本發(fā)明涉及一種預(yù)防和修復(fù)腎損傷的縮醛磷脂及其制備方法，屬于生物醫(yī)藥。

背景技術(shù)：

1、順鉑(cisplatin，cp)，是治療癌癥患者的主要化療藥物之一，被用于治療各種惡性腫瘤。盡管順鉑表現(xiàn)出廣譜的抗癌活性，但在其實際臨床使用過程中出現(xiàn)多種副作用，包括腎毒性、肝毒性和耳毒性，在給患者帶來痛苦的同時嚴(yán)重限制了順鉑在治療過程中的給藥劑量，導(dǎo)致治療周期延長。順鉑可以通過改變dna二級結(jié)構(gòu)、干擾dna復(fù)制和細(xì)胞分裂來抑制癌細(xì)胞生長，但同時也會引起線粒體dna損傷，導(dǎo)致活性氧(ros)積累并對腎臟造成損傷。順鉑對非靶向組織的損傷也是導(dǎo)致癌癥幸存者在生命后期死亡的重要因素之一。

2、急性腎損傷(acute?kidney?injury,aki)是一種復(fù)雜的綜合癥，發(fā)生在各種臨床環(huán)境中，臨床表現(xiàn)包括敗血癥、腎毒性和急性心力衰竭。順鉑的腎毒性主要表現(xiàn)為腎小管上皮細(xì)胞的炎癥、凋亡和壞死，以及氧化應(yīng)激和線粒體功能障礙，而腎小管是腎臟中負(fù)責(zé)過濾和排除廢物的結(jié)構(gòu)，腎小管受損將導(dǎo)致影響腎臟行使正常功能。常見的腎損傷癥狀包括尿量減少、尿液異常及腎功能惡化，對血清檢測會發(fā)現(xiàn)肌酐及尿素氮含量上升。

3、現(xiàn)在預(yù)防順鉑引起的腎損傷的主要方式為對順鉑進行水化，此外還需控制順鉑給藥劑量和給藥頻率，避免用藥過度。臨床上還需定期檢測腎功能并對尿液及其他相關(guān)指標(biāo)進行分析。這些都極大限制了順鉑的使用，因此開發(fā)新的能夠有效緩解順鉑所引起的急性腎損傷的相關(guān)藥物具有重要的臨床意義。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對于現(xiàn)存狀況，本發(fā)明的目的是提供一種從海鞘中提取的縮醛磷脂在預(yù)防和治療急性腎損傷中的應(yīng)用，并通過與大豆卵磷脂、雞蛋卵磷脂和百令片比較研究縮醛磷脂的護腎作用。順鉑作為常用的抗癌藥物可能會導(dǎo)致腎臟損傷，極大限制了其在臨床中的使用，本發(fā)明提供的縮醛磷脂可以降低順鉑造成的急性腎損傷，從而達到保護化療患者接受順鉑治療的目的。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供的縮醛磷脂在制備預(yù)防和/或修復(fù)腎損傷的藥物中的應(yīng)用。

4、進一步的，所述縮醛磷脂的制備方法，包括以下步驟：

5、(a)取海鞘肉，之后將海鞘肉和水混合打成勻漿，離心，得到沉淀；

6、(b)將步驟(a)制得的沉淀和氯仿、水、和甲醇混合，振蕩混勻，離心，保留上清液；

7、(c)將步驟(b)制得的上清液和水、氯仿，振蕩混勻，靜置，離心，取下層溶液，真空干燥，得到粗提物；

8、(d)將步驟(c)制得的粗提物洗滌，得到總脂；

9、(e)將步驟(d)制得的總脂用氯仿溶解，并采用柱層析法脫除中性酯，氯仿和甲醇作為洗脫液洗脫總脂，收集洗脫液；洗脫液進行硅膠板層析，顯色確認(rèn)后旋蒸，得到海鞘磷脂粗提物；

10、(f)將步驟(e)制得的海鞘磷脂粗提物用正己烷溶解，加入磷脂酶a1和檸檬酸鈉緩沖液孵育后，用正己烷和異丙醇萃取經(jīng)磷脂酶a1處理的海鞘磷脂粗提物，收集己烷層，并洗滌，旋蒸得到縮醛磷脂。

