一種從火炬樹果實中提取木犀草素和木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品加工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從火炬樹果實中提取木犀草素和木 犀草素-7-0-0 -D-吡喃葡萄糖苷的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來天然產(chǎn)物及其衍生物在保健品、食品添加劑以及藥品開發(fā)等方面顯示了 巨大的應(yīng)用前景，特別是一些藥食同源的材料中有效成分的開發(fā)利用?；鹁鏄洌瑢W(xué)名 漆樹科Anacardiaceae，原產(chǎn)北美，上世紀(jì)六十年代引種到中國，現(xiàn)在在東北、華北 等地大面積種植，在河南省也廣泛種植?；鹁鏄渲饕獮榇菩郛愔辏切⌒蛦棠净蛘吖嗄?，它 的根和樹皮都能做藥?；鹁鏄涑鳛轱L(fēng)景林觀賞外，也可用作荒山綠化及水土保持樹種，果 穗紅色，大而顯目?；鹁鏄涔麑嵕哂锌咕⑾?、保膽保肝、清瘀降脂等祛病功效。在北美原 產(chǎn)地區(qū)，傳統(tǒng)上用于制作一種稱為"印第安檸檬汁"的飲料，早已被確認(rèn)無毒?；鹁鏄淙~和 果實富含多酚和類黃酮，果實常用來提取天然食用色素，在美國它是"sumac acid"一種果 汁飲料的主要成分。近年來，醫(yī)學(xué)界又對火炬樹果實進(jìn)行了深入的藥理及臨床應(yīng)用研究， 而其藥物的有效成分即為構(gòu)成色素的花色苷。因而火炬紅色素不僅可認(rèn)為是安全無毒性食 用天然色素，而且作為食品添加劑應(yīng)用還具有一定的保健功能。
[0003] 研究發(fā)現(xiàn)，火炬樹果穗、葉提取成分還有抗氧化性，并且具有一定的抑菌活性，在 一定濃度下抑制金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌及霉菌等常見病菌的生長。同時提取 成分對山楂葉螨、斑葉螨等農(nóng)業(yè)林業(yè)害蟲具有強(qiáng)烈的拒食和毒殺活性。雖然已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這些 良好活性，但是對于活性相關(guān)具體化學(xué)成分的研究還鮮見報道。
[0004] 層析（chromatography)是"色譜分析"的簡稱，利用各組分物理性質(zhì)的不同，將多 組分混合物進(jìn)行分離及測定的方法。層析技術(shù)早在1903年就應(yīng)用于植物色素的分離提取， 各種顏色的色素從上到下在吸附柱上排列成色譜，也稱色譜分離法。1931年有人用氧化鋁 柱分離了胡蘿卜素的兩種同分異構(gòu)體，顯示了這一分離技術(shù)的高度分辨力，從此引起了人 們的廣泛注意。隨著人們認(rèn)識和實踐的提高以及物理化學(xué)技術(shù)的發(fā)展，應(yīng)用范圍更加廣泛， 沒有顏色的物質(zhì)同樣可用此法分離，這時的工作全是使用吸附劑的吸附層析法。自1944年 應(yīng)用濾紙作為固定支持物的紙層析誕生以來，色譜技術(shù)的發(fā)展越來越快。20世紀(jì)50年代開 始，相繼出現(xiàn)了氣相色譜和高效液相色譜，其它如薄層層析、薄膜層析、親和層析、凝膠層析 等也迅速發(fā)展。在生物化學(xué)領(lǐng)域里，層析技術(shù)已成為一項常用的分離分析方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供了一種從火炬樹果實中提取木犀草素和木犀草 素-7-0-0 -D-吡喃葡萄糖苷的方法，該方法是基于各種不同類型層析技術(shù)的基礎(chǔ)上，把火 炬樹果實經(jīng)超聲波浸提、過濾、低溫真空濃縮、萃取、硅膠柱層析、凝膠柱層析、葡聚糖凝膠 柱層析、最后甲醇洗脫得木犀草素和木犀草素-7-0-3 -D-吡喃葡萄糖苷。