一種生物防治抗白刺莖腐病及促生的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物防治肥的制備領(lǐng)域，具體設(shè)及一種生物防治抗白刺莖腐病及促生 的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 白刺是裝襲科白刺屬的灌木，分枝多而密集，呈叢生狀，具有很強(qiáng)固沙阻沙能力， 分布在我國(guó)柴達(dá)木、塔里木、阿拉善、河西走廊等地區(qū)的湖盆邊緣和河流階地及積沙的粘± 上，具有抗旱、抗風(fēng)蝕沙埋、耐鹽堿、萌生能力強(qiáng)等特性，是干旱荒漠區(qū)重要的建群植物，在 河流下游干旱荒漠區(qū)分布最廣、面積最大，在植被恢復(fù)、防風(fēng)固沙、維護(hù)荒漠生態(tài)系統(tǒng)平衡、 保護(hù)綠洲等方面起著重要作用。中藥白刺為裝襲科白刺屬植物白刺N(yùn)itraria tangutorum Bor.的果實(shí)，具有健脾胃，滋補(bǔ)強(qiáng)壯，調(diào)經(jīng)活血，催乳之功效。
[0003] 白刺莖腐病是白刺病害中危害較為嚴(yán)重的一種，受害植株主桿呈干腐狀，導(dǎo)致 白刺整株枯死，造成白刺群落嚴(yán)重退化，最終形成白刺沙丘活化。尖抱鑲刀菌化sarium 0巧sporum F. Sp.是白刺莖腐病病原菌之一。
[0004] 植物病理真菌主要存在于±壤中，在植物生長(zhǎng)中感染植物，引起植物病害、造成生 產(chǎn)損失。因此，要從生物防治的角度消除植物真菌病害，除了殺滅植株上的病理真菌，殺滅 或抑制±壤中的病理真菌也至關(guān)重要，而使用具有生物防治功效的生物肥是實(shí)現(xiàn)該一目的 的有效途徑。在各種生物肥中，長(zhǎng)久W來(lái)我國(guó)應(yīng)用的都是無(wú)芽抱菌類。但是無(wú)芽抱菌抗逆 性低，對(duì)于干燥高溫的抵抗能力差，所W當(dāng)制成液體或者吸附劑時(shí)穩(wěn)定性不高。生物肥發(fā)展 的新趨勢(shì)應(yīng)是大力發(fā)展抗逆性高、能夠長(zhǎng)期穩(wěn)定生存的芽抱桿菌。特別是芽抱桿菌能夠產(chǎn) 生多種抗真菌物質(zhì)，對(duì)植物病原菌有顯著抑制作用，并且對(duì)人畜無(wú)害，也不會(huì)污染環(huán)境，將 在防治植物真菌病害中起重要作用。
[0005] 芽抱桿菌形態(tài)上呈直或者近直的桿狀，好氧或者兼性厭氧，革蘭氏陽(yáng)性，在特定環(huán) 境條件下能產(chǎn)生抗逆性內(nèi)生抱子。芽抱桿菌在植物中廣泛定殖，被認(rèn)為是公認(rèn)的食品級(jí)安 全微生物（generally regarded as safety, GRA巧?？莶菅勘U菌是一種典型的芽抱桿菌， 產(chǎn)生抗菌蛋白、多膚類物質(zhì)、脂類物質(zhì)及beta葡聚糖酶等抗菌物質(zhì)，特別是beta葡聚糖酶 等水解酶類與其抗植物病理真菌能力有密切關(guān)系，因?yàn)檎婢?xì)胞壁的組成是葡聚糖。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供了一種生物防治抗白刺莖腐病及促生的方法，通過(guò)將產(chǎn)beta葡聚糖 酶的枯草芽抱桿菌（CICC 10339)融入白刺天然菌群中，制成能夠通過(guò)生物防治途徑有效 抑制殺滅白刺病理真菌的生物肥。
[0007] 一種生物防治抗白刺莖腐病及促生的方法，包括W下步驟：
[000引 1)將枯草芽抱桿菌（CICC 10339)進(jìn)行培養(yǎng)，制成密度109~10 i°c化/血的高密度 菌懸液；
[0009] 2)將白刺健康枝條剪成小段進(jìn)行堆肥，堆肥過(guò)程中噴施步驟1)中的高密度菌懸 液，堆肥結(jié)束后進(jìn)行發(fā)酵，經(jīng)發(fā)酵后得到能有效抑制殺滅白刺病理真菌的生物肥，將該生物 肥用在生物防治抗白刺莖腐病及促生上。
