗線蟲、松材線蟲、南方根結(jié)線蟲和菜豆蚜都有較強的殺蟲活性，顯示出比阿維菌素b1a、b2a更好的殺蟲活性，部分化合物的殺蟲活性達到90％以上，如中間體xii和cau-avm-06，表明本申請所涉及化合物具有很好的生物活性。