一種醫(yī)學檢測痰液標本勻質(zhì)化方法及試劑的制備
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明提供了一種符合臨床檢測的新型痰消化液，其可有效的勻質(zhì)化痰液，同時 保護痰液中的菌不受損傷，有利于對痰液樣本的進一步分析。
【背景技術(shù)】
[0002] 臨床上一般采用自然咳痰法和吸痰法收集痰液標本，這樣獲取的痰液標本具有明 顯的非均質(zhì)性，細菌等成分的分布很不均勻。隨著醫(yī)學檢驗的發(fā)展和實驗室質(zhì)量控制要求 的提高，標本的前處理受到越來越多的重視。根據(jù)日常工作觀察，痰標本培養(yǎng)陽性率普遍較 高，但臨床符合率并不理想，經(jīng)常出現(xiàn)無法檢測到痰液中的實際致病菌而誤導(dǎo)臨床診治的 情況。
[0003] 目前，國內(nèi)外對臨床痰標本細菌分離培養(yǎng)所使用的商品痰消化液主要是由英國 OXOID公司生產(chǎn)Sputasol (Liquid) SR0233,其成分包括二硫蘇糖醇、氯化鈉、氯化鉀、磷酸 氫二鈉、磷酸二氫鉀等。此外，實際臨床檢測或者實驗中還有使用胰蛋白酶、糜蛋白酶等消 化痰液的做法。
[0004] 雖然已經(jīng)有上述痰消化液和消化方法用于痰標本的檢測，但臨床實踐結(jié)果表明， 這些消化液的勻質(zhì)化性能和保護樣本中菌的能力仍有欠缺。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 發(fā)明人經(jīng)過大量研究和比對發(fā)現(xiàn)上述問題的主要原因在于二硫蘇糖醇、蛋白酶等 裂解痰液中粘性蛋白的成分對多種菌菌體也有損害，而這些物質(zhì)濃度較低時勻質(zhì)化效果又 有不足。發(fā)明人設(shè)計了一種符合臨床檢測的新型痰消化液，以較低濃度的N-乙酰-L-半 胱氨酸和胰蛋白酶組合來裂解痰液中的粘性蛋白質(zhì)，并輔以螯合劑中毒性較低的三乙醇胺 來消除重金屬對菌的不良影響，可以在保證對痰液的菌低損害的同時取得良好的勻質(zhì)化效 果。
[0006] -方面，本發(fā)明提供了一種痰消化液，其成分包括N-乙酰-L-半胱氨酸。
[0007] 進一步地，該痰消化液由下列成分組成：
[0008] N-乙酰-L-半胱氨酸 0. 1-0. 3% (w/v)，
[0009] 胰蛋白酶 0.05-0. 2% (w/v), 三乙醇胺 0. 3-0. 5% (w/v)， 氯化鉀 0. 1-0, 3% (w/v)， 磷酸二氫鉀 I. 4%-l. 6% (w/v), 磷酸氫二甲 0. 1%_0· 3% (w/v),
[0010] 無菌水溶劑。 toon] 再進一步地，該痰消化液由下列成分組成：
[0012] N-乙酰-L-半胱氨酸 0. 2%(w/v), 胰蛋白酶 0. 1% (w/v), 三乙醇胺 0.4% (w/v), 氯化鉀 0. 2% (w/v), 磷酸二氫鉀 I. 5% (w/v)， 磷酸氫二甲 0. 2%(w/v)，
[0013] 無菌水溶劑。
[0014] 另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的痰消化液在制備臨床痰液標本檢測試劑盒的應(yīng) 用。
[0015] 另一方面，本發(fā)明還提供了一種痰液標本勻質(zhì)化方法，使用本發(fā)明提供的痰消化 液處理痰液標本。
【具體實施方式】
[0016] 1本發(fā)明的痰消化液和對照痰消化液的配制與使用
[0017] 本發(fā)明的痰消化液的配制
[0018] 按照下列成分列表配制本發(fā)明的痰消化液：
[0019] N-乙酰-L-半胱氨酸 0.2% (w/v)， 胰蛋白酶 0. 1% (w/v), 三乙醇胺 0.4% (w/v), 氯化鉀 0. 2% (w/v), 磷酸二氫鉀 I. 5% (w/v), 磷酸氫二甲 0. 2% (w/v)，
[0020] 無菌水溶劑。
[0021] 將配制出的痰消化液分裝為IOml/份的小瓶作為貯存液保存在4°C冰箱中。使用 時，每IOml貯存液加無菌水90ml配制成工作液。向痰液中加等量工作液，37°C水浴中消化 20分鐘，10000rpm/min，離心5min，取沉淀物供細菌培養(yǎng)或用作DNA提取使用。
[0022] 對照消化液1 :市售Sputasol (Liquid) SR0233 (OXOID)，使用方法按說明。
[0023] 對照消化液2 :0. 1% (w/v)的胰蛋白酶生理鹽水溶液，使用時向痰液中加等量消 化液，37°C水浴中消化20分鐘，10000rpm/min，離心5min，取沉淀物供細菌培養(yǎng)或用作DNA 提取使用。
[0024] 對照消化液3 :0. 1 % (w/v)N-乙酰-L-半胱氨酸生理鹽水溶液，使用時向痰液中 加等量消化液，37°C水浴中消化20分鐘，10000rpm/min，離心5min，取沉淀物供細菌培養(yǎng)或 用作DNA提取使用。
[0025] 對照消化液4 :中國專利申請201110126201. 2號實施例1中的痰消化液，使用方 法按該申請說明書中的記載。
[0026] 2各種痰消化液消化效果比較
[0027] 2. 1勻質(zhì)化效果
[0028] 取吸痰樣品1份，以40ml無菌生理鹽水洗滌3次以去除痰液表面的呼吸道正常菌 群。按照實施例1中所述方法消化痰液。被消化的痰液被分為10等份接種于血平板、麥康 凱平板和巧克力平板上，置于35°c CO2溫箱中培養(yǎng)。3日后通過菌落形態(tài)和鏡檢來區(qū)分菌 種類，記錄每份痰液在三種平板上培養(yǎng)出的菌種類數(shù)。結(jié)果如下：
[0029]
【主權(quán)項】
1. 一種痰消化液，其成分包括N-乙酰-L-半胱氨酸。
2. 權(quán)利要求1的痰消化液，由下列成分組成：
無菌水溶劑。
3. 權(quán)利要求2的痰消化液，由下列成分組成：
無菌水溶劑。
4. 權(quán)利要求1-3的痰消化液在制備臨床痰液標本檢測試劑盒的應(yīng)用。
5. -種痰液標本勻質(zhì)化方法，使用權(quán)利要求1-3的痰消化液處理痰液標本。
【專利摘要】一種醫(yī)學檢測痰液標本勻質(zhì)化方法及試劑的制備。本發(fā)明提供了一種符合臨床檢測的新型痰消化液,由N-乙酰-L-半胱氨酸0.2％(w/v)，胰蛋白酶0.1％(w/v)，三乙醇胺0.4％(w/v)，氯化鉀0.2％(w/v)，磷酸二氫鉀1.5％(w/v)，磷酸氫二甲0.2％(w/v)，無菌水溶劑組成。
【IPC分類】C12Q1-04
【公開號】CN104561230
【申請?zhí)枴緾N201510031792
【發(fā)明人】燕啟江, 郭周萍
【申請人】四川金域醫(yī)學檢驗中心有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2015年1月22日
【公告號】CN104561230B