[0010] 本發(fā)明中，將白刺健康枝條剪成小節(jié)堆肥，使所制備生物肥中的菌群即為健康白 刺植株本身天然菌群，此菌群與白刺植株協(xié)同進(jìn)化生長(zhǎng)，形成了互益共生體系，對(duì)病害真菌 有一定生物防治作用。進(jìn)一步地，將能夠產(chǎn)beta葡聚糖酶的枯草芽抱桿菌（CICC 10339)加 入堆肥中，顯著加強(qiáng)對(duì)白刺病害真菌的生物防治作用。枯草芽抱桿菌（CICC 10339)由于產(chǎn) beta葡聚糖酶，對(duì)白刺植株纖維有良好分解作用，為堆肥發(fā)酵過(guò)程所必須，故能夠充分融入 到堆肥菌群中穩(wěn)定持久地增殖。如同乳酸菌對(duì)于動(dòng)物的益生作用，抑制殺滅植物病理真菌 的微生物可W稱之為植物益生菌。本發(fā)明所制備生物肥中，枯草芽抱桿菌（CICC 10339)即 是白刺益生菌，對(duì)白刺病理真菌有顯著生物防治作用。
[0011] 步驟1)中，枯草芽抱桿菌（CICC 10339)采用現(xiàn)有技術(shù)，來(lái)自中國(guó)工業(yè)微生物菌 種保藏管理中屯、（CICC)，地址；北京市朝陽(yáng)區(qū)酒仙橋中路24號(hào)院6號(hào)樓；保藏日期為2007 年，菌種保持編號(hào)為10339?？莶菅勘U菌（CICC 10339)可W向中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏 管理中屯、購(gòu)買。
[0012] 將枯草芽抱桿菌（CICC 10339)進(jìn)行培養(yǎng)，包括；枯草芽抱桿菌（CICC 10339)的出 發(fā)密度為1〇6~1〇7個(gè)/111以接種至液體培養(yǎng)基中接種量為1%~5%，33°C~39°C振蕩培養(yǎng) 20~2她，至菌液密度為10 9~10 i°c化/mL的高密度菌懸液。
[0013] 進(jìn)一步優(yōu)選，將枯草芽抱桿菌（CICC 10339)進(jìn)行培養(yǎng)，包括；枯草芽抱桿菌（CICC 10339)的出發(fā)密度為106~10 7個(gè)/111以接種至液體培養(yǎng)基中接種量為2%~3%，36°C~ 37°C振蕩培養(yǎng)22~26h，至菌液密度為10 9~10 i°c化/mL的高密度菌懸液。
[0014] 所述的液體培養(yǎng)基，W 1L計(jì)，包括W下組分：
[0015] 葡萄糖 11~17g; 牛商膏 20~30g; 憐酸二氨鐘 1.5~3.5g; 花生餅粉 7~13g; 調(diào)節(jié) pH=6.5~7.5。
[0016] 進(jìn)一步優(yōu)選，所述的液體培養(yǎng)基，W 1L計(jì)，包括W下組分：
[0017] 葡萄糖 Hg; 牛肉膏 ^g; 憐酸二氨鐘 2.45g; 花生餅粉 lOg; 調(diào)節(jié) pH=7.0。
[0018] 液體培養(yǎng)基在12TC滅菌20min。
[0019] 步驟。中，堆肥過(guò)程中噴施步驟1)中的高密度菌懸液，包括：在堆肥內(nèi)部溫度達(dá) 到30°C~34°C時(shí)，噴施步驟1)中的高密度菌懸液，繼續(xù)堆肥，待堆肥內(nèi)部溫度達(dá)到4rC~ 45 °C時(shí)堆肥結(jié)束。
[0020] 堆肥過(guò)程中噴施步驟1)中的高密度菌懸液，包括；在堆肥內(nèi)部溫度達(dá)到32°C時(shí)， 噴施步驟1)中的高密度菌懸液，繼續(xù)堆肥，待堆肥內(nèi)部溫度達(dá)到43°C時(shí)堆肥結(jié)束。
[0021] 步驟2)中，堆肥結(jié)束后，將堆肥攬拌攤涼。所述的發(fā)酵采用自然狀態(tài)下發(fā)酵。
[0022] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0023] 本發(fā)明中，將白刺健康枝條剪成小節(jié)堆肥，使所制備生物肥中的菌群即為健康白 刺植株本身天然菌群，此菌群與白刺植株協(xié)同進(jìn)化生長(zhǎng)，形成了互益共生體系，對(duì)病害真菌 有一定生物防治作用。
[0024] 枯草芽抱桿菌（CICC 10339)產(chǎn)beta葡聚糖酶，強(qiáng)力破壞病理真菌細(xì)胞壁，對(duì)病理 真菌有顯著抑制殺滅作用。如同乳酸菌對(duì)于動(dòng)物的益生作用，抑制殺滅植物病理真菌的微 生物可W稱之為植物益生菌。本發(fā)明所制備生物肥中富含的枯草芽抱桿菌（CICC 10339) 即是白刺益生菌，對(duì)白刺病理真菌有顯著生物防治作用。
[0025] 堆肥過(guò)程在自然狀態(tài)下進(jìn)行，依靠微生態(tài)穩(wěn)定的白刺植株天然菌群進(jìn)行發(fā)酵，而 枯草芽抱桿菌（CICC