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種從火炬樹果實中提取木犀草素 和木犀草素-7-0-P-D-吡喃葡萄糖苷的方法，其特征在于包括以下步驟：（1)超聲波浸提， 將粉碎后的火炬樹果實粉末溶于甲醇中，然后使用超聲波提取三次，將浸出液收集，經(jīng)低溫 真空濃縮后用于下一步的萃取；（2)分級萃取，依次使用極性從小到大的溶劑正己烷、二氯 甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水進(jìn)行萃取，過濾，合并濾液，蒸發(fā)、真空干燥后分別記作正己烷 層、二氯甲烷層、乙酸乙酯層、正丁醇層和水層；（3)乙酸乙酯層的硅膠柱層析，取乙酸乙酯 層浸膏做硅膠柱層析，用正己烷與乙酸乙酯體積配比為7:3的洗脫液洗脫得到組分S3,將 組分S3再次用硅膠柱層析分離，分別選用二氯甲烷與甲醇體積配比為3:7的洗脫液和甲醇 洗脫液洗脫得到組分Fr4和Fr5 ; (4)葡聚糖凝膠柱層析，將組分Fr4和Fr5分別經(jīng)葡聚糖 凝膠柱層析，甲醇洗脫液洗脫得到木犀草素和木犀草素-7-0-0 -D-吡喃葡萄糖苷。
[0007]本發(fā)明通過生物活性指導(dǎo)的方法，經(jīng)過超聲波浸提、過濾、低溫真空濃縮、萃取、硅 膠柱層析、凝膠柱層析、葡聚糖凝膠柱層析、真空低溫脫溶、脫水干燥，并制成粉狀產(chǎn)品等分 離技術(shù)，從火炬樹果實中分離出生理活性物質(zhì)木犀草素和木犀草素-7-0-々-D-吡喃葡萄 糖苷，提取工藝簡單，有利于進(jìn)一步工業(yè)化應(yīng)用。
【附圖說明】
[0008] 圖1是本發(fā)明的提取工藝流程圖。
【具體實施方式】
[0009]以下通過實施例對本發(fā)明的上述內(nèi)容做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不應(yīng)該將此理解為本 發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā) 明的范圍。 實施例
[0010] 1、抗氧化能力最強(qiáng)的乙酸乙酯層萃取物的獲取 火炬樹果實蒸餾水清洗兩遍，洗去灰塵、在陰涼處陰干，放入粉碎機(jī)破碎成粉末，甲醇 浸取，使用超聲波在功率800W，30°C條件下，提取20min，高壓抽濾，濾液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除 去溶劑，獲得甲醇粗提物。將甲醇粗提物按固液比為1:10的比例加入蒸餾水后，立即充分 振蕩，再加入等體積的正己烷后用磁力攪拌器攪拌4h，轉(zhuǎn)入分液漏斗，靜置24h，待液體充 分分層后，小心收集分液層，重復(fù)三次后，合并正己烷層，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀把正己烷蒸餾除去， 轉(zhuǎn)移至真空干燥器，得到溶質(zhì)正己烷層。分液后的蒸餾水層中再加入二氯甲烷，攪拌4h，轉(zhuǎn) 入分液漏斗，使用上述的方法獲得二氯甲烷層。然后依次使用乙酸乙酯、正丁醇，同樣的方 法萃取，合并萃取液，蒸發(fā)、真空干燥后分別乙酸乙酯層、正丁醇層和水層。
[0011]通過對各萃取層的總酚和類黃酮類物質(zhì)含量的測定，以及對DPPH自由基清除能 力的測定，發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯層具有最高含量的總酚和類黃酮，以及DPPH自由基清除能力，可 用于進(jìn)一步的分離。