11、進一步的，步驟(a)中海鞘肉和水的質(zhì)量比為1:0.5～3。

12、進一步的，步驟(a)中所述離心為在8000～10000rpm下離心0.5～1小時。

13、進一步的，步驟(b)中沉淀和水的質(zhì)量體積比為1:3～5。

14、進一步的，步驟(b)中沉淀和氯仿的質(zhì)量體積比為1:3～6。

15、進一步的，步驟(b)中沉淀和甲醇的質(zhì)量體積比為1:8～12。

16、進一步的，步驟(b)中所述離心為在3000～5000rpm下離心0.2～0.6小時。

17、進一步的，步驟(c)中上清液和水體積比為2～8:1。

18、進一步的，步驟(c)中上清液和氯仿體積比為2～6:1。

19、進一步的，步驟(c)中所述離心為8000～10000rpm下離心0.2～0.6小時。

20、進一步的，步驟(e)中氯仿和甲醇的體積比為8～10:1。

21、進一步的，步驟(f)中海鞘磷脂粗提物的質(zhì)量和正己烷的體積之比為50mg:8～15ml。

22、進一步的，步驟(f)中檸檬酸鈉緩沖液的ph為4～5。

23、進一步的，步驟(f)中海鞘磷脂粗提物的質(zhì)量和檸檬酸鈉緩沖液的體積之比為50mg:8～15ml。

24、進一步的，步驟(f)中加入磷脂酶a1使得體系的酶活力為30～50lu/ml。

25、進一步的，步驟(f)中孵育時間為2～5小時。

26、進一步的，步驟(f)中正己烷和異丙醇的體積比為3～5:1。

27、進一步的，所述藥物劑型為液體試劑、粉劑、粒劑中的一種或多種。

28、進一步的，所述藥物中還含有藥用輔料。

29、進一步的，所述藥用輔料包括：增溶劑、乳化劑、著色劑、黏合劑、崩解劑、填充劑、潤濕劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、助流劑、矯味劑、防腐劑、助懸劑、包衣材料、芳香劑、抗黏合劑、整合劑、ph值調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、增塑劑、消泡劑、增稠劑、保濕劑、助濾劑以及釋放阻滯劑中任意一種或多種。

30、有益效果

31、1、本發(fā)明通過海鞘制備縮醛磷脂，相較于其他海洋生物海鞘價格便宜，養(yǎng)殖成本低，具有大規(guī)模養(yǎng)殖的潛力。海鞘中磷脂含量豐富，可以廣泛用于食品保健行業(yè)。

32、2、本發(fā)明提供了一種提取縮醛磷脂的方法，具體是通過化學(xué)萃取法從海鞘肉中提取出總脂，并通過硅膠柱層析和酶解法對總脂進行純化，最終制得了一種縮醛磷脂占總磷脂更高比例的縮醛磷脂，比現(xiàn)有技術(shù)中的常規(guī)提取效果要更好，并且所取得的縮醛磷脂也能夠起到更好的防治效果。

33、3、本發(fā)明通過順鉑在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)急性腎損傷模型上使用縮醛磷脂，探討本發(fā)明中縮醛磷脂對于預(yù)防和治療順鉑誘導(dǎo)的急性腎損傷中的用途。通過小鼠組織病理學(xué)研究以及血清中肌酐及尿素氮指標(biāo)檢測，發(fā)現(xiàn)該縮醛磷脂可以有效改善順鉑誘導(dǎo)的急性腎損傷。

34、4、本發(fā)明通過驗證縮醛磷脂減少了hk-2細(xì)胞對順鉑的攝入并減少了順鉑損傷下hk-2細(xì)胞對鈣黃綠素的攝取，為縮醛磷脂與細(xì)胞膜之間潛在的相互作用及細(xì)胞膜保護機制提供數(shù)據(jù)支持。

技術(shù)特征：

1.縮醛磷脂在制備預(yù)防和/或修復(fù)腎損傷的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述縮醛磷脂的制備方法，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟(a)中，海鞘肉和水的質(zhì)量比為1:0.5～3。

3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟(b)中，沉淀和水的質(zhì)量體積比為1:3～5；沉淀和氯仿的質(zhì)量體積比為1:3～6；沉淀和甲醇的質(zhì)量體積比為1:8～12。

4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟(c)中，上清液和水體積比為2～8:1；上清液和氯仿體積比為2～6:1。

5.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟(f)中，海鞘磷脂粗提物的質(zhì)量和正己烷的體積之比為50mg:8～15ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟(f)中，檸檬酸鈉緩沖液的ph為4～5；海鞘磷脂粗提物的質(zhì)量和檸檬酸鈉緩沖液的體積之比為50mg:8～15ml。

7.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟(f)中，加入磷脂酶a1使得體系的酶活力為30～50lu/ml；孵育時間為2～5小時。

8.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物劑型為液體試劑、粉劑、粒劑中的一種或多種。

9.根據(jù)權(quán)利要求1～8任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物中還含有藥用輔料。

10.根據(jù)權(quán)利要求9中所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥用輔料包括：增溶劑、乳化劑、著色劑、黏合劑、崩解劑、填充劑、潤濕劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、助流劑、矯味劑、防腐劑、助懸劑、包衣材料、芳香劑、抗黏合劑、整合劑、ph值調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、增塑劑、消泡劑、增稠劑、保濕劑、助濾劑以及釋放阻滯劑中任意一種或多種。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種預(yù)防和修復(fù)腎損傷的縮醛磷脂及其制備方法，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。所述縮醛磷脂的制備方法是通過化學(xué)萃取法將海鞘肉中的總脂提取出來，并通過硅膠柱層析和酶解法對總脂進行純化，得到縮醛磷脂。本發(fā)明通過驗證縮醛磷脂在預(yù)防和治療順鉑誘導(dǎo)急性腎損傷的作用，為預(yù)防和治療順鉑誘導(dǎo)急性腎損傷的臨床用藥提供了實驗數(shù)據(jù)支持，同時也擴大了海鞘及縮醛磷脂的使用范圍。

技術(shù)研發(fā)人員：陸乃彥,林泉,孫旦芹,向文,唐雪,楊國鋒
受保護的技術(shù)使用者：江南大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/9/9