[0012] 2、木犀草素的提取的獲取 取20g乙酸乙酯層浸膏做硅膠(德國MERCK社9385Silicagel)柱層析，流動相依次 采用正己烷、正己烷與乙酸乙酯體積配比分別為9:1、7:3、5:5、3:7、1:9和乙酸乙酯的洗脫 液梯度洗脫得組分S1-S7,將組分S3再經(jīng)硅膠柱層析分離，流動相依次用二氯甲烷、二氯甲 烷與甲醇體積配比分別為7:3、5:5、3:7和甲醇的洗脫液洗脫得到組分？1'141'5，再將組分 Fr4經(jīng)S印hadexLH-20葡聚糖凝膠柱層析，甲醇洗脫液洗脫得到26mg化合物1木犀草素。
[0013] 3、木犀草素-7-0-，-D_吡喃葡萄糖苷的獲取 將組分Fr5利用s印hadexLH-20葡聚糖凝膠柱層析，甲醇洗脫液洗脫得到化合物2木 犀草素K-批喃葡萄糖苷7mg。
[0014] 核磁共振（NMR)鑒定結(jié)構(gòu) 化合物1經(jīng)鑒定是木犀草素，黃色粉末：FAB-MSm/z: [M+H]+，287; 1HNMR(DMS0， 400MHz): 8 7.47 (1H,d,J= 8. 1Hz,H-6'), 7.42 (1H,s,H-2'), 6.90 (1H,d, J= 8. 1,H-5'), 6.79 (1H,s,H-3), 6.74 (1H,brs,H-8), 6.44 (1H,brs,H-6). 13CNMR(DMSO, 100MHz) : 8 181.63 (C-4), 164.31 (C-2), 163.65 (C-7), 157.28 (C-5), 161.36 (C-9), 150.28 (C-4'），146.08 (C-3'），121.63 (C-1'），119.35 (C-6'），116.17 (C-5'），113.67 (C-2'），103.68 (C-10), 103.15 (C-3), 99.86 (C-6), 94.07 (d,C-8)。化合物1的結(jié)構(gòu)式如下：
【主權(quán)項】
1. 一種從火炬樹果實中提取木犀草素和木犀草素-7-0-0 -D-批喃葡萄糖苷的方法， 其特征在于包括以下步驟：（1)超聲波浸提，將粉碎后的火炬樹果實粉末溶于甲醇中，然后 使用超聲波提取三次，將浸出液收集，經(jīng)低溫真空濃縮后用于下一步的萃取；（2)分級萃 取，依次使用極性從小到大的溶劑正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水進(jìn)行萃取，過 濾，合并濾液，蒸發(fā)、真空干燥后分別記作正己烷層、二氯甲烷層、乙酸乙酯層、正丁醇層和 水層；（3)乙酸乙酯層的硅膠柱層析，取乙酸乙酯層浸膏做硅膠柱層析，用正己烷與乙酸乙 酯體積配比為7:3的洗脫液洗脫得到組分S3,將組分S3再次用硅膠柱層析分離，分別選用 二氯甲烷與甲醇體積配比為3:7的洗脫液和甲醇洗脫液洗脫得到組分Fr4和Fr5 ; (4)葡 聚糖凝膠柱層析，將組分Fr4和Fr5分別經(jīng)葡聚糖凝膠柱層析，甲醇洗脫液洗脫得到木犀草 素和木犀草素-7-0-0 -D-吡喃葡萄糖苷。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從火炬樹果實中提取木犀草素和木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的方法，該方法是基于各種不同類型層析技術(shù)的基礎(chǔ)上，把火炬樹果實經(jīng)超聲波浸提、過濾、低溫真空濃縮、萃取、硅膠柱層析、凝膠柱層析、葡聚糖凝膠柱層析、最后甲醇洗脫得木犀草素和木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，提取工藝簡單，能夠進(jìn)一步工業(yè)化應(yīng)用。
【IPC分類】C07D311-30, C07H17-07, C07D311-40, C07H1-08
【公開號】CN104628694
【申請?zhí)枴緾N201510050991
【發(fā)明人】王蘭, 邱宗波, 許明錄, 高復(fù)高, 常愛霞, 仉曉文, 邵強(qiáng), 周春娥, 李建軍
【申請人】河南師范大學(xué)
【公開日】2015年5月20日
【申請日】2015年2